專利名稱：一株產(chǎn)丙酸詹氏丙酸桿菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種詹氏丙酸桿菌，特別是ー種產(chǎn)丙酸的詹氏丙酸桿菌。
背景技術(shù)：
丙酸及其衍生物在エ業(yè)上的應(yīng)用領(lǐng)域十分廣泛，主要應(yīng)用于食品防腐、飼料儲藏、醫(yī)藥中間體合成、農(nóng)業(yè)除莠劑合成、有機(jī)合成中間體等方面。2006年世界丙酸總生產(chǎn)能力在35萬噸/年左右，2008年達(dá)到50萬噸/年。美國是世界上最大的丙酸生產(chǎn)及消費(fèi)國。目前我國丙酸實際年產(chǎn)量只有200噸左右，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足實際的市場需求，毎年仍需大量進(jìn)ロ來彌補(bǔ)國內(nèi)的空缺。用于丙酸發(fā)酵的菌種主要是丙酸桿菌屬(Propionibacteria),該屬有多個種和亞 種，均為厭氧菌，丙酸桿菌是ー類G+、不產(chǎn)芽抱、不運(yùn)動、接觸酶陽性的厭氧菌。菌落呈現(xiàn)白色、黃色或者褐紅色。一般情況下，最適PH為6. 5^7. 5，最適生長的溫度為28°C 37°C。丙酸的生產(chǎn)方法有化學(xué)合成法和微生物發(fā)酵法，化學(xué)合成法是以石油等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過加溫、加壓利用催化劑合成丙酸的方法，該方法是エ業(yè)級規(guī)模上丙酸的主要生產(chǎn)方法。微生物發(fā)酵法是丙酸菌在常溫、常壓下利用一般營養(yǎng)源通過自身代謝產(chǎn)生丙酸。由于微生物發(fā)酵生產(chǎn)丙酸能降低對石油等不可再生能源的依賴性，減輕對環(huán)境造成的壓力，因此，在當(dāng)前全世界面臨環(huán)境污染、能源短缺的嚴(yán)峻情況下，微生物發(fā)酵法生產(chǎn)丙酸為丙酸合成提供了新的思路，同時得到了越來越多研究者的關(guān)注。但是微生物法生產(chǎn)丙酸仍然存在成本高，丙酸產(chǎn)量低等缺點(diǎn)。因此，篩選丙酸的高產(chǎn)菌株是非常有必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種丙酸高產(chǎn)菌株詹氏丙酸桿菌(Propionibacterium jensenii) JN925,能夠高效的生產(chǎn)和積累丙酸。所述菌株于2012年5月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為=CCTCCNo M 2012153，保藏地址為中國武漢武漢大學(xué)。所述詹氏丙酸桿菌的篩選方法為其技術(shù)方案是從奶酪廠下水道淤泥中篩選出厭氧菌，根據(jù)其能耐受丙酸的性能，通過在培養(yǎng)基中添加丙酸來富集產(chǎn)丙酸菌。其具體步驟依次是取樣，添加丙酸液體富集培養(yǎng)，初篩，復(fù)篩，最后得到I株在厭氧條件下，能夠?qū)崿F(xiàn)丙酸高產(chǎn)量生產(chǎn)的菌株。(I)菌株來源奶酪廠下水道淤泥(2)培養(yǎng)基富集培養(yǎng)基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸 I. 5。初篩培養(yǎng)基(g/L):瓊脂20 ;酵母粉10 ;蛋白胨5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸
2.50
復(fù)篩培養(yǎng)基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸5。種子培養(yǎng)基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5。發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ；CaC03 30 ;甘油 30 ；CoC12 0. 01。(3)富集培養(yǎng)的具體方法是將奶酪下水道淤泥稀釋接種到富集培養(yǎng)基中，每隔ー段時間轉(zhuǎn)接一次。(4)初篩的具體方法是將富集好的菌液進(jìn)行稀釋，涂布初篩培養(yǎng)基，30° C厭氧培養(yǎng)4-5天。(5)復(fù)篩的具體方法是將初篩得到的菌株接入復(fù)篩培養(yǎng)基，30° C厭氧培養(yǎng)4-5 天。選擇菌濃最高的3-4株菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，30° C厭氧培養(yǎng)150小時，測定丙酸濃度。I.菌體干重的測定用722型可見光分光光度計，于600nm處比色測OD值。2.丙酸產(chǎn)量的測定用Agilent高效液相儀測定發(fā)酵上清液中丙酸濃度。
具體實施例方式實施例I :產(chǎn)丙酸的詹氏丙酸桿菌篩選方法取采取的一定量的淤泥，放入裝有IOOmL無菌水及玻璃珠的250mL三角瓶中稀釋不同濃度梯度，將不同濃度梯度稀釋好的樣品分別接入富集培養(yǎng)基中30° C靜置厭氧培養(yǎng)4-5天，分別重新轉(zhuǎn)接新鮮富集培養(yǎng)基30° C靜置厭氧培養(yǎng)4-5天。將富集好的培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋，分別涂布初篩培養(yǎng)基30° C厭氧培養(yǎng)4-5天。將菌落分別接入復(fù)篩培養(yǎng)基中，30° C靜置厭氧培養(yǎng)4-5天。分別測定其菌體濃度，選擇菌濃最高的3-4株菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，進(jìn)行產(chǎn)量檢測。將產(chǎn)量最高的一株菌進(jìn)行菌種鑒定并做甘油管保藏。實施例2 :詹氏丙酸桿菌丙酸產(chǎn)量的檢測以1%接種量接種于種子培養(yǎng)基，待生長至對數(shù)生長期吋，以10%接種量，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，30° C厭氧培養(yǎng)150小時，取發(fā)酵液8000rpm，4° C離心2min。取上清液用
3.68mmol/L 硫酸定容至 10mT,n檢測條件Agilent高效液相儀，Agilent ZORBAX SB-Aq液相柱，柱溫35° C，檢測波長210nm，進(jìn)樣量10 u L，流動相為19. 7g磷酸氫ニ鈉與IOmLこ腈溶于IOOOmL超純水并且用磷酸將pH調(diào)為2. O。經(jīng)過高效液相色譜檢測，丙酸產(chǎn)量最高ー株菌命名為Propionibacteriumjensenii JN925，其厭氧瓶發(fā)酵150h丙酸產(chǎn)量為20. 96g/L。
權(quán)利要求
1.一株產(chǎn)丙酸詹氏丙酸桿菌，2012年5月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC No M 2012153。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的詹氏丙酸桿菌，其特征在于所述詹氏丙酸桿菌能夠高效生產(chǎn)丙酸。
3.權(quán)利要求I所述的詹氏丙酸桿菌應(yīng)用發(fā)酵生產(chǎn)丙酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株產(chǎn)丙酸詹氏丙酸桿菌及其應(yīng)用，于2012年5月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC No.M 2012153。所述詹氏丙酸桿菌是從奶酪廠下水道的淤泥中篩選所得，應(yīng)用所述詹氏丙酸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)丙酸的產(chǎn)量可達(dá)20.96g/L。
文檔編號C12N1/20GK102766589SQ20121016850
公開日2012年11月7日 申請日期2012年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月25日
發(fā)明者劉龍, 堵國成, 諸葛鑫, 陳堅 申請人:江南大學(xué)