專利名稱：一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及檢驗微生物培養(yǎng)領域，具體涉及一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基。
背景技術：
牙周炎是口腔中的常見病和多發(fā)病，屬于細菌感染性疾病。流行病學研究表明，牙銀口卜啉菌(Porphyromonas gingivalis, P. gingivalis)與牙周炎的發(fā)生、發(fā)展顯著相關,是牙周炎的優(yōu)勢致病菌。牙周炎發(fā)病后期引起的牙齦萎縮、牙槽骨喪失一般難以再生，因此，牙周炎的早期診斷、P. gingivalis的早期檢出至關重要。目前的P. gingivalis檢驗手段主要是銀下菌斑采樣進行聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR),該種方法需要對樣本進行DNA提取和PCR引物設計，且需要配備PCR相關儀器設備，成本昂貴，操作 復雜。微生物培養(yǎng)是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術，而選擇性培養(yǎng)基是用來促進或抑制一定類型的生物體(如細胞或細菌等)而設計的培養(yǎng)基，利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。人類口腔中寄居著500多種細菌，其中定植在齦下的就有300多種，正是由于這種復雜的樣本環(huán)境，使得牙垢標本P. gingivalis的培養(yǎng)分離率低，口腔主流菌群中的鏈球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟氏菌、乳桿菌、螺旋體、假絲酵母在目前的培養(yǎng)基中比牙齦卟啉菌生長更快，很快覆蓋了培養(yǎng)基，牙齦卟啉菌無法生長
發(fā)明內容
本發(fā)明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供一種能夠用于牙垢標本的，對牙齦卟啉菌分離率高的培養(yǎng)基。本發(fā)明解決其技術問題的技術方案是一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15 30g ;雞蛋蛋白液15(T200ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5 ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. I O. 4g ;瓊脂15 20g ;共殺素15 20mg ;泰利霉素8 12mg ;利奈唑胺5 IOmg ;天門冬素3. 6 g ;四水檸檬酸鈣O. 0Γ0. 2g ;蒸餾水加至1000ml。優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有大蒜榨出汁0. 05、· 5g。優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸0. θΓθ. lg。優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的黃精水煮液20(T300ml。最優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有大蒜榨出汁0. 05、. 5g ;L_半胱氨酸
0.θΓθ. Ig ;濃度 200g/L 的黃精水煮液 20(T300ml。一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；
(2)取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；
(3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L_半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，850C間歇滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。其中所述的麥芽浸粉提供碳氮源和能量；枸櫞酸鎂和四水檸檬酸鈣為緩沖劑，并可以抑制雜菌生長；氯化血紅素和維生素Kl為營養(yǎng)劑；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；共殺素可以抑制革蘭氏陽性菌蛋白質的合成，對于廣泛耐藥的革蘭氏陽性菌也有效；泰利霉素對于奈瑟氏菌、乳桿菌、假絲酵母具有一定的抑菌作用；利奈唑胺對耐藥性金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、無乳鏈球菌和腸球菌屬等均具有良好活性；天門冬素、L-半胱氨酸屬氨基酸類，為營養(yǎng)劑；雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等，這些物質對促進牙齦卟啉菌的繁殖和生長都是很重要的因素，此外雞蛋蛋白液還具有維持培養(yǎng)基PH值恒定的作用。大蒜榨出汁所含的蒜酶、過氧化酶、磷酸酯酶及水解酶等，有氧化和水解作用，可以致使牙垢標本中的核梭桿菌、脆弱類桿菌胞壁消失或變薄，核糖體聚集成團塊，最終導致細菌變形及破裂，達到抑制核梭桿菌、脆弱類桿菌的作用。黃精為百合科植物黃精、多花黃精和滇黃精的根莖，含有蔗糖、葡萄糖、葉酸、多種氨基酸等成分，可以提供能量代謝、細胞發(fā)育、新陳代謝因子，且水煮液對堇色毛癬菌、紅色表皮 癬菌、石膏樣毛癬菌、考夫曼-沃爾夫氏表皮癬菌、螺旋體、皰疹病毒均有抑制作用。本發(fā)明與現有技術相比較，具有檢出可靠、牙齦卟啉菌分離率高的特點。
具體實施例方式以下結合實際情況，對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細說明。實施例1，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. Ig ;瓊脂15g ;共殺素15mg ;泰利霉素8mg ;利奈唑胺IOmg ;天門冬素3. 6 g ;四水朽1fefef丐O. 2g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥牙浸粉；雞蛋蛋白液；氣化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。實施例2，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉30g ;雞蛋蛋白液200ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. 4g ;瓊脂20g ;共殺素20mg ;泰利霉素12mg ;利奈唑胺5mg ;天門冬素3. 6 g ;四水檸檬酸鈣O. Olg ;蒸餾水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。實施例3，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. Ig ;瓊脂15g ;共殺素15mg ;泰利霉素8mg ;利奈唑胺IOmg ;天門冬素3. 6 g ;四水朽1檬酸鈣O. 2g ;大蒜榨出汁O. 05g, L-半胱氨酸O. Ig ;蒸餾水加至IOOOml。制備方法取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。實施例4，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉30g ;雞蛋蛋白液200ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. 4g ;瓊脂20g ;共殺素20mg ;泰利霉素12mg ;利奈唑胺5mg ;天門冬素3. 6 g ;四水朽1檬酸I丐O. Olg,大蒜榨出汁O. 5g, L-半胱氨酸O. Olg ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。實施例5，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉25g ;雞蛋蛋白液170ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5 ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. 3g ;瓊脂18g ;共殺素18mg ;泰利霉素IOmg ;利奈唑胺8mg ;天門冬素3. 6 g ;四水檸檬酸鈣O. Ig,大蒜榨出汁O. 3g，L-半胱氨酸O. 05g ;蒸餾水加至IOOOml。制備方法取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。實施例6，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5 ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. Ig ;瓊脂15g ;共殺素15mg ;泰利霉素8mg ;利奈唑胺IOmg ;天門冬素3. 6 g ;四水檸檬酸鈣O. 2g，大蒜榨出汁O. 05g，L-半胱氨酸O. lg，濃度200g/L的黃精水煮液200ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法
(1)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；
(2)取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；
(3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，850C間歇滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。實施例7，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉30g ;雞蛋蛋白液200ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5 ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. 4g ;瓊脂20g ;共殺素20mg ;泰利霉素12mg ;利奈唑胺5mg ;天門冬素3. 6 g ;四水檸檬酸鈣O. Olg，大蒜榨出汁O. 5g，L-半胱氨酸O. Olg，濃度200g/L的黃精水煮液300ml ；蒸懼水加至1000ml。制備方法
(1)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；
(2)取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；
(3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂； 共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L_半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，850C間歇滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。實施例8，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉25g ;雞蛋蛋白液170ml ;濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5 ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液O. 5ml ;枸櫞酸鎂O. 3g ;瓊脂18g ;共殺素18mg ;泰利霉素IOmg ;利奈唑胺8mg ;天門冬素3. 6 g ;四水檸檬酸鈣O. lg，大蒜榨出汁O. 3g，L-半胱氨酸O. 05g，濃度200g/L的黃精水煮液250ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法
(1)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；
(2)取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；
(3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步 驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，85°C間歇滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。所述的黃精水煮液濃度為200g/L，指的是每升黃精水煮液中含有生藥200g。本發(fā)明所得牙齦卟啉菌培養(yǎng)基用于牙垢標本具有檢出可靠、牙齦卟啉菌分離率高的特點，為臨床資料充分證明，有關資料如下。I對象與方法
I. I培養(yǎng)基制備共設4組，分別為實施例8方案組、實施例5方案組、實施例2方案組和對照組，對照組為巧克力瓊脂培養(yǎng)基。I. 2齦下菌斑采集培養(yǎng)方法隔濕唾液，齦上刮治器去除齦上牙石，碘酊消毒后，用無菌Gracey刮治器采集2顆下頜中切牙唇側近中至遠中的齦下菌斑。將采集的菌斑懸浮于Iml生理鹽水，用接種環(huán)分區(qū)劃線接種，厭氧環(huán)境下37°C培養(yǎng)24h，挑取細小菌落進行菌屬鑒定。I. 3統(tǒng)計學分析用SPSS 13. O進行統(tǒng)計分析，P〈 O. 05表示有顯著性意義。2結果在84份經由PCR確定牙齦卟啉菌陽性的牙垢標本，細菌培養(yǎng)分離并鑒定為牙齦卟啉菌的，實施例8方案組為79例，實施例5方案組為78例，實施例2方案組為74例，對照組巧克力瓊脂培養(yǎng)基為24例，經統(tǒng)計學處理，本發(fā)明各實施例組與對照組比較具有明顯差異(P〈0. 001)。結果表明，本發(fā)明實施例牙齦卟啉菌分離率明顯高現有的培養(yǎng)基。
權利要求
1.一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有 麥芽浸粉15 30g ； 雞蛋蛋白液15(T200ml ； 濃度為5 mg/ml的氯化血紅素溶液2. 5 ml ; 濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0. 5ml ； 枸櫞酸鎂0. I 0. 4g ； 瓊脂15 20g ； 共殺素15 20mg ； 泰利霉素8 12mg ； 利奈唑胺5 I Omg ； 天門冬素3. 6 g ; 四水檸檬酸鈣0. oro. 2g ； 蒸餾水加至1000ml。
2.根據權利要求I所述的一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基，其特征在于每IOOOml培養(yǎng)基還含有大蒜榨出汁0. 05、. 5g。
3.根據權利要求I所述的一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基，其特征在于每IOOOml培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸0. oro. lg。
4.根據權利要求I所述的一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基，其特征在于每IOOOrnl培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的黃精水煮液20(T300ml。
5.根據權利要求I所述的一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基，其特征在于每IOOOrnl培養(yǎng)基還含有大蒜榨出汁0. 05、. 5g ；L-半胱氨酸0. Of 0. Ig ;濃度200g/L的黃精水煮液 20(T300ml。
6.一種制備權利要求5中所述用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液； (2)取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁； (3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，850C間歇滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素K1乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；蒸餾水加至1000ml。最佳優(yōu)化配方制備方法為取麥芽浸粉、雞蛋蛋白液、氯化血紅素、瓊脂、枸櫞酸鎂、四水檸檬酸鈣、共殺素、大蒜榨出汁、L-半胱氨酸溶于黃精水煮液中，混勻，定容，滅菌后分裝。本發(fā)明與現有技術相比較，具有檢出可靠、牙齦卟啉菌分離率高的特點。
文檔編號C12Q1/04GK102703568SQ20121022777
公開日2012年10月3日 申請日期2012年7月4日 優(yōu)先權日2012年7月4日
發(fā)明者候素君, 秦娜 申請人:候素君