專利名稱：巴氏染色液及其快速染色方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及巴氏染色液及其染色方法，屬于體外診斷試劑及試劑的使用方法
背景技術(shù)：
巴氏(Papanicolaou)染色法是病理切片和脫落細(xì)胞染色中最好的最常用的染色方法，該染色法不但具有顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，分色明顯，透明度好，胞漿受色鮮艷等特點(diǎn)， 而且所染標(biāo)本不易脫色，可長(zhǎng)久保存。細(xì)胞核的主要成分是脫氧核糖核酸，其等電點(diǎn)為pH 1. 6-2. 0，當(dāng)pH大于2. 0時(shí) DNA帶負(fù)電，能與帶正電的染料陽離子結(jié)合。蘇木素是染核的染料，氧化后成為氧化蘇木素即蘇木素紅或蘇木精，它的等離子點(diǎn)是PH 6. 5，當(dāng)染液的酸堿度調(diào)節(jié)到PH 2. 2-2. 9時(shí)，蘇木精能析出陽離子，與帶負(fù)電的DNA結(jié)合。因?yàn)樘K木精陽離子電荷不強(qiáng)，與DNA結(jié)合不牢， 所以染色不深。當(dāng)加入鉀礬等媒劑后，即結(jié)合成帶強(qiáng)正電的大分子帶色體——蘇木精礬，后者具有強(qiáng)大親和力，與DNA結(jié)合牢固，染成較深紫色，不易為醇、水洗脫。細(xì)胞漿中的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)約為PH 6.0，在不同的酸堿度中能與不同的染料結(jié)合。但在PH小于4時(shí)便不能再與染料的陽離子結(jié)合；PH大于8時(shí)便不再與染料的陰離子結(jié)合。伊紅、亮綠、桔黃、俾士麥棕的發(fā)色部分都是陰離子，只能與蛋白質(zhì)的陽離子結(jié)合，因此染色環(huán)境不能太酸太堿。較年輕的細(xì)胞如底層鱗狀上皮細(xì)胞漿中核蛋白體較多，易與亮綠結(jié)合而染綠色。成熟的細(xì)胞漿中含核蛋白體較少(如成熟紅細(xì)胞、表層角化鱗狀上皮細(xì)胞)易與伊紅結(jié)合而染紅色。很衰老的細(xì)胞(如完全角化細(xì)胞)則可與桔黃結(jié)合而呈桔黃色。傳統(tǒng)的巴氏染色液配制復(fù)雜，染色手續(xù)繁雜，時(shí)間較長(zhǎng)且難以掌握。因而檢驗(yàn)技術(shù)人員普遍感到操作難度大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為避免上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足之處，提供一種巴氏染色液及其染色方法。以使巴氏染色液配制簡(jiǎn)單、染色過程時(shí)間短，易于技術(shù)人員準(zhǔn)確操作。本發(fā)明巴氏染色液的特點(diǎn)是由細(xì)胞核染色液和細(xì)胞漿染色液構(gòu)成；所述細(xì)胞核染色液的配制方法為將0. 3g蘇木素色精單獨(dú)溶解于30ml無水乙醇中得蘇木素酒精液；將硫酸鋁銨 6g置于IOOOml大燒杯中加蒸餾水700ml，加熱至70-80°C，攪拌使其完全溶解，然后加溫至90°C，關(guān)斷熱源即加入蘇木素酒精液，邊加邊攪拌，加完之后繼續(xù)加熱至沸即離開熱源； 再向其中加入0. 5g黃色氧化汞粉末，邊加邊攪拌，繼續(xù)加熱使溶液呈深紫色，立即置于 10-30°C的水中進(jìn)行水浴冷卻；冷卻到10-30°C后置于塑料桶中，加入體積濃度為冰乙酸anl，經(jīng)濾紙濾去殘?jiān)吹眉?xì)胞核染色液；所述細(xì)胞漿染色液的配制方法取0. Ig橙黃G6溶于100ml、95%酒精得橙黃G6酒精液為備用料；取0. Ig亮綠溶于100ml、95%酒精得亮綠酒精液為備用料；
取0. 05g俾仕麥棕溶于100ml、95%酒精得俾仕麥棕酒精液為備用料；取0. Ig伊紅溶于100ml、95%酒精得伊紅酒精液為備用料；取磷鎢酸0.5g為備用料；所有備用料充分混勻溶解后即為細(xì)胞漿染色液。本發(fā)明巴氏染色液的快速染色方法的特點(diǎn)是在22°C的室溫環(huán)境下按如下步驟進(jìn)行操作a、固定將未干的宮頸分泌物涂片置95%酒精中，15-30分鐘時(shí)取出得固定涂片；b、染核將步驟a所得固定涂片置于細(xì)胞核染色液中染色2分鐘，取出后用蒸餾水沖凈得染核涂片，立即進(jìn)行下一步驟的染漿；c、染漿將染核涂片置于細(xì)胞漿染色液中，2分鐘取出，在95%酒精液中洗滌至無細(xì)胞漿染色液附著即得染漿涂片，所述染漿涂片即可用于進(jìn)行鏡檢；若需要長(zhǎng)期保存則繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)步驟d的封片；d、封片將步驟c所得染漿涂片置于無水酒精中洗滌后，再置于AR級(jí)二甲苯洗滌透明涂片；用阿拉伯樹膠封固透明涂片，所述被封固的透明涂片在10-30°C避光條件下保存。染色結(jié)果上皮細(xì)胞核染藍(lán)紫色、核仁紅色；胞漿依分化高低，分別染成橙黃、粉紅、綠色、淡藍(lán)色。與已有技術(shù)相比，本發(fā)明有益效果體現(xiàn)在1、本發(fā)明巴氏染色液制備方法簡(jiǎn)單、成本低。2、本發(fā)明染色方法簡(jiǎn)單可靠，可以從傳統(tǒng)的90分鐘縮減為7分鐘，工作效率大大提尚。


圖1為傳統(tǒng)的巴氏染色方法的染色效果圖；圖2為經(jīng)本發(fā)明巴氏染色液按本發(fā)明方法操作的染色效果圖；經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明與傳統(tǒng)方法所獲得的染色效果相一致。
具體實(shí)施例方式本實(shí)施例巴氏染色液是由細(xì)胞核染色液和細(xì)胞漿染色液構(gòu)成；細(xì)胞核染色液的配制將0. 3g蘇木素色精單獨(dú)溶解于30ml無水乙醇中得蘇木素酒精液；將硫酸鋁銨 6g置于IOOOml大燒杯中加蒸餾水700ml，加熱至70-80°C，攪拌使其完全溶解，然后加溫至 90°C，關(guān)斷熱源即加入蘇木素酒精液，邊加邊攪拌，加完之后繼續(xù)加熱至沸即離開熱源；再向其中加入0. 5g黃色氧化汞粉末，邊加邊攪拌，繼續(xù)加熱使溶液經(jīng)目測(cè)呈深紫色，立即置于10-30°C的水中進(jìn)行水浴冷卻；冷卻到10-30°C后置于塑料桶中，加入體積百分比為冰乙酸anl，經(jīng)濾紙濾去殘?jiān)吹眉?xì)胞核染色液，避光保存；冰乙酸的加入能穩(wěn)定蘇木素染色團(tuán)抗拒氧化，使不過染，也減少沉淀形成；細(xì)胞漿染色液的配制取0. Ig橙黃G6溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得橙黃G6酒精液為備用料；取0. Ig亮綠溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得亮綠酒精液為備用料；取0. 05g俾仕麥棕溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得俾仕麥棕酒精液為備用料；取0. Ig伊紅溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得伊紅酒精液為備用料；取磷鎢酸0.5g為備用料；所有備用料充分混勻溶解后即為細(xì)胞漿染色液。利用以上過程制備的巴氏染色液的快速染色方法是在22°C的室溫環(huán)境下按如下步驟進(jìn)行操作a、固定將未干的宮頸分泌物涂片置體積百分比為95%的酒精中，15-30分鐘時(shí)取出得固定涂片；b、染核將步驟a所得固定涂片置于細(xì)胞核染色液中染色2分鐘，取出后用蒸餾水沖凈得染核涂片，立即進(jìn)行下一步驟的染漿；C、染漿將染核涂片置于細(xì)胞漿染色液中，2分鐘取出，先后在兩缸體積百分比為 95%的酒精液中洗滌至無細(xì)胞漿染色液附著即得染漿涂片，染漿涂片即可用于進(jìn)行鏡檢； 若需要長(zhǎng)期保存則繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)步驟d的封片；d、封片將步驟c所得染漿涂片置于無水酒精中洗滌后，再先后置于兩缸AR級(jí)二甲苯洗滌透明涂片；用阿拉伯樹膠封固透明涂片，被封固的透明涂片在10-30°C避光條件下保存。本實(shí)施例中各原料來源橙黃G6，型號(hào)為Q/GHXC 6118-2004 ；生產(chǎn)廠家上海展云化工有限公司；電話 021-56772368 ；網(wǎng)址:www. shzychem. com ；亮綠，型號(hào)為Q/CYDZ 2516-2005 ；生產(chǎn)廠家國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；地址 上海市寧波路52號(hào)；俾仕麥棕，符合企標(biāo)；生產(chǎn)廠家上海展云化工有限公司；電話021-56772368 ； 網(wǎng)址:www. shzychem. com ；伊紅，符合企標(biāo)；生產(chǎn)廠家上海展云化工有限公司；電話021-56772368，網(wǎng)址 www. shzychem. com ；阿拉伯樹膠，生產(chǎn)廠家泰安利達(dá)膠業(yè)有限公司；地址山東省泰安市熱電廠南， 電話:0538-8297288ο
權(quán)利要求
1.巴氏染色液，其特征是由細(xì)胞核染色液和細(xì)胞漿染色液構(gòu)成； 所述細(xì)胞核染色液的配制方法為將0. 3g蘇木素色精單獨(dú)溶解于30ml無水乙醇中得蘇木素酒精液；將硫酸鋁銨6g置于 IOOOml大燒杯中加蒸餾水700ml，加熱至70_80°C，攪拌使其完全溶解，然后加溫至90°C，關(guān)斷熱源即加入蘇木素酒精液，邊加邊攪拌，加完之后繼續(xù)加熱至沸即離開熱源；再向其中加入0. 5g黃色氧化汞粉末，邊加邊攪拌，繼續(xù)加熱使溶液呈深紫色，立即置于10-30°C的水中進(jìn)行水浴冷卻；冷卻到10_30°C后置于塑料桶中，加入體積濃度為冰乙酸anl，經(jīng)濾紙濾去殘?jiān)吹眉?xì)胞核染色液；所述細(xì)胞漿染色液的配制方法取0. Ig橙黃G6溶于100ml、95%酒精得橙黃G6酒精液為備用料；取0. Ig亮綠溶于100ml、95%酒精得亮綠酒精液為備用料；取0. 05g俾仕麥棕溶于100ml、95%酒精得俾仕麥棕酒精液為備用料；取0. Ig伊紅溶于100ml、95%酒精得伊紅酒精液為備用料；取磷鎢酸0. 5g為備用料；所有備用料充分混勻溶解后即為細(xì)胞漿染色液。
2.—種權(quán)利要求1所述巴氏染色液的快速染色方法，其特征是在22°C的室溫環(huán)境下按如下步驟進(jìn)行操作a、固定將未干的宮頸分泌物涂片置95%酒精中，15-30分鐘時(shí)取出得固定涂片；b、染核將步驟a所得固定涂片置于細(xì)胞核染色液中染色2分鐘，取出后用蒸餾水沖凈得染核涂片，立即進(jìn)行下一步驟的染漿；c、染漿將染核涂片置于細(xì)胞漿染色液中，2分鐘取出，在95%酒精液中洗滌至無細(xì)胞漿染色液附著即得染漿涂片，所述染漿涂片即可用于進(jìn)行鏡檢；若需要長(zhǎng)期保存則繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)步驟d的封片；d、封片將步驟c所得染漿涂片置于無水酒精中洗滌后，再置于AR級(jí)二甲苯洗滌透明涂片；用阿拉伯樹膠封固透明涂片，所述被封固的透明涂片在10-30°C避光條件下保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種巴氏染色液及其快速染色方法，巴氏染色液是由細(xì)胞核染色液和細(xì)胞漿染色液構(gòu)成；巴氏染色液的快速染色方法，是在22℃的室溫環(huán)境下操作。本發(fā)明巴氏染色液制備方法簡(jiǎn)單、成本低。利用本發(fā)明巴氏染色液的染色方法簡(jiǎn)單可靠，可以從傳統(tǒng)的90分鐘縮減為7分鐘，工作效率大大提高。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK102286603SQ20111010310
公開日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月25日
發(fā)明者吳志昇, 吳松, 袁立成 申請(qǐng)人:安徽省巢湖市弘慈醫(yī)療器械有限公司