用于改善的側(cè)向流動(dòng)測(cè)定法的單一墊條及使用其的測(cè)試裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于在單一平面上生物學(xué)樣品的改善的側(cè)向流動(dòng)測(cè)定法的條及使用含有其的測(cè)試裝置的側(cè)向流動(dòng)層析測(cè)定法。本發(fā)明的條由單一墊組成，所述單一墊可以通過(guò)提供容易且簡(jiǎn)單的規(guī)程和清楚的視覺(jué)讀出來(lái)改善側(cè)向流動(dòng)測(cè)定法。本發(fā)明的條由樣品應(yīng)用(樣品)區(qū)和反應(yīng)物-所得物區(qū)(在那里反應(yīng)混合物均在相同平面上沉積(反應(yīng)物))組成。另外，本發(fā)明提供了層析方法，其中在固相上通過(guò)差別層析將血紅蛋白與分析物分開(kāi)。本發(fā)明消除血紅蛋白對(duì)結(jié)果檢測(cè)的任何干擾。本發(fā)明提供了優(yōu)點(diǎn)，包括具有快速且清楚的應(yīng)答的容易且簡(jiǎn)單的規(guī)程。
【專利說(shuō)明】用于改善的側(cè)向流動(dòng)測(cè)定法的單一墊條及使用其的測(cè)試裝
[0001]對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002]本申請(qǐng)要求2011年7月22日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)流水號(hào)61/510，762的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其內(nèi)容通過(guò)提及并入本文。
[0003]發(fā)明背景
[0004]在護(hù)理點(diǎn)(POC)實(shí)施的測(cè)試已經(jīng)不僅在健康護(hù)理設(shè)施，包括醫(yī)院和醫(yī)生診所中，而且還在其它臨床位置，包括工作場(chǎng)所或遠(yuǎn)程現(xiàn)場(chǎng)位置中變成常見(jiàn)且非常有用的診斷工具。由于測(cè)試的緊迫和目的，簡(jiǎn)單且有效的測(cè)試裝置和以成本和時(shí)間有效的方式獲得結(jié)果的方法是很想要的。更具體而言，在非健康護(hù)理設(shè)施中，諸如在用于快速增長(zhǎng)的流行性疾病的遠(yuǎn)程現(xiàn)場(chǎng)臨床位置測(cè)試，用于戰(zhàn)場(chǎng)的生物戰(zhàn)試劑的測(cè)試，用于污染物的環(huán)境測(cè)試，或用于藥物濫用的工作場(chǎng)所測(cè)試中的測(cè)試需要簡(jiǎn)單且容易實(shí)施。有時(shí)，由于這些測(cè)試經(jīng)常由具有很少(若有的話)臨床診斷學(xué)培訓(xùn)的個(gè)體實(shí)施，這些護(hù)理測(cè)試點(diǎn)需要是簡(jiǎn)單的，快速的，且容易使用的。此外，環(huán)境中需要對(duì)貯存條件諸如溫度或濕度沒(méi)有大量控制的裝置。如此，理想地，用于護(hù)理測(cè)試點(diǎn)點(diǎn)的裝置需要最小量的設(shè)備，并且裝置內(nèi)體現(xiàn)的測(cè)試方法在對(duì)于嚴(yán)格環(huán)境條件，包括溫度或濕度穩(wěn)定時(shí)會(huì)是想要的。
[0005]隨著不斷需要用于不斷增加的目的和變化環(huán)境的護(hù)理測(cè)試點(diǎn)，本領(lǐng)域中仍然需要提供用于以成本和時(shí)間有效的方式實(shí)施用于生物學(xué)標(biāo)本的測(cè)試的方法和裝置。
[0006]發(fā)明概述
[0007]在一個(gè)實(shí)施方案 中，本發(fā)明提供了一種用于側(cè)向流動(dòng)測(cè)定法的基于單一墊(single-pad)的條,其中樣品應(yīng)用(樣品)區(qū)和反應(yīng)物-所得物區(qū)(reactant-resultantzone)(在那里沉積有反應(yīng)混合物(反應(yīng)物))均在同一平面的、單一的、單墊上(asingle, one-pad)。
[0008]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)先選擇的分析物的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法(enzyme-driven, lateral chromatographic flow assay)的條，其由下列各項(xiàng)組成:單一墊；和以干形式(dry form)沉積的底物。
[0009]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)先選擇的分析物的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法(assay),其包括:
[0010](a)提供包含條的測(cè)試裝置，所述條由下列各項(xiàng)組成:
[0011]⑴單一墊；和
[0012](ii)以干形式沉積的底物；
[0013](b)對(duì)其中沉積有所述底物的所述單一墊應(yīng)用樣品；
[0014](c)容許所述樣品流過(guò)消化墊以到達(dá)所述底物；
[0015](d)容許所述樣品與所述底物起反應(yīng)以產(chǎn)生應(yīng)答；并
[0016](e)鑒定并解讀所述應(yīng)答以指示所述樣品中所述分析物的存在或濃度。
[0017]在別的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)存在的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法，其包括:[0018](a)提供包含單一墊條的測(cè)試裝置，所述單一墊條包含:
[0019](i)用裂解緩沖液處理的消化單一墊；
[0020](?)測(cè)定混合物，其包含葡萄糖-6-磷酸、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、氫化物或電子轉(zhuǎn)移劑及其混合物；和
[0021](iii)四唑鹽，
[0022](b)在所述消化單一墊上應(yīng)用樣品；
[0023](C)容許所述樣品流過(guò)所述消化墊以接觸所述測(cè)定混合物；
[0024](d)容許所述樣品與所述測(cè)定混合物起反應(yīng)以產(chǎn)生應(yīng)答，并
[0025](e)鑒定并解讀(interprete)所述應(yīng)答以指示所述樣品中所述分析物的存在或濃度。
[0026]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明基于干形式測(cè)定法，其中樣品應(yīng)用區(qū)中應(yīng)用的樣品通過(guò)毛管力(capillary force)行進(jìn)至反應(yīng)區(qū)，而應(yīng)用區(qū)和反應(yīng)區(qū)在同一平面上。反應(yīng)物含有組分的組合，包括引發(fā)顏色反應(yīng)并且以干形式沉積的組合物和酶。在本發(fā)明中，樣品行進(jìn)至反應(yīng)物區(qū)，并且與反應(yīng)物混合。由于樣品與反應(yīng)物混合，所得的組合物會(huì)緩慢遷移并且在反應(yīng)物-所得物區(qū)上保留，而樣品中的其它組分，諸如血紅蛋白比所得的組合物更快移動(dòng)，并且通過(guò)諸如毛管力繼續(xù)行進(jìn)以與期望的所得物分開(kāi)。在與含有分析物的樣品起反應(yīng)后，反應(yīng)物結(jié)果區(qū)會(huì)呈現(xiàn)指示劑，諸如顏色的結(jié)果。所得物的保留和樣品的其它組分的繼續(xù)毛細(xì)管移動(dòng)會(huì)消除其它組分，諸如血紅蛋白的任何干擾，并且改善結(jié)果的鑒定。樣品在樣品(諸如血液)或另外應(yīng)用有樣品的緩沖溶液中含有的液體中通過(guò)毛管力行進(jìn)。
[0027]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于護(hù)理測(cè)試點(diǎn)的單墊條上干形式測(cè)定法中的快速診斷測(cè)試(RDT)。單墊上的側(cè)向?qū)游鎏峁┝朔€(wěn)定的測(cè)試，簡(jiǎn)單的方法及快速的測(cè)試結(jié)果O
[0028]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了層析方法，其中在固相上使用差別層析將血紅蛋白與分析物分開(kāi)。血紅蛋白的顏色經(jīng)常干擾紅細(xì)胞中分析物的顏色反應(yīng)的視覺(jué)讀出。本發(fā)明提供了側(cè)向?qū)游龇椒?，其中樣品的差別遷移由于大小差異、粘度、分析物與反應(yīng)物的沉淀、通過(guò)充滿會(huì)與分析物起反應(yīng)的試劑的多孔基質(zhì)的電荷差異而發(fā)生。
[0029]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)包括容易且簡(jiǎn)單過(guò)程的能力，和沒(méi)有血紅蛋白干擾的清楚視覺(jué)讀出。
[0030]貫穿本申請(qǐng)，以下術(shù)語(yǔ)具有下文所列的意義。
[0031]“生物學(xué)材料”、“生物學(xué)樣品”或“樣品”指從脊椎動(dòng)物提取的流體或組織，諸如全血、血清、血漿、唾液、尿液和腦脊液。
[0032]“分析物”指生物學(xué)材料、生物學(xué)樣品、或樣品中含有作為測(cè)定法的目的以鑒定結(jié)果諸如存在、缺乏或濃度之一的比活的某種組分。
[0033]除非另有定義，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員的通常理解具有相同的意義。雖然與本文中描述的方法和材料相似或等同的方法和材料可以在本發(fā)明的實(shí)施或測(cè)試中使用，但是下文描述了合適的方法和材料。本文中提及的所有出版物、專利申請(qǐng)、專利和其它參考文獻(xiàn)通過(guò)提及完整并入。在沖突的情況中，應(yīng)以本說(shuō)明書(shū)，包括定義為準(zhǔn)。另外，材料、方法和例子僅是例示性的而不意圖為限制性的。
[0034]本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)從以下發(fā)明詳述及從權(quán)利要求書(shū)看會(huì)是顯而易見(jiàn)的。[0035]附圖簡(jiǎn)述
[0036]圖1提供了與常規(guī)兩墊條相比本發(fā)明的單墊條(one-pad strip)的結(jié)構(gòu)。
[0037]圖2提供了在G6H)缺乏測(cè)試方面本發(fā)明的單墊條與常規(guī)兩墊條之間的視覺(jué)比較測(cè)試結(jié)果。通過(guò)圖中提供的得分測(cè)量視覺(jué)顏色鑒定強(qiáng)度。
[0038]圖3提供了對(duì)G6H)測(cè)試使用酶測(cè)定法得到的本發(fā)明的單墊條與常規(guī)兩墊條之間的信號(hào)強(qiáng)度比較測(cè)試結(jié)果。通過(guò)圖中提供的得分測(cè)量視覺(jué)顏色鑒定強(qiáng)度。
[0039]圖4提供了在乳酸脫氫酶測(cè)試方面本發(fā)明的單墊條與常規(guī)兩墊條之間的視覺(jué)比較測(cè)試結(jié)果。
[0040]圖5提供了對(duì)乳酸脫氫酶測(cè)試使用酶測(cè)定法得到的本發(fā)明的單墊條與常規(guī)兩墊條之間的信號(hào)強(qiáng)度比較測(cè)試結(jié)果。通過(guò)aQzen閱讀器測(cè)量視覺(jué)顏色鑒定的強(qiáng)度。
[0041]圖6提供了在乙醇(alcohol)測(cè)試方面本發(fā)明的單墊條與常規(guī)兩墊條之間的視覺(jué)比較測(cè)試結(jié)果。
[0042]圖7提供了對(duì)醇脫氫酶測(cè)試使用酶測(cè)定法得到的本發(fā)明的單墊條與常規(guī)兩墊條之間的信號(hào)強(qiáng)度比較測(cè)試結(jié)果。通過(guò)aQzen閱讀器測(cè)量視覺(jué)顏色鑒定的強(qiáng)度。
[0043]圖8提供了對(duì)乳酸脫氫酶測(cè)試使用酶測(cè)定法得到的本發(fā)明的單墊條與常規(guī)兩墊條之間的信號(hào)強(qiáng)度比較測(cè)試結(jié)果。通過(guò)圖中提供的得分測(cè)量視覺(jué)顏色鑒定強(qiáng)度。
[0044]發(fā)明詳述
[0045]本發(fā)明提供了一種用于預(yù)先選擇的分析物的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法的條，其由下列各項(xiàng)組成:
[0046]單一墊；和
[0047]以干形式沉積的底物。
[0048]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的單一墊是用裂解緩沖液，諸如氯化鎂預(yù)處理的消化
墊。
[0049]在另一個(gè)實(shí)施方案中，分析物選自人和動(dòng)物流體中的蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂質(zhì)、核酸。
[0050]在另一個(gè)實(shí)施方案中，以干形式沉積的底物是測(cè)定混合物，其含有分析物的反應(yīng)性底物，諸如對(duì)于葡萄糖磷酸脫氫酶(G6PD)為葡萄糖-6-磷酸，該測(cè)定混合物可以進(jìn)一步包含煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、氫化物轉(zhuǎn)移劑、及其混合物。
[0051]在某個(gè)實(shí)施方案中，分析物選自葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)、乳酸脫氫酶、或醇(alcohol)。
[0052]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析物是葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)。
[0053]在別的實(shí)施方案中，底物含有指示劑，諸如染料化合物。可以不做限制采用許多化合物，該化合物可以通過(guò)使底物與分析物接觸在電子上或結(jié)構(gòu)上改變，并且以視覺(jué)或使用測(cè)量方法或儀器可檢測(cè)的任何形式表示變化。此類化合物的例子包括但不限于染料。表達(dá)各種顏色的化合物經(jīng)常由于結(jié)構(gòu)的任何化學(xué)或電子狀態(tài)改變而改變顏色。甲臜(formazan)染料是自脫氫酶和還原酶還原四唑鹽生成的生色化合物。甲臜染料具有從深藍(lán)色至深紅色至橙色的多種顏色，這取決于用作反應(yīng)底物的初始四唑鹽。一批四唑鹽包括但不限于TTC (四唑、氯化四唑或 2，3，5-三苯基-2H-氯化四唑(2，3，5-triphenyl-2H_tetrazoliumchloride))、INT (2- (4-碘苯基)_3_ (4-硝基苯基)-5-苯基-2H-氯化四唑(2- (4-1odophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-2H_tetrazolium chloride))、MTT(3-(4, 5- 二甲基-2-噻唑基)-2，5- 二苯基-2H-溴化四唑((3- (4，5-dimethyl-2-thiazolyl) -2，5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide)))、XTT (2, 3- 二 -(2-甲氧基-4-硝基-5-石黃苯基)-2H_ 四唑-5-甲酸苯胺(2，3-bis- (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl) -2H-tetrazoIium-5-carboxaniIide))、NBT (硝基藍(lán)四唑(Nitroblue Tetrazolium))、MTS (3-(4, 5- 二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)_5_(3-carboxymethoxyphenyl)~2~(4-sulfophenyl)-2H_tetrazolium))、或DCPIP (2，6-二氯靛酹(2，6-dichlorophenolindophenol))。在通過(guò)酶或化學(xué)條件(諸如與煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氫化物(NADH)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)或任何氫化物轉(zhuǎn)移劑起反應(yīng))還原后，四唑鹽可以轉(zhuǎn)變顏色，并且可以甚至形成不溶性沉淀物?？梢酝ㄟ^(guò)方法檢測(cè)結(jié)果，所述方法包括但不限于視覺(jué)檢查、色度計(jì)、UV檢測(cè)儀、分光光度計(jì)、圖像分析閱讀器，等等。
[0054]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)先選擇的分析物的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法，其包括:
[0055](a)提供包含條的測(cè)試裝置，所述條由下列各項(xiàng)組成:
[0056](i)單一墊；和
[0057](ii)以干形式沉積的底物；
[0058](b)對(duì)其中沉積有所述底物的所述單一墊應(yīng)用樣品；
[0059](C)容許所述 樣品流過(guò)消化墊以到達(dá)所述底物；
[0060](d)容許所述樣品與所述底物起反應(yīng)以產(chǎn)生應(yīng)答；并
[0061](e)鑒定并解讀所述應(yīng)答以指示所述樣品中所述分析物的存在或濃度。
[0062]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析物是酶諸如G6H)。
[0063]在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)G6H)存在的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法，其包括:
[0064](a)提供包含單一墊條的測(cè)試裝置，所述單一墊條包含:
[0065](i)用裂解緩沖液處理的消化單一墊；
[0066](ii)測(cè)定混合物，其包含葡萄糖-6-磷酸、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、氫化物或電子轉(zhuǎn)移劑及其混合物；和
[0067](iii)四唑鹽，
[0068](b)在所述消化單一墊上應(yīng)用樣品；
[0069](C)容許所述樣品流過(guò)所述消化墊以接觸所述測(cè)定混合物；
[0070](d)容許所述樣品與所述測(cè)定混合物起反應(yīng)以產(chǎn)生應(yīng)答，并
[0071](e)鑒定并解讀所述應(yīng)答以指示所述樣品中所述分析物的存在或濃度。
[0072]本發(fā)明提供了一種側(cè)向流動(dòng)測(cè)定法，其中樣品應(yīng)用(樣品)區(qū)和反應(yīng)物-所得物區(qū)(在那里沉積有反應(yīng)混合物(反應(yīng)物))均在同一平面的、單一的、單墊上。
[0073]另外，本發(fā)明基于干形式測(cè)定法，其中樣品應(yīng)用區(qū)中應(yīng)用的樣品通過(guò)毛管力行進(jìn)至反應(yīng)區(qū)，而應(yīng)用區(qū)和反應(yīng)區(qū)在同一平面上。反應(yīng)物含有組分的組合，包括引發(fā)顏色反應(yīng)并且以干形式沉積的組合物和酶。在本發(fā)明中，樣品行進(jìn)至反應(yīng)物區(qū)，并且與反應(yīng)物混合。
[0074]由于樣品與反應(yīng)物混合，所得的組合物會(huì)沉淀，緩慢遷移并且在反應(yīng)物-所得物區(qū)上保留，而樣品中的其它組分，諸如血紅蛋白通過(guò)諸如毛管力繼續(xù)行進(jìn)以與期望的所得物分開(kāi)。在與含有分析物的樣品起反應(yīng)后，反應(yīng)結(jié)果區(qū)會(huì)以可以視覺(jué)檢測(cè)的指示劑，諸如顏色呈現(xiàn)結(jié)果。同時(shí)，逆向讀出也是有可能的:在與含有分析物的樣品起反應(yīng)后，具有指示劑，諸如顏色的反應(yīng)結(jié)果區(qū)會(huì)消失。不含分析物的樣品:顏色保留于結(jié)果區(qū))。所得物的保留和樣品的其它組分的繼續(xù)毛細(xì)管移動(dòng)會(huì)消除其它組分，諸如血紅蛋白的任何干擾，并且改善結(jié)果的鑒定。樣品在樣品(諸如血液)或另外應(yīng)用有樣品的緩沖溶液中含有的液體中通過(guò)毛管力行進(jìn)。
[0075]單墊條
[0076]本發(fā)明提供了單墊條裝置，其中樣品應(yīng)用區(qū)和反應(yīng)物結(jié)果區(qū)都在單墊上。單一墊中實(shí)施的測(cè)定法會(huì)提供分析物的一致遷移，并且通過(guò)消除樣品的不均勻遷移通過(guò)多層來(lái)產(chǎn)生一致的結(jié)果。例如，在將血液樣品應(yīng)用于用裂解緩沖液預(yù)處理的單墊條時(shí)，可以將血紅蛋白容易地與所得物分開(kāi)。
[0077]另外，可以通過(guò)增加與反應(yīng)物起反應(yīng)的分析物的實(shí)際量，而不是分析物的量在單墊條裝置中 提高靈敏性，因?yàn)闃悠窌?huì)行進(jìn)到相同表面，而不是通過(guò)不同介質(zhì)或?qū)印＿€有，通過(guò)采用單墊條裝置，生產(chǎn)成本會(huì)較低，并且過(guò)程會(huì)比常規(guī)多層測(cè)定法的過(guò)程簡(jiǎn)單。
[0078]例如，BinaxNOVV_:KX.16PD測(cè)試具有由兩個(gè)不同墊組成的條，所述兩個(gè)不同墊是樣品墊和反應(yīng)墊。具有正常Gero活性的樣品產(chǎn)生截然不同的顏色變化。紅色樣品顏色在反應(yīng)墊的上半部分上變化成褐色/黑色顏色。血液樣品中反應(yīng)產(chǎn)物的顏色沒(méi)有消除血紅蛋白的顏色；因此，褐色/黑色顏色與血液的紅色顏色沒(méi)有清楚的差異。與包括BiiiaxNOW?G6PD的其它裝置中使用的二相或多相且不連續(xù)系統(tǒng)不一樣,本發(fā)明采用單相且連續(xù)層析。測(cè)試條由單一墊組成，并且連續(xù)層析比兩相層析提供與染料(諸如甲臜染料)的所得物與條上的血紅蛋白的更容易的分開(kāi)。
[0079]本發(fā)明由三個(gè)區(qū)，即樣品應(yīng)用(樣品)區(qū)、反應(yīng)物和所得物區(qū)構(gòu)成。反應(yīng)區(qū)是以干形式沉積的引發(fā)顏色反應(yīng)的組成組合，所得物區(qū)是視覺(jué)讀出區(qū)，并且樣品區(qū)是應(yīng)用樣品的區(qū)域。由于這些區(qū)由相同基質(zhì)構(gòu)成，單墊、連續(xù)形式通過(guò)經(jīng)由多層消除樣品不均勻遷移的可能性實(shí)現(xiàn)分析物的一致遷移并且產(chǎn)生一致的結(jié)果。另外，可以通過(guò)增加與反應(yīng)物起反應(yīng)的分析物的實(shí)際量而不是通過(guò)多層的分析物量來(lái)提高靈敏性。還有，本發(fā)明的形式降低產(chǎn)生成本，并且使產(chǎn)品過(guò)程比常規(guī)多層測(cè)定法的產(chǎn)品過(guò)程更容易。
[0080]側(cè)向流動(dòng)層析測(cè)定法
[0081]分析物使用各種反應(yīng)，諸如抗體-抗原反應(yīng)間的免疫學(xué)反應(yīng)、酶-底物反應(yīng)、蛋白質(zhì)-底物綴合、或底物-底物復(fù)合物形成與反應(yīng)物起反應(yīng)。
[0082]雖然免疫學(xué)測(cè)定法經(jīng)常利用側(cè)向流動(dòng)層析測(cè)定法，但是側(cè)向流動(dòng)層析測(cè)定法用于酶促測(cè)定法尚不常見(jiàn)。側(cè)向流動(dòng)酶測(cè)定法對(duì)某種酶鑒定其存在或缺乏和濃度，其使用與底物的反應(yīng)并且使用可以表示與某種化學(xué)品，諸如氫化物起反應(yīng)后通過(guò)酶和底物之間的反應(yīng)產(chǎn)生的某種顏色的指示劑諸如染料檢測(cè)反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。
[0083]葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)
[0084]本發(fā)明的一個(gè)特定的實(shí)施方案提供了基于酶的測(cè)定法，諸如直接檢測(cè)樣品中酶(諸如血液樣品中的G6PD)的存在，其利用來(lái)自酶與其底物之間的反應(yīng)的代謝物活性進(jìn)行，所述活性可以將染料還原以表示某些指示劑諸如顏色?？梢詫⑷玖戏肿又T如四唑化合物還原以形成不溶性甲臜。不溶性甲臜會(huì)呈現(xiàn)紫色顏色，其可以不用任何特定的設(shè)備容易視覺(jué)鑒定。
[0085]人酶葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)在人生物化學(xué)中實(shí)施至關(guān)重要的功能。它是氧化戊糖途徑的部分，其中它發(fā)揮功能以通過(guò)提供還原性等同物使自由基對(duì)細(xì)胞的氧化攻擊最小化。例如，G6PD將葡萄糖-6-磷酸轉(zhuǎn)化成6-磷酸葡萄糖酸，由此釋放質(zhì)子，其將煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)還原成NADPH，即NADP的還原形式。NADPH啟動(dòng)一系列下游反應(yīng)，其最終還原自由基氧化劑，并且使其中許多在正常人生物化學(xué)中不太有效。
[0086]G6PD存在于大多數(shù)人細(xì)胞中，但是它以較高濃度在紅細(xì)胞中，所述紅細(xì)胞在其主要功能之一中作用為氧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，并且因此對(duì)氧化攻擊特別易感。此酶幫助保護(hù)紅細(xì)胞免于氧化損傷和過(guò)早破壞。Gero系統(tǒng)的效率明顯較高，如實(shí)際上在正?；钚云陂g小于1%其能力用于對(duì)抗和阻止不想要的氧化反應(yīng)反映的。然而，在必須對(duì)人體引入強(qiáng)氧化劑，諸如奎寧類抗瘧疾藥物的成員時(shí)，對(duì)還原劑的快速生成的需要大大增加。[0087]編碼Gero的基因的幾處突變是已知的，其降低酶在其基因組的兩個(gè)半份中都擁有此類突變的個(gè)體的生物化學(xué)中的效率，這引起其Gero的數(shù)量與具有正?；虻娜酥斜３钟谙嗤?，而且還引起其Gero顯示大大降低的比活。在這些個(gè)體中，施用強(qiáng)氧化劑諸如奎寧型抗瘧疾藥物類別的成員可以引起幾種臨床并發(fā)癥，諸如溶血性貧血，因?yàn)槠銰6DP的低比活沒(méi)有實(shí)現(xiàn)足夠還原劑的生成以阻止對(duì)其紅細(xì)胞的快速的不想要的氧化影響。在瘧疾感染常見(jiàn)且有時(shí)甚至流行的區(qū)域，因此需要快速的有效測(cè)試，其會(huì)容易區(qū)別具有低比活的G6ro的對(duì)象與其G6ro活性正常的對(duì)象，并且會(huì)使醫(yī)學(xué)人員能夠確保(I)僅對(duì)具有正?；蜉^好的G6ro比活的個(gè)體規(guī)定奎寧抗瘧疾藥物，以及(2)用備選類型的抗瘧疾藥物用藥治療具有低于正常的G6ro活性的對(duì)象。
[0088]另外，已知多種類型的藥物增加溶血性貧血，并且名單包括但不限于抗瘧藥(伯氨喹(primaquine),撲痕喹(pamaquine),等等),磺胺類藥(sulfonamides)(磺胺、磺胺醋酰(sulphacetamide)、磺胺批P定(sulphapyridine)、磺胺甲基異口惡唑,等等)，砜(氨苯砜，等等)，硝基呋喃類藥(nitrofurans)(呋喃妥因，等等)，等等(萘唳酸(nalidixacid)、萘、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、亞甲藍(lán)、甲苯胺藍(lán),等等)。
[0089]為了測(cè)試G6H)的缺乏，含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)的紅細(xì)胞在其接觸用血液裂解劑預(yù)處理的樣品應(yīng)用區(qū)時(shí)裂解到測(cè)試條上。裂解的紅細(xì)胞中的Gero與其在預(yù)處理的干條中的底物起反應(yīng)，并且發(fā)生酶反應(yīng)以在存在四唑染料和氫化物轉(zhuǎn)移劑的情況中起始顏色形成過(guò)程。催化性G6ro可以氧化葡萄糖-6-磷酸以釋放NADPH，并且釋放的NADPH還原四唑染料以將四唑染料的顏色改變?yōu)榧着H，諸如紫色或藍(lán)色等，其可以在同一墊上視覺(jué)檢查。
[0090]在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，測(cè)試條在樣品應(yīng)用和顏色形成反應(yīng)區(qū)在同一墊上的單層中構(gòu)建。若需要的話，測(cè)定條的上部由具有吸水性材料的吸收墊構(gòu)成。測(cè)試條用包含離子型或非離子型表面活性劑的裂解試劑預(yù)處理。其提供實(shí)施測(cè)試的簡(jiǎn)單規(guī)程，因?yàn)樗恍枰獞?yīng)用樣品前的血液裂解步驟。預(yù)處理的測(cè)試條用試劑浸潰，該試劑包含:作為Gero的特異性底物的葡萄糖-6-磷酸、輔酶NADP或NAD、四唑染料、和氫化物轉(zhuǎn)移劑和穩(wěn)定劑如糖模塊或水溶性聚合物。
[0091]快速診斷測(cè)試(RDT)和雙重測(cè)試[0092]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了供護(hù)理點(diǎn)測(cè)試用的單墊條上干形式測(cè)定法中的快速診斷測(cè)試(RDT)。干形式側(cè)向?qū)游鎏峁┝朔€(wěn)定的測(cè)試裝置，簡(jiǎn)單的方法和快速的測(cè)試結(jié)果。Gero缺乏是影響4億人且在瘧疾地方病區(qū)域中高度流行的最常見(jiàn)人酶缺乏之一。此缺乏似乎提供某種保護(hù)免于瘧疾感染。然而，它也可以在施用某些瘧疾藥物，包括PRIMAQUINE后引起溶血。因此，迫切需要適合于現(xiàn)場(chǎng)篩選的快速診斷測(cè)試(RDT)。
[0093]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了測(cè)試方法，其中使用臨床樣品得到的GeroRDT測(cè)試結(jié)果可以與定量測(cè)試結(jié)果相關(guān)聯(lián)。測(cè)試可以將約≤4IU/gHb(于37°C正常12±2.09U/gHb)檢測(cè)為缺乏。截留可以隨G6H)缺乏患者中紅細(xì)胞對(duì)伯氨喹的耐受性而變化。結(jié)束的穩(wěn)定性研究提供了測(cè)試條對(duì)于于45°C持續(xù)3個(gè)月和于60°C持續(xù)10天是穩(wěn)定的。針對(duì)G6H)的此RDT可以與針對(duì)瘧疾的RDT組合，所述針對(duì)瘧疾的RDT能夠檢測(cè)每μ L血液的小于30種寄生物。此雙重測(cè)試試劑盒可以使用少量血液(通常小于10 μ L)同時(shí)診斷瘧疾感染和G6ro缺乏。測(cè)定條是快速的(〈10分鐘)且用少量樣品(〈10UL血液)，使用簡(jiǎn)單，成本有效，輕便的，并且沒(méi)有特殊的貯存要求，其對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)使用是至關(guān)重要的要素。
[0094]側(cè)向流動(dòng)層析
[0095]許多常用的護(hù)理點(diǎn)測(cè)試基于利用多微孔膜的毛細(xì)管作用的基于膜的免疫層析的側(cè)向流動(dòng)測(cè)定法。在側(cè)向流動(dòng)層析測(cè)定法中，通過(guò)對(duì)固定固相上捕捉分子的親和力結(jié)合將流動(dòng)相標(biāo)本溶液中的分析物與其它組分分開(kāi)。由硝酸纖維素或尼龍制成的膜為親和層析的固體固定相和分配層析的液相提供基質(zhì)，所述液相通過(guò)毛細(xì)管作用驅(qū)動(dòng)免疫復(fù)合物顆粒與其它液體溶劑分開(kāi)。
[0096]由尼龍或硝酸纖維素制成的多微孔膜在其第一次證明蛋白質(zhì)可以轉(zhuǎn)移通過(guò)膜時(shí)從約1979年起已經(jīng)用于抗原/抗體測(cè)試。已經(jīng)廣泛利用硝酸纖維素作為用于在研究技術(shù)諸如Western印跡和側(cè) 向流動(dòng)免疫診斷學(xué)中固定化蛋白質(zhì)的表面。微孔性和硝酸纖維素為快速免疫層析測(cè)定法提供許多益處，包括例如高結(jié)合能力、蛋白質(zhì)的非共價(jià)附接、和穩(wěn)定的長(zhǎng)期固定化環(huán)境。
[0097]—般地，在側(cè)向?qū)游?包括酶驅(qū)動(dòng)的測(cè)定法，諸如用于G6H)缺乏的測(cè)試)中，干底物是在層析條(即如本發(fā)明中的單墊條)上樣品接收區(qū)的接合(junction)附近且剛超出該接合預(yù)先沉積。然而，它可以置于樣品流動(dòng)路徑中的別的地方以適應(yīng)樣品或底物中的一種或多種成分的特定要求，只要它置于基本上在末端或“吸收墊”(在那里樣品流動(dòng)停止，并且存在的任何過(guò)量流體流入吸收墊或可以提供的其它接收器(sink)裝置中)前的流動(dòng)路徑中。
[0098]重要的是，干燥的底物在一定范圍中(優(yōu)選在限制區(qū)內(nèi))沉積，只要便于其通過(guò)樣品的向前流動(dòng)被完全挑出。干燥的底物在流動(dòng)路徑中的放置還應(yīng)當(dāng)考慮液體樣品內(nèi)溶解或分散形式的底物的重建到樣品到達(dá)樣品流動(dòng)停止的點(diǎn)的時(shí)間完成是期望的。
[0099]為了方便運(yùn)輸、貯存和使用，優(yōu)選地，本發(fā)明的每個(gè)層析條可以在構(gòu)建為使得該條側(cè)向放置的合適裝置內(nèi)容納。許多此類裝置是本領(lǐng)域中公知的，并且可以適當(dāng)利用其中任一種，其構(gòu)建為使得通過(guò)側(cè)向流動(dòng)實(shí)施置于其內(nèi)的層析條上的測(cè)定法性能。
[0100]在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的單墊條提供特征，其包括但不限于下列各項(xiàng):
[0101]1.單墊條包括選自下組的多孔性基質(zhì):硝酸纖維素膜、玻璃纖維、纖維素或聚酯，坐坐寸寸，
[0102]2.條包含單墊條，其中所述條的樣品應(yīng)用區(qū)和干燥試劑混合物的沉積區(qū)在同一墊中，而不管兩個(gè)區(qū)域重疊與否。
[0103]3.本發(fā)明中的條具有接收樣品流體后發(fā)生的對(duì)反應(yīng)混合物的液體流動(dòng)的單一路徑。
[0104]4.任選地，本發(fā)明的單墊條可以用容許通過(guò)直接接觸樣品應(yīng)用區(qū)而不用緩沖液預(yù)先裂解來(lái)裂解生物學(xué)流體的裂解試劑預(yù)包被，所述裂解試劑含有離子型(陰離子型、陽(yáng)離子型和兩性離子型)或非離子型表面活性劑和氯化鎂。
[0105]5.本發(fā)明的單墊條含有選自下組的糖模塊(moiety):單糖、二糖、多糖或水溶性聚合物如穩(wěn)定劑以提高熱穩(wěn)定性。
[0106]6.本發(fā)明的單墊條差別設(shè)計(jì)并在雙重測(cè)試形式裝置中裝配以用肉眼區(qū)別中等(例如:正常活性檢測(cè)的10-60%)和嚴(yán)重G6H)缺乏(例如:正?；钚詸z測(cè)的小于10%)。檢測(cè)活性的％不限于10-60%或小于10%。
[0107]7.反應(yīng)區(qū)中的組分包含酶底物、顏色顯現(xiàn)試劑和穩(wěn)定劑。可以采用單墊系統(tǒng)進(jìn)行定量或半定量測(cè)定法，因?yàn)闂l上的顏色變化可以通過(guò)儀器可讀出，所述儀器諸如光學(xué)分光光度計(jì)、掃描儀、閱讀器、或密度計(jì)。
[0108]8.單墊系統(tǒng)也可適用于電化學(xué)系統(tǒng)。經(jīng)由氧化還原酶或電子轉(zhuǎn)移介導(dǎo)物(mediator)從由G6H)生成的NADPH或NADH至電極的電子轉(zhuǎn)移可以通過(guò)干形式的電子量化。
[0109]9.可以采用單墊系統(tǒng)進(jìn)行免疫測(cè)定法，其在固相上固定化捕捉分子。
[0110]通過(guò)差別層析分開(kāi)血紅蛋白與分析物
[0111]控制側(cè)向?qū)游鰷y(cè)定法中的信號(hào)強(qiáng)度的關(guān)鍵參數(shù)是膜的毛細(xì)管流動(dòng)率和蛋白質(zhì)結(jié)合能力。毛細(xì)管流動(dòng)率和結(jié)合能力由膜的孔徑、孔隙率和厚度決定。膜的蛋白質(zhì)結(jié)合能力取決于其孔徑，和表面特性。
[0112]本發(fā)明提供了層析，其中在固相上使用差別層析將血紅蛋白與分析物分開(kāi)。血紅蛋白的顏色經(jīng)常干擾紅細(xì)胞中分析物的顏色反應(yīng)的視覺(jué)讀出。本發(fā)明提供了側(cè)向?qū)游龇椒?，其中樣品的不同遷移是由于大小差異、粘性、分析物與反應(yīng)物的沉淀、通過(guò)充滿會(huì)與分析物相互作用的試劑的多孔基質(zhì)的電荷差異所致。在樣品區(qū)上應(yīng)用血細(xì)胞，所述樣品區(qū)用裂解劑預(yù)處理以進(jìn)行紅細(xì)胞裂解至反應(yīng)區(qū)，并且在需要時(shí)應(yīng)用緩沖液。裂解的血細(xì)胞移動(dòng)至反應(yīng)-結(jié)果區(qū)，并且與反應(yīng)物混合，所得的組合物會(huì)保留在反應(yīng)物-所得物區(qū)上，而血紅蛋白通過(guò)諸如毛管力繼續(xù)行進(jìn)以與期望的所得物分開(kāi)。血紅蛋白的分開(kāi)會(huì)使指示劑諸如顏色的結(jié)果檢測(cè)更清楚且更容易鑒定。
實(shí)施例
[0113]下文具體描述了特定的Gero測(cè)定法，其可以由現(xiàn)場(chǎng)、家庭、醫(yī)生診所或缺乏培訓(xùn)過(guò)的實(shí)驗(yàn)室人員和儀器的任何地方工作的任何人容易成功使用，并且附圖1-3中提供了結(jié)
果O
[0114]實(shí)施例1:為G6H)缺乏測(cè)試條準(zhǔn)備和進(jìn)行樣品測(cè)試
[0115]將墊用裂解緩沖液預(yù)處理，并將其于室溫干燥。圖1中顯示了單墊和兩墊條的結(jié)構(gòu)。將經(jīng)預(yù)處理的墊在塑料支持物上附接，并且在塑料支持物上頭部部分中對(duì)墊覆蓋吸水紙作為吸附墊。制備含有葡萄糖-6-磷酸、NADP、四唑、和氫化物或電子轉(zhuǎn)移劑的測(cè)定混合物，并且將其浸潰至多孔墊上。容許經(jīng)測(cè)定混合物浸潰的墊于室溫干燥過(guò)夜。
[0116].單墊的制備:塑料支持物上經(jīng)測(cè)定混合物浸潰的墊。
[0117].兩墊的制備:通過(guò)在塑料支持物上重疊l_2mm將供樣品應(yīng)用的墊附接于經(jīng)測(cè)定混合物浸潰的墊的底部。
[0118]將正?；蛉狈Φ臉悠窇?yīng)用于條上。結(jié)果呈現(xiàn)了正常樣品的確在本發(fā)明的單墊條系統(tǒng)中比在兩墊系統(tǒng)中產(chǎn)生更強(qiáng)且更清楚的紫色顏色，如圖2中顯示的。缺乏樣品在單墊和兩墊兩者中都沒(méi)有產(chǎn)生任何顏色，因?yàn)闆](méi)有Gero可用于產(chǎn)生NADPH。另外，結(jié)果呈現(xiàn)了流體遷移在單墊中比在兩墊中更一致且更快，并且血液清除的完成在本發(fā)明的單墊條系統(tǒng)中比在兩墊系統(tǒng)中更快。
[0119]實(shí)施例2:為乳酸脫氫酶測(cè)試條準(zhǔn)備和進(jìn)行樣品測(cè)試
[0120]將墊用含有氯化鎂的裂解緩沖液預(yù)處理，并且將其于室溫干燥過(guò)夜。將經(jīng)預(yù)處理的墊在塑料支持物上附接，并且在塑料支持物上頭部部分中對(duì)墊覆蓋吸水紙作為吸附墊。制備含有乳酸鹽、NAD、四唑、和Tris-HCl緩沖液pH8.0、氫化物轉(zhuǎn)移劑的測(cè)定混合物，并將其浸潰至多孔墊上。容許經(jīng)測(cè)定混合物浸潰的墊于室溫干燥過(guò)夜。
[0121].單墊的制備:塑料支持物上經(jīng)測(cè)定混合物浸潰的墊。
[0122].兩墊的制備:通過(guò)在塑料支持物上重疊1-2_將樣品墊附接于經(jīng)測(cè)定混合物浸潰的墊的底部。
[0123]將2微升血液樣品應(yīng)用于條上。結(jié)果呈現(xiàn)了血液中的LDH酶的確在本發(fā)明的單墊條系統(tǒng)中比在兩墊系統(tǒng)中產(chǎn)生更強(qiáng)且更清楚的紫色顏色，如圖4中顯示的。另外，結(jié)果呈現(xiàn)了流體遷移在單墊中比在兩墊中更一致且更快，并且血液清除的完成在本發(fā)明的單墊條系統(tǒng)中比在兩墊系統(tǒng)中更快。通過(guò)aQzen閱讀器測(cè)量紫色顏色的強(qiáng)度，如表1中顯示的。單墊的強(qiáng)度高于兩墊系統(tǒng)的強(qiáng)度，如圖5中顯示的。
[0124]表1.
【權(quán)利要求】
1.一種用于預(yù)先選擇的分析物的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法的條，其由下列各項(xiàng)組成: 單一墊；和 以干形式沉積的底物。
2.權(quán)利要求1的條，其中所述分析物選自下組:人和動(dòng)物流體中的蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂質(zhì)、核酸。
3.權(quán)利要求1的測(cè)定法，其中所述分析物選自下組:葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)、乳酸脫氫酶、和醇。
4.權(quán)利要求1的條，其中所述單一墊用緩沖液或裂解緩沖液預(yù)處理。
5.權(quán)利要求1的條，其中所述底物是測(cè)定混合物，其包含葡萄糖-6-磷酸、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、氫化物或電子轉(zhuǎn)移劑及其混合物。
6.權(quán)利要求1的條，其中所述底物包含指示劑。
7.權(quán)利要求6的條，其中所述指示劑是染料化合物。
8.權(quán)利要求7的 條，其中所述染料化合物選自下組:TTC(四唑，氯化四唑或2，3，5-三苯基-2H-氯化四唑)、INT (2- (4-碘苯基)-3- (4-硝基苯基)_5_苯基-2H-氯化四唑)、MTT (3- (4，5- 二甲基-2-噻唑基)-2、5- 二苯基-2H-溴化四唑)、XTT (2，3- 二 - (2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-甲酰苯胺)、NBT (硝基藍(lán)四唑)、MTS (3- (4，5_ 二甲基噻唑-2-基)-5- (3-羧基甲氧基苯基)-2- (4-磺苯基)-2H-四唑)、和DCPIP (2，6- 二氯靛酚)。
9.權(quán)利要求8的條，其中所述染料化合物是氯化四唑或四唑。
10.一種用于預(yù)先選擇的分析物的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法，其包括: (a)提供包含條的測(cè)試裝置，所述條由下列各項(xiàng)組成: (i)單一墊；和 (?)以干形式沉積的底物； (b)對(duì)其中沉積有所述底物的所述單一墊應(yīng)用樣品； (c)容許所述樣品流過(guò)消化墊以到達(dá)所述底物； (d)容許所述樣品與所述底物起反應(yīng)以產(chǎn)生應(yīng)答；并 (e)鑒定并解讀所述應(yīng)答以指示所述樣品中所述分析物的存在或濃度。
11.權(quán)利要求10的條，其中所述分析物選自下組:人和動(dòng)物流體中的蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂質(zhì)、核酸。
12.權(quán)利要求10的測(cè)定法，其中所述分析物選自下組:葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)、乳酸脫氫酶、和醇。
13.權(quán)利要求10的條，其中所述單一墊用緩沖液或裂解緩沖液預(yù)處理。
14.權(quán)利要求10的測(cè)定法，其中所述底物是測(cè)定混合物，其包含葡萄糖-6-磷酸、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、氫化物或電子轉(zhuǎn)移劑及其混合物。
15.權(quán)利要求10的測(cè)定法，其中所述底物包含指示劑。
16.權(quán)利要求15的測(cè)定法，其中所述指示劑是染料化合物。
17.權(quán)利要求16的測(cè)定法，其中所述染料化合物選自下組:TTC(四唑，氯化四唑或2，3，5-三苯基-2H-氯化四唑)、INT (2- (4-碘苯基)-3- (4-硝基苯基)_5_苯基-2H-氯化四唑)、MTT(3-(4，5- 二甲基-2-噻唑基)-2,5- 二苯基-2H-溴化四唑)、XTT(2，3_ 二-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2Η-四唑-5-甲酰苯胺)、NBT (硝基藍(lán)四唑)、MTS (3- (4，5- 二甲基噻唑-2-基)-5- (3-羧基甲氧基苯基)-2- (4-磺苯基)-2Η-四唑)、和DCPIP (2，6- 二氯靛酹)。
18.權(quán)利要求17的測(cè)定法，其中所述染料化合物是氯化四唑或四唑。
19.權(quán)利要求13的測(cè)定法，其中所述裂解緩沖液包含氯化鎂。
20.一種用于檢測(cè)G6ro存在的酶驅(qū)動(dòng)的側(cè)向?qū)游隽鲃?dòng)測(cè)定法，其包括: (a)提供包含單一墊條的測(cè)試裝置，所述單一墊條包含: (i)用裂解緩沖液預(yù)處理的消化單一墊； (?)測(cè)定混合物，其包含葡萄糖-6-磷酸、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、氫化物轉(zhuǎn)移劑及其混合物；和 (iii)四唑鹽， (b)在所述消化單一墊上應(yīng)用樣品； (c)容許所述樣品流過(guò)所述消化墊以接觸所述測(cè)定混合物； (d)容許所述樣品與所述測(cè)定混合物起反應(yīng)以產(chǎn)生應(yīng)答，并 (e)鑒定并解讀所述應(yīng)答以指示所述樣品中所述分析物的存在或濃度。
【文檔編號(hào)】C12Q3/00GK103842523SQ201280043565
【公開(kāi)日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2012年7月20日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月22日
【發(fā)明者】金賢淑, 具泰希, 崔永鎬 申請(qǐng)人:阿賽斯生物股份有限公司