一種含有益生菌的小麥日糧酶及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種含有益生菌的小麥日糧酶及其制備方法，屬于飼料酶制劑領域。所述含有益生菌的小麥日糧酶由以下重量份數(shù)的組分組成：木聚糖酶100-140份，纖維素酶6-10份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物20-30份，中溫α-淀粉酶5-10份，中草藥粉0.5-2份。其中地衣芽孢桿菌（Βacillus?licheniformis）β-10-25，保藏編號CCTCC?NO：M2013538。制備方法如下：地衣芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵后通過過濾、濃縮、干燥獲得的培養(yǎng)物與其他成分復配，所得復合酶能提高飼料轉化率，降低飼料成本。
【專利說明】一種含有益生菌的小麥日糧酶及其制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于酶制劑領域，具體涉及一種含有益生菌的小麥日糧酶及其制造方法。

【背景技術】
[0002] 隨著近代酶技術及生物技術的發(fā)展，高效能生物活性物質--酶制劑已能大規(guī)模 地工業(yè)化生產(chǎn)，并被應用于飼料工業(yè)中，許多實驗和實際應用結果都表明，飼用酶制劑作為 一種飼料添加劑能有效地提高飼料的利用率、促進動物生長和防治動物疾病的發(fā)生，與抗 生素和激素類物質相比，具有卓越的安全性，引起了全球范圍內(nèi)飼料行業(yè)的高度重視。
[0003] 飼料酶制劑是為了提高動物對飼料的消化、利用或改善動物體內(nèi)的代謝效能而加 入飼料中的酶類物質。目前可以在飼料中添加的酶制劑包括淀粉酶、α-半乳糖苷酶、纖 維素酶、β -葡聚糖酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、麥芽糖酶、甘露聚糖酶、果膠酶、植酸酶、蛋白 酶、角蛋白酶、木聚糖酶等。由于飼料原料結構的復雜性，目前飼料工業(yè)生產(chǎn)中更多使用的 是復合酶制劑。小麥日糧酶是一種新型的飼料添加劑，在國外其應用始于20世紀70年代， 而我國的飼料工業(yè)在20世紀90年代才開展酶制劑的應用。因此，加大對飼料復合劑的研 究對于我國的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有非常重要的意義。
[0004] 飼用酶種類繁多，在畜禽生產(chǎn)中均取得了相當好的效果。前蘇聯(lián)科學家在早期斷 奶仔豬日糧中添加淀粉糊精酶，使得日增重提高14. 6%，碳水化合物消化率提高77. 2%。據(jù) 美國有關資料報道，Collier在早期斷奶仔豬日糧中補充酶制劑(含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖 酶)，結果實驗組比對照組日增重提高了 25%，飼料轉化率提高了 15.5%。西德學者曾多次進 行育肥豬添加復合酶制劑的實驗研究，在以大麥為主的日糧中，添加0. 1%的復合酶制劑， 結果為：實驗組比對照組生長速度提高5. 1%，飼料利用率提高4. 1%?？梢姡暳厦改茱@著提 高畜禽對飼料的消化吸收，促進生長，降低飼料成本，并且作為一種綠色飼料添加劑，它的 使用具有安全性，有利于畜牧業(yè)生產(chǎn)走上經(jīng)濟節(jié)約型的發(fā)展道路。
[0005] 長期以來，人們習慣以玉米作為能量飼料，但隨著養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展對玉米需求量加大 和國際市場上玉米行情的變化，造成玉米采購難和價格上揚，尤其在非玉米主產(chǎn)區(qū)，玉米的 短缺成為限制當?shù)匦竽翗I(yè)發(fā)展的重要因素。而在非玉米主產(chǎn)區(qū)往往小麥的來源較廣，其價 格也較為穩(wěn)定，而且在小麥收獲季節(jié)，其價格和玉米相比往往具有一定的優(yōu)勢，特別是隨著 我國小麥產(chǎn)量的逐漸增大，以及WT0的加入，進口小麥涌入帶來的沖擊，使得小麥價格呈 下降趨勢。同時，畜牧業(yè)發(fā)展迅速，飼料用量不斷增大，制造淀粉和賴氨酸也消耗掉大量 的玉米，以前主要用作能量飼料的玉米價格不斷上漲，小麥以其種植面積廣、產(chǎn)量高、價格 低等優(yōu)點成為替代玉米的首選。
[0006] 目前，糧食的短缺是困擾我國飼料工業(yè)發(fā)展的主要因素。因此，要選擇有利于節(jié)約 糧食資源的畜牧業(yè)發(fā)展道路，提高飼料利用率，充分利用有限的糧食資源獲得盡可能多的 畜產(chǎn)品。β -葡聚糖酶等酶制劑的使用，能有效的解決這個問題，但目前在生產(chǎn)、實驗中的實 際應用的β_葡聚糖酶酶活力大多較低，且熱穩(wěn)定性差。此外，科學實驗證實了地衣芽孢桿 菌具有促進畜禽生長，降低料重比；增加腸道有益菌數(shù)量，改善畜禽腸道微生態(tài)環(huán)境；預防 和治療腸道疾病，降低死亡率的作用。1989年，美國FDA和美國飼料控制官員協(xié)會公布了可 以直接飼喂且一般認為是安全的微生物菌種名單，其中包括地衣芽孢桿菌。中華人民共和 國農(nóng)業(yè)部318號公告也把地衣芽孢桿菌列入了飼料添加劑目錄。
[0007] 鑒于以上原因，本發(fā)明將提供一種添加有能夠生產(chǎn)高活性和穩(wěn)定性β -葡聚糖酶 的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物的飼料復合酶。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種多種酶種復配的含有益生菌的小麥日糧酶及其制備 方法。
[0009] 本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現(xiàn)：
[0010] 一種含有益生菌的小麥日糧酶，其特征在于，所述小麥日糧酶由以下重量份數(shù)的 組分組成：中草藥粉〇. 5-2份，木聚糖酶100-140份，纖維素酶6-10份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng) 物20-30份，中溫α -淀粉酶5-10份。
[0011] 所述木聚糖酶、纖維素酶和中溫α -淀粉酶均為湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公 司或其他公司產(chǎn)品；
[0012] 所述中草藥粉的制備方法如下：
[0013] 稱取黃芪5-12份；黨參8-15份；板藍根5-10份；當歸10-15份；分別將上述中草 藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉；
[0014] 所述地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物制備方法如下：
[0015] (1)種子培養(yǎng)
[0016] 將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵；
[0017] 所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為：酵母粉0.5%，蛋白胨1%，可溶性淀粉1%，NaCl 1%，，ρΗ4· 5-7. 0,121-123?滅菌 30-40min。
[0018] (2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0019] 將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度 35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量（V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間10-15h ;然后將1L經(jīng)過 121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35-45°C時恒溫培養(yǎng) 15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將 1L經(jīng)過121 °C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35-45°C時恒 溫培養(yǎng)10-15h ;
[0020] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖 2g，中草藥粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀 2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0· 5g，純凈水1000mL，pH值4. 5-7. 0,121°C滅菌20min ;
[0021] 中草藥粉組成：取黃芪10份；黨參9份；板藍根8份；當歸12份；分別將上述中草 藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉；
[0022] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調配方法為：按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉 米粉、豆餅粉投入配料罐中，調節(jié)pH值3-7,加入中溫淀粉酶（3u/g玉米粉）與高溫淀粉 酶（30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫 15-30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調初始PH3-7,121-123°C滅菌30-40min 備用。
[0023] 溶解氧控制：通過調整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧15-30% ;
[0024] PH控制：通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ;
[0025] 補料控制：當發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時，開始添加補料培養(yǎng) 基，補料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ;
[0026] 放罐標準：60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。
[0027] (3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾，然后于10_20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固 形物含量20-40%濃縮液；濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
[0028] 所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌（B acillus licheniformis) β-10-25。 該菌株已于2013年11月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為：湖北 省武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學生命科學學院)，保藏號為CCTCC NO :M2013538。
[0029] 該菌株為經(jīng)過物理化學誘變所得，特點如下：
[0030] 所述菌株在固體平板上菌落為白色，邊緣不整齊，表面干燥不透明，鏡檢為革蘭氏 陽性細菌，細胞形態(tài)呈短桿狀，芽孢中生，橢圓形，不膨大。
[0031] 所述菌株生理生化特征:V-P試驗(+)，淀粉水解(+)，酪素水解（+)，明膠水解（+)， 硝酸鹽還原（+)，吲哚試驗(-)，利用檸檬酸鹽(+)，硝酸還原（+)，甘露醇（+)，木糖（+)。
[0032] 所述地衣芽孢桿菌β -10-25是一株高產(chǎn)熱穩(wěn)定性β -葡聚糖酶的菌株，生產(chǎn)所得 的β-葡聚糖酶酶活力高達8000-10000u/ml ;在室溫下保存6個月后酶活損失小于25%， 4°C保存12個月后酶活損失小于20% ;60°C條件下保存lh后仍能保持80%以上酶活，70°C 條件下保存l〇min后保持20%以上酶活。比現(xiàn)有的β-葡聚糖酶酶活力高，熱穩(wěn)定性及儲 存穩(wěn)定性均較高，特別適合飼料工業(yè)的需求。
[0033] 優(yōu)選的，一種含有益生菌的小麥日糧酶按如下重量份數(shù)組成：木聚糖酶120份，纖 維素酶8份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物25份，中溫淀粉酶8份，中草藥粉1份。
[0034] 所述小麥日糧酶適用于飼料加工廠和養(yǎng)殖場自配飼料，使用時應與飼料中的其它 原料混合均勻。建議每噸全價料添加量為80-120g (飼料中小麥用量低于30%，添加量為 80g/t，小麥用量超過30%，添加量為100-120g/t)。
[0035] 有益效果：
[0036] 本發(fā)明所添加的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，與添加純酶工藝相比不僅簡化了酶的純化 工藝，而且在添加酶的同時加入大量益生菌--地衣芽孢桿菌。地衣芽孢桿菌的添加一方 面能產(chǎn)生蛋白多肽類抗菌物質，拮抗腸道病原細菌，抑制需氧菌及兼性厭氧菌特別是大腸 桿菌等病原菌的繁殖；一方面還能產(chǎn)生除β_葡聚糖酶外的多種酶類，如蛋白酶、淀粉酶、 脂肪酶及纖維素酶等，從而進一步提高畜禽對蛋白質和能量的利用率，促進動物生長；最 后，地衣芽胞桿菌還具有增強動物免疫功能、抵御感染和改善動物生理狀態(tài)的功能。另外 本發(fā)明所添加地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物中的β-葡聚糖酶酶活力高達8000-10000u/ml ;該酶在 60°C條件下保存lh后仍能保持80%以上酶活，70°C條件下保存lOmin后保持20%以上酶活； 在室溫下保存6個月后酶活損失小于25%，4°C保存12個月后酶活損失小于20%。比現(xiàn)有的 β_葡聚糖酶酶活力高，酶作用最適pH值范圍寬泛，熱穩(wěn)定性及儲存穩(wěn)定性均較高。相較于 市售的小麥日糧酶，在同樣的用量下本發(fā)明對淀粉的酶解率更高，從而提高飼料轉化率，降 低飼料成本。
[0037] 本發(fā)明中添加了中草藥粉，其具有天然抗菌和增強免疫力的作用，可以有效的提 高畜禽動物的抗應激能力、免疫功能以及抗病防御機能。另外，中草藥粉中添加了具有抗熱 應激原作用的黃芩、柴胡，使得本發(fā)明產(chǎn)品具有更好的穩(wěn)定性和保存活性，較沒有添加中草 藥粉的產(chǎn)品在長時間高溫條件下的保存活性提高了 15%。

【具體實施方式】
[0038] 實施例1中草藥粉的制備方法
[0039] 一種中草藥粉的制備方法如下：
[0040] 稱取黃芪10份；黨參12份；板藍根8份；當歸12份；分別將上述中草藥粉碎至粒 徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉。
[0041] 實施例2 -種地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物的制備方法
[0042] 包括如下步驟：
[0043] (1)液體種子擴大培養(yǎng)
[0044] ①一級種子培養(yǎng)：將活化后的斜面菌種2環(huán)接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100 毫升，旋轉式搖床180轉/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間10h ;
[0045] ②二級種子培養(yǎng)：將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培 養(yǎng)條件與一級種子相同；
[0046] ③三級種子培養(yǎng)：將二級種子以10%接種量接入5000暈升三級種子搖瓶中，培養(yǎng) 基裝量1000毫升，旋轉式搖床100轉/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間12h ;
[0047] ④一級種子罐培養(yǎng)：將三級種子以10%接種量接入總容積為150L的一級種子 罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度41 °C，攪拌速度300rpm，通風量（V/V) 1:1. 5,罐壓 0· 05Mpa,培養(yǎng)時間15h ;
[0048] 所述種子培養(yǎng)基組成為：酵母粉0. 5 %，蛋白胨1 %，可溶性淀粉1 %，NaCl 1 %， ρΗ5· 5,121°C 滅菌 35min。
[0049] (2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0050] 將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度 37°C，攪拌速度250r/min，通風量（V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間12h ;然后將1L經(jīng)過121°C滅菌 20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)18h ;此時，將 一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)12h ;繼續(xù)將1L經(jīng)過121°C滅菌 20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)12h ;
[0051] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β-葡聚糖 2g，中草藥粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀 2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0· 5g，純凈水1000mL，pH值5. 5,121°C滅菌20min ;
[0052] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調配方法為：按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米 粉、豆餅粉投入配料罐中，調節(jié)PH值5. 5,加入中溫淀粉酶（3u/g玉米粉）與高溫淀粉酶 (30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫20min，然后緩慢升溫至90°C保溫20min進 行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調初始PH5. 5,121°C滅菌35min備用。
[0053] 所述中草藥粉組成：黃芪10份；黨參9份；板藍根8份；當歸12份；分別將上述中 草藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉；
[0054] (3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑500 μ m粗濾，然后于15°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量 20%濃縮液；濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
[0055] 實施例3 -種飼用復合酶制劑的制備方法
[0056] -種含有益生菌的小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成：
[0057] 木聚糖酶120份，纖維素酶8份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物25份，中溫α -淀粉酶8份， 中草藥粉1份。
[0058] 取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司或其他公司的木聚糖酶，纖維素酶，中 溫α -淀粉酶，以及實施例1所得的中草藥粉1份，實施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物， 于25°C條件下在混合機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中 保存。
[0059] 實施例4 一種飼用復合酶制劑的制備方法
[0060] 一種含有益生菌的小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成：
[0061] 木聚糖酶100份，纖維素酶6份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物30份，中溫α -淀粉酶10 份，中草藥粉0.5份；
[0062] 中草藥粉各組分的重量份數(shù)組成為：黃芪5份;黨參13份;板藍根10份；當歸15份；
[0063] 按上述重量份數(shù)取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司的木聚糖酶，纖維素 酶，中溫α -淀粉酶，中草藥粉，實施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，于25°C條件下在混合 機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0064] 實施例5 -種飼用復合酶制劑的制備方法
[0065] 一種含有益生菌的小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成：
[0066] 木聚糖酶140份，纖維素酶10份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物20份，中溫α -淀粉酶5 份，中草藥粉2份；
[0067] 中草藥粉各組分的重量份數(shù)組成為：黃芪12份;黨參15份;板藍根6份；當歸10份；
[0068] 按上述重量份數(shù)取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司的木聚糖酶，纖維素 酶，中溫α -淀粉酶，中草藥粉，實施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物于25°C條件下在混合 機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0069] 實施例5效果對比實驗
[0070] 選取120頭育肥前期豬，按體重、血統(tǒng)及性別無差異分為實驗組和對照組，每組3 個重復，每個重復20頭豬。實驗期為28天，實驗組每噸飼料添加本實施例3所述復合酶 制劑120g，對照組不添加復合酶制劑，于試驗期的始末日早晨空腹稱重，計算日增重和料肉 比，并給毛色進行打分。實驗結果如下表所示：
[0071]

【權利要求】
1. 一種含有益生菌的小麥日糧酶，其特征在于：由以下重量份數(shù)的組分組成：木聚糖 酶100-140份，纖維素酶6-10份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物20-30份，中溫α -淀粉酶5-10份， 中草藥粉0. 5-2份； 所述地衣芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis) β-10-25,保藏編號 為 CCTCCN0:M2013538。
2. 如權利要求1所述一種含有益生菌的小麥日糧酶，其特征在于，所述中草藥粉的制 備方法如下： 稱取黃芪5-12份；黨參8-15份；板藍根5-10份；當歸10-15份；分別將上述中草藥粉 碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉。
3. 如權利要求1所述一種含有益生菌的小麥日糧酶，其特征在于，地衣芽孢桿菌培養(yǎng) 物的制備方法，包括如下步驟： 地衣芽孢桿菌β-10-25經(jīng)斜面菌種活化培養(yǎng)后進行一、二、三級液體種子和種子罐 培養(yǎng)；將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度 35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量（V/V)l:l-3,培養(yǎng)時間10-15h ;然后將1L經(jīng)過 121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35-45°C時恒溫培養(yǎng) 15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù) 將1L經(jīng)過121 °C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35-45°C時 恒溫培養(yǎng)l〇-15h ; 發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾，然后于10-20°c循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量 20-40%濃縮液；濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
4. 如權利要求3所述的一種含有益生菌的小麥日糧酶，其特征在于，所述種子培養(yǎng)的 培養(yǎng)基為：酵母粉〇. 5%，蛋白胨1%，可溶性淀粉l%，NaCll%，pH4. 5-7. 0,121-123°C滅菌 30-40min〇 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中 草藥粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸 檬酸鈉3g，消泡劑0· 5g，純凈水1000mL，pH值4. 5-7. 0,121°C滅菌20min ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調配方法為：按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆 餅粉投入配料罐中，調節(jié)pH值3-7,加入中溫淀粉酶（3u/g玉米粉）與高溫淀粉酶（30u/g 玉米粉），同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15-30min進 行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，PH3-7,121-123°C滅菌30-40min備用。
5. -種制備如權利要求1-5所述的含有益生菌的小麥日糧酶的方法，包括如下步驟： 按照原料組成將木聚糖酶，纖維素酶，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，中溫α -淀粉酶，中草藥 粉混合均勻即可； 所述木聚糖酶，纖維素酶，中溫α-淀粉酶為湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司或其 他現(xiàn)有產(chǎn)品； 所述中草藥粉的制備方法如下： 稱取黃芪5-12份；黨參8-15份；板藍根5-10份；當歸10-15份；分別將上述中草藥粉 碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉； 所述地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物制備方法如下： (1) 種子培養(yǎng) 將地衣芽孢桿菌β -10-25斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵； 所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為：酵母粉0.5%，蛋白胨1%，可溶性淀粉1%，NaCll%，， ρΗ4· 5-7. 0,121-123? 滅菌 30-40min。 (2) 發(fā)酵罐發(fā)酵 將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度 35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量（V/V)l:l-3,培養(yǎng)時間10-15h ;然后將1L經(jīng)過 121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35-45°C時恒溫培養(yǎng) 15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù) 將1L經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35-45°C時 恒溫培養(yǎng)l〇 -15h ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調配方法為：按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆 餅粉投入配料罐中，調節(jié)pH值3-7,加入中溫淀粉酶（3u/g玉米粉）與高溫淀粉酶（30u/g 玉米粉），同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15-30min進 行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調初始PH3-7,121-123°C滅菌30-40min備用； 溶解氧控制：通過調整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧15-30% ; pH控制：通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ; 補料控制：當發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時，開始添加補料培養(yǎng)基，補 料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ; 放罐標準：60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢； (3) 發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾，然后于10-20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物 含量20-40 %濃縮液；濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
6. 如權利要求1所述的一種含有益生菌的小麥日糧酶，其特征在于：由以下重量份數(shù) 的組分組成：木聚糖酶120份，纖維素酶8份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物25份，中溫α -淀粉酶 8份，中草藥粉1份。
7. 如權利要求1所述的一種含有益生菌的小麥日糧酶在畜禽小麥日糧中的應用。
8. 如權利要求1所述的一種含有益生菌的小麥日糧酶，其特征在于：所述中草藥粉組 成：黃芪10份；黨參9份；板藍根8份；當歸12份。
【文檔編號】C12N1/20GK104054914SQ201310739603
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2013年12月27日 優(yōu)先權日:2013年12月27日
【發(fā)明者】李洪兵, 李貴駿, 易繼云, 劉文明, 周玉明 申請人:湖南鴻鷹生物科技有限公司