哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置制造方法
【專利摘要】一種哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置。它是利用一種能夠產(chǎn)生負壓的裝置將胚胎吸入塑料毛細管內(nèi)，再將塑料毛細管置入旋轉(zhuǎn)的液體中在培養(yǎng)箱中進行水浴培養(yǎng)，旋轉(zhuǎn)的液體使塑料毛細管產(chǎn)生擺動和震動，不但能夠模擬生殖道對胚胎發(fā)育的刺激作用，而且顯著減小了培養(yǎng)基體積，胚胎質(zhì)量和發(fā)育能力顯著提高，而且該裝置操作簡便，節(jié)約耗材，不需要昂貴的培養(yǎng)皿和礦物油。
【專利說明】晡乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及動物胚胎工程領(lǐng)域，特別是涉及一種哺乳動物胚胎體外培養(yǎng)裝置，利用該裝置可顯著提高胚胎體外發(fā)育能力。
【背景技術(shù)】
[0002]胚胎體外培養(yǎng)是胚胎工程領(lǐng)域的主要技術(shù)，在所有的有關(guān)胚胎研究領(lǐng)域，如體外受精、試管嬰兒、胚胎移植、動物克隆、轉(zhuǎn)基因動物、胚胎干細胞、嵌合體動物等都涉及胚胎體外培養(yǎng)環(huán)節(jié)，胚胎質(zhì)量的優(yōu)劣以及發(fā)育能力是影響上述這些研究的主要因素。對胚胎質(zhì)量和發(fā)育能力起決定性作用的是胚胎體外培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)基的組成和培養(yǎng)體系。在過去的30年，培養(yǎng)基的組成已經(jīng)發(fā)生了很大的變化，而培養(yǎng)體系一直沿用傳統(tǒng)的微滴培養(yǎng)法，即在培養(yǎng)皿底部做一小液滴，將多個胚胎置于其中，然后在液滴上方覆蓋礦物油，最后將培養(yǎng)皿置于二氧化碳培養(yǎng)箱中即可。微滴培養(yǎng)法至少存在兩種缺陷，一是無法模擬胚胎在體內(nèi)發(fā)育過程中所受到的各種生殖道刺激，如輸卵管蠕動對胚胎的刺激作用。二是微滴的體積顯著大于胚胎在體內(nèi)所處的空間體積，大量培養(yǎng)基不利于胚胎體外發(fā)育。這兩種缺陷是導(dǎo)致目前胚胎體外培養(yǎng)效率差的重要原因，胚胎質(zhì)量顯著低于體內(nèi)正常發(fā)育的胚胎，因此，我們發(fā)明了一種胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置，該裝置不但能夠模擬生殖道對胚胎發(fā)育的刺激作用，而且顯著減小了培養(yǎng)基體積，胚胎質(zhì)量和發(fā)育能力顯著提高，同時，該裝置操作簡便，節(jié)約耗材，不需要昂貴的培養(yǎng)皿和礦物油。通過對國內(nèi)外專利文獻、期刊雜志及其他公開發(fā)表的文獻(如互聯(lián)網(wǎng))進行檢索，本發(fā)明在國內(nèi)外未見報道，我們也未公開發(fā)表涉及本
【發(fā)明內(nèi)容】
的文章，本發(fā)明在國內(nèi)外公眾未知。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服現(xiàn)有的胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)的缺陷，提高胚胎培養(yǎng)質(zhì)量和胚胎發(fā)育能力，本發(fā)明提供了一種哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:將塑料毛細管與塑料接頭相連接，連接部位用`熱縮管密封，塑料接頭與移液器相匹配，塑料毛細管透明光滑、體積小、耐高溫、耐低溫、耐腐蝕、高潤滑、不粘附、無毒害。塑料毛細管摩擦系數(shù)小，表面張力小，無毛細現(xiàn)象，內(nèi)徑狹小，所裝培養(yǎng)基體積小。將移液器與塑料接頭相連，在解剖顯微鏡下通過移液器產(chǎn)生的負壓將胚胎和培養(yǎng)基吸入塑料毛細管，然后將塑料毛細管置入旋轉(zhuǎn)的液體中，液體旋轉(zhuǎn)的動力來自一種磁力攪拌裝置，旋轉(zhuǎn)的液體使塑料毛細管產(chǎn)生擺動和震動，模擬子宮和輸卵管的運動環(huán)境。最后將整個裝置放入二氧化碳培養(yǎng)箱即可。塑料毛細管處于大量旋轉(zhuǎn)的液體中，液體溫度恒定，不易受外界環(huán)境影響。哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置除用于胚胎體外培養(yǎng)外，還可用于體外受精、嵌合體制備、類胚體培養(yǎng)、細胞聚合等研究。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:提高了哺乳動物胚胎體外培養(yǎng)效率，提高了胚胎質(zhì)量和發(fā)育能力，顯著優(yōu)于現(xiàn)有的微滴培養(yǎng)法，而且該哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置節(jié)約耗材，不需要昂貴的細胞培養(yǎng)皿和礦物油，操作簡便，不易污染?！揪唧w實施方式】
[0004]將4厘米長、內(nèi)徑0.3毫米的聚全氟乙烯丙烯共聚物塑料毛細管與10微升的聚丙烯塑料接頭(與2微升的移液器相匹配)相連接，并用熱縮管將連接之處密封，將連接好的塑料毛細管高壓滅菌后烘干備用。收集小鼠受精卵或2-細胞胚胎，置于培養(yǎng)基中，將移液器與塑料接頭連接，在解剖顯微鏡下，利用移液器產(chǎn)生的負壓將10個受精卵或2-細胞胚胎吸入塑料毛細管，然后將裝有胚胎的塑料毛細管置于盛有400毫升蒸餾水的燒杯中，將燒杯放在磁力攪拌器上，之后將整個裝置放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-4天，培養(yǎng)完成后再用移液器將胚胎取 出，用蒸餾水反復(fù)沖洗塑料毛細管并高壓滅菌后烘干，下次繼續(xù)使用。
【權(quán)利要求】
1.一種哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置，塑料毛細管與塑料接頭相連接，連接部位用熱縮管密封，塑料接頭與移液器相匹配，塑料毛細管置于旋轉(zhuǎn)的液體中，其特征是，塑料毛細管透明光滑、體積小、耐高溫、耐低溫、耐腐蝕、高潤滑、不粘附、無毒害，塑料毛細管處于旋轉(zhuǎn)的液體中，液體溫度恒定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置，其特征是:塑料毛細管摩擦系數(shù)小，表面張力小，無毛細現(xiàn)象，內(nèi)徑狹小，所裝培養(yǎng)基體積小，利用移液器產(chǎn)生的負壓將胚胎吸入塑料毛細管。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置，其特征是:塑料毛細管處于旋轉(zhuǎn)的液體中，液體旋轉(zhuǎn)的動力來自一種磁力攪拌裝置，旋轉(zhuǎn)的液體使塑料毛細管產(chǎn)生擺動和震動。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置，其特征是:旋轉(zhuǎn)的液體置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，液體溫度恒定。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置，其特征是:哺乳動物胚胎毛細管體外培養(yǎng)裝置除用于胚胎體外培養(yǎng)外，還可用于體外受精、嵌合體制備、類胚體培養(yǎng)、細胞聚合 等研究。
【文檔編號】C12M3/00GK103881909SQ201310267895
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2013年7月1日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月1日
【發(fā)明者】李相運, 孫芳園, 張振南 申請人:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)