專利名稱：一種雄蜂蛹多肽提取物的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及蜂蛹活性成分功能研究領域，具體涉及一種雄蜂蛹多肽提取物的應用。
背景技術：
我國是世界上養(yǎng)蜂最多的國家之一，蜜蜂在我國有著悠久的養(yǎng)殖歷史，豐富的資源。我國對蜜蜂產(chǎn)品的食用價值的研究歷史悠久，目前已在多方面形成自己獨特的研究體系，并已開發(fā)出多種產(chǎn)品，但尚有許多領域待于開發(fā)利用。雄蜂蛹是蜂工在雄蜂房產(chǎn)的未受精卵，孵化成幼蟲，進入蛹期，在此期采收的蜜蜂軀體為雄蜂蛹，它是以吸食蜂王漿、蜂蜜和花粉等發(fā)育而成的，具有很高的營養(yǎng)價值，是一種亟待開發(fā)的天然食品。據(jù)科學分析，雄蜂蛹中蛋白質(zhì)的含量高于蜂王漿，是花粉、牛乳的2倍以上，達33. 4%，其中，賴氨酸含量4. 45mg/100g，是雞蛋的5倍，異亮氨酸含量為2. 7%，超過其他食物。粗脂肪的含量16. 08%，其中必需脂肪酸含量達19. 71%，是花粉的2倍以上，牛肉、雞蛋的3倍以上，牛乳的10倍以上。維生素的含量超過了牛肉、雞蛋，比魚肝油高10倍。此外，雄蜂蛹還含有豐富的礦物元素，其中鋅的含量是蜂王漿的2倍，是花粉的10倍以上；硒的含量高達2.4-2.8μ8/10(^?？梢?，雄蜂蛹是一個營養(yǎng)寶庫。雄蜂蛹不僅有很好的營養(yǎng)價值，而且有很好的醫(yī)藥價值。早在《圖經(jīng)本草》、《禮記.內(nèi)則》等古籍中就有詳實的記錄，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中將“蜂仔”視為上品，記載有“蜂仔氣味甘平，微寒無毒，主治頭痛，除毒，補虛贏”的藥效；《名醫(yī)別錄》中記載，蜂仔能主治丹毒、風疹、腹內(nèi)留熱、利大小便、去浮血、下乳汁的作用，對孕婦、產(chǎn)婦有滋補和治療作用。在亞洲、非洲熱帶地區(qū)、澳大利亞和南美一些民族也早有食用雄蜂蛹的習慣。隨著科技的發(fā)展，人們對雄蜂蛹的認識有更深的了解。人們發(fā)現(xiàn)，雄蜂蛹對生物機體具有多方面的功能，其中在促進機體新陳代謝、生長發(fā)育及精力減退、體力虛弱、營養(yǎng)不良、青春發(fā)育遲緩、更年期、未老先衰的康復方面較為突出，在調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)、內(nèi)分泌紊亂、消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等疾病方面也顯示其獨特的療效。近年來人們發(fā)現(xiàn)肽類具有獨特的生理功能，如促進鈣的吸收、降血壓、增強免疫 力、抗腫瘤等；且其在人體內(nèi)的消化吸收明顯優(yōu)于單個氨基酸，營養(yǎng)學實驗也證明肽對人體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成無任何不良影響?，F(xiàn)代科學的許多實驗也證明，蛋白質(zhì)水解成多肽后，具有更強的生物活性。肽還具有良好的理化性質(zhì)如水合性提高(蛋白質(zhì)水解物離子基團增加)、溶解度增加(蛋白質(zhì)水解物體積變小，離子性增強)、粘度降低(蛋白多聚體的解聚和離子基團的增加，使蛋白質(zhì)的有序性增加，蛋白分子的表現(xiàn)體積減少)、膠凝性降低(蛋白質(zhì)水解物疏水性下降)、發(fā)泡性降低(粘度降低)等?；谝陨蟽?yōu)點，相信肽在功能性食品領域?qū)袕V闊的應用前景?？捎糜谑称返墓δ苄噪墨@得的途徑有三種，一是從天然生物體中直接提取天然活性肽；二是在消化過程中產(chǎn)生或體外水解蛋白質(zhì)產(chǎn)生；三是通過化學方法、酶法，重組DNA等技術合成。從天然生物體中提取是可取的，但成本較高；而合成法雖可按人們的意愿合成任意活性肽，但目前因為成本高，副反應多及殘留化合物等問題制約著發(fā)展。目前常用的方法是體外水解法，而酶水解能在溫和的條件下進行，且可通過選擇酶的種類，控制反應時間來得到特定的活性肽。雄蜂蛹的蛋白質(zhì)含量較高，我國是世界養(yǎng)蜂大國，現(xiàn)擁有700萬群(箱)蜜蜂，雄蜂蛹資源豐富，隨著養(yǎng)蜂業(yè)的發(fā)展，雄蜂蛹的來源也將更加廣泛。因此，通過酶法將雄蜂蛹水解成多肽，開發(fā)成相應的保健食品，不僅能促進我國蜂蛹深加工技術的發(fā)展，而且能促進養(yǎng)蜂業(yè)的發(fā)展和農(nóng)民的增收。雄蜂蛹蛋白質(zhì)是一種完全蛋白，富含18種氨基酸，其中8種人體所必需氨基酸占總量的17%以上。雄蜂蛹中谷氨酸和天門冬氨酸的含量達到總氨基酸的20%以上，這不但使蜂蛹美味可口，而且提示具有良好的健腦功能，因為這兩種氨基酸能通過大腦屏障，起到健腦的作用。所以，雄蜂蛹有望作為營養(yǎng)豐富的高蛋白食品進行深入的開發(fā)。將雄蜂蛹蛋白進一步水解成多肽和氨基酸后，將更容易為人體所吸收，在食品、保健品行業(yè)具有廣闊的應用前景。蛋白質(zhì)水解時可以采用酸水解、堿水解和酶水解的方式，但是酸水解導致色氨酸全部破壞，絲氨酸、酪氨酸和蘇氨酸部分破壞；堿水解引起消旋作用而降低營養(yǎng)價值；酶水解時反應條件溫和，營養(yǎng)價值得以保障；因此，現(xiàn)有技術中多采用酶解法提取雄蜂蛹。中國專利申請CN93101793. 9公開了一種蜂蛹系列營養(yǎng)品及其制備方法，以蜂蛹和/或幼蟲為原料，應用酶解和乳酸發(fā)酵相結(jié)合的方式，充分提取蜂蛹及幼蟲中的多種營養(yǎng)物質(zhì)，然后采用不同的工藝，制成營養(yǎng)口服液、營養(yǎng)乳液及顆粒速溶沖劑；可作為缺鋅的兒童及老人的天然補鋅劑和保健滋補品。中國專利申請CN89101221. 4公開了一種利用酶解反應提取雄蜂營養(yǎng)成分的工藝，并指出所提取的雄蜂營養(yǎng)成分的主要用途。所述的雄蜂營養(yǎng)成分的提取工藝是將雄蜂、雄蜂幼蟲、雄蜂蛹等采用蛋白酶經(jīng)酶解反應提取其各種營養(yǎng)成分。由于所提取的雄蜂營養(yǎng)成分中氨基酸、微量元素、維生素等主要指標均超過蜂王漿、勝過花粉，可用所提取的雄蜂營養(yǎng)成分做保健藥品和營養(yǎng)食品的原料，做成各種滋補、保健藥品和高級營養(yǎng)食品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種雄蜂蛹多肽提取物的應用，該雄蜂蛹多肽提取物具有改善記憶和抗氧化功能，可作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的產(chǎn)品或者用于制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的產(chǎn)品。一種雄蜂蛹多肽提取物的應用，主要是所述的雄蜂蛹多肽提取物在作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的食品或制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的食品中的應用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的保健品或制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的保健品中的應用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的藥品中的應用。所述的雄蜂蛹多肽提取物的改善記憶功能實驗研究結(jié)果表明，在跳臺實驗中，與水對照組比較，服用雄蜂蛹多肽提取物組小鼠跳下平臺的潛伏期延長，測試錯誤次數(shù)減少，測驗錯誤反應率降低，且高劑量組改善顯著(P〈0. 05);在避暗實驗中，與對照組比較，雄蜂蛹多肽提取物小鼠測驗潛伏期延長，高劑量組小鼠測驗潛伏期顯著延長(p〈0. 05);在水迷宮實驗中，與對照組比較，雄蜂蛹多肽提取物組小鼠到達終點時間縮短、到達終點前的錯誤次數(shù)較對照組減少且2min內(nèi)到達終點的動物數(shù)增多，高劑量組小鼠到達終點時間顯著縮短(P〈0. 01)，到達終點前的錯誤次數(shù)較對照組顯著減少(P〈0. 05)，2min內(nèi)到達終點的動物數(shù)顯著增多(P〈0. 01)。結(jié)論雄蜂蛹多肽提取物具有明顯的改善記憶的功能。所述的雄蜂蛹多肽提取物對老齡小鼠抗氧化功能影響的實驗研究表明，給予不同劑量的雄蜂蛹多肽提取物30天(d)后，各劑量組血液丙二醛(MDA)水平有降低趨勢，其中高劑量組與對照組比較差異有顯著性(P〈0. 01);給予不同劑量的雄蜂蛹多肽提取物30d后，各劑量組血清超氧化物歧化酶(SOD)活力有升高趨勢，其中高劑量組與對照組比較差異有顯著性(P〈0. 05);給予不同劑量的雄蜂蛹多肽提取物30d后，各劑量組血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力與對照組比較均有顯著性差異(P〈0. 05)。結(jié)論雄蜂蛹多肽提取物具有較好的抗氧化作用。所述的雄蜂蛹多肽提取物的主要成分為雄蜂蛹多肽，雄蜂蛹多肽為其活性成分，可采用市售產(chǎn)品或采用現(xiàn)有制備方法制備，也可采用本發(fā)明提供的方法制備。所述的雄蜂蛹多肽提取物的制備方法，包括步驟將雄蜂蛹用水洗凈勻漿后溶于丙酮中脫脂，離心所得殘渣用水配成懸濁液，將懸濁液在85°C _95°C加熱10分鐘-15分鐘，優(yōu)選在90°C加熱10分鐘，冷卻后調(diào)pH值至7. 5-8. 5，優(yōu)選調(diào)pH值至8，加蛋白酶水解，滅菌后調(diào)pH值至4_5，優(yōu)選調(diào)pH值至4. 5，離心或過濾所得上清液為多肽溶液，經(jīng)真空濃縮和冷凍干燥，得到雄蜂蛹多肽提取物。所述的蛋白酶水解的條件優(yōu)選為在400C -50°C水解2小時-6小時，進一步優(yōu)選為在45°C水解6小時。所述的蛋白酶可采用本領域酶解常用的蛋白酶，優(yōu)選動物蛋白水解效果較好的酶，如可優(yōu)選胰酶或者胰蛋白酶等酶種；由于胰酶和胰蛋白酶對雄蜂蛹進行水解，通過對水解過程的水解度的測定，發(fā)現(xiàn)兩者用量接近時，水解度接近，但胰蛋白酶的價格約為胰酶的10倍，因此從降低成本的角度考慮進一步優(yōu)選胰酶。隨著蛋白酶用量的增加，水解度也漸漸增加，但蛋白酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比超過O. 006:1后，水解度增加很少，因此，所述的蛋白酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比優(yōu)選為 O. 001-0. 006:1,進一步優(yōu)選為 O. 002-0. 006:1,最優(yōu)選 O. 006:10所述的懸濁液的質(zhì)量百分濃度以雄蜂蛹計優(yōu)選為8%_15%，進一步優(yōu)選為10%。所述的滅菌的條件采用本領域滅菌的常規(guī)條件，如可在100°C滅菌15分鐘。所述的pH值采用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)，所述的pH調(diào)節(jié)劑采用本領域常規(guī)的酸堿pH調(diào)節(jié)劑，可采用NaOH水溶液或HCl水溶液。本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了雄蜂蛹多肽提取物的新用途，主要是雄蜂蛹多肽提取物具有改善記憶和抗氧化功能，可作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的產(chǎn)品或者用于制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的產(chǎn)品。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。蛋白質(zhì)的回收率和肽的回收率的測試方法在加入蛋白酶開始水解時，不斷地加入Imol的NaOH水溶液或Imol的HCl水溶液維持溶液的PH值恒定，記錄水解時間和所加入的NaOH水溶液或HCl水溶液的體積，反應至設定時間后，煮沸10-15分鐘滅酶，冷卻后，調(diào)溶液pH至7. 0，8000rpm / min離心分離15min,取上清液.沉淀用適量蒸懼水洗漆一次,8000rpm/min_離心分離,合并上清液,并記錄體積和凱氏定氮，測定中性水解液中蛋白質(zhì)的含量，計算蛋白質(zhì)回收率，并取50ml水解液，調(diào)節(jié)PH4. 5，離心分離，取上清液，凱氏定氮，測定上清液中氮的含量，以此計算水解液中酸溶性肽的得率。蛋白質(zhì)回收率=P H 7. O時水解液中蛋白質(zhì)總量+ (原料中蛋白質(zhì)總量+酶蛋白質(zhì)的量)肽的得率=P H 4. 5時水解液中蛋白質(zhì)總量+ (原料中蛋白質(zhì)總量+酶蛋白質(zhì)的量)。實施例1雄蜂蛹多肽提取物的制備將雄蜂蛹(由浙江蜂之語蜂業(yè)集團有限公司提供)用蒸餾水洗凈勻漿后溶于丙酮中脫脂，勻漿與丙酮的質(zhì)量比為1:1. 5，離心后傾去上清液，所得殘渣用蒸餾水配成懸濁液，懸濁液的質(zhì)量百分濃度以雄蜂蛹計為10%。將懸濁液在90°C加熱10分鐘，冷卻后用Imol的NaOH水溶液或Imol的HCl水溶液調(diào)pH值至8，加胰酶(400000U/g)在45°C水解6小時，胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 006:1,100°C滅菌15分鐘后調(diào)pH值至4. 5，離心所得上清液為多肽溶液，經(jīng)真空濃縮和冷凍干燥，得到雄蜂蛹多肽提取物。蛋白質(zhì)的回收率為86. 7%，肽的得率為73. 6%。通過對雄蜂蛹水解前和水解液的毛細管電泳圖譜進行比較分析發(fā)現(xiàn)，水解后蛋白質(zhì)峰消失，出現(xiàn)很多小峰，對圖譜進行峰面積分析可知，多肽含量為9. 44%ο實施例2除了水解時間為4小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例3除了水解時間為2小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例4除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 004:1，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例5除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 004:1，水解時間為4小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例6除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 004:1，水解時間為2小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例7除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 002:1，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例8除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 002:1，水解時間為4小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。
實施例9除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 002:1，水解時間為2小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例10除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 001:1，水解時間為3小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例11除了胰酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 001:1 (即胰酶4000U/10g雄蜂蛹)，水解時間為6小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例12除了將胰酶替換為胰蛋白酶(1000000U/g)，胰蛋白酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為0.001:1 (即胰蛋白酶10000U/10g雄蜂蛹)，水解時間為3小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。實施例13除了將胰酶替換為胰蛋白酶(1000000U/g)，胰蛋白酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為0. 001:1 (即胰蛋白酶10000U/10g雄蜂蛹)，水解時間為6小時，其它操作同實施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。各實施例水解度見表1:
權利要求
1.一種雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物在作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的食品或制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的食品中的應用。
2.—種雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物在作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的保健品或制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的保健品中的應用。
3.—種雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物在制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的藥品中的應用。
4.根據(jù)權利要求1、2或3所述的雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物的活性成分為雄蜂蛹多肽。
5.根據(jù)權利要求1、2或3所述的雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物的制備方法，包括將雄蜂蛹用水洗凈勻漿后溶于丙酮中脫脂，離心所得殘渣用水配成懸濁液，將懸濁液在850C -95°C加熱10分鐘-15分鐘，優(yōu)選在90°C加熱10分鐘，冷卻后調(diào)pH值至7. 5-8. 5， 優(yōu)選調(diào)pH值至8,加蛋白酶水解,滅菌后調(diào)pH值至4-5,優(yōu)選調(diào)pH值至4. 5,離心或過濾所得上清液為多肽溶液，經(jīng)真空濃縮和冷凍干燥，得到雄蜂蛹多肽提取物。
6.根據(jù)權利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的蛋白酶水解的條件為在400C -50°C水解2小時-6小時。
7.根據(jù)權利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的蛋白酶為胰酶或者胰蛋白酶。
8.根據(jù)權利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的蛋白酶的質(zhì)量與雄蜂蛹的質(zhì)量之比為O. 001-0. 006:1。
9.根據(jù)權利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的應用，其特征在于，所述的懸濁液的質(zhì)量百分濃度以雄蜂蛹計為8%-15%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雄蜂蛹多肽提取物的應用，包括所述的雄蜂蛹多肽提取物在作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的食品或制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的食品中的應用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在作為具有改善記憶和/或抗氧化功能的保健品或制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的保健品中的應用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的藥品中的應用。該雄蜂蛹多肽提取物明顯的改善記憶的功能以及較好的抗氧化作用，可用于作為或制備具有改善記憶和/或抗氧化功能的產(chǎn)品。
文檔編號A23J3/34GK103005466SQ20121059295
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月31日 優(yōu)先權日2012年12月31日
發(fā)明者楊鋒, 童曄玲, 陳宇, 戴關海, 任澤明, 朱婉萍, 何娟, 陳璇 申請人:浙江省中醫(yī)藥研究院