含有?；薮继擒盏姆勰罨蚬腆w狀的組合物及其制造方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于，提供粉末狀或固體狀的、來自米糠的含酰化甾醇糖苷(ASG)組合物。以來自米糠的米卵磷脂為原料，用使用二氧化碳和乙醇的超臨界萃取操作處理，從所得到的萃取殘渣中去除乙醇。
【專利說明】含有?；舸继擒盏姆勰罨蚬腆w狀的組合物及其制造方 法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及含有?；舸继擒盏姆勰罨蚬腆w狀的組合物及其制造方法。

【背景技術(shù)】
[0002] ?；薮继擒眨ㄒ韵掠洖?ASG"。）為在類固醇骨架3位上結(jié)合的糖被酰基化的 化合物。ASG可從大豆、糙米、發(fā)芽糙米等得到（參照專利文獻1、專利文獻2)。專利文獻 1的來自發(fā)芽糙米的ASG具有改善糖尿病性神經(jīng)障礙的效果。且專利文獻2的來自大豆的 ASG具有DNA合成酶的抑制作用。
[0003] 為了得到這些ASG，例如在專利文獻1的來自發(fā)芽糙米的ASG的情況下，從將發(fā)芽 糙米碾米時得到的米糠中，使用極性低的氯仿、極性高的甲醇等的有機溶劑萃取ASG組分 (參照非專利文獻1)，使用吸附色譜法，進而使用高效液相色譜法（HPLC)制備。
[0004] 此外，在專利文獻2的來自大豆的甾醇糖苷的情況下，在大豆（Glycine max L.) 中加入正己烷得到正己烷萃取物后，餾去正己烷，加入氯仿，得到氯仿萃取物，進而進行色 譜分離、HPLC操作而萃取。
[0005] 即使使用上述萃取方法（HPLC操作前），在來自發(fā)芽糙米的ASG的情況下，每單位 干燥物中也僅得到2. 7%的含量。另外，均使用氯仿等的溶劑為用于提高萃取效率的必需條 件，將氯仿作為萃取溶劑使用時，其氯仿會殘留在萃取物中。而且，在溶劑萃取的情況下，因 萃取溶劑中，米糠、大豆中所含有的脂質(zhì)表現(xiàn)出與ASG同樣的行為，所以ASG與脂質(zhì)的分離 極其困難，僅由溶劑萃取來提高ASG的純度（含有率）非常難。
[0006] 進而還有，這些用現(xiàn)有技術(shù)制備的含ASG萃取物均為油狀或具有強粘性的組合 物，為了利用ASG，非常難于處理。因此，為了作為食品、醫(yī)藥品原料而有效利用時，要在濃縮 的組合物中添加用于粉末化的助劑、淀粉等，并將ASG再次稀釋使用等，技術(shù)上非高效的操 作是必不可少的。
[0007] 本
【發(fā)明者】探討了高效萃取此種難處理的含ASG組合物的方法，開發(fā)了從米糠中 應(yīng)用超臨界萃取技術(shù)的二階段萃取技術(shù)，并已進行了專利申請（日本特愿2012 - 146577 號）。該發(fā)明為可高效萃取極性高的ASG的方法，但因所得到的萃取組合物為油狀的粘性高 的物質(zhì)，所以難處理的課題無法解決。
[0008] 本
【發(fā)明者】著眼于米糠中存在的ASG，發(fā)現(xiàn)了 ASG在被稱為米卵磷脂的米油的精制 過程的副產(chǎn)物中含有較高濃度（約2. 5% (w/w))。
[0009] 因此，本
【發(fā)明者】進一步推進研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了更高效的ASG制備技術(shù)。而且還發(fā)現(xiàn) 在使用該制備技術(shù)時，以往難處理的含ASG組合物可容易地進行粉末化或固體化，從而完 成了本發(fā)明。
[0010] 現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0011] 專利文獻
[0012] 專利文獻1國際公開第2009/110612號公報
[0013] 專利文獻2日本特開2011 - 213609號公報
[0014] 非專利文獻
[0015] 非專利文獻 IJordi Folch et. al. J. Biol. Chem.，226,497-505,1957


【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 本發(fā)明以提供粉末狀或固體狀的、來自米糠的含ASG組合物為課題。且還以提供 粉末化或固體化的來自米糠的ASG的制造方法為課題。
[0017] 本發(fā)明如下構(gòu)成。
[0018] (1) 一種來自米糠的含?；舸继擒战M合物，其特征在于，為粉末狀或固體狀。
[0019] ⑵根據(jù)⑴中所述的組合物，其特征在于，含有4% (w/w)以上?；舸继擒?。
[0020] (3)根據(jù)⑴中所述的組合物，其特征在于，含有6% (w/w)以上酰化留醇糖苷。
[0021] (4)根據(jù)（1)?（3)中任一項所述的組合物，其特征在于，含?；舸继擒战M合物 中的憐脂含量為約50% (w/w)以上。
[0022] (5)根據(jù)⑴?⑶中任一項所述的組合物，其特征在于，含?；舸继擒战M合物 中的磷脂含量為約55?90% (w/w)。
[0023] (6) -種粉末狀或固體狀的來自米糠的含?；舸继擒战M合物的制造方法，其為 制造以來自米糠的米卵磷脂為原料的粉末狀或固體狀含酰化留醇糖苷組合物的方法，其特 征在于，包含以下操作：將米卵磷脂用使用二氧化碳和乙醇的超臨界萃取操作處理，從所得 到的萃取殘渣中去除乙醇。
[0024] (7)根據(jù)（6)中所述的制造方法，其特征在于，萃取溫度為32?70°C，萃取壓力為 10?50MPa，二氧化碳與乙醇量的混合比為1 :1?100 :1的范圍。
[0025] (8)根據(jù)（6)中所述的制造方法，其特征在于，萃取溫度為32?45°C，萃取壓力為 10?30MPa，二氧化碳與乙醇量的混合比為10 :1?15 :1的范圍。
[0026] (9) -種粉末狀或固體狀的來自米糠的含?；舸继擒战M合物的制造方法，其為 制造以來自米糠的米卵磷脂為原料的粉末狀或固體狀的含?；舸继擒战M合物的方法，其 特征在于，包含以下操作：將米卵磷脂用僅使用二氧化碳的超臨界萃取操作處理的第一階 段萃取操作，用使用二氧化碳和乙醇的超臨界萃取操作處理的第二階段萃取操作，從由第 二階段萃取操作的結(jié)果得到的萃取殘渣中減壓除去乙醇的操作。
[0027] (10)根據(jù)（9)中所述的制造方法，其特征在于，第一階段萃取操作的萃取條件為 萃取溫度為32?45°C，萃取壓力為10?30MPa，第二階段萃取操作的萃取溫度為32? 70°C，萃取壓力為10?50MPa，二氧化碳與乙醇量的混合比為1 :1?100 :1。
[0028] (11)根據(jù)（10)中所述的制造方法，其特征在于，第二階段萃取操作的二氧化碳與 乙醇量的混合比10 :1?15 :1。
[0029] 通過本發(fā)明，提供粉末狀或固體狀的來自米糠的含ASG組合物。
[0030] 且還通過本發(fā)明，提供粉末狀或固體狀的來自米糠的含ASG組合物的制造方法。
[0031] 此外，本發(fā)明的制法為不使用氯仿的方法，含ASG組合物中不會殘留氯仿。進而還 有本發(fā)明的組合物為粉末或固體狀組合物，可直接用作目的原料或通過壓片等進行制劑化 來用作目的原料。而且，因不需要用于進行粉末化或固體化的助劑，所以，成為能以高濃度 用作食品、醫(yī)藥品原料的含ASG組合物。
[0032] 此外，以往米卵磷脂未被有效利用于作為卵磷脂原料的用途以外，但通過本發(fā)明， 發(fā)現(xiàn)了作為ASG的原料的新型利用領(lǐng)域。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0033] 圖1表示用于分析本發(fā)明中得到的含ASG組合物的HPLC洗脫溶劑的梯度曲線和 HPLC色譜圖（通過標準品的梯度程序的洗脫模式）。在洗脫時間剛要到5分鐘之前ASG被 洗脫。
[0034] 圖2表示分析作為原料的米卵磷脂中的ASG的HPLC色譜圖。
[0035] 圖3表示分析萃取例1的第一階段操作中得到的萃取物中的ASG的HPLC色譜圖。
[0036] 圖4表示分析萃取例1的第二階段操作中得到的萃取物中的ASG的HPLC色譜圖。
[0037] 圖5表示分析萃取例1的第二階段操作中得到的殘渣中的ASG的HPLC色譜圖。

【具體實施方式】
[0038] 以下更詳細地說明本發(fā)明的實施方式。
[0039] 作為本發(fā)明的原料的米卵磷脂通常通過以下方法制造。
[0040] 將米糠進行加熱處理，水分調(diào)整后，通過己烷萃取油分。從萃取的油分中將己烷和 不溶物去除，作為脫膠處理加入溫水并將磷脂水合。其后，用離心分離器分離膠和油，所得 至_膠即為米卵磷脂。另外，米卵磷脂含有約28. 9?43.3% (w/w)的磷脂。雖然米卵磷脂 富含磷脂，可作為磷脂、卵磷脂的原料利用，但作為ASG的原料還不為人所知。此用途是通 過本發(fā)明才被首次發(fā)現(xiàn)的用途。
[0041] 通過以該米卵磷脂為原始物質(zhì),才可實施本發(fā)明。
[0042] 第一階段萃取
[0043] 為了萃取ASG，將米油的精制工序中得到的米卵磷脂收納在超臨界二氧化碳萃取 裝置的萃取槽內(nèi)，在通常實施的超臨界二氧化碳的萃取條件下進行操作。適合的萃取條件 為例如，二氧化碳流量為10?IOOg/分鐘，萃取時間為1?5小時，萃取壓力為10?30MPa 及萃取溫度為32?45°C。更優(yōu)選二氧化碳流量為65g/分鐘，萃取時間為4小時，萃取壓力 為25MPa及萃取溫度為40°C。
[0044] 第二階段萃取
[0045] 第一階段萃取結(jié)束后，萃取槽的殘渣用添加了低級醇（例如優(yōu)選乙醇）的超臨界 二氧化碳再次萃取。
[0046] 作為適合的萃取條件，例如在二氧化碳流量為10?IOOg/分鐘，萃取時間為 0. 5?5小時，萃取壓力為10?50MPa及萃取溫度為32?70°C的條件下進行萃取。另外， 乙醇的添加量調(diào)整到二氧化碳與乙醇量的混合比為1 :1?100 :1。
[0047] 作為更優(yōu)選的萃取條件，例如在二氧化碳流量為10?IOOg/分鐘，萃取時間為 0. 5?5小時，萃取壓力為10?30MPa及萃取溫度為32?45°C的條件下進行萃取。另外， 乙醇的添加量調(diào)整到二氧化碳與乙醇量的混合比為10 :1?15 :1。
[0048] 特別優(yōu)選萃取時間為3小時，萃取壓力為25MPa及萃取溫度為40°C，二氧化碳流量 為65g/分鐘，乙醇添加量為4. 7mg/分鐘。
[0049] 另外，也可不進行第一階段的萃取操作，僅實施第二階段的萃取操作。
[0050] 進行如上所述萃取操作時，萃取槽的殘渣成為高濃度含ASG組合物。
[0051] 將該組合物進一步僅用二氧化碳進行再萃取而去除醇類。為了去除醇類，二氧化 碳流量為10?IOOg/分鐘，萃取時間為1?5小時，萃取壓力為10?50MPa及萃取溫度為 32 ?70。。。
[0052] 更優(yōu)選二氧化碳流量為65g/分鐘，萃取時間為1小時，萃取壓力為25MPa及萃取 溫度為40°C。
[0053] 或也可在二次階段萃取操作結(jié)束后，取出萃取槽的殘渣，進行冷凍干燥等的減壓 干燥操作而去除乙醇。
[0054] 由此得到的組合物呈現(xiàn)粉末狀或固體狀，含有4% (w/w)以上ASG。也可將該組合 物通過柱色譜法、制備型HPLC，而作為用于得到進一步提高了 ASG含有率的組合物的原料。
[0055] ASG的確認方法
[0056] 所得到的含ASG組合物中的ASG含量用以下所示方法進行分析、確認。
[0057] 1)標準品溶液的制備方法
[0058] 標準品使用酯化硬脂基葡糖苷（Esterified Steryl Glucoside) (2mg/安瓿、 Larodan Fine Chemicals AB公司制、funakoshi公司銷售）。制備為在安瓿開封后，將總 量2mg進行氮干固，移入IOmL容量瓶內(nèi)，用氯仿：甲醇=2 :1(容量比）的混合溶液（以下 為CM混合液）混合至10mL(200iig/mL)后，分級稀釋為100、50、25、12. 5及6. 25iig/mL的 濃度系列，制成校正曲線。
[0059] 2)分析用試樣溶液的制備方法
[0060] 將米卵磷脂、濃縮干固品（ASG萃取物）及超臨界萃取殘渣（含ASG組合物）一 起精確稱量30mg，移入IOmL容量瓶后，用CM混合液混合成10mL，將用過濾器過濾（孔徑： 0. 45iim)的濾液（3mg/mL)作為分析用試樣溶液。
[0061] 3)分析條件
[0062] 分析系統(tǒng)及其分析條件如下
[0063] 分析裝置：HPLC
[0064] 流動相A :甲醇冰=95 :5 (v/v)
[0065] 流動相 B :氯仿=100 (v/v)
[0066] 泵：Model582solvent delivery system
[0067] 分析色譜柱：LiChrospher Si60 (5 iim) HPLC-Cartridge LiChroCART125-4:MERCK 公司制
[0068] 檢測器：電霧式檢測器（Corona Dionex公司制）
[0069] 進樣體積（Injection Volume) :20 u L
[0070] 柱溫箱：40°C (FLO 公司制 model502)
[0071] 分析時間：40分鐘
[0072] 脫泡裝置：uniflows Degasys Ultimate DV3003
[0073] 流速：ImL/分鐘
[0074] 4)梯度程序條件
[0075] 如以下所示
[0076] (1)0-15 分鐘
[0077] 流動相 A :1 % - 25%、流動相 B :99% - 75%
[0078] (2) 15-20 分鐘
[0079] 流動相 A :2590%、流動相 B :7510%
[0080] (3) 20-25 分鐘
[0081] 流動相A :90%、流動相B : 10%
[0082] (4) 25-30 分鐘
[0083] 流動相 A :90%- 1%、流動相 B :10% - 99%
[0084] (5) 30-40 分鐘
[0085] 流動相A : 1 %、流動相B :99 %
[0086] 另外，通過標準品溶液的梯度程序的洗脫模式如圖1所示。
[0087] 實施例
[0088] 如以下實施例、分析例所示，詳細說明本發(fā)明。
[0089] 〈萃取操作例1 >
[0090] 第一階段萃取操作
[0091] 分析ASG的含量，采集約5L35g含量為2.5% (w/w)的米卵磷脂（脫水膠 (dehydrated gum)辻制油公司制），將其移入超臨界萃取裝置（三菱化工機公司制）的耐 壓容器（萃取槽，0.5L容器）中。而后作為萃取溶劑使用二氧化碳，進行升溫?升壓操作， 40°C 25MPa下將超臨界二氧化碳通入萃取槽并進行萃取操作，進行4小時（C02流速：65g/ 分鐘）。
[0092] 萃取液移入回收槽進行秤量。通過本條件下的萃取操作，可萃取約45%所秤量的 原料，55%作為殘渣回收到萃取槽中。
[0093] 表示將通過超臨界萃取的ASG的濃縮狀況在上述HPLC條件下分析時的色譜。圖2 為作為原料的米卵磷脂的色譜。且圖3表示第一階段萃取操作結(jié)束后的萃取物的色譜。在 確認到相當(dāng)于ASG的峰之前，可確認出相當(dāng)于被洗脫的游離脂肪酸、甘油酯化合物的峰。該 現(xiàn)象表明第一階段萃取操作結(jié)束后的殘渣中的游離脂肪酸及甘油酯化合物的去除會成為 用于提高ASG濃度、并使其固體化的重要原因之一。
[0094] 第二階段萃取操作
[0095] 其次，相對于萃取槽中的殘渣，將超臨界二氧化碳和乙醇的混合溶劑通入萃取槽 并進行萃取，該操作在40°C 25MPa、C02流速：約65g/分鐘、乙醇：約2. 4g/分鐘的條件下進 行1個半小時，進而在40°C 25MPa、C02流速：約65g/分鐘、乙醇：約4. 7g/分鐘的條件下進 行1個半小時。作為萃取殘渣，得到含ASG固體物。
[0096] 另外，所秤量的原料重量的約10%通過該超臨界萃取操作萃取，萃取槽中含有 ASG的組分可作為45%殘渣回收。
[0097] 圖4中，顯示出通過第二階段萃取操作，相當(dāng)于ASG的峰面積增加，但也顯示出了 未能在第一階段萃取操作中去除的相當(dāng)于游離脂肪酸、甘油酯化合物的峰。且收量甚微。
[0098] 圖5中，顯示相當(dāng)于ASG的峰面積增加，游離脂肪酸、甘油酯化合物被去除。實際 上，ASG與脂肪酸、甘油酯化合物的色譜圖的峰面積比（ASG :脂肪酸、甘油酯化合物）也顯示 出，米卵磷脂的（87. 26 :12. 74)在最終殘渣中成為（64. 33:35. 67)，ASG增加，脂肪酸和甘油 酯化合物為減少的值。而且磷脂類增加也證明其為固體化合物。另外，對于對象試樣，磷脂 量使用Folch的方法（參照非專利文獻1)萃取脂質(zhì)，通過在灰化后使用鑰藍分光光度法來 進行測定，本測定的結(jié)果確認了殘渣中的磷脂含有約58. 7?88. 1%。
[0099] 乙醇的去除
[0100] 為了去除萃取殘渣中殘留的乙醇，在40°c 25MPa的條件下通入二氧化碳1小時以 去除乙醇。進一步減壓后，回收殘渣進行冷凍干燥，作為干燥粉末得到含ASG粉末。在測定 含酰化留醇糖苷組合物的ASG含量時，為約7% (w/w)(參照表1)。
[0101] <萃取條件的影響確認試驗>
[0102] 為了研究上述萃取操作例1中進行的試驗的最適條件，用下述表1的條件研究對 ASG濃度的影響。
[0103] 表 1
[0104]

【權(quán)利要求】
1. 一種來自米糠的含?；舸继擒战M合物，其特征在于，為粉末狀或固體狀。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的組合物，其特征在于，含有4% w/w以上?；薮继擒?。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的組合物，其特征在于，含有6% w/w以上酰化甾醇糖苷。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的組合物，其特征在于，含?；舸继擒战M合物中 的磷脂含量為約50% w/w以上。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的組合物，其特征在于，含酰化留醇糖苷組合物中 的磷脂含量為約55?90% w/w。
6. -種粉末狀或固體狀的來自米糠的含?；舸继擒战M合物的制造方法，其為制造 以來自米糠的米卵磷脂為原料的粉末狀或固體狀含?；舸继擒战M合物的方法，其特征在 于，包含以下操作：將米卵磷脂用使用二氧化碳和乙醇的超臨界萃取操作處理，從所得到的 萃取殘渣中去除乙醇。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6中所述的制造方法，其特征在于，萃取溫度為32?70°C，萃取壓力 為10?50MPa，二氧化碳與乙醇量的混合比為1 :1?100 :1的范圍。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6中所述的制造方法，其特征在于，萃取溫度為32?45°C，萃取壓力 為10?30MPa，二氧化碳與乙醇量的混合比為10 :1?15 :1的范圍。
9. 一種粉末狀或固體狀的來自米糠的含酰化留醇糖苷組合物的制造方法，其為制造以 來自米糠的米卵磷脂為原料的粉末狀或固體狀的含?；舸继擒战M合物的方法，其特征在 于，包含以下操作：將米卵磷脂用僅使用二氧化碳的超臨界萃取操作處理的第一階段萃取 操作，用使用二氧化碳和乙醇的超臨界萃取操作處理的第二階段萃取操作，從由第二階段 萃取操作的結(jié)果得到的萃取殘渣中減壓除去乙醇的操作。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9中所述的制造方法，其特征在于，第一階段萃取操作的萃取條件 為萃取溫度為32?45°C，萃取壓力為10?30MPa，第二階段萃取操作的萃取溫度為32? 70°C，萃取壓力為10?50MPa，二氧化碳與乙醇量的混合比為1 :1?100 :1。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10中所述的制造方法，其特征在于，第二階段萃取操作的二氧化碳 與乙醇量的混合比為10 :1?15 :1。
【文檔編號】A23L1/29GK104415250SQ201410357406
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月2日
【發(fā)明者】本城政稔, 奧原康英, 中村秀美, 足立知基 申請人:株式會社芳珂