本發(fā)明屬于酶發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體涉及一種以枇杷皮為原料的復(fù)合酵素及其制備方法。
背景技術(shù)：
：枇杷是人們喜愛的水果之一，市場需求巨大，枇杷不僅果肉美味，而且其廢棄物枇杷皮也具有較好的抗氧化成分。然而，目前對(duì)于枇杷皮中抗氧化成本的提取多采取有機(jī)試劑提取的方法，如《枇杷皮和芒果皮粗提液抗氧化活性研究》和《枇杷皮色素提取物的體外抗氧化活性研究》。由有機(jī)試劑提取出來的成分常需要進(jìn)行純化處理，難以大規(guī)模制備相應(yīng)的抗氧化產(chǎn)品，更重要的是，有機(jī)試劑殘留對(duì)于人體健康具有著重大的威脅。利用發(fā)酵菌對(duì)適宜發(fā)酵的原料進(jìn)行發(fā)酵處理，具有可以大批量處理的優(yōu)勢。然而，關(guān)于以枇杷皮作為原料進(jìn)行發(fā)酵方面而言，目前的報(bào)道很少。在發(fā)明人所做的預(yù)實(shí)驗(yàn)中，利用常規(guī)的發(fā)酵技術(shù)對(duì)枇杷皮進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵周期十分長，至少需要55天。更為重要的是，所得發(fā)酵產(chǎn)品的抗氧化性能僅為《枇杷皮和芒果皮粗提液抗氧化活性研究》報(bào)道中的30%左右，說明常規(guī)的發(fā)酵技術(shù)對(duì)枇杷皮的利用率十分低。因此，如何改進(jìn)發(fā)酵技術(shù)，使得枇杷皮的利用率得以提高，并縮短發(fā)酵周期以節(jié)省制備成本，成為本領(lǐng)域亟待解決的問題。另外，枇杷皮的抗氧化性能與其它水果（如香蕉、西瓜）相比較低，如何提高枇杷皮發(fā)酵物的抗氧化性能也是本領(lǐng)域的研究方向。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的之一在于提供一種以枇杷皮為原料的復(fù)合酵素的制備方法，該制備方法包括如下步驟：（1）按重量份計(jì)，準(zhǔn)備如下原料：枇杷皮10-12份，大蒜皮1-3份，砂糖0.5-1份；（2）將枇杷皮和大蒜皮進(jìn)行粉碎，過200目篩，加入20-25份水；（3）向步驟（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接種量為3-5%，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為16-18℃，pH為3-4，發(fā)酵時(shí)間為12-15天；（4）調(diào)整發(fā)酵溫度為20-22℃，pH為5-5.5，發(fā)酵時(shí)間為4-6天，取發(fā)酵液，即得所述復(fù)合酵素。如本發(fā)明的一個(gè)對(duì)比實(shí)施例所示，當(dāng)采取常規(guī)的發(fā)酵技術(shù)僅對(duì)枇杷皮進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，發(fā)酵周期長達(dá)55天以上，而且所得發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化性能很差，對(duì)卵黃脂蛋白不飽和脂肪酸過氧體系的抗氧化活性（AOA）不超過12%。本發(fā)明所述的發(fā)酵周期意為超過某一發(fā)酵時(shí)間后，再長的發(fā)酵時(shí)間不會(huì)增加發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)生。而當(dāng)采取本發(fā)明的兩級(jí)發(fā)酵技術(shù)后，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)不僅發(fā)酵周期大幅縮短，而且所得產(chǎn)物的AOA很高，最高可達(dá)62.7%?？赡艿脑蛟谟?，枇杷皮在發(fā)酵初期時(shí)，進(jìn)程較慢，在中期時(shí)，受低溫控制的抑制物的產(chǎn)生較多，而將發(fā)酵溫度適當(dāng)調(diào)高后，抑制物的生產(chǎn)較少，促進(jìn)了發(fā)酵過程的平穩(wěn)進(jìn)行。其中的相關(guān)抑制物目前仍在分離鑒定當(dāng)中。蒜皮的加入可以將AOA從50%左右提升至60%左右。這與大蒜皮本身也具有一定的抗氧化性能有關(guān)。然而，值得指出的是，大蒜皮的加入，促進(jìn)了發(fā)酵周期的進(jìn)一步縮短，可縮短發(fā)酵時(shí)間約8天左右。由于大蒜皮對(duì)發(fā)酵時(shí)間縮短的貢獻(xiàn)不是主要的，可能的解釋在于大蒜皮的加入進(jìn)一步抑制了上述抑制物的產(chǎn)生。這一點(diǎn)需要發(fā)明人后續(xù)將所述抑制物分離鑒定出來后，再行設(shè)置相關(guān)實(shí)驗(yàn)予以驗(yàn)證。優(yōu)選的，步驟（1）中，按重量份計(jì)，準(zhǔn)備如下原料：枇杷皮11份，大蒜皮2份，砂糖0.8份。優(yōu)選的，步驟（3）中，接種量為4%。優(yōu)選的，步驟（3）中，發(fā)酵時(shí)間為13天。優(yōu)選的，步驟（4）中，發(fā)酵時(shí)間為4天。本發(fā)明的另一目的在于提供由上述方法制備得到復(fù)合酵素。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明大幅度縮短了枇杷皮的發(fā)酵周期，并獲得了具有優(yōu)秀的抗氧化性能的復(fù)合酵素；本發(fā)明中的大蒜皮對(duì)發(fā)酵周期的縮短有進(jìn)一步的促進(jìn)左右，且能所得酵素的抗氧化性能。具體實(shí)施方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，有必要在此指出的是以下實(shí)施例只是用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)上述
發(fā)明內(nèi)容所做出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1（1）按重量份計(jì)，準(zhǔn)備如下原料：枇杷皮10份，大蒜皮1份，砂糖0.5份；（2）將枇杷皮和大蒜皮進(jìn)行粉碎，過200目篩，加入20份水；（3）向步驟（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接種量為3%，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為16-18℃，pH為3-4，發(fā)酵時(shí)間為12天；（4）調(diào)整發(fā)酵溫度為20-22℃，pH為5-5.5，發(fā)酵時(shí)間為5天，取發(fā)酵液，即得所述復(fù)合酵素。實(shí)施例2（1）按重量份計(jì)，準(zhǔn)備如下原料：枇杷皮12份，大蒜皮3份，砂糖1份；（2）將枇杷皮和大蒜皮進(jìn)行粉碎，過200目篩，加入25份水；（3）向步驟（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接種量為5%，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為16-18℃，pH為3-4，發(fā)酵時(shí)間為12-15天；（4）調(diào)整發(fā)酵溫度為20-22℃，pH為5-5.5，發(fā)酵時(shí)間為6天，取發(fā)酵液，即得所述復(fù)合酵素。實(shí)施例3（1）按重量份計(jì)，準(zhǔn)備如下原料：枇杷皮11份，大蒜皮2份，砂糖0.8份；（2）將枇杷皮和大蒜皮進(jìn)行粉碎，過200目篩，加入22份水；（3）向步驟（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接種量為4%，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為16-18℃，pH為3-4，發(fā)酵時(shí)間為13天；（4）調(diào)整發(fā)酵溫度為20-22℃，pH為5-5.5，發(fā)酵時(shí)間為4天，取發(fā)酵液，即得所述復(fù)合酵素。對(duì)比實(shí)施例1將枇杷皮粉碎后，過200篩，加入適量水和砂糖，接種Saccaromycescerevisiae，于16-18℃發(fā)酵。在常見報(bào)道范圍，無論如何調(diào)節(jié)水和砂糖的添加量以及發(fā)酵pH，發(fā)酵周期均在55天以上。所得發(fā)酵產(chǎn)物的AOA均不超過12%。對(duì)比實(shí)施例2除不添加大蒜皮之外，其余與實(shí)施例3一致。第二級(jí)發(fā)酵的時(shí)間比實(shí)施例3多8天。實(shí)驗(yàn)例對(duì)實(shí)施例1-3和對(duì)比實(shí)施例2所得物進(jìn)行對(duì)卵黃脂蛋白不飽和脂肪酸過氧體系的抗氧化活性測試，結(jié)果如表1所示。表1實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3對(duì)比實(shí)施例2AOA（%）61.961.562.751.2當(dāng)前第1頁1 2 3