一種組織塊法培養(yǎng)皿的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種組織塊法培養(yǎng)皿，所述的培養(yǎng)皿由培養(yǎng)皿底盤、培養(yǎng)皿頂蓋、多孔蓋三部分組成；所述培養(yǎng)皿底盤由底盤底面、底盤側(cè)面、“8”字形支架三部分組成；所述“8”字形支架包括支架突起部、支架連接部、支架管狀部，所述支架管狀部為中空管狀結(jié)構(gòu)，支架管狀部下表面設(shè)有長方形突出，所述多孔蓋邊緣有缺口。使用本發(fā)明的培養(yǎng)皿有效的解決了組織塊培養(yǎng)過程中貼壁難的問題，降低了組織塊被污染的風(fēng)險，提高了組織塊培養(yǎng)法的成功率，而且長距離轉(zhuǎn)移培養(yǎng)皿不會影響組織塊培養(yǎng)。
【專利說明】一種組織塊法培養(yǎng)皿
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于細(xì)胞原代培養(yǎng)的器皿，具體地說，是一種組織塊法培養(yǎng)皿?！尽颈尘凹夹g(shù)】】
[0002]組織塊培養(yǎng)法是對細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)的方法。目前的組織塊培養(yǎng)法主要包括翻轉(zhuǎn)干涸法與薄層培養(yǎng)法。翻轉(zhuǎn)干涸法主要步驟為:將組織剪成I立方毫米左右的組織塊，清洗后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶，將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，加入適量培養(yǎng)液到非細(xì)胞生長面上，靜置一段時間使組織塊微干涸后再翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使培養(yǎng)液覆蓋組織塊；薄層培養(yǎng)法亦是將組織剪成I立方毫米左右的組織塊，清洗后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶，加入極少量培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液既能接觸組織塊又不會完全覆蓋組織塊。這兩種組織塊培養(yǎng)法在培養(yǎng)過程中不能很好地保證組織貼壁生長。組織塊原代培養(yǎng)的成功的關(guān)鍵是組織塊貼壁生長與避免污染。細(xì)胞污染除了因為使用不潔的標(biāo)本和空氣污染外，還可因為在操作和消毒過程中將污染源帶入培養(yǎng)皿。因此，在操作過程中盡可能避免與外界接觸能有效降低發(fā)生污染的風(fēng)險。與此同時，在操作或移動過程中造成培養(yǎng)皿震動會導(dǎo)致組織塊貼壁失敗。中國專利文獻(xiàn)201210203962.8公開了一種組織培養(yǎng)器皿與組織培養(yǎng)方法，所述培養(yǎng)皿包括底壁與至少一個側(cè)壁以限定出的內(nèi)腔的培養(yǎng)皿，所述培養(yǎng)皿包括蓋子，其特征在于:所述內(nèi)腔中還包括至少一個碗狀容器，所述碗狀容器包括半球形的碗底與開口，所述開口處設(shè)有與碗狀容器側(cè)壁垂直的邊擋，所述邊擋的內(nèi)緣直徑小于開口，外緣直徑大于開口 ；所述碗狀容器底部與培養(yǎng)皿底壁連接；所述碗狀容器的開口直徑為1cm。該種培養(yǎng)皿培養(yǎng)過程中能提供氣液共存的培養(yǎng)環(huán)境，但并沒有解決組織塊培養(yǎng)過程中貼壁難的問題。因此設(shè)計一種能強(qiáng)制組織塊貼壁生長，而且能避免組織塊被污染的培養(yǎng)皿是十分必要的。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0003]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種組織塊法培養(yǎng)皿。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
[0005]一種組織塊法培養(yǎng)皿，它是由培養(yǎng)皿底盤、培養(yǎng)皿頂蓋、多孔蓋三部分組成；所述培養(yǎng)皿底盤由底盤底面、底盤側(cè)面、“8”字形支架三部分組成；所述“8”字形支架包括支架突起部、支架連接部、支架管狀部；所述支架管狀部為中空管狀結(jié)構(gòu)，支架管狀部固定在底盤側(cè)面的內(nèi)表面且與底盤底面垂直；所述支架突起部通過支架連接部固定在支架管狀部外表面靠近培養(yǎng)皿中心一側(cè)；所述支架突起部為圓柱體結(jié)構(gòu)且與底盤底面垂直；所述支架管狀部底面靠近培養(yǎng)皿中心一側(cè)設(shè)有長方形突出；所述培養(yǎng)皿頂蓋由頂蓋頂面、頂蓋側(cè)面、頂蓋凸起三部分組成；所述多孔蓋均勻分布有圓柱貫穿孔，多孔蓋外側(cè)有一缺口 ；所述多孔蓋的上表面有半圓形提環(huán)；所述多孔蓋的下表面有四個多孔蓋凸起；所述的多孔蓋缺口能和長方形突出相嵌合將多孔蓋固定在培養(yǎng)皿內(nèi)；所述的多孔蓋缺口能與支架連接部相嵌合，使多孔蓋立于培養(yǎng)皿底盤上方；所述培養(yǎng)皿由透明材料制成。
[0006]所述的支架管狀部底面與底盤底面之間有l(wèi)_2mm高度的空隙。
[0007]所述的頂蓋凸起呈十字對稱分布于頂蓋頂面下表面的邊緣內(nèi)側(cè)。
[0008]所述頂蓋凸起的頂點所構(gòu)成圓的直徑小于底盤側(cè)面外表面所構(gòu)成圓的直徑。
[0009]所述的頂蓋側(cè)面內(nèi)表面為圓柱體側(cè)面；所述的頂蓋側(cè)面外表面為倒置圓臺側(cè)面。
[0010]根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于，所述的貫穿孔直徑為1mm。
[0011]所述的多孔蓋凸起的高度為0.1?0.3mm。
[0012]所述的多孔蓋凸起呈十字對稱分布于多孔蓋下表面的邊緣內(nèi)側(cè)。
[0013]本發(fā)明優(yōu)點在于:培養(yǎng)過程中多孔蓋將組織塊固定在底盤底面上，強(qiáng)制組織塊貼壁生長，有效的解決了組織塊培養(yǎng)過程中貼壁難的問題。操作過程中，將多孔蓋缺口與支架連接部相嵌合，使多孔蓋立于培養(yǎng)皿底盤上方，無需另找無菌處存放多孔蓋；換液時，只需將吸管插入支架管狀部，通過負(fù)壓將液體吸出，由于抽吸位置是培養(yǎng)空間最低點，因而可以最大限度地吸出液體。使用本發(fā)明的培養(yǎng)皿有效地解決了組織塊培養(yǎng)過程中組織塊貼壁難的問題、降低了組織塊被污染的風(fēng)險、提高了組織塊培養(yǎng)法的成功率，而且長距離轉(zhuǎn)移培養(yǎng)皿不會影響組織塊培養(yǎng)。
【【專利附圖】

【附圖說明】】
[0014]附圖1是培養(yǎng)皿底盤結(jié)構(gòu)示意圖。
[0015]附圖2是“8 “字形支架結(jié)構(gòu)示意圖。
[0016]附圖3是培養(yǎng)皿頂蓋結(jié)構(gòu)示意圖。
[0017]附圖4是頂蓋凸起剖視圖。
[0018]附圖5是多孔蓋結(jié)構(gòu)示意圖。
[0019]附圖6是圓柱貫穿孔與多孔蓋凸起的剖視圖。
[0020]附圖7是培養(yǎng)皿主視圖。
[0021]附圖8是培養(yǎng)皿多孔蓋9立于培養(yǎng)皿底盤I上方示意圖。
【【具體實施方式】】
[0022]下面結(jié)合實施例并參照附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
[0023]附圖中涉及的附圖標(biāo)記和組成部分如下所示:
[0024]1.培養(yǎng)皿底盤2.底盤底面
[0025]3.底盤側(cè)面4.“8”字形支架
[0026]41.支架突起部42.支架連接部
[0027]43.支架管狀部44.長方形突出
[0028]5.培養(yǎng)皿頂蓋6.頂蓋頂面
[0029]7.頂蓋側(cè)面8.頂蓋凸起
[0030]9.多孔蓋10.圓柱貫穿孔
[0031]11.缺口12.半圓形提環(huán)
[0032]13.多孔蓋凸起
[0033]實施例1
[0034]請參照圖1和圖2，圖1是本發(fā)明的培養(yǎng)皿底盤I結(jié)構(gòu)示意圖，圖2是本發(fā)明的“8”字形支架結(jié)構(gòu)示意圖。所述培養(yǎng)皿底盤I由底盤底面2、底盤側(cè)面3、“8”字形支架4三部分組成。所述底盤底面2是圓形平面，底盤底面2外緣上方接有底盤側(cè)面3，所述底盤側(cè)面3為圓管狀且與底盤底面2垂直；所述“8”字形支架4包括支架突起部41、支架連接部42、支架管狀部43，所述支架管狀部為中空管狀結(jié)構(gòu)，支架管狀部43固定在底盤側(cè)面3的內(nèi)表面且與底盤底面2垂直，所述支架管狀部43的底面與底盤底面2之間有2-3mm高度的空隙，所述支架連接部42為長方體結(jié)構(gòu)且與底盤底面2垂直，所述支架突起部41為圓柱體結(jié)構(gòu)且與底盤底面2垂直，所述支架突起部41通過支架連接部42固定在支架管狀部43外表面靠近培養(yǎng)皿中心一側(cè)；所述長方形突出44連接在支架管狀部43底面靠近培養(yǎng)皿中心一側(cè)。
[0035]請參照圖3和圖4，圖3是本發(fā)明的培養(yǎng)皿頂蓋5結(jié)構(gòu)示意圖，圖4是本發(fā)明的頂蓋凸起8的剖視圖。所述培養(yǎng)皿頂蓋5由頂蓋頂面6、頂蓋側(cè)面7、頂蓋凸起8三部分組成。所述頂蓋頂面6為圓形平面，頂蓋頂面6外緣下方接有頂蓋側(cè)面7，所述頂蓋側(cè)面7內(nèi)表面為圓柱體側(cè)面且與頂蓋頂面6垂直，所述頂蓋側(cè)面7外表面為倒置圓臺側(cè)面，所述頂蓋凸起8呈十字對稱分布于頂蓋頂面6下表面的邊緣內(nèi)側(cè)并處在同一平面上；所述頂蓋凸起8的頂點所構(gòu)成圓的直徑小于底盤側(cè)面3(圖中未標(biāo)出)外表面所構(gòu)成圓的直徑，因此，將培養(yǎng)皿頂蓋5蓋在培養(yǎng)皿底盤I上時，底盤側(cè)面3的上緣與頂蓋凸起8接觸，使底盤側(cè)面3(圖中未標(biāo)出)的上緣與頂蓋頂面6之間產(chǎn)生一個空隙。
[0036]請參照圖5和圖6，圖5是本發(fā)明的培養(yǎng)皿多孔蓋9結(jié)構(gòu)示意圖，圖6是本發(fā)明圓柱貫穿孔10與多孔蓋凸起13的剖視圖。所述多孔蓋9為圓形平面，多孔蓋9上均勻分布有圓柱貫穿孔10，多孔蓋9外側(cè)有一缺口 11，多孔蓋9上表面有半圓形提環(huán)12，所述多孔蓋9下表面有4個多孔蓋凸起13，多孔蓋凸起13均勻分布在多孔蓋9下表面的邊緣內(nèi)側(cè)，所述多孔蓋9缺口 11與長方形突出44相嵌合。
[0037]請參照圖7，圖7是本發(fā)明培養(yǎng)皿主視圖。多孔蓋9蓋在底盤底面2上并通過缺口11與長方形突出44嵌合將多孔蓋9固定，培養(yǎng)皿頂蓋5蓋在培養(yǎng)皿底盤I上。頂蓋凸起8的頂點所構(gòu)成圓的直徑小于底盤側(cè)面3 (圖中未標(biāo)出)外表面所構(gòu)成圓的直徑，將培養(yǎng)皿頂蓋5蓋在培養(yǎng)皿底盤I上時，底盤側(cè)面3的上緣與頂蓋凸起8接觸，使底盤側(cè)面3上緣與頂蓋頂面6(圖中未標(biāo)出)之間產(chǎn)生一個空隙，可以使培養(yǎng)皿與外部空氣交換。
[0038]請參照圖8，圖8是本發(fā)明培養(yǎng)皿多孔蓋9立于培養(yǎng)皿底盤I上方示意圖。使用時，只需將多孔蓋9的缺口 11與支架連接部42相嵌合，使多孔蓋9立于培養(yǎng)皿底盤I上方，無需另找無菌處存放多孔蓋9。
[0039]所述的培養(yǎng)皿規(guī)格優(yōu)選為:所述培養(yǎng)皿底盤I外徑為8cm，高為1.5cm,底盤側(cè)面3厚為0.1cm ;所述支架管狀部43直徑為0.5cm,高為0.7cm,支架管狀部43底面與底盤底面2之間留有Imm高度的空隙；所述支架突起部直徑為0.3cm,高為0.5cm ;所述頂蓋頂面6直徑為8.3cm,高為0.6cm ;頂蓋側(cè)面7內(nèi)表面直徑為8.1cm,外表面上端直徑為8.4cm,外表面下端直徑為8.2cm ;所述多孔蓋9直徑為7.7cm,厚為0.04cm ;所述圓柱貫穿孔10直徑為1mm。但其規(guī)格不僅限于此，還可以在以下范圍內(nèi):所述培養(yǎng)皿底盤I外徑為7-9cm，高為1.3-1.7cm,底盤側(cè)面3厚為0.1-0.2cm ;所述支架管狀部43直徑為0.4-0.6cm,高為0.5-0.9cm,支架管狀部43底面與底盤底面2之間留有l(wèi)_2mm高度的空隙；所述支架突起部直徑為0.2-0.4cm,高為0.4-0.6cm ;所述頂蓋頂面6直徑為8.2-8.4cm,高為0.4-0.8cm ；頂蓋側(cè)面7內(nèi)表面直徑為8.0-8.2cm，外表面上端直徑為8.2-8.6cm，外表面下端直徑為8.0-8.4cm ;所述多孔蓋9直徑為7.5-7.9cm,厚為0.03-0.05cm ;所述圓柱貫穿孔10直徑為1-1.5mm。
[0040]需要說明的是，本文中“倒置圓臺”代表上端直徑大于下端直徑的圓臺形狀。所述的培養(yǎng)皿由透明材料制成，這樣的設(shè)計方便在使用過程中對培養(yǎng)皿中的組織塊實時觀察；所述底盤側(cè)面3的內(nèi)表面固定有支架管狀部43，換液時只需將吸管插入支架管狀部43的管狀結(jié)構(gòu)內(nèi)，以負(fù)壓將培養(yǎng)皿中的液體吸出。同時支架管狀部43底面與底盤底面2之間留有l(wèi)-2mm高度的空隙，這樣的設(shè)計可使液體被吸出的更完全，獲得更多的組織細(xì)胞；所述支架突起部41通過支架連接部42固定在支架管狀部43外表面靠近培養(yǎng)皿中心一側(cè)，操作時，只需將多孔蓋9的缺口 11插進(jìn)支架連接部42，支撐多孔蓋9 (如圖7所示)，不需要另找無菌區(qū)域放置多孔蓋9，降低組織塊被污染的風(fēng)險；所述頂蓋側(cè)面7外表面為倒置圓臺側(cè)面，頂蓋側(cè)面7的外表面由上到下逐漸接近培養(yǎng)皿底盤側(cè)面3，這樣在拿取培養(yǎng)皿時，手指能與整個培養(yǎng)皿貼合良好，拿取更穩(wěn)；所述頂蓋凸起8頂點所構(gòu)成圓的直徑小于底盤側(cè)面3外表面所構(gòu)成圓的直徑，培養(yǎng)時，底盤側(cè)面3的上緣與頂蓋凸起8接觸，使底盤側(cè)面3上緣與頂蓋頂面6之間產(chǎn)生一個空隙，培養(yǎng)箱中的氣體成分如二氧化碳通過頂蓋凸起8與底盤側(cè)面3上緣形成的空隙進(jìn)入到培養(yǎng)皿內(nèi)部，再經(jīng)過多孔蓋9上均勻分布的圓柱貫穿孔10與培養(yǎng)皿中全部培養(yǎng)液進(jìn)行交換；所述多孔蓋9上表面有半圓形提環(huán)12，移動多孔蓋9時只需要用鑷子夾持半圓形提環(huán)12，能夠避免夾持不穩(wěn)，降低培養(yǎng)皿底盤I內(nèi)發(fā)生污染的概率；多孔蓋9上均勻分布有直徑為Imm的圓柱貫穿孔10，該設(shè)計使處于底盤底座2上的組織塊不會通過圓柱貫穿孔10到達(dá)多孔蓋9的上方，使組織塊貼壁生長，同時均勻分布的圓柱貫穿孔10讓位于底盤底座2上的組織塊有相同的生長環(huán)境，利于組織塊的培養(yǎng)；所述多孔蓋9的缺口 11與長方形突出44相嵌合，細(xì)胞培養(yǎng)時，將多孔蓋9置入培養(yǎng)皿底盤I中，使缺口 11與長方形突出44相嵌合，固定多孔蓋9，同時多孔蓋9由于自身的重力，會將組織塊壓在底盤底面2上，使組織塊貼壁生長，而且方便培養(yǎng)皿移動，不會因為培養(yǎng)皿的震動使組織塊貼壁失??；所述多孔蓋9下表面有4個多孔蓋凸起13，有利于胰酶完全消化底面2與多孔蓋9之間的細(xì)胞。
[0041]本發(fā)明組織塊法培養(yǎng)皿使用方法:細(xì)胞培養(yǎng)操作時，打開培養(yǎng)皿頂蓋5放于一側(cè)，使用無菌鑷子夾持半圓形提環(huán)12，將多孔蓋9提起，并以缺口 11與支架連接部42嵌合，使多孔蓋9立于培養(yǎng)皿底盤I上方。在底盤底面2均勻分布剪切好的組織塊，滿意后再次使用鑷子夾持半圓形提環(huán)12，將多孔蓋9提起，并以缺口 11與長方形突出44嵌合，此時由于多孔蓋9自身的重力，會將組織塊壓在底盤底面2上(多孔蓋凸起13高度小于組織塊高度)。加入培養(yǎng)基，滿意后蓋上培養(yǎng)皿頂蓋5并放入培養(yǎng)箱內(nèi)開始培養(yǎng)。細(xì)胞生長時，培養(yǎng)箱中的氣體成分如二氧化碳，通過頂蓋凸起8與底盤側(cè)面2上緣形成的空隙，進(jìn)入到培養(yǎng)皿內(nèi)部，再經(jīng)過多孔蓋9上均勻分布的若干圓柱貫穿孔10與培養(yǎng)皿中全部培養(yǎng)液進(jìn)行交換。由于圓柱貫穿孔10的平均分布，被多孔蓋9覆蓋的組織塊生長環(huán)境是相同的。圓柱貫穿孔10尺寸為Imm(組織塊尺寸大于Imm)，因此組織塊不會穿過圓柱貫穿孔10到多孔蓋9的上面。進(jìn)行換液時，打開培養(yǎng)皿頂蓋5放于一側(cè)，傾斜培養(yǎng)皿使液體向“8字”形支架4側(cè)聚集，以吸管自支架管狀部43中負(fù)壓吸引，培養(yǎng)皿中的液體通過支架管狀部43底面與底盤底面2間的空隙被吸出。滿意后，向培養(yǎng)皿底盤中加入新的培養(yǎng)液。進(jìn)行細(xì)胞收獲時，打開培養(yǎng)皿頂蓋5放于一側(cè),如上所述傾斜培養(yǎng)皿并用吸管將培養(yǎng)液從支架管狀部43吸出，滿意后使用無菌鑷子夾持半圓形提環(huán)12，將多孔蓋9提起，并以缺口 11與支架連接部42嵌合，使多孔蓋9立于培養(yǎng)皿底盤I上方，用無菌鑷子將組織塊從培養(yǎng)皿底盤I摘除，重新蓋上多孔蓋9 (或不蓋)，加入胰酶消化，如上所述傾斜培養(yǎng)皿并用吸管將消化好的細(xì)胞懸液從支架管狀部43吸出，消化過程中，多孔蓋底面3的多孔蓋凸起13會避免多孔蓋底面與培養(yǎng)皿底面接觸，使胰酶能夠在此兩個平面間流動，消化細(xì)胞。
[0042]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種組織塊法培養(yǎng)皿，其特征在于，所述的培養(yǎng)皿由培養(yǎng)皿底盤、培養(yǎng)皿頂蓋、多孔蓋三部分組成；所述培養(yǎng)皿底盤由底盤底面、底盤側(cè)面、“8”字形支架三部分組成；所述“8”字形支架包括支架突起部、支架連接部、支架管狀部；所述支架管狀部為中空管狀結(jié)構(gòu)，支架管狀部固定在底盤側(cè)面的內(nèi)表面且與底盤底面垂直；所述支架突起部通過支架連接部固定在支架管狀部外表面靠近培養(yǎng)皿中心一側(cè)；所述支架突起部為圓柱體結(jié)構(gòu)且與底盤底面垂直；所述支架管狀部底面靠近培養(yǎng)皿中心一側(cè)設(shè)有長方形突出；所述培養(yǎng)皿頂蓋由頂蓋頂面、頂蓋側(cè)面、頂蓋凸起三部分組成；所述多孔蓋均勻分布有圓柱貫穿孔，多孔蓋外側(cè)有一缺口 ；所述多孔蓋的上表面有半圓形提環(huán)；所述多孔蓋的下表面有四個多孔蓋凸起；所述的多孔蓋缺口能和長方形突出相嵌合將多孔蓋固定在培養(yǎng)皿內(nèi)；所述的多孔蓋缺口能與支架連接部相嵌合，使多孔蓋立于培養(yǎng)皿底盤上方；所述培養(yǎng)皿由透明材料制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于，所述的支架管狀部底面與底盤底面之間有l(wèi)_2mm高度的空隙。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于，所述的頂蓋凸起呈十字對稱分布于頂蓋頂面下表面的邊緣內(nèi)側(cè)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于，所述頂蓋凸起的頂點所構(gòu)成圓的直徑小于底盤側(cè)面外表面所構(gòu)成圓的直徑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于，所述的頂蓋側(cè)面內(nèi)表面為圓柱體側(cè)面；所述的頂蓋側(cè)面外表面為倒置圓臺側(cè)面。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于，所述的貫穿孔直徑為1mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于，所述的多孔蓋凸起呈十字對稱分布于多孔蓋下表面的邊緣內(nèi)側(cè)。
【文檔編號】C12M1/22GK104450505SQ201410663746
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】王春生, 孫勇新, 康樂, 鄒翔, 鄒云增 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院