一種直觀篩選抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種直觀篩選抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法，首先制備適宜海洋微生物、陸地微生物、或植物內(nèi)生菌等各類(lèi)微生物生長(zhǎng)的固體培養(yǎng)基平板，在平板四周點(diǎn)接接種4個(gè)不同的微生物菌種，在25-35度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0-2天后，再在平板中央接種寄生曲霉DM菌株，繼續(xù)培養(yǎng)3-4天后，眼睛直接觀察平板中DM菌株的菌絲生長(zhǎng)和橘紅色降散盤(pán)衣酸的產(chǎn)生情況，凡是能抑制DM菌株菌絲中橘紅色降散盤(pán)衣酸的產(chǎn)生和/或菌絲生長(zhǎng)的微生物菌種，即是能抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的微生物菌種。該發(fā)明是一種直觀、快速、安全、低成本篩選高效抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種直觀篩選抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及應(yīng)用微生物、生物防治和真菌毒素等【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說(shuō)是一種直觀篩選抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]黃曲霉毒素是由黃曲霉、寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物，是自然界中已發(fā)現(xiàn)的毒性最強(qiáng)的真菌毒素，其急性毒性是劇毒化學(xué)藥品氰化鉀的10倍以上，并且，還具有強(qiáng)致癌性，免疫抑制性和致畸形性，被國(guó)際癌癥機(jī)構(gòu)列為一類(lèi)致癌物質(zhì)。黃曲霉毒素可在作物收獲前和貯藏期間廣泛污染谷類(lèi)作物，油料作物，豆類(lèi)作物，及其加工品，對(duì)人類(lèi)和動(dòng)物健康危害極大，并導(dǎo)致農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。因此，如何有效地防止黃曲霉毒素污染農(nóng)產(chǎn)品都是一個(gè)亟待解決的重大課題，以往的防治黃曲霉毒素污染食品的方法主要是用物理和化學(xué)方法清除食品中已污染的毒素或使其失去毒性，不僅成本大，而且效果也不理想，利用化學(xué)農(nóng)藥防治黃曲霉菌侵染作物和食品也曾被利用，但近年來(lái)，由于化學(xué)農(nóng)藥導(dǎo)致的環(huán)境污染問(wèn)題越來(lái)越被各國(guó)科學(xué)家和政府所重視，利用對(duì)環(huán)境友好的生物防治已成為研究熱點(diǎn)。
生物防治黃曲霉毒素污染的關(guān)鍵是篩選出能高效抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生菌生長(zhǎng)和產(chǎn)毒的生防微生物菌種，由于黃曲霉毒素是極毒的真菌代謝產(chǎn)物，產(chǎn)生后，肉眼又不能直接觀測(cè)至IJ，必須借助相關(guān)儀器和分析手段才能檢測(cè)到毒素的產(chǎn)生情況，不僅手續(xù)繁瑣，而且容易造成環(huán)境污染，危害操作人員的健康，因此，建立一種直觀、快速、安全、低成本篩選能高效抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法非常重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種適合于從海洋微生物、陸地微生物、植物內(nèi)生菌等諸多不同生境來(lái)源的微生物中直觀、快速、安全、低成本篩選出能高效抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案是:一種直觀篩選抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法，其特征包括如下步驟:
(I)所使用的黃曲霉毒素指不囷株為寄生曲霉DM囷株；
(2 )所使用的篩選培養(yǎng)基為能提供海洋微生物、陸地微生物、植物內(nèi)生菌等各類(lèi)微生物生長(zhǎng)的各種固體培養(yǎng)基；
(3)根據(jù)待篩選微生物種類(lèi)的不同，制備適宜的固體培養(yǎng)基平板；
(4)在平板四周點(diǎn)接接種4個(gè)不同的微生物菌種，在25-35度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0-2天后，再在平板中央接種DM菌株，繼續(xù)培養(yǎng)3-4天后，觀察培養(yǎng)結(jié)果；
(5)眼睛直接觀察平板中DM菌株的菌絲生長(zhǎng)和橘紅色降散盤(pán)衣酸的產(chǎn)生，凡是能抑制DM菌株菌絲中橘紅色降散盤(pán)衣酸的產(chǎn)生和/或菌絲生長(zhǎng)的微生物菌種，即是能抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的微生物菌種。 本發(fā)明與其他篩選方法顯著不同在于第一是使用寄生曲霉DM菌株為指示菌株，DM菌株具有在菌絲體中累積人眼睛可見(jiàn)的橘紅色的黃曲霉毒素生物合成途徑中的中間產(chǎn)物降散盤(pán)衣酸的能力，因此，可以通過(guò)眼睛直接觀察寄生曲霉DM菌株的菌絲體中是否顯示橘紅色而判斷是否有中間產(chǎn)物降散盤(pán)衣酸的產(chǎn)生，進(jìn)而進(jìn)一步判斷是否有黃曲霉毒素的產(chǎn)生，凡是能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸產(chǎn)生的微生物菌種，即具備抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的能力，因此，結(jié)果觀察直觀、簡(jiǎn)單、方便、快速；第二是DM菌株不產(chǎn)生黃曲霉毒素，因此，不會(huì)對(duì)環(huán)境和操作人員帶來(lái)黃曲霉毒素的危害，因此，該發(fā)明操作安全；第三是只需要人的眼睛觀察結(jié)果，不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備檢測(cè)即可判斷對(duì)黃曲霉毒素的抑制效果，且培養(yǎng)時(shí)間只有3-6天，具有快速、低成本的特點(diǎn)，可對(duì)大量樣品進(jìn)行篩選。

【具體實(shí)施方式】
[0004]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。
[0005]實(shí)施例1:抑制黃曲霉毒素的海洋微生物菌種的篩選
按括號(hào)內(nèi)的配方制備固體培養(yǎng)基平板(酵母提取物3 g，麥芽膏3 g，蛋白胨5 g，葡萄糖10 g，瓊脂15g，天然海水100mL),在平板四周分別接種四個(gè)海洋微生物菌種，在25度恒溫培養(yǎng)2天后，在平板中央接種寄生曲霉DM菌株，繼續(xù)培養(yǎng)4天后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，凡是能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸在菌絲中產(chǎn)生的菌種，即是能抑制黃曲霉毒素合成的海洋微生物菌種，如圖1所示。
[0006]圖1是平板篩選能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸產(chǎn)生的海洋微生物菌種的圖。圖1中正向方的菌株為具有抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸產(chǎn)生的海洋微生物菌種，亦即能抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的海洋微生物菌種。
[0007]實(shí)施例2:抑制黃曲霉毒素的陸地微生物菌種的篩選
按括號(hào)內(nèi)的配方制備固體培養(yǎng)基平板(酵母粉5g，酪蛋白2 g，可溶性淀粉10 g，蔗糖10g，瓊脂20g，自來(lái)水100mL),在平板四周分別接種四個(gè)陸地微生物菌種后，在平板中央接種寄生曲霉DM菌株，在32度恒溫培養(yǎng)3-5天后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，凡是能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸在菌絲中產(chǎn)生的菌種，即是能抑制黃曲霉毒素合成的陸地微生物菌種，如圖2所示。
[0008]圖2是平板篩選能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸產(chǎn)生的陸地微生物菌種的圖。圖2中左側(cè)圖為對(duì)照，顯示產(chǎn)生大量橘紅色降散盤(pán)衣酸，右側(cè)圖顯示能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸產(chǎn)生的4個(gè)陸地微生物菌種，亦即能抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的4個(gè)陸地微生物菌種。
[0009]實(shí)施例3:抑制黃曲霉毒素的植物內(nèi)生菌菌種的篩選
按括號(hào)內(nèi)的配方制備固體培養(yǎng)基平板(酵母粉5g，葡萄糖20g，瓊脂18g，花生種子提取液100mL),在平板四周分別接種四個(gè)植物內(nèi)生菌菌種后，在平板中央接種寄生曲霉DM菌株，在30度恒溫培養(yǎng)3-5天后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，凡是能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸在菌絲中產(chǎn)生的菌種，即是能抑制黃曲霉毒素合成的植物內(nèi)生菌菌種，如圖3所示。
[0010]圖3是平板篩選能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸產(chǎn)生的植物內(nèi)生菌菌種的圖。圖3中左側(cè)圖為對(duì)照，顯示產(chǎn)生大量橘紅色降散盤(pán)衣酸，右側(cè)圖顯示能抑制橘紅色降散盤(pán)衣酸產(chǎn)生的4個(gè)植物內(nèi)生菌菌種，亦即能抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的4個(gè)植物內(nèi)生菌菌種。
【權(quán)利要求】
1.一種直觀篩選抑制黃曲霉毒素的微生物菌種的方法，其特征包括如下步驟: (I)所使用的黃曲霉毒素指不囷株為寄生曲霉DM囷株； (2 )所使用的篩選培養(yǎng)基為能提供海洋微生物、陸地微生物、植物內(nèi)生菌等各類(lèi)微生物生長(zhǎng)的各種固體培養(yǎng)基； (3)根據(jù)待篩選微生物種類(lèi)的不同，制備適宜的固體培養(yǎng)基平板； (4)在平板四周點(diǎn)接接種4個(gè)不同的微生物菌種，在25-35度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0-2天后，再在平板中央接種DM菌株，繼續(xù)培養(yǎng)3-4天后，觀察培養(yǎng)結(jié)果； (5)眼睛直接觀察平板中DM菌株的菌絲生長(zhǎng)和橘紅色降散盤(pán)衣酸的產(chǎn)生，凡是能抑制DM菌株菌絲中橘紅色降散盤(pán)衣酸的產(chǎn)生和/或菌絲生長(zhǎng)的微生物菌種，即是能抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的微生物菌種。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK104328161SQ201410520947
【公開(kāi)日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月29日
【發(fā)明者】閆培生, 王凱, 王琢, 史翠娟 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)（威海）