專利名稱：美國大杏仁用于制備血管緊張素轉化酶抑制劑的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于食品領域，具體地說，是關于美國大杏仁用于制備血管緊張素轉化酶 (Angiotensin Converting Enzyme, ACE)抑制劑的應用。
背景技術：
美國大杏仁(Amygdalus comnnis)又稱扁桃(在中國俗稱巴旦杏、巴旦木)薔薇科扁桃屬，是一種重要的干果油料及藥用樹種。其世界年總產(chǎn)量在120萬噸左右，居世界四大干果之首。美國加州是大杏仁最佳的生長地點，美國大杏仁含有蛋白質(zhì)21. 22% ;油脂 49. 42%;粗纖維12. 2%;糖類3. 89%;水4. 70% 每100克大杏仁中含鉀800mg、鈣264mg、 鎂268mg、磷484mg、維生素E 26. 22mg,不含膽固醇和咖啡因(悅莉等,美國大杏仁寒熱性的研究[J]，中國食品學報，2008 (5) 58-63 ;楊凌等，美國大杏仁保健功能的研究進展[J]，中國食物與營養(yǎng)，2009 (12) :55-57 ；Hyson DA, Schneeman BO, Davis PA. Almonds and almond oil have similar effects on plasma lipids and LDL oxidation in healthy men and women. The Journal of Nutrition. 2002,132 :703-707 ；http://ndb. nal. usda. gov/ndb/ foods/show/)。ACE(血管緊張素轉化酶,Angiotensin Converting Enzyme)在人體內(nèi)的作用是把血管緊張素I (Angiotensin I)轉化成血緊張素II (Angiotensin II),同時還會使血管舒緩激肽失活，而血管緊張素II為強烈的血管收縮物質(zhì)，從而使體內(nèi)血壓升高。ACE是一種金屬肽酶，含有2個結合Zn2+的位點，這就是與底物結合的“必須結合位點(Obligatory Binding Site)”。Zn2+結合位點是ACE催化反應的活性基團所在部位。 各種ACE抑制物的共同作用是與ACE活性部位的Zn2+結合，使之失活。降血壓肽是由數(shù)個氨基酸組成的肽，是對ACE活性區(qū)域親和力較強的競爭性抑制劑，它們與ACE的親和力比血管緊張素I或舒緩激肽更強，而且也較不容易從ACE結合區(qū)釋放，降低ACE活性或使其失去活性，從而阻礙ACE催化血管緊張素I轉化成血管緊張素II，使血管不收縮，以及催化水解舒緩激肽成為失活片段的兩種生化反應過程，起到降血壓的作用。到目前為止，未發(fā)現(xiàn)有關于利用美國大杏仁制備ACE抑制物或降血壓藥物的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本申請的發(fā)明人在研究美國大杏仁的用途的過程中發(fā)現(xiàn)，美國大杏仁的水解產(chǎn)物具有明顯的抑制血管緊張素轉化酶(ACE)的活性。本發(fā)明的目的在于，提供一種美國大杏仁提取血管緊張素轉化酶抑制劑的應用。根據(jù)本發(fā)明，所述美國大杏仁為大杏仁經(jīng)蛋白酶水解、酸性水解或堿性水解后的 產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，所述美國大杏仁包括脫脂和未脫脂的杏仁。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，所述蛋白酶選自胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、 木瓜蛋白酶、風味酶、胰蛋白酶以及菠蘿蛋白酶。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，所述蛋白酶水解時間為0. 5 19hr。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，所述酸性水解選擇的pH為2 6。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，所述堿性水解選擇的pH為8 11?；诿绹笮尤示哂幸种蒲芫o張素轉化酶活性的作用，美國大杏仁可進一步用于開發(fā)具有降血壓功能的食品或保健品。本發(fā)明為美國大杏仁的開發(fā)利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應用前景
具體實施例方式以下結合具體實施例，對本發(fā)明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。以下實施例中，ACE抑制活性的測定原理及方法步驟如下美國大杏仁蛋白水解物(多肽)的ACE抑制活性測定采用體外模擬測定，體外ACE 抑制率測試原理為底物馬尿酰組氨酰亮氨酸(HHL)在ACE的催化作用下，可以生成一分子馬尿酸(Hip)、一分子由組氨酸和亮氨酸結合的二肽，通過高效液相色譜的方法測定Hip的含量，進而可以間接測定ACE的酶活；而ACE抑制劑的存在可以抑制ACE的活性，致使Hip 的生成減少，從而間接反映了 ACE抑制肽的活性。測試方法步驟如下選取Eppendorf(EP)管作為反應器，編號1、2、3、4等，I號管加入20 u L去離子水作為對照，2、3、4等管加入20 ii L的ACE抑制劑，同時各管內(nèi)加入10 y L 的底物HHL，37°C溫浴5min，然后加入10 y L的ACE啟動反應，在37°C水浴中反應40min，反應結束后，加入IOOuL的HCl(IM)終止反應。反應液在12000rpm，4°C離心lOmin，上清液用0. 45 ii m的醋酸纖維薄膜過濾，然后在高效液相色譜(HPLC)上進行測定。HPLC條件是 15%乙腈85%水(0. 1% TFA)，檢測波長228nm，柱溫30°C，上樣量10 u L ；ACE抑制率(X)按下式計算X = (A 對照-Al) /A 對照 X 100 %式中X_ACE抑制率)A對照-對照組生成Hip的峰面積Al-實驗組生成Hip的峰面積。實施例1-18、未脫脂美國大杏仁多肽水解物的制備美國大杏仁搗碎研磨，收集粉末。按表I所示，對獲得的未脫脂美國大杏仁粉末分別用酸性溶液、堿性溶液不同的蛋白酶處理，具體如下酶水解稱取5g磨碎美國大杏仁粉末，加水50ml ;蛋白酶選自常見蛋白酶，如胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、風味酶、胰蛋白酶以及菠蘿蛋白酶，按照表I 所列的蛋白酶水解條件，調(diào)至蛋白酶相應的pH值，加蛋白酶0. 1% (w/v)，分別在最適溫度下水解。取酶解液離心(12000r/min，10min，4°C )，上清液于4°C冷藏。酸、堿水解稱取5g粉末加50ml去離子水，分別用IM HCl和IM NaOH調(diào)pH值至2、4、6、8、10、11，于55°C水浴水解。分別取酸解液和堿解液離心(12000r/min，10min,4°C )，
上清液于4°C冷藏。表I、蛋白酶、酸、堿水解條件
權利要求
1.美國大杏仁用于制備血管緊張素轉化酶抑制劑的應用。
2.如權利要求I所述的應用，其特征在于，所述美國大杏仁為果仁經(jīng)蛋白酶水解、酸性水解或堿性水解后的產(chǎn)物。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述美國大杏仁包括脫脂和未脫脂的果仁。
4.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述蛋白酶選自常見蛋白酶，比如胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、風味酶、胰蛋白酶以及菠蘿蛋白酶。
5.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述酸性水解的pH為2 6。
6.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述堿性水解的pH為8 11。
7.美國大杏仁用于制備降血壓食品或保健品的應用，其特征在于，所述降血壓食品或保健品用于抑制血管緊張素轉化酶的活性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種美國大杏仁用于制備血管緊張素轉化酶抑制劑的應用。優(yōu)選的，所述美國大杏仁為大杏仁經(jīng)蛋白酶水解、酸性水解或堿性水解后的產(chǎn)物。本發(fā)明為美國大杏仁的開發(fā)利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應用前景。
文檔編號C12P21/06GK102618608SQ20121008165
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月23日 優(yōu)先權日2012年3月23日
發(fā)明者吳燕玲, 方明, 李鵬, 杜磊, 謝靜莉, 魏東芝 申請人:華東理工大學