尼日利亞菌素的制備方法
【專利摘要】尼日利亞菌素的制備方法，涉及殺藻化合物。尼日利亞菌素的分子式為C40H68O11，相對分子質(zhì)量為742。將生產(chǎn)尼日利亞菌素的菌株接種于平板上劃線分離，培養(yǎng)；挑取單菌落接種于高氏一號液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后即得發(fā)酵液，發(fā)酵液離心，收集上清液；所述菌株為Streptomyces?malaysiensis?O4-6，保藏編號為CCTCC?NO：M2011051；用乙酸乙酯萃取上清液，減壓濃縮，干燥得乙酸乙酯萃取物，再溶于乙酸乙酯，再加入到硅膠柱中進行洗脫，收集洗脫液進行薄層層析分析，合并洗脫液，真空蒸干，產(chǎn)物進行抑藻活性的測定，獲得可抑藻的活性組分，然后高效液相色譜洗脫，收集洗脫液，獲得尼日利亞菌素。
【專利說明】尼日利亞菌素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及殺藻化合物，特別涉及一種尼日利亞菌素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，隨著分子生態(tài)學(xué)方法的廣泛使用，海洋放線菌多樣性研究，尤其是深海放線菌的多樣性研究取得的巨大進展。越來越多的海洋放線菌被發(fā)現(xiàn)(1、Prof.AlanClaude, ff., Diversity and biogeography of marine actinobacteria[J].2006.9 (3):279-286.)，包括新的 16S rDNA 序列族(2、Liesack, W.and E.Stackebrandt, Occurrenceof novel groups of the domain Bacteria as revealed by analysis of geneticmaterial isolated from an Australian terrestrial environment.J.Bacteriol.[J]，1992.174(15):5072-5078.3、Rheims, H.，et al., Molecular biological evidencefor the occurrence of uncultured members of the actinomycete line of descentin different environments and geographical locations.Microbiology[J], 1996.142(10):2863-2870.)，放線菌的種類和數(shù)量不斷增加，由最初的3個屬增加到了 170個屬。然而，放線菌的已知物種與其在自然界存在的數(shù)量相比仍然是微不足道的(4、Bull,A.T.，etal., Marine actinobacteria:perspectives, challenges, future directions.AntonieVan Leeuwenhoek International Journal of General and Molecular Microbiology[J],2005.87(3):259-262；5> Jensen, P.R.,et al., Marine actinomycete diversity andnatural product discovery.Antonie van Leeuwenhoek[J], 2005.87(1):43-48)。
[0003]由于海洋環(huán)境的特殊性，海洋微生物具有獨特的代謝方式，產(chǎn)生的代謝化學(xué)結(jié)構(gòu)具有極大的復(fù)雜性和多樣性。近20年來，有關(guān)海洋微生物產(chǎn)生新的具有生物活性的次級代謝產(chǎn)物的報道逐漸增多，從海洋放線菌發(fā)現(xiàn)新生物活性物質(zhì)的概率甚至超過陸生放線菌。從海洋放線菌獲得的部分活性物質(zhì)有灰紫紅菌素A，鹽孢胺A，鹽孢胺B，熏衣菁藍(lán)素，鹽胺，河豚毒素，海洋霉素A、B,四并霉 素Dl,色霉素A3,腸球菌素,棘霉素,抗霉素A,巴弗洛霉素，菲律平，脂霉素，兔菌素，等(6、徐麗華等，放線菌系統(tǒng)學(xué)——原理、方法及實踐[M].北京:科學(xué)出版社，2007.)。這些研究結(jié)果表明，海洋環(huán)境是發(fā)現(xiàn)和篩選新的放線菌物種和代謝產(chǎn)物的寶貴資源庫，其中蘊藏著大量放線菌資源等待開發(fā)和利用。
[0004]20世紀(jì)以來，伴隨著沿海地區(qū)人口激增，工農(nóng)業(yè)的迅速發(fā)展，內(nèi)灣、河口和沿岸水域嚴(yán)重有機污染和富營養(yǎng)化。有害藻類水華(Harmful algae blooms, HABs)在中國的發(fā)生規(guī)模和頻度呈急劇上升趨勢，對我國沿海造成了嚴(yán)重的生態(tài)、資源、環(huán)境問題和重大的經(jīng)濟損失(7、Qin, S.，et al., Two New Metabolites, Epoxydine A and B, from Phomasp.Helvetica Chimica Acta[J]，2010.93 (I): 169—174)。研究赤潮防治方法，制定有關(guān)防治對策已經(jīng)成為許多國家和地區(qū)當(dāng)務(wù)之急的環(huán)保措施。由于物理和化學(xué)方法治理赤潮存在難以大面積施用及易造成二次污染等不足之處，利用生物相互之間的生態(tài)作用來治理赤潮已成為當(dāng)前研究熱點(8、Skerratt, J.H.，et al., Algicidal bacteria associatedwith blooms of a toxic dinoflagellate in a temperate Australian estuary.MarineEcology-Progress Series[J], 2002.244:1-15.)。
[0005]迄今為止，大多數(shù)篩選到的抑藻微生物是通過分泌特異的具有抑藻活性的物質(zhì)來起抑藻作用的。已經(jīng)報道的抑藻活性物質(zhì)包括:蛋白質(zhì)(含胞外酶)、多肽、氨基酸、抗生素、含氮化合物等其他尚未定性的抑藻化合物(9、Yoshikawa, K., et al., beta-cyanoalanineproduction by marine bacteria on cyanide-free medium and its specificinhibitory activity toward cyanobacteria.Applied and Environmental Microbiology[J]，2000.66(2):718-722)。通過篩選高效、專一的抑藻活性物質(zhì)成為開發(fā)抑藻劑用于赤潮治理的一個新思路。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供尼日利亞菌素的制備方法。
[0007]所述尼日利亞菌素(Nigericin)的分子式為C4tlH68O11,相對分子質(zhì)量為742,結(jié)構(gòu)
式為:
[0008]
【權(quán)利要求】
1.尼日利亞菌素的制備方法，其特征在于所述尼日利亞菌素的分子式為C4tlH68O11，相對分子質(zhì)量為742，結(jié)構(gòu)式為:


2.如權(quán)利要求1所述尼日利亞菌素的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述離心的條件為:速率10000~12000g,時間10~20min。
3.如權(quán)利要求1所述尼日利亞菌素的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述硅膠柱的規(guī)格為170mmX 30mm，200~300目。
4.如權(quán)利要求1所述尼日利亞菌素的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述洗脫的洗脫劑為正己烷和乙酸乙酯的混合物，所述洗脫的程序為:用正己烷和乙酸乙酯體積比1: 2的混合物洗脫20min,再用正己燒和乙酸乙酯體積比1:1的混合物洗脫30min,最后用正己燒洗脫30min,洗脫的流速為:lmL/min。
5.如權(quán)利要求1所述尼日利亞菌素的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述薄層層析的展開劑為乙酸乙酯，所述薄層層析的顯示劑為含0.5%碘的氯仿溶液。
6.如權(quán)利要求1所述尼日利亞菌素的制備方法，其特征在于在步驟5)中，所述洗脫的程序:
【文檔編號】C12R1/465GK103497980SQ201310486479
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月21日
【發(fā)明者】鄭天凌, 鄭小偉, 張幫周, 黃麗萍, 張金龍 申請人:廈門大學(xué)