(一)技術領域
本發(fā)明涉及一種提高竹葉抗氧化劑穩(wěn)定性的方法。
(二)
背景技術：
竹葉抗氧化劑在我國已較早批準為食品添加劑，其基本成分為竹葉黃酮、內(nèi)酯和酚酸?？蓮V泛應用于多種食品抗氧化，具有來源天然、安全性高等優(yōu)點。但竹葉抗氧化劑在貯存過程中穩(wěn)定性尚不夠高，有一定的自身被氧化現(xiàn)象，影響其應用價值。目前生產(chǎn)企業(yè)采用真空包裝、避光儲存等方法來減少竹葉抗氧化劑貯存過程中的自身被氧化，但效果并不理想，因而，提高竹葉抗氧化劑自身的穩(wěn)定性，對其在食品加工中更好的應用，意義重大。
(三)
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的是提供一種提高竹葉抗氧化劑穩(wěn)定性的方法，將竹葉抗氧化劑制成環(huán)糊精包合物，減少竹葉抗氧化劑自身被氧化，提高其作為食品添加劑的穩(wěn)定性，同時具有改善竹葉抗氧化劑風味的作用，使竹葉抗氧化劑能更好的應用于食品。
本發(fā)明采用的技術方案是：
本發(fā)明提供一種提高竹葉抗氧化劑穩(wěn)定性的方法，所述方法為：將竹葉抗氧化劑溶于體積濃度30-50％乙醇水溶液中制成竹葉抗氧化劑溶液；再將環(huán)糊精用去離子水溶解后加入乳化劑，混勻，制成環(huán)糊精溶液；將環(huán)糊精溶液加熱至30-60℃，緩慢滴加竹葉抗氧化劑溶液，滴加完畢后攪拌反應30-60min，反應液真空蒸餾去除乙醇后干燥，獲得竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物，實現(xiàn)竹葉抗氧化劑穩(wěn)定性的提高；所述乳化劑為吐溫80或司盤80；所述竹葉抗氧化劑與環(huán)糊精、乳化劑質(zhì)量比為1:1-10：0.001-0.1；所述乙醇水溶液體積用量以竹葉抗氧化劑質(zhì)量計為20-40l/kg，所述去離子水體積用量以環(huán)糊精質(zhì)量計為20-50l/kg。
進一步，所述竹葉抗氧化劑中黃酮質(zhì)量含量為25-40％，所述竹葉抗氧化劑為竹葉提取物，用作食品抗氧化劑，優(yōu)選購自杭州眾芝康菇生物技術有限公司。
進一步，所述乙醇水溶液體積用量以竹葉抗氧化劑質(zhì)量計優(yōu)選為20l/kg。
進一步，所述去離子水體積用量以環(huán)糊精質(zhì)量計優(yōu)選25l/kg。
進一步，所述竹葉抗氧化劑溶液滴加速度為1l/min。
進一步，所述反應液在0.1pa、60℃下真空蒸餾去除乙醇后在120-150℃下噴霧干燥。
進一步，所述竹葉抗氧化劑與環(huán)糊精、乳化劑質(zhì)量比為1:4-7：0.002-0.005。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在：
本發(fā)明所研制的竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物，在抗氧化穩(wěn)定性上較原料有明顯提高，提高了1倍多。通過60℃的加速氧化試驗，30天后，原料的自由基清除率不達包合物的一半，充分說明包合物有良好的保持竹葉抗氧化劑性能的作用。同時，竹葉抗氧化劑按本發(fā)明的方法以環(huán)糊精包合后，提高了水溶性，在純水中可完全溶解，水溶液可達到無竹葉味，提升了其應用性能。
(四)具體實施方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此：
實施例1：
(1)稱取竹葉抗氧化劑1000克(分光光度法測定其總黃酮質(zhì)量含量為30％，購自西安澤朗生物科技有限公司)，溶解于20升體積濃度40％乙醇水溶液中，攪拌使其充分溶解，制成竹葉抗氧化劑溶液。稱取6000克食品級環(huán)糊精(購自淄博千匯生物科技有限公司)，溶解于150升去離子水中，再稱取4.0克食用級乳化劑吐溫80，溶于環(huán)糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分攪拌均勻，形成環(huán)糊精吐溫80水溶液，并加熱至40℃，恒溫下在不斷攪拌中將竹葉抗氧化劑溶液緩慢加入到環(huán)糊精吐溫80水溶液中，每分鐘加入1升左右，總加入時間20分鐘。加入混合完畢，再保持溫度繼續(xù)攪拌50分鐘。攪拌完畢在0.1大氣壓真空度下、60℃真空蒸餾回收乙醇，回收完畢，以140℃的熱風溫度噴霧干燥，得到竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物6716g。
(2)竹葉抗氧化劑中的總黃酮的測定
以蘆丁為標準品，采用分光光度法測定竹葉抗氧化劑中的總黃酮，以總黃酮的包合率表征環(huán)糊精包合的效果。檢測方法如下：
1)標準曲線：蘆丁標準品，純度98.5％，購于中國藥品生物制品檢定所。蘆丁標準溶液配制：準確稱取蘆丁標準品11.6mg，用體積濃度60％的乙醇水溶液溶解并定容于50ml容量瓶中，得到濃度為0.232mg·ml-1的蘆丁標準溶液。
用移液管分別取蘆丁標準溶液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0ml，分別置于25ml容量瓶中，加體積濃度60％乙醇水溶液補充至10ml，分別往各瓶中加入0.7ml的質(zhì)量濃度5％亞硝酸鈉水溶液，搖勻放置5min，然后加入0.7ml的質(zhì)量濃度10％硝酸鋁水溶液，搖勻放置5min，再加入5ml的質(zhì)量濃度4.3％氫氧化鈉水溶液，搖勻放置5min，最后用體積濃度60％乙醇水溶液定容置25ml刻度線處，搖勻。用紫外分光光度計在510nm處測其吸光度值，以不加蘆丁標準溶液為空白對照。以蘆丁濃度c(mg·ml-1)為縱坐標，所測得的吸光度值(a)為橫坐標，繪制標準曲線，得到蘆丁的濃度c(mg·ml-1)與吸光度值a標準曲線的回歸方程式為：c＝0.0935a-0.0011，r2＝0.9996，結果表明，吸光度與蘆丁的濃度呈良好的線性關系。
2)樣品總黃酮的檢測：取0.05g樣品，用體積濃度60％的乙醇水溶液溶解并定容于50ml的容量瓶中，用移液管取5.0ml置于25ml容量瓶中，根據(jù)以上標準曲線的測定方法在510nm處測其吸光度值，根據(jù)測得的吸光度值并按照回歸方程計算樣品中黃酮的濃度。
(3)竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物總黃酮包合率的測定：
包合物表面黃酮的含量測定：準確稱取0.6g竹葉抗氧化劑包合物產(chǎn)品，加入20ml無水乙醇，充分振蕩、洗滌后，轉移到50ml容量瓶中，然后用無水乙醇定容，靜置，過濾，取2ml濾液按蘆丁為標準品分光光度法測定濾液的吸光度，計算包合物表面黃酮的含量。
包合物產(chǎn)品黃酮總量的測定：準確稱取0.6g竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物產(chǎn)品，加20ml蒸餾水加熱溶解后，轉移到50ml容量瓶中，然后用無水乙醇定容，經(jīng)超聲充分振蕩靜置，過濾，取1ml濾液按蘆丁為標準品分光光度法測定濾液的吸光度，計算包合物總黃酮的含量。
按下式計算包合物的包合率:
a(％)＝(1-b/c)×100％
式中，a為包合物的包合率(％)；b為包合物表面的黃酮質(zhì)量(mg)；c為包合物中總黃酮質(zhì)量(mg)。
(4)檢測竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物的穩(wěn)定性，參照《中華人民共和國藥典》2010年版加速試驗方法，以竹葉抗氧化劑原料為對照，采用鄰二氮菲fe2+氧化法測定竹葉抗氧化劑包合物與原料的活性自由基清除率，作為抗氧化穩(wěn)定性的評價，具體方法為：將竹葉抗氧化劑粉末和竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物置于(60±2)℃恒溫箱中，進行抗氧化穩(wěn)定性試驗，每隔五天取一次樣，采用鄰二氮菲fe2+氧化法測定其對活性自由基的清除率。
方法操作如下：取0.2ml5×10-3mol·l-1鄰二氮菲水溶液和1ml50mmol·l-1tris-hcl緩沖溶液(ph＝7.4，以去離子配制)于5ml容量瓶中，加入0.2ml7.5×10-3mol·l-1feso4水溶液，立即搖勻，加入200μl濃度為10μg/ml的樣品水溶液，再加入0.2ml質(zhì)量濃度l％的h2o2，用乙醇定容。充分搖勻后，置于37℃水浴中保溫60min，然后以分光光度計在536nm處測其吸光度值。其清除率按下式計算：
n＝[(a2－a3)/(a1－a3)]×100％
式中：n是清除率(％)；a1是不加h2o2和樣品時的吸光度；a2是加入h2o2和樣品時的吸光度；a3是加入h2o2，但不加樣品時的吸光度。
所得包合物經(jīng)檢測，總黃酮包合率達88％，經(jīng)60℃恒溫箱中加速氧化試驗，第15天竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物清除自由基率保留93％，原料清除自由基率保留78％，第20天竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物清除自由基率保留86％，原料清除自由基率保留60％，第30天竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物保留66％，原料清除自由基率保留31％。
稱取竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物1.0g，加入10ml去離子水，在室溫下攪拌，可完全溶解為清澈溶液。樣品溶液經(jīng)品嘗，與竹葉抗氧化劑的40％乙醇溶液比較，無竹葉味。
實施例2：
稱取竹葉抗氧化劑1000克(分光光度法測定其總黃酮含量為25％，購自杭州眾芝康菇生物技術有限公司)，溶解于40升體積濃度30％乙醇水溶液中，攪拌使其充分溶解，制成竹葉抗氧化劑溶液。稱取4000克食品級環(huán)糊精(購自海鹽六和淀粉化工有限公司)，溶解于180升去離子水中，再稱取3.0克食用級乳化劑司盤80，溶于環(huán)糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分攪拌均勻，形成環(huán)糊精司盤80水溶液，并加熱至30℃，恒溫下在不斷攪拌中將竹葉抗氧化劑溶液緩慢加入到環(huán)糊精司盤80水溶液中，每分鐘加入1升左右，總加入時間20分鐘。加入混合完畢，再保持溫度繼續(xù)攪拌30分鐘。攪拌完畢在0.1大氣壓真空度下60℃真空蒸餾回收乙醇，回收完畢，以150℃的熱風溫度噴霧干燥，得到竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物4702g。
采用實施例1方法，所得包合物經(jīng)檢測，總黃酮包合率達85％，經(jīng)60℃恒溫箱中加速氧化試驗，第15天竹葉抗氧化劑包合物清除自由基率保留91％，原料清除自由基率保留79％，第20天竹葉抗氧化劑包合物清除自由基率保留85％，原料清除自由基率保留61％，第30天竹葉抗氧化劑包合物保留65％，原料清除自由基率保留30％。
稱取竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物1.0g，加入10ml去離子水，在室溫下攪拌，可完全溶解為清澈溶液。樣品溶液經(jīng)品嘗，與竹葉抗氧化劑的40％乙醇溶液比較，無竹葉味。
實施例3：
稱取竹葉抗氧化劑1000克(分光光度法測定其總黃酮含量為40％，購自陜西柏威生物科技有限公司)，溶解于30升體積濃度50％乙醇水溶液中，攪拌使其充分溶解，制成竹葉抗氧化劑溶液。稱取7000克食品級環(huán)糊精(購自無錫市澗興淀粉制品有限公司)，溶解于140升去離子水中，再稱取5.0克食用級乳化劑吐溫80，溶于環(huán)糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分攪拌均勻，形成環(huán)糊精吐溫80水溶液，并加熱至60℃，恒溫下在不斷攪拌中將竹葉抗氧化劑溶液緩慢加入到環(huán)糊精吐溫80水溶液中，每分鐘加入1升左右，總加入時間20分鐘。加入混合完畢，再保持溫度繼續(xù)攪拌60分鐘。攪拌完畢在0.1大氣壓真空度下60℃真空蒸餾回收乙醇，回收完畢，以120℃的熱風溫度噴霧干燥，得到竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物7708g。
采用實施例1方法，所得包合物經(jīng)檢測，總黃酮包合率達88％，經(jīng)60℃恒溫箱中加速氧化試驗，第15天竹葉抗氧化劑包合物清除自由基率保留94％，原料清除自由基率保留79％，第20天竹葉抗氧化劑包合物清除自由基率保留86％，原料清除自由基率保留61％，第30天竹葉抗氧化劑包合物保留67％，原料清除自由基率保留31％。
稱取竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物1.0g，加入10ml去離子水，在室溫下攪拌，可完全溶解為清澈溶液。樣品溶液經(jīng)品嘗，與竹葉抗氧化劑的40％乙醇溶液比較，無竹葉味。
實施例4：
稱取竹葉抗氧化劑1000克(分光光度法測定其總黃酮含量為30％，購自陜西康躍生物科技有限公司)，溶解于30升體積濃度50％乙醇水溶液中，攪拌使其充分溶解，制成竹葉抗氧化劑水溶液。稱取5000克食品級環(huán)糊精(購自無錫市澗興淀粉制品有限公司)，溶解于160升去離子水中，再稱取2.0克食用級乳化劑吐溫80，溶于環(huán)糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分攪拌均勻，形成環(huán)糊精吐溫80水溶液，并加熱至50℃，恒溫下在不斷攪拌中將竹葉抗氧化劑溶液緩慢加入到環(huán)糊精吐溫80水溶液中，每分鐘加入1升左右，總加入時間20分鐘。加入混合完畢，再保持溫度繼續(xù)攪拌40分鐘。攪拌完畢在0.1大氣壓真空度下60℃真空蒸餾回收乙醇，回收完畢，以130℃的熱風溫度噴霧干燥，得到竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物5705g。
采用實施例1方法，所得包合物經(jīng)檢測，總黃酮包合率達87％，經(jīng)60℃恒溫箱中加速氧化試驗，第15天竹葉抗氧化劑包合物清除自由基率保留93％，原料清除自由基率保留79％，第20天竹葉抗氧化劑包合物清除自由基率保留85％，原料清除自由基率保留60％，第30天竹葉抗氧化劑包合物保留65％，原料清除自由基率保留30％。
稱取竹葉抗氧化劑環(huán)糊精包合物1.0g，加入10ml去離子水，在室溫下攪拌，可完全溶解為清澈溶液。樣品溶液經(jīng)品嘗，與竹葉抗氧化劑的40％乙醇溶液比較，無竹葉味。