利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，既能低成本處理抗生素廠(chǎng)廢水，又能獲得有重要餌料價(jià)值的海洋微藻。扁圓卵形藻傳統(tǒng)上采用廖氏改良培養(yǎng)液并使用環(huán)形跑道池培養(yǎng)，生長(zhǎng)慢、產(chǎn)量低、投資大、易污染、浪費(fèi)土地、效益低，現(xiàn)在我采用白色蒸餾水桶充氣培養(yǎng)，成本低，生長(zhǎng)快，不易污染，且在培養(yǎng)基中增加了抗生素廠(chǎng)廢水、氟硅酸鈉、豬糞浸出液、甲硫氨酸、土壤浸出液、海泥浸出液、L-精氨酸、硝酸銨、尿素、氯化銨、磷酸二氫鉀、羧甲基纖維素鈉、海藻酸丙二醇酯、異亮氨酸等營(yíng)養(yǎng)成分，有機(jī)和無(wú)機(jī)肥混合使用，營(yíng)養(yǎng)更全面、均衡，扁圓卵形藻生長(zhǎng)速度大幅提高，產(chǎn)量提高360％。
【專(zhuān)利說(shuō)明】利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，尤其涉及一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]抗生素是人類(lèi)控制感染性疾病、保障身體健康及防治動(dòng)植物病害的重要化學(xué)藥物?？咕厣a(chǎn)始于二戰(zhàn)，我國(guó)白20世紀(jì)50年代初開(kāi)始生產(chǎn)抗生素，產(chǎn)量逐年增加，現(xiàn)已成為世界上主要抗生素生產(chǎn)國(guó)之一。目前抗生素生產(chǎn)中在抗菌素的篩選和生產(chǎn)、菌種選育等方面仍存在許多難題，原料利用率低，提煉純度低，廢水中殘留抗菌素含量高，易造成嚴(yán)重污染?？股厣a(chǎn)包括微生物發(fā)酵、過(guò)濾、萃取結(jié)晶、化學(xué)方法提取、精制等環(huán)節(jié)。以糧食或糖蜜為主要原料生產(chǎn)抗生素的廢水主要來(lái)自分離、提取、精制純化工藝的高濃度有機(jī)廢水,如結(jié)晶液、廢母液、種子罐、發(fā)酵罐洗滌水及發(fā)酵罐冷卻水,廢水CODCr含量高、含生物毒素、色度高、PH波動(dòng)大、間歇排放，治理難度大。
[0003]目前抗生素制藥廢水有化學(xué)處理法、物化處理法、生物處理法及多種方法組合處理。
[0004]1、化學(xué)處理方法
[0005]在抗生素廢水的化學(xué)處理方法中，臭氧氧化法能提高抗生素廢水B0D5/C0D比值，同時(shí)對(duì)COD有較高去除率。Isil Akmehmet對(duì)2種人體抗生素和I種獸用抗生素廢水進(jìn)行了臭氧氧化處理，并研究了 pH、進(jìn)水COD值和過(guò)氧化氫加入量等因素對(duì)臭氧氧化過(guò)程的影響。結(jié)果顯示，對(duì)于獸用抗生素，在臭氧用量為2.96g/L時(shí)，B0D5/C0D從0.077增加至0.38，而對(duì)人用抗生素，該比值分別是0.1和0.27。結(jié)果還顯示，在不調(diào)整廢水pH值情況下，3種廢水均可獲得75%以上的COD去除率。缺點(diǎn)是工藝復(fù)雜、成本高且效果不穩(wěn)定。
[0006]2、物化處理方法
[0007]由于抗生素生產(chǎn)廢水成分復(fù)雜、有機(jī)物含量高且含抗生素殘留，生化處理法過(guò)程復(fù)雜、成本高、效果易受天氣影響。采用物化方法或作為后續(xù)生化處理的預(yù)處理方法可降低水中懸浮物并減少?gòu)U水中生物抑制物質(zhì)。物化法主要包括混凝、反滲透和膜過(guò)濾等步驟。該法缺點(diǎn)是占地面積大，運(yùn)行成本高且COD去除率較低。
[0008]3、厭氧處理方法
[0009]厭氧處理過(guò)程中起主要代謝作用的產(chǎn)酸菌和產(chǎn)甲烷菌具有不同生物學(xué)特征，故可構(gòu)造不同環(huán)境條件，利用產(chǎn)酸菌生長(zhǎng)快、毒物敏感性差特點(diǎn)將其作為厭氧過(guò)程首段，提高廢水可生化性，減少?gòu)U水對(duì)產(chǎn)甲烷菌的抑制作用，提高系統(tǒng)抗沖擊負(fù)荷，進(jìn)而保證處理效果穩(wěn)定性。缺點(diǎn)是厭氧方法處理后出水COD仍較高，出水難達(dá)標(biāo)，基礎(chǔ)建設(shè)投資大。
[0010]4、厭氧-好氧處理方法及與其它方法的組合
[0011]厭氧-好氧處理法及其與其它方法的組合處理工藝在改善廢水可生化性、耐沖擊性、投資成本、處理效果等方面明顯優(yōu)于單獨(dú)處理方法，使其成為制藥廢水主要處理方法。楊俊仕采用水解酸化-AB生物法新工藝處理多品種抗生素廢水，工藝流程短，節(jié)能，處理費(fèi)用低。任立人采用兩相厭氧-氣提與H2S氣體凈化-好氧生化法處理青霉素廢水效果良好。在日處理200m3廢水工業(yè)系統(tǒng)中，廢水COD總?cè)コ蔬_(dá)93.1 %，沼氣中H2S還可回收利用。買(mǎi)文寧采用厭氧和好氧生物綜合處理技術(shù)對(duì)年產(chǎn)量450t、生產(chǎn)乙酰螺旋霉素的華中醫(yī)藥集團(tuán)廢水進(jìn)行處理，不僅處理效果良好，每天還可回收沼氣6260m3，僅此一項(xiàng)每年可得112.7萬(wàn)元。缺點(diǎn)是工藝復(fù)雜，動(dòng)力消耗大，操作麻煩，工程建設(shè)投資大。
[0012]為了解決目前抗生素廠(chǎng)廢水處理技術(shù)存在的不足，我發(fā)明了一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，既能低成本高效率處理抗生素廠(chǎng)廢水，又能獲得有重要餌料價(jià)值的生物產(chǎn)品-扁圓卵形藻，變廢為寶，化害為利，可大幅度減少?gòu)U水處理費(fèi)用并提高處理效果，是抗生素廠(chǎng)廢水處理的最佳選擇。
[0013]扁圓卵形藻Cocconeis placentula是一種海洋微藻,隸屬娃藻門(mén)、羽紋綱、管殼縫目、曲殼藻科、卵形藻屬。細(xì)胞長(zhǎng)16-22微米，寬13-17微米。殼面橢圓形或近圓形，殼面花紋左右對(duì)稱(chēng)。上殼和下殼花紋粗細(xì)與排列方式略有不同。上殼只有擬殼縫，下殼有殼縫、中央結(jié)節(jié)和端結(jié)節(jié)。殼橫軸略彎曲，殼環(huán)面為長(zhǎng)方形。色素體一個(gè)，形成復(fù)大孢子繁殖，復(fù)大孢子由一或兩個(gè)細(xì)胞組成。本屬共有190種，中國(guó)15種。常貼在高等藻類(lèi)、水生動(dòng)物或其它物體上爬行，海、淡水均有，也有化石種類(lèi)。扁圓卵形藻是鮑、海參、海膽、埋棲貝類(lèi)、舔食螺類(lèi)幼體優(yōu)質(zhì)開(kāi)口餌料，是影響幼苗成活率和體質(zhì)強(qiáng)弱的關(guān)鍵，特別是在鮑苗種培養(yǎng)中，扁圓卵形藻數(shù)量與質(zhì)量對(duì)鮑人工育苗成敗至關(guān)重要。鮑浮游幼體的附著變態(tài)率是鮑育苗的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，扁圓卵形藻可顯著提高匍匐幼蟲(chóng)的變態(tài)率和成活率，為后續(xù)培養(yǎng)打下良好基礎(chǔ)。鮑幼體從附著至剝離，依賴(lài)扁圓卵形藻等底棲硅藻維持生長(zhǎng)，扁圓卵形藻供應(yīng)量直接影響鮑附著幼體成活率和生長(zhǎng)速度。研究報(bào)道，即使鮑附著幼體處于衰亡期，投入適量扁圓卵形藻做餌料也會(huì)使大量幼鮑存活。另外，在海參人工育苗中，扁圓卵形藻影響海參幼蟲(chóng)附著與變態(tài)，藻的數(shù)量和質(zhì)量直接關(guān)系到海參育苗成敗、產(chǎn)量高低。
[0014]扁圓卵形藻傳統(tǒng)上采用廖氏改良培養(yǎng)液即KN0360毫克，Na2Si0320毫克，Na2HPO4.12H2040毫克，1000毫升消毒海水并使用環(huán)形跑道池培養(yǎng)，生長(zhǎng)慢、產(chǎn)量低、投資大、易污染、浪費(fèi)土地、效益低，現(xiàn)在我采用白色的蒸餾水桶充氣培養(yǎng)，成本低，生長(zhǎng)快，不易污染，洗刷方便，易于操作，方便靈活，而且我在培養(yǎng)基中增加了抗生素廠(chǎng)廢水、氟硅酸鈉、豬糞浸出液、鴨糞浸出液、f/2維生素溶液、f/2微量元素、硬脂酸鎂、甲硫氨酸、土壤浸出液、海泥浸出液、L-精氨酸、硝酸銨、尿素、氯化銨、磷酸二氫鉀、麥飯石粉、920植物生長(zhǎng)刺激素、鈦溶液、酵母浸粉、脫氧膽酸鈉、山梨醇、甘露醇、羧甲基纖維素鈉、海藻酸丙二醇酯、胰蛋白、過(guò)磷酸鈣、三羥甲基氨基甲烷、天冬氨酸、異亮氨酸等營(yíng)養(yǎng)成分，有機(jī)肥和無(wú)機(jī)肥混合使用，營(yíng)養(yǎng)更加全面、均衡，扁圓卵形藻生長(zhǎng)速度大幅提高，培養(yǎng)周期縮短，產(chǎn)量提高360%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]為了克服目前技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基，配方如下:
[0016]抗生素廠(chǎng)廢水100毫升，氟硅酸鈉0.5毫克，豬糞浸出液2毫升，鴨糞浸出液1.2毫升，f/2維生素溶液I毫升，f/2微量兀素I毫升，硬脂酸鎂I暈克，甲硫氨酸0.2暈克；土壤浸出液1.4毫升，海泥浸出液1.6毫升，L-精氨酸0.5毫克，硝酸銨20毫克，尿素3毫克，氯化銨8毫克，磷酸二氫鉀6毫克，麥飯石粉6毫克，920植物生長(zhǎng)刺激素6國(guó)際單位，鈦溶液I毫升，酵母浸粉8毫克，脫氧膽酸鈉4毫克，山梨醇10毫克，甘露醇4毫克，羧甲基纖維素鈉2毫克，海藻酸丙二醇酯3毫克，胰蛋白6毫克，過(guò)磷酸鈣5毫克，三羥甲基氨基甲烷
0.5毫克，天冬氨酸0.4毫克，異亮氨酸0.2毫克，臭氧消毒后的純凈海水1000毫升；
[0017]一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，具體步驟如下:
[0018]培養(yǎng)容器為20升蒸餾水桶，該桶普通化學(xué)實(shí)驗(yàn)室和生物實(shí)驗(yàn)室均有且市場(chǎng)有售，高密度聚乙烯材料制成，無(wú)色或白色，有較好的透光性，以利藻類(lèi)進(jìn)行光合作用?？拷撞坑幸凰堫^，水桶頂部右上角有一圓形蓋子，上有旋絲，可旋轉(zhuǎn)而密封，蓋子打上2個(gè)孔，一個(gè)孔插入充氣管，另一個(gè)孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內(nèi)徑6毫米。將蒸餾水桶洗刷干凈，后用蒸餾水潤(rùn)洗3遍，裝入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基12升，充氣混合5分鐘，選擇生命力旺盛、無(wú)污染的扁圓卵形藻接種，接種密度6X IO4ceIVmL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長(zhǎng)，35厘米，頂端露出蓋子15厘米，下端通過(guò)料管與散氣石連接，用以充氣(散氣石的作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細(xì)胞)；另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細(xì)；用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定；長(zhǎng)的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:氨氣=92%: 6%: 1%: 1% ;連續(xù)充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；室外培養(yǎng)，太陽(yáng)光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強(qiáng)度5000-10000Lux ;培養(yǎng)的前5天，水桶上方搭建一簡(jiǎn)易棚，上放置簾子遮擋光線(xiàn)，使光照強(qiáng)度維持在1500-2800LUX，避免強(qiáng)烈陽(yáng)光對(duì)細(xì)胞造成的光傷害；第6天撤掉簾子，較強(qiáng)的光照有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖和高不飽和脂肪酸的合成；培養(yǎng)至第7天，停止充氣，拿開(kāi)蓋子，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基2升，以彌補(bǔ)蒸發(fā)掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第9天，扁圓卵形藻密度增加至450X 104cell/mL，停止培養(yǎng)，從底部的水龍頭放出藻液，將培養(yǎng)容器洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒30分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)；
[0019]所述中藥消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材:白屈菜20~50份、忍冬藤10~20份、桉樹(shù)葉15~25份、桅子5~10份、甘草5~15份，防腐輔料1-3份；中藥消毒液制作方法:將新鮮白屈菜、忍冬藤、桉樹(shù)葉、甘草、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機(jī)分別粉碎至80目備用，用托盤(pán)天平分別稱(chēng)取烘干并粉碎的白屈菜120克，忍冬藤60克，桉樹(shù)葉葉60克，甘草30克，山桅果30克，防腐輔料6克，置于三角燒瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小時(shí)，200篩絹過(guò)濾，將清液靜置沉淀32-36小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為復(fù)方中藥消毒液，密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
[0020]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0021]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎荆?-10分鐘，
[0022]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘，
[0023]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?，消?-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類(lèi)培養(yǎng)。
[0024]優(yōu)選地，所述防腐輔料為食用鹽。
[0025]優(yōu)選地，所述防腐輔料為出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸的混合物，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5。
[0026]優(yōu)選地，所述防腐輔料組分為出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸的混合物，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5，所述防腐輔料的制備步驟為:用托盤(pán)天平分別稱(chēng)取出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5，置于三角燒瓶中充分混合后，加入混合物30-50倍體積的85%乙醇，搖勻靜置沉淀12-15小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為防腐輔料，密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于3-4°C冰箱備用。
[0027]有益結(jié)果:
[0028]為了解決目前抗生素廠(chǎng)廢水處理技術(shù)存在的不足，我發(fā)明了一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，既能低成本處理抗生素廠(chǎng)廢水，又能獲得有重要餌料價(jià)值的生物產(chǎn)品-扁圓卵形藻，變廢為寶，化害為利，可大幅度減少?gòu)U水處理費(fèi)用并提高處理效果，是抗生素廠(chǎng)廢水處理的最佳選擇。扁圓卵形藻傳統(tǒng)上采用廖氏改良培養(yǎng)液即KN0360毫克，Na2Si0320毫克，Na2HPO4.12H2040毫克，1000毫升消毒海水并使用環(huán)形跑道池培養(yǎng)，生長(zhǎng)慢、產(chǎn)量低、投資大、易污染、浪費(fèi)土地、效益低，現(xiàn)在我采用白色的蒸餾水桶充氣培養(yǎng)，成本低，生長(zhǎng)快，不易污染，洗刷方便，易于操作，方便靈活，而且我在培養(yǎng)基中增加了抗生素廠(chǎng)廢水、氟硅酸鈉、豬糞浸出液、鴨糞浸出液、f/2維生素溶液、f/2微量元素、硬脂酸鎂、甲硫氨酸、土壤浸出液、海泥浸出液、L-精氨酸、硝酸銨、尿素、氯化銨、磷酸二氫鉀、麥飯石粉、920植物生長(zhǎng)刺激素、鈦溶液、酵母浸粉、脫氧膽酸鈉、山梨醇、甘露醇、羧甲基纖維素鈉、海藻酸丙二醇酯、胰蛋白、過(guò)磷酸鈣、三羥甲基氨基甲烷、天冬氨酸、異亮氨酸等營(yíng)養(yǎng)成分，有機(jī)肥和無(wú)機(jī)肥混合使用，營(yíng)養(yǎng)更加全面、均衡，扁圓卵形藻生長(zhǎng)速度大幅提高，培養(yǎng)周期縮短，產(chǎn)量提高360%。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0029]圖1為扁圓卵形藻形態(tài)構(gòu)造圖；
[0030]其中附圖標(biāo)記為:1端結(jié)節(jié)2中央結(jié)節(jié)3殼縫4線(xiàn)紋。
[0031]圖2為利用抗生素制藥廢水養(yǎng)殖扁圓卵形藻方法圖；
[0032]其中附圖標(biāo)記為:5蒸餾水桶6藻液7水龍頭8出氣管9充氣管。
【具體實(shí)施方式】
[0033]抗生素廠(chǎng)廢水預(yù)處理方法:抗生素廠(chǎng)廢水用于養(yǎng)藻前需要進(jìn)行預(yù)處理，方法是:先用60目的篩絹過(guò)濾廢水，除去漂浮物、玻璃渣子、毛發(fā)、泥沙、樹(shù)葉、塑料袋等體積較大固形物，后將污水引入長(zhǎng)30米、寬20米、深0.7米的水泥曝氣池中，池子呈東西走向，以接受更多的陽(yáng)光照射；水深保持在60厘米；按每立方米污水加入50克生石灰的量均勻潑灑生石灰(生石灰最好預(yù)先按I公斤加入5升純水的量在塑料桶中溶解、稀釋、攪拌均勻，再全池潑灑)，隔60分鐘，再按每立方米污水加入80克的量全池潑灑明礬(明礬最好預(yù)先按100克加4升純水的量在塑料桶中溶解、稀釋并攪拌均勻，再全池潑灑)，然后用耙子攪動(dòng)或充氣攪拌60分鐘，使石灰和明礬充分溶解、混合并與污水中有機(jī)物充分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，然后自然沉淀、發(fā)酵、曝光72小時(shí)，撇去水面泡沫等漂浮物，勿攪動(dòng)池底，取中上層的污水，裝入不透光的黑色塑料桶中，密封，4 °C冰箱或冷庫(kù)，保存，備用；
[0034]臭氧消毒海水方法:取海水，脫脂棉過(guò)濾，通入臭氧消毒；所用臭氧發(fā)生器產(chǎn)臭氧量為3500毫克/小時(shí)，每立方米海水充臭氧30分鐘，充完后自然曝氣90分鐘，讓水體中過(guò)多的臭氧揮發(fā)出來(lái)，即可接種。
[0035]過(guò)氧乙酸消毒液制備方法和使用注意事項(xiàng):市售過(guò)氧乙酸原液含量35% (以重量計(jì))，無(wú)色液體，有強(qiáng)烈刺激性氣味。使用時(shí)應(yīng)用潔凈自來(lái)水稀釋成0.2%溶液，浸泡跑道池內(nèi)壁2小時(shí)。該品對(duì)眼睛、皮膚、粘膜和上呼吸道有強(qiáng)烈刺激作用，頭痛、惡心且易燃，具爆炸性、強(qiáng)腐蝕性、強(qiáng)刺激性，可致人體灼傷，加熱至100°C即猛烈分解，遇火或受熱、受震都可起爆。與還原劑、促進(jìn)劑、有機(jī)物、可燃物等接觸會(huì)發(fā)生劇烈反應(yīng)；不可直接用手接觸，操作時(shí)應(yīng)帶膠皮手套、口罩和眼鏡，對(duì)金屬有腐蝕性，不可用于金屬器械的消毒；原液長(zhǎng)期放置可分解，注意保質(zhì)期，應(yīng)貯于塑料桶內(nèi)涼暗處保存。
[0036]接種用的扁圓卵形藻預(yù)先進(jìn)行提純(本領(lǐng)域常規(guī)方法，只要可實(shí)現(xiàn)提純即可，例如凱氏提取法)，以確保接種時(shí)藻種處于生長(zhǎng)旺盛的指數(shù)生長(zhǎng)期；
[0037]各種營(yíng)養(yǎng)鹽要按配方中提供的順序加入，以免發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；
[0038]各種無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)鹽和維生素需預(yù)先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存?zhèn)溆?，放置時(shí)間不要超過(guò)45天；
[0039]鴨糞浸出液制備方法:把新鮮鴨糞、青草、豆餅、米糠、穎殼(五谷雜糧的外殼)和腐殖土按60: 10: 12: 15: 2: I的重量比例混合，攪拌均勻，裝入缸內(nèi)密閉進(jìn)行發(fā)酵，30天后，倒出，在干凈水泥地上，攤成薄層，晾干48小時(shí)，后取2公斤，置于塑料水桶，加自來(lái)水10公斤，攪拌均勻，用80目篩絹過(guò)濾，將清液煮沸5分鐘，冷卻，靜置24小時(shí)，取上清液，裝入試劑瓶，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱，備用；
[0040]土壤抽出液制備方法:取樹(shù)林中松散、富含有機(jī)質(zhì)的上層土壤I公斤，加自來(lái)水5升，煮沸20分鐘，將泥漿倒入燒杯中，靜置24小時(shí)，后吸取上清液，倒入三角燒瓶中，加棉花塞，煮沸15分鐘，冷卻，靜置沉淀12小時(shí)，取上清液即得土壤抽出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用；
[0041]麥飯石粉由麥飯石原礦經(jīng)過(guò)篩選、粉碎加工成面粉狀，顆粒大小可以通過(guò)200目篩絹即可；
[0042]920植物生長(zhǎng)刺激素為白色結(jié)晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(一般每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小時(shí)以上)，再按所需濃度兌水稀釋?zhuān)?br> [0043]豬糞浸出液制備方法:取新鮮豬糞50公斤，加入麩皮3公斤，玉米面I公斤，自來(lái)水4升，充分?jǐn)嚢?，堆成圓錐狀，自然發(fā)酵15天，后攤成薄層，陽(yáng)光下暴曬3天，后取3公斤放入水桶中，加入10升蒸餾水，充分?jǐn)噭?，靜置，48小時(shí)后100目篩絹過(guò)濾，取濾液加熱，煮沸45分鐘，殺死其中的細(xì)菌、霉菌、病毒等，冷卻，沉淀24小時(shí)，取上清液，即得馬糞浸出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰箱或冷庫(kù)備用；
[0044]海泥抽取液制備方法:取比較肥沃又不於黑的海泥，以1份泥加2份淡水，充分?jǐn)嚢杈鶆?，靜置1-2分鐘，取上層泥漿于鋁鍋中，按每1000毫升泥漿加I克NaOH的量加入NaOH，煮沸25分鐘。煮時(shí)需不斷攪拌均勻，煮后靜置24小時(shí)取上清液，密封，置于4°C冰箱或冷庫(kù)備用；
[0045]鈦溶液配法:把736.6毫克草酸鈦，溶解于100毫升蒸餾水中，加入5克氫氧化銨，使之成堿性，發(fā)生沉淀，用離心法將沉淀集中，用20毫升0.05mol/L的硫酸溶解即得；
[0046]f/2 微量元素溶液配方=ZnSO4.4H2023 毫克，MnCl2.4H20178 毫克，CuSO4.5H2010毫克，F(xiàn)eC6H5O7.5Η203.9 克，Na2MoO4.2Η207.3 毫克，CoCl2.6Η2012 毫克，Na2EDTA4.35 克，純水1000毫升；
[0047]f/2維生素溶液配方:維生素B120.5毫克，維生素B1IOO毫克，維生素H0.5毫克，純水1000毫升。
[0048]所用化學(xué)藥品純度均需化學(xué)純級(jí)別；
[0049]一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基，配方如下:
[0050]抗生素廠(chǎng)廢水100毫升，氟硅酸鈉0.5毫克，豬糞浸出液2毫升，鴨糞浸出液1.2毫升，f/2維生素溶液I毫升，f/2微量兀素I毫升,硬脂酸鎂I暈克，甲硫氨酸0.2暈克；土壤浸出液1.4毫升，海泥浸出液1.6毫升，L-精氨酸0.5毫克，硝酸銨20毫克，尿素3毫克，氯化銨8毫克，磷酸二氫鉀6毫克，麥飯石粉6毫克，920植物生長(zhǎng)刺激素6國(guó)際單位，鈦溶液I毫升，酵母浸粉8毫克，脫氧膽酸鈉4毫克，山梨醇10毫克，甘露醇4毫克，羧甲基纖維素鈉2毫克，海藻酸丙二醇酯3毫克，胰蛋白6毫克，過(guò)磷酸鈣5毫克，三羥甲基氨基甲烷
0.5毫克，天冬氨酸0.4毫克，異亮氨酸0.2毫克，臭氧消毒后的純凈海水1000毫升；
[0051]一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，具體步驟如下:
[0052]培養(yǎng)容器為20升蒸餾水桶，該桶普通化學(xué)實(shí)驗(yàn)室和生物實(shí)驗(yàn)室均有且市場(chǎng)有售，高密度聚乙烯材料制成，無(wú)色或白色，有較好的透光性，以利藻類(lèi)進(jìn)行光合作用?？拷撞坑幸凰堫^，水桶頂部右上角有一圓形蓋子，上有旋絲，可旋轉(zhuǎn)而密封，蓋子打上2個(gè)孔，一個(gè)孔插入充氣管，另一個(gè)孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內(nèi)徑6毫米。將蒸餾水桶洗刷干凈，后用蒸餾水潤(rùn)洗3遍，裝入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基12升，充氣混合5分鐘，選擇生命力旺盛、無(wú)污染的扁圓卵形藻接種，接種密度6X IO4ceIVmL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長(zhǎng)，35厘米，頂端露出蓋子15厘米，下端通過(guò)料管與散氣石連接，用以充氣(散氣石的作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細(xì)胞)；另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細(xì)；用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定；長(zhǎng)的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:氨氣=92%: 6%: 1%: 1% ;連續(xù)充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；室外培養(yǎng)，太陽(yáng)光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強(qiáng)度5000-10000Lux ;培養(yǎng)的前5天，水桶上方搭建一簡(jiǎn)易棚，上放置簾子遮擋光線(xiàn)，使光照強(qiáng)度維持在1500-2800LUX，避免強(qiáng)烈陽(yáng)光對(duì)細(xì)胞造成的光傷害；第6天撤掉簾子，較強(qiáng)的光照有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖和高不飽和脂肪酸的合成；培養(yǎng)至第7天，停止充氣，拿開(kāi)蓋子，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基2升，以彌補(bǔ)蒸發(fā)掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第9天，扁圓卵形藻密度增加至450X 104cell/mL，停止培養(yǎng)，從底部的水龍頭放出藻液，將培養(yǎng)容器洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒30分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)；
[0053]所述中藥消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材:白屈菜20~50份、忍冬藤10~20份、桉樹(shù)葉15~25份、桅子5~10份、甘草5~15份，防腐輔料1-3份；中藥消毒液制作方法:將新鮮白屈菜、忍冬藤、桉樹(shù)葉、甘草、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機(jī)分別粉碎至80目備用，用托盤(pán)天平分別稱(chēng)取烘干并粉碎的白屈菜120克，忍冬藤60克，桉樹(shù)葉葉60克，甘草30克，山桅果30克，防腐輔料6克，置于三角燒瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小時(shí)，200篩絹過(guò)濾，將清液靜置沉淀32-36小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為復(fù)方中藥消毒液，密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
[0054]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0055]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎?，消?-10分鐘，
[0056]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘，
[0057]優(yōu)選地，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?，消?-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類(lèi)培養(yǎng)。
[0058]優(yōu)選地，所述防腐輔料為食用鹽。
[0059]優(yōu)選地，所述防腐輔料為出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸的混合物，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5。
[0060]優(yōu)選地，所述防腐輔料組分為出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸的混合物，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5，所述防腐輔料的制備步驟為:用托盤(pán)天平分別稱(chēng)取出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5，置于三角燒瓶中充分混合后，加入混合物30-50倍體積的85%乙醇，搖勻靜置沉淀12-15小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為防腐輔料，密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于3-4°C冰箱備用。
[0061]最后應(yīng)說(shuō)明的是:以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依然可以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的培養(yǎng)基，其特征在于配方如下: 抗生素廠(chǎng)廢水100毫升,氟娃酸鈉0.5暈克,豬糞浸出液2毫升,鴨糞浸出液1.2毫升，f/2維生素溶液I毫升，f/2微量元素I毫升，硬脂酸鎂I毫克，甲硫氨酸0.2毫克；土壤浸出液1.4毫升,海泥浸出液1.6毫升，L-精氨酸0.5暈克,硝酸銨20暈克,尿素3暈克,氯化銨8毫克，磷酸二氫鉀6毫克，麥飯石粉6毫克，920植物生長(zhǎng)刺激素6國(guó)際單位，鈦溶液I毫升，酵母浸粉8毫克，脫氧膽酸鈉4毫克，山梨醇10毫克，甘露醇4毫克，羧甲基纖維素鈉2毫克，海藻酸丙二醇酯3毫克，胰蛋白6毫克，過(guò)磷酸鈣5毫克，三羥甲基氨基甲烷0.5毫克，天冬氨酸0.4毫克，異亮氨酸0.2毫克，臭氧消毒后的純凈海水1000毫升。
2.一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于具體步驟如下: 培養(yǎng)容器為20升蒸餾水桶，該桶普通化學(xué)實(shí)驗(yàn)室和生物實(shí)驗(yàn)室均有且市場(chǎng)有售，高密度聚乙烯材料制成，無(wú)色或白色，有較好的透光性，以利藻類(lèi)進(jìn)行光合作用，靠近底部有一水龍頭，水桶頂部右上角有一圓形蓋子，上有旋絲，可旋轉(zhuǎn)而密封，蓋子打上2個(gè)孔，一個(gè)孔插入充氣管，另一個(gè)孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內(nèi)徑6毫米，將蒸餾水桶洗刷干凈，后用蒸餾水潤(rùn)洗3遍，裝入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基12升，充氣混合5分鐘，選擇生命力旺盛、無(wú)污染的扁圓卵形藻接種，接種密度6X104cell/mL，蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長(zhǎng)，35厘米，頂端露出蓋子15厘米，下端通過(guò)料管與散氣石連接，用以充氣(散氣石的作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細(xì)胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，兩根玻璃管同樣粗細(xì)，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長(zhǎng)的玻璃 管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:氨氣=92%: 6%: 1%: 1%，連續(xù)充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可，室外培養(yǎng)，太陽(yáng)光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強(qiáng)度5000-10000Lux,培養(yǎng)的前5天，水桶上方搭建一簡(jiǎn)易棚，上放置簾子遮擋光線(xiàn)，使光照強(qiáng)度維持在1500-2800LUX，避免強(qiáng)烈陽(yáng)光對(duì)細(xì)胞造成的光傷害，第6天撤掉簾子，較強(qiáng)的光照有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養(yǎng)至第7天，停止充氣，拿開(kāi)蓋子，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基3升，以彌補(bǔ)蒸發(fā)掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第9天，扁圓卵形藻密度增加至450X 104cell/mL，停止培養(yǎng)，從底部的水龍頭放出藻液，將培養(yǎng)容器洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒30分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)。 所述中藥消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成:每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中藥材:白屈菜20~50份、忍冬藤10~20份、按樹(shù)葉15~25份、桅子5~10份、甘草5~15份，防腐輔料1-3份；中藥消毒液制作方法:將新鮮白屈菜、忍冬藤、桉樹(shù)葉、甘草、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機(jī)分別粉碎至80目備用，用托盤(pán)天平分別稱(chēng)取烘干并粉碎的白屈菜120克，忍冬藤60克，桉樹(shù)葉葉60克，甘草30克，山桅果30克，防腐輔料6克，置于三角燒瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小時(shí)，200篩絹過(guò)濾，將清液靜置沉淀32-36小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為復(fù)方中藥消毒液，密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎?，消?-10分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于，對(duì)選用的所述的反應(yīng)器，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?，消?-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類(lèi)培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于:所述防腐輔料為食用鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于:所述防腐輔料為出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸的混合物，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種利用抗生素廠(chǎng)廢水培養(yǎng)扁圓卵形藻的方法，其特征在于:所述防腐輔料組分為出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸的混合物，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5，所述防腐輔料的制備步驟為:用托盤(pán)天平分別稱(chēng)取出梨酸、尼泊酸乙酯、莽草酸、氫氰酸，混合比例為重量混合比1:1:1: 0.5，置于三角燒瓶中充分混合后，加入混合物30-50倍體積的85%乙醇，搖勻靜置沉淀12-15小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為 防腐輔料，密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于3-4°C冰箱備用。
【文檔編號(hào)】C12N1/12GK104017732SQ201410280628
【公開(kāi)日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2014年6月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月23日
【發(fā)明者】王培磊 申請(qǐng)人:臨沂大學(xué)