專利名稱：生物加工的制作方法
生物加工相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求于2009年5月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/180，019和于2009年 10月16日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/252，300的優(yōu)先權(quán)。這些臨時(shí)申請(qǐng)各自的全部公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用在此合并入本文。背景碳水化合物可以通過(guò)生物加工技術(shù)轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌牧希錾锛庸ぜ夹g(shù)利用試劑例如微生物或酶。例如，在發(fā)酵中碳水化合物可以通過(guò)微生物轉(zhuǎn)變?yōu)榇蓟蛩?，例如糖使用酵母在缺氧條件下轉(zhuǎn)變成醇。當(dāng)發(fā)酵在碳水化合物完全轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物(例如糖至醇)前終止時(shí)， 被稱為已發(fā)生“粘滯”發(fā)酵。其他生物加工技術(shù)包括纖維素和木質(zhì)纖維素材料酶促水解成低分子量糖。概述在某些情況下，生物加工過(guò)程中基材的存在促進(jìn)例如低分子量糖轉(zhuǎn)變成中間產(chǎn)物或產(chǎn)物，或纖維素或木質(zhì)纖維素材料轉(zhuǎn)變成低分子量糖。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)在具有低分子量糖、介質(zhì)例如溶劑或溶劑系統(tǒng)和微生物的混合物中包括基材例如無(wú)機(jī)或有機(jī)材料，可以改善通過(guò)糖例如醇例如乙醇或丁醇(例如正丁醇)轉(zhuǎn)變獲得中間產(chǎn)物或產(chǎn)物的得率和生產(chǎn)率。包括基材還可以預(yù)防例如通過(guò)發(fā)酵的不完全、遲緩或“粘滯”產(chǎn)物轉(zhuǎn)變。類似地，基材的包括在內(nèi)可以增強(qiáng)纖維素或木質(zhì)纖維素材料的酶促水解。一般地，本發(fā)明的特征在于這樣的方法，其包括使用固定化在基材例如纖維或顆粒上的微生物和/或酶，以將碳水化合物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物。在一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于這樣的方法，其包括使用固定化在基材例如無(wú)機(jī)或塑料顆粒或者纖維上的微生物，以將低分子量糖例如蔗糖、葡萄糖、木糖或這些中的任何的混合物轉(zhuǎn)變成中間產(chǎn)物或產(chǎn)物。在某些情況下，基材用基材在其天然狀態(tài)中不具有的官能團(tuán)進(jìn)行官能化。“固定化”意指微生物或酶通過(guò)共價(jià)、氫、離子或等價(jià)鍵合和/或通過(guò)機(jī)械相互作用，例如在微生物和纖維或顆粒的孔之間，直接或間接地(例如通過(guò)化學(xué)接頭)與基材(例如顆?；蚶w維)結(jié)合。結(jié)合可以例如通過(guò)電極化基材材料來(lái)產(chǎn)生。相互作用可以是永久、 半永久或短暫的。機(jī)械相互作用可以包括與纖維或顆粒的孔或其他位點(diǎn)嵌套或粘住的微生物或酶。 某些實(shí)現(xiàn)包括一個(gè)或多個(gè)下述特征。 轉(zhuǎn)變可以包括允許微生物將至少部分低分子量糖轉(zhuǎn)換為醇例如乙醇或丁醇，或轉(zhuǎn)變成烴或氫。轉(zhuǎn)變可以包括發(fā)酵。微生物可以包括酵母例如釀酒酵母(S. cerevisiae)和/ 或樹(shù)干畢赤酵母(P. stipitis)，或者細(xì)菌例如運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌(Zymomonas mobilis)。該方法可以進(jìn)一步包括例如用電離輻射例如粒子束照射基材例如無(wú)機(jī)纖維。纖維或顆?？梢跃哂写笥?. 25m2/g的BET表面積和/或至少70%的多孔性。在某些情況下，BET表面積可以大于10、100、250、500或甚至1000m2/g。該方法可以進(jìn)一步包括在后續(xù)轉(zhuǎn)變過(guò)程中再使用基材°
在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于包括具有極性官能團(tuán)的基材例如微粒材料、具有互補(bǔ)官能團(tuán)的微生物或酶和液體介質(zhì)的混合物。在某些情況下，基材包括纖維例如無(wú)機(jī)纖維或塑料纖維。在一個(gè)進(jìn)一步的方面，本發(fā)明的特征在于包括具有官能團(tuán)的基材例如纖維或顆粒、和具有互補(bǔ)官能團(tuán)的微生物或酶的組合物，所述微生物或酶固定化在基材上。當(dāng)使用纖維時(shí)，纖維可以是例如無(wú)機(jī)纖維或塑料纖維。本發(fā)明的特征還在于這樣的方法，其包括使具有基材、微生物和溶劑或溶劑系統(tǒng) (例如水或水和有機(jī)溶劑的混合物)的混合物中的低分子量糖或包括低分子量糖的材料轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g產(chǎn)物或產(chǎn)物。溶劑或溶劑系統(tǒng)的例子包括水、己烷、十六烷、甘油、氯仿、甲苯、乙酸乙酯、石油醚、液化石油氣(LPG)、離子液體及其混合物。溶劑或溶劑系統(tǒng)可以以單相或2個(gè)或更多個(gè)相的形式。基材可以例如以纖維形式。例如，基材可以包括無(wú)機(jī)纖維或合成纖維， 例如塑料纖維。在某些情況下，在中間產(chǎn)物或產(chǎn)物例如乙醇的生產(chǎn)過(guò)程中具有基材(例如，通過(guò)本文描述的任何方法處理或未經(jīng)處理的纖維)的存在可以增強(qiáng)產(chǎn)物的生產(chǎn)率。不希望受任何具體理論束縛，認(rèn)為通過(guò)增加溶質(zhì)的有效濃度且提供可以在其上發(fā)生反應(yīng)的基材，具有固體存在例如高表面積和/或高多孔性固體可以增加反應(yīng)速率。例如，經(jīng)照射或未經(jīng)照射的纖維材料，例如無(wú)機(jī)材料例如碳纖維或玻璃纖維，或者合成聚合材料例如塑料纖維，可以加入發(fā)酵過(guò)程中，例如玉米-乙醇發(fā)酵或甘蔗提取物發(fā)酵，以使生產(chǎn)率增加至少10、15、20、30、40、50、75或100%或更多，例如至少150%或甚至高達(dá)1000%。纖維材料可以具有高表面積、高多孔性和/或低堆密度。在某些實(shí)施方案中，纖維材料以約0. 5重量％ -約50重量％的濃度存在于混合物中，例如約1重量％ -約25重量％，或約2重量％ -約12.5重量％。在其他實(shí)施方案中，生物材料以大于約0.5重量％ 的量存在，例如大于約1、2、3、4、5、6、7、8、9、或甚至大于約10重量％。例如，在某些實(shí)施方案中，氧化、照射或化學(xué)官能化的纖維材料可以加入低分子量糖發(fā)酵過(guò)程中，例如以增強(qiáng)發(fā)酵速率和輸出。因?yàn)榛钠渥陨碓谵D(zhuǎn)變過(guò)程期間不消耗，所以基材可以在多批次加工過(guò)程中再使用，或可以連續(xù)使用用于生產(chǎn)相對(duì)大體積的產(chǎn)物。某些實(shí)現(xiàn)包括下述特征中的一種或多種。轉(zhuǎn)變可以包括允許微生物使至少部分低分子量糖轉(zhuǎn)變成醇例如乙醇或丁醇。例如，轉(zhuǎn)變可以包括發(fā)酵。微生物可以包括例如選自釀酒酵母和樹(shù)干畢赤酵母的酵母，或者細(xì)菌例如運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌。微生物可以是天然微生物或經(jīng)改造的微生物。例如，微生物可以是細(xì)菌例如分解纖維素的細(xì)菌，真菌例如酵母，植物或原生生物例如藻類，原生動(dòng)物或真菌樣原生生物例如粘菌。當(dāng)生物相容時(shí)，可以利用混合物。轉(zhuǎn)變可以顯示出至少140%在某些情況下至少170%的性能％。用于測(cè)定關(guān)于乙醇發(fā)酵的性能％的等式是 性能％ =(樣品中的乙醇/對(duì)照中的乙醇)χ 100 基材可以包括纖維材料。所述方法可以進(jìn)一步包括在混合前例如用電離輻射以例如至少5Mrad的總用量照射纖維材料。照射可以使用粒子束例如電子束執(zhí)行。在某些實(shí)施方案中，在基材暴露于空氣、氮、氧、氦或氬時(shí)，對(duì)基材執(zhí)行照射。照射可以利用電離輻射來(lái)執(zhí)行，例如 射線、電子束或具有約IOOnm-約^Onm波長(zhǎng)的紫外線C輻射。輻射可以使用輻射的多重應(yīng)用來(lái)執(zhí)行。在某些情況下，輻射可以以約IOMrad-約150Mrad的總劑量，和以約0. 5-約IOMrad/天、或lMrad/s-約10Mrad/s的劑量率應(yīng)用。在某些實(shí)施方案中，照射包括應(yīng)用2個(gè)或更多個(gè)輻射源，例如、射線和電子束。在另一個(gè)方面，基材包括在糖化過(guò)程中，其中基材的存在可以增強(qiáng)來(lái)自含纖維素原料的低分子量糖的反應(yīng)速率和得率。在這個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于包括利用固定化在顆粒上的糖化劑的方法，以糖化纖維素或木質(zhì)纖維素材料。糖化劑可以是例如酶。除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。盡管下文描述了合適方法和材料，但與本文描述那些相似或等價(jià)的方法與材料可以用于本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試。本文提及的所有出版物、專利申請(qǐng)、 專利和其他參考文獻(xiàn)通過(guò)引用整體合并。在沖突的情況下，以本說(shuō)明書(shū)包括定義為準(zhǔn)。此外，材料、方法和實(shí)施例僅是舉例說(shuō)明性的，并且不預(yù)期是限制性的。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)由于下述詳述和權(quán)利要求將是顯而易見(jiàn)的。附圖描述

圖1是舉例說(shuō)明纖維的處理和經(jīng)處理的纖維在發(fā)酵過(guò)程中的用途的方框圖。圖IA 是與微生物相互作用的官能化纖維的圖示。詳述本文描述的基材材料例如官能化的微粒材料可以促進(jìn)低分子量糖轉(zhuǎn)變成中間產(chǎn)物或產(chǎn)物，例如在發(fā)酵過(guò)程期間。具有所需功能性類型和量的官能化的基材材料，例如羧酸基團(tuán)、烯醇基團(tuán)、醛基、酮基、腈基、硝基或亞硝基，可以使用本文描述的方法或其他已知方法進(jìn)行制備。基材材料下文討論的材料可以用官能團(tuán)進(jìn)行官能化，所述官能團(tuán)與在轉(zhuǎn)變低分子量糖中使用的試劑上的官能團(tuán)是互補(bǔ)的，例如在微生物例如酵母上存在的官能團(tuán)。合適的基材材料包括有機(jī)和無(wú)機(jī)微粒材料。基材材料包括例如無(wú)機(jī)填充劑，例如碳酸鈣(例如，沉淀的碳酸鈣或天然碳酸鈣)、霰石粘土、斜方晶粘土、方解石粘土、三角晶粘土、高嶺土、膨潤(rùn)土、磷酸二鈣、磷酸三鈣、焦磷酸鈣、不溶性偏磷酸鈉、正磷酸鎂、磷酸三鎂、羥磷灰石、合成磷灰石、鋁、水合氧化鋁、硅基干凝膠、金屬鋁硅酸鹽復(fù)合物、硅酸鋁鈉、 硅酸鋯、二氧化硅石墨、硅灰石、云母、玻璃、玻璃纖維、二氧化硅、滑石、碳纖維、導(dǎo)電碳黑、 陶瓷粉末和陶瓷纖維、和三水合氧化鋁。還可以使用其他微粒材料，例如研磨建筑廢物、研磨輪胎橡膠、木質(zhì)素、馬來(lái)酸化聚丙烯、尼龍纖維或其他熱塑性纖維、和氟化聚合物，例如氟化聚乙烯。還可以使用上述材料的組合。某些材料以官能化狀態(tài)是商購(gòu)可得的。例如，羧基官能化的碳納米管是例如從 NanoLab, Newton, MA, USA商購(gòu)可得的，并且官能化的硅膠是從Isco，Inc商購(gòu)可得的。微粒材料可以具有例如超過(guò)1微米的顆粒大小，例如超過(guò)2微米、5微米、10微米、 25微米或甚至超過(guò)35微米。優(yōu)選基材的其他物理性質(zhì)將在下文描述。納米尺寸的填充劑也可以單獨(dú)或與任何大小和/或形狀的纖維材料組合使用。填充劑可以以例如顆粒、平板或纖維的形式。例如，可以使用納米大小的粘土、硅和碳納米管或巴克球，以及硅和碳納米線。填充劑可以具有小于IOOOnm的橫向尺度，例如小于900nm、 800nm、750nm、600nm、500nm、350nm、300nm、250nm、200nm、小于 lOOnm、或甚至小于 50nm。
在某些實(shí)施方案中，納米粘土是蒙脫土。此類粘土可從Nanocor，Inc.和Southern Clay產(chǎn)品獲得，并且已在美國(guó)專利號(hào)6，849，680和6，737，464中描述。粘土可以在混合到例如樹(shù)脂或纖維材料內(nèi)之前進(jìn)行表面處理。例如，粘土可以進(jìn)行表面處理，從而使得它的表面在性質(zhì)中是離子的，例如陽(yáng)離子或陰離子的。還可以使用聚集或凝聚的納米尺寸填充劑，或裝配成超分子結(jié)構(gòu)例如自裝配的超分子結(jié)構(gòu)的納米尺寸填充劑。聚集或超分子的填充劑在結(jié)構(gòu)中可以是開(kāi)放或閉合的，并且可以具有各種形狀，例如筒、管或球形。本文描述的任何基材材料的摻和物可以用于制備本文描述的任何產(chǎn)物?！鑫浮?amp;舗圖1顯示用于處理基材材料例如纖維或微粒材料，并且隨后使用經(jīng)處理的材料以增強(qiáng)發(fā)酵加工過(guò)程的系統(tǒng)100。系統(tǒng)100包括基材材料在其中例如通過(guò)照射、氧化、化學(xué)官能化或其他方法進(jìn)行官能化的光學(xué)模塊102。如果基材材料要以其天然狀態(tài)使用，或已進(jìn)行預(yù)官能化，那么省略這個(gè)步驟。經(jīng)處理的基材材料例如官能化的顆?；蚶w維通過(guò)基材遞送模塊108遞送至發(fā)酵系統(tǒng)106?；牟牧峡梢砸匀魏嗡铦舛冗f送，例如約0. 05 % -約20 %、約0. 1 % -約10 %、 約0.2% -約6%、或約0.3% -約4%。濃度將部分由所使用基材材料的性質(zhì)和多少基材材料加入作為實(shí)際物質(zhì)來(lái)指定。官能化的基材材料隨后存在于發(fā)酵過(guò)程中，并且通過(guò)提供基材增強(qiáng)發(fā)酵過(guò)程，所述基材可以與發(fā)酵中使用的微生物例如酵母細(xì)胞相互作用。這種相互作用在圖IA中示意性顯示，所述圖IA描述了官能化的極性纖維10和具有互補(bǔ)極性官能團(tuán)的酵母細(xì)胞12。由于纖維和酵母細(xì)胞的極性，細(xì)胞可以變得固定化在一種或多種纖維上。酵母細(xì)胞(或其他微生物)與纖維的結(jié)合可以通過(guò)氫鍵合或通過(guò)共價(jià)或離子鍵合。在某些情況下，纖維上的官能團(tuán)可以與微生物上的那些反應(yīng)，形成共價(jià)鍵。纖維的高表面積和多孔性提供了用于纖維和微生物的相互作用的大表面積，并且從而增強(qiáng)這種相互作用。固定化的細(xì)胞具有更高生產(chǎn)性，增加發(fā)酵加工過(guò)程的效率和得率，并且阻止該過(guò)程變得過(guò)早“粘滯”。應(yīng)當(dāng)指出如果混合在發(fā)酵過(guò)程中執(zhí)行，那么混合是優(yōu)選相對(duì)溫和的(低剪切)，以便使微生物和纖維之間相互作用的破壞降到最低。在某些實(shí)施方案中，使用噴射混合，如于2009年5月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/179，995、和于2009年6月19日提交的
61/218，832、和在代理人案號(hào)00119-1US下與本申請(qǐng)同時(shí)提交的USSN_中描述的。這些
申請(qǐng)各自的完整公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用合并入本文。在圖1中所示的實(shí)現(xiàn)中，發(fā)酵產(chǎn)生粗乙醇混合物，這流動(dòng)到容納槽110內(nèi)。水或其他溶劑和其他非乙醇組分使用反萃取柱112從粗乙醇混合物中剝離，并且乙醇隨后使用蒸餾單元114例如精餾器進(jìn)行蒸餾。最后，乙醇可以使用分子篩116進(jìn)行干燥，需要時(shí)進(jìn)行變性，并且輸出至所需運(yùn)送方法。在某些情況下，本文描述的系統(tǒng)或其組分可以是手提式的，從而使得該系統(tǒng)可以從一個(gè)位置轉(zhuǎn)運(yùn)(例如通過(guò)軌道、貨車或海洋船只)到另一個(gè)。本文描述的方法步驟可以在一個(gè)或多個(gè)位置執(zhí)行，并且在某些情況下，一個(gè)或多個(gè)步驟可以在運(yùn)輸中執(zhí)行。此類移動(dòng)加工在美國(guó)序列號(hào)12/374，549和國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朩O 2008/011598中描述，其完整公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用合并入本文。
基材的物理件質(zhì)官能化的基材材料和以其天然狀態(tài)的基材材料可以具有本文討論的物理性質(zhì)。如本文使用的，平均纖維寬度(即直徑)是通過(guò)隨機(jī)選擇約5，000根纖維在光學(xué)上測(cè)定的。平均纖維長(zhǎng)度是校正長(zhǎng)度-加權(quán)長(zhǎng)度。BET(Brunauer，Emmet和1Te 11 er)表面積是多點(diǎn)表面面積，并且多孔性是通過(guò)水銀孔率法測(cè)定的那些。如果基材材料是纖維的，那么在某些情況下，基材材料的纖維的平均長(zhǎng)度直徑比可以是例如大于8/1、例如大于10/1、大于15/1、大于20/1、大于25/1或大于50/1。纖維的平均長(zhǎng)度可以是例如約0. 5mm-2. 5mm、例如約0. 75mm-l. 0mm,并且纖維的平均寬度(即直徑)可以是例如約5 μ m-50 μ m,例如約10 μ m-30 μ m。在某些實(shí)施方案中，纖維的長(zhǎng)度標(biāo)準(zhǔn)差小于纖維的平均長(zhǎng)度的60%，例如小于平均長(zhǎng)度的50 %、小于平均長(zhǎng)度的40 %、小于平均長(zhǎng)度的25 %、小于平均長(zhǎng)度的10 %、小于平均長(zhǎng)度的5%、或甚至小于平均長(zhǎng)度的1%。 在某些實(shí)施方案中，基材材料的BET表面積大于0. lm2/g，例如大于0. 25m2/g、 0. 5m2/g、l. 0m2/g、l. 5m2/g、l. 75m2/g、5. 0m2/g、10m2/g、25m2/g、35m2/g、50m2/g、75m2/g、IOOm2/ g、200m2/g、250m7g、500m7g 或甚至大于 1000m2/g。基材材料的多孔性可以是例如大于20%、大于25%、大于35%、大于50%、大于 60%、大于70%、例如大于80%、大于85%、大于90%、大于92%、大于94%、大于95%、大于97. 5%、大于99%、或甚至大于99. 5%。基材的猝滅和官能化在某些情況下，基材材料通過(guò)照射進(jìn)行官能化。如本領(lǐng)域眾所周知的，還可以使用其他技術(shù)，例如氧化或化學(xué)官能化。在某些實(shí)施方案中，官能化基材材料不是所述加工過(guò)程的部分，例如材料以其天然狀態(tài)使用，或通過(guò)供應(yīng)者進(jìn)行預(yù)官能化。在用電離輻射處理后，基材材料變得電離；即，材料包括在用電子自旋共振光譜儀可檢測(cè)的水平上的原子團(tuán)。目前的原子團(tuán)實(shí)際檢測(cè)極限是在室溫下約IO14自旋。在電離后，可以猝滅材料，以減少經(jīng)電離的材料中的原子團(tuán)水平，例如從而使得原子團(tuán)用電子自旋共振光譜儀不再可檢測(cè)。例如，通過(guò)給材料應(yīng)用足夠壓力和/或通過(guò)利用與經(jīng)電離的材料接觸的流體，所述流體例如氣體或液體，與原子團(tuán)反應(yīng)(猝滅)，可以使原子團(tuán)猝滅。使用至少幫助原子團(tuán)猝滅的氣體或液體也允許操作者以所需量和種類的官能團(tuán)控制經(jīng)電離的材料官能化，所述官能團(tuán)例如羧酸基團(tuán)、烯醇基團(tuán)、醛基、硝基、腈基、氨基、烷基氨基、烷基、環(huán)烷基或氯氟烷基。如上所述，通過(guò)猝滅而賦予材料的官能團(tuán)可以充當(dāng)用于通過(guò)微生物或酶附著的受體位點(diǎn)。通過(guò)電子自旋共振光譜儀檢測(cè)經(jīng)照射的樣品中的原子團(tuán)和此類樣品中的原子團(tuán)壽命在 Bartolotta 等人，Physics in Medicine and Biology，46 (2001)，461-471，和 Bartolotta ^A, Radiation Protection Dosimetry,第 84 Nos. 1-4,第 293-296 M (1999)中討論。在某些實(shí)施方案中，猝滅包括給經(jīng)電離的材料應(yīng)用壓力，例如通過(guò)使材料機(jī)械變形，例如在1、2或3個(gè)維度直接機(jī)械壓縮材料，或?qū)⒉牧辖肫渲械牧黧w應(yīng)用壓力，例如等靜壓制。在此類情況下，材料自身的變形使通常在結(jié)晶結(jié)構(gòu)域中捕獲的原子團(tuán)處于足夠接近中，從而使得原子團(tuán)可以重組或與另一個(gè)基團(tuán)反應(yīng)。在某些情況下，壓力連同熱的應(yīng)用例如足夠量的熱一起應(yīng)用，以使材料的溫度升高超過(guò)材料或材料組分的熔點(diǎn)或軟化點(diǎn)。熱可以改善材料中的分子流動(dòng)性，這可以幫助原子團(tuán)的猝滅。當(dāng)壓力用于猝滅時(shí)，壓力可以大于約 lOOOpsi，例如大于約 1250psi、1450psi、3625psi、5075psi、7250psi、IOOOOpsi 或甚至大于 15000psi。在某些實(shí)施方案中，猝滅包括使材料與流體例如液體或氣體相接觸，所述流體例如能夠與原子團(tuán)反應(yīng)的氣體，例如乙炔或乙炔在氮、乙烯、氯化乙烯或氯氟乙烯中的混合物，丙烯或這些氣體的混合物。在其他具體實(shí)施方案中，猝滅包括使材料與液體相接觸，所述液體例如在材料中可溶或至少能夠穿透到材料內(nèi)且與原子團(tuán)反應(yīng)的液體，例如二烯，例如1，5_環(huán)辛二烯。在某些具體實(shí)施方案中，猝滅包括使材料與抗氧化劑例如維生素E相接觸。用于猝滅的其他方法是可能的。例如，在Muratoglu等人，美國(guó)專利申請(qǐng)
發(fā)明者H·米多夫, M·米多夫, T·馬斯特曼 申請(qǐng)人:希樂(lè)克公司