專利名稱：重型肝炎相關(guān)基因hFas microRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建方法及其藥學(xué)用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及構(gòu)建一組基因生物制劑，即構(gòu)建重型肝炎相關(guān)的人fgl2(Human Fibrinogen-Iike protein 2，hfgl2)凝血酶原酶、Fas 和腫瘤壞死因子受體 I (tumor necrosis factor, TNFR1)基因的microRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒，在重型肝炎中聯(lián)合應(yīng)用三種質(zhì)粒進(jìn)行 治療，驗(yàn)證其藥學(xué)用途。
背景技術(shù)：
由于病毒性肝炎發(fā)病率高、危害性大，已成為嚴(yán)重影響人民健康與生活水平、 制約經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要疾病。迄今為止，國(guó)際上對(duì)于重型肝炎尚無(wú)確定有效的治療方法， 探索重型肝炎的發(fā)病機(jī)制和防治方法是應(yīng)用基礎(chǔ)和臨床研究領(lǐng)域的重要課題。用鼠3型肝炎病毒(mouse hepatitis viras-3, MHV-3)感染不同種系近親繁殖小 鼠，我們已成功建立了類似人類各種不同臨床類型的肝炎，包括暴發(fā)型肝炎、慢性肝炎 及臨床健康病毒攜帶者(專利申請(qǐng)?zhí)?2115980.7) ； MHV-3誘導(dǎo)產(chǎn)生的鼠fgl2 (mfgl2) 凝血酶原酶(纖維介素)基因在鼠病變肝組織中選擇性高度表達(dá)，其基因表達(dá)水平與肝組 織纖維蛋白沉積及廣泛肝細(xì)胞壞死密切相關(guān)；MHV-3感染小鼠接受鼠fgl2凝血酶原酶 中和抗體注射后可減輕肝臟疾病嚴(yán)重程度并顯著降低死亡率。以上結(jié)果表明，鼠fgl2凝 血酶原酶在鼠暴發(fā)型肝炎的發(fā)病過(guò)程中起重要作用。在上述研究的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步 研究發(fā)現(xiàn)重癥乙型肝炎病人肝臟組織的枯否氏細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和壞死、纖維化區(qū)域 發(fā)現(xiàn)人fgl2(hfgl2)凝血酶原酶高度表達(dá)，fgl2在病毒性肝炎中引發(fā)肝臟纖維蛋白沉積和 微血管內(nèi)微循環(huán)障礙，導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死，表明人fgl2凝血酶原酶在人病毒性肝炎的惡化 進(jìn)展中起著關(guān)鍵性的作用。重型肝炎的肝細(xì)胞死亡包括細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡。迅速發(fā)生的凋亡是引發(fā)暴發(fā) 性肝炎的重要機(jī)制之一。Fas基因廣泛表達(dá)于人體組織中，屬于腫瘤壞死因子受體超家族 (TNFRSF)，并被命名為CD95。Fas/FasL通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在感染性疾病、自身免疫 性疾病和腫瘤的發(fā)生中起重要的作用，是病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、 急慢性肝衰竭和移植性排斥反應(yīng)等造成肝組織細(xì)胞炎癥損傷的重要環(huán)節(jié)。肝細(xì)胞對(duì)Fas介 導(dǎo)的凋亡非常敏感。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，病毒抗原激活肝細(xì)胞表達(dá)Fas，局部大量浸潤(rùn)的CTL表 達(dá)FasL，引起肝細(xì)胞凋亡，肝細(xì)胞Fas/FasL表達(dá)程度與病變活動(dòng)性一致，F(xiàn)as介導(dǎo)的肝 細(xì)胞凋亡在肝損傷中起非常重要的作用。腫瘤壞死因子(TNF)包括TNF α和TNF β，其中TNFa主要是由活化的單核
/巨噬細(xì)胞分泌，是具有廣泛的生物學(xué)活性的多肽調(diào)節(jié)因子，在內(nèi)毒素性休克、炎癥、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞毒性和抗病毒活動(dòng)中起著重要作用。TNFci誘導(dǎo)的各種細(xì)胞反應(yīng)是通過(guò)細(xì) 胞表面兩種特異性受體而產(chǎn)生的，即55KD的腫瘤壞死因子受體I (TNFR I)和75KD的腫 瘤壞死因子受體II (TNFR II)。TNF α的許多生物學(xué)效應(yīng)包括細(xì)胞凋亡都是通過(guò)TNFR I 產(chǎn)生的，而TNFRII則起著輔助信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用。TNFRI的高表達(dá)所致的肝細(xì)胞凋亡在 人類重型肝炎的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。臨床上多種病因可致重型肝炎，其發(fā)病兇險(xiǎn)，患者短期內(nèi)可出現(xiàn)大面積肝細(xì)胞 死亡，目前缺乏特異有效的治療手段。研究表明Fas、TNFRI系統(tǒng)介導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡與 重型肝炎的肝損傷有關(guān)，抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞大量激活并高度集中于患者肝 臟，通過(guò)Fas/FasL或TNFα/TNFRI誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而殺傷肝細(xì)胞。hfgl2凝血酶原 酶在病毒性肝炎中引發(fā)肝臟纖維蛋白沉積和微血管內(nèi)微循環(huán)障礙，導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死。上 述研究表明人fgl2凝血酶原酶、Fas/FasL和TNF α /TNFR I系統(tǒng)在人重型肝炎的惡化進(jìn) 展中起著關(guān)鍵性的作用。RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指導(dǎo)入特異性針對(duì)目標(biāo)基因的同源雙鏈 RNA(double-strain RNA, dsRNA)，誘導(dǎo)產(chǎn)生的沉默復(fù)合體(RISC)將目標(biāo)mRNA降解，
從而引起目標(biāo)基因不表達(dá)或減效表達(dá)。MicroRNA是由機(jī)體內(nèi)源基因轉(zhuǎn)錄的約70nt的發(fā) 夾狀結(jié)構(gòu)前體(pre-microRNA)被Dicer酶切割后產(chǎn)生的約22nt的非編碼單鏈核苷酸片 段，可與目的基因mRNA的非翻譯區(qū)結(jié)合，抑制mRNA的翻譯而不影響其穩(wěn)定性，也可 以RISC樣降解與之完全互補(bǔ)的靶RNA。microRNA作為一種新的基因干預(yù)工具，具有高 效、特異、快速等優(yōu)點(diǎn)，為基因調(diào)控的研究和基因治療的發(fā)展帶來(lái)了新的視角。國(guó)際上 大量研究表明其基因表達(dá)干預(yù)效果優(yōu)于反義技術(shù)，更具臨床應(yīng)用價(jià)值。應(yīng)用腺病毒載體 有如下優(yōu)點(diǎn)1.宿主范圍廣，對(duì)人致病性低；2.可在增殖和非增殖細(xì)胞中感染和表達(dá)基 因；3.不整合到染色體中，無(wú)插入致突變性；4.與人類基因同源；5.能有效進(jìn)行增殖， 滴度高；6.能同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因。發(fā)明人構(gòu)建了 hfgl2、hFas和hTNFRl基因的miRNA 表達(dá)質(zhì)粒，并對(duì)其進(jìn)行了體外細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明了 hfgl2、hFas和hTNFRl基因 的miRNA表達(dá)質(zhì)粒對(duì)相應(yīng)基因有特異性地抑制作用，表明它們對(duì)病毒誘導(dǎo)的重型肝炎的 治療具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明基于重型肝炎暫無(wú)確定有效的治療方法，發(fā)明了一種用于治療多種病因 誘導(dǎo)的重型肝炎的基因藥物。發(fā)明人構(gòu)建了一組新的生物制劑一 hfgl2凝血酶原酶、 hFas和hTNFRl的miRNA表達(dá)質(zhì)粒，用以抑制重型肝炎相關(guān)的hfgl2凝血酶原酶、hFas 和hTNFRl的表達(dá)，阻止肝細(xì)胞死亡和異常凋亡，可望在臨床上提高重型肝炎患者的存 活率和生存質(zhì)量。所以，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供構(gòu)建hfgl2凝血酶原酶、hFas和 hTNFRl的miRNA表達(dá)質(zhì)粒的方法；本發(fā)明的第二個(gè)目的是應(yīng)用hfgl2凝血酶原酶、hFas 和hTNFRl的miRNA表達(dá)質(zhì)粒特異性地抑制hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl基因 的表達(dá)，并驗(yàn)證其藥學(xué)用途。我們通過(guò)細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)，證實(shí)hfgl2凝血酶原酶、hFas和 hTNFRl的miRNA pcDNA表達(dá)質(zhì)粒特異性地抑制細(xì)胞系中相應(yīng)目的基因的表達(dá)。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人設(shè)計(jì)重型肝炎相關(guān)基因hfgl2、hFas和hTNFRl 的microRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建方法，在于采用pAd/CMV/V5-DEST載體和 hfgl2、hFas、hTNFRl 的 pcDNA 表達(dá)質(zhì)粒通過(guò) Gateway 技術(shù)，構(gòu)建 pAd_hfgl2、 pAd-hFas、pAd-hTNFRl。本發(fā)明所述的pcDNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建是將產(chǎn)生hfgl2凝血酶原酶、hFas和 hTNFRl的miRNA的雙鏈寡核苷酸分別插入microRNA的表達(dá)載體pcDNATM6.2_GW/ EmGFP-miR 中。本發(fā)明所述的寡核甘酸如下產(chǎn)生hfgl2凝血酶原酶miRNA的單鏈寡核苷酸序列為5' -TGCTGTTCTTTGAACACCTCCTCGATGTTTTGGCCACTGACTGACATCG AGGATGTTCAAAGAA-3 ‘產(chǎn)生hFas的miRNA的單鏈寡核苷酸序列為5' -TGCTGTTAAGTTGGAGATTCATGAGAGTTTTGGCCACTGACTGACTCTC ATGACTCCAACCTTA-3 ‘產(chǎn)生hTNFRl的miRNA的單鏈寡核苷酸序列為5' -TGCTGTTCAGGTGTCGATTTCCCACAGTTTTGGCCACTGACTGACTGTG GGAACGACACCTGAA-3 ‘。本發(fā)明所述的pcDNA表達(dá)質(zhì)粒，它們保藏的培養(yǎng)物名稱為大腸桿菌Top 10/ phfgl2-miRNA/ 大腸桿菌 Top 10/phTNFRl-miRNA/ 大腸桿菌 ToplO/phFas-miRNA，已 保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)分別為CCTCC NO: 207188/CCTCC NO M207189/CCTCCNO M207187,保藏日期為 2007 年 11 月 30 日。下面發(fā)明人進(jìn)一步展現(xiàn)本發(fā)明表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建的具體步驟是一、pcDNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建構(gòu)建表達(dá)hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl的miRNA pcDNA表達(dá)質(zhì)粒。1.利用Invitrogen公司miRNA設(shè)計(jì)軟件獲得針對(duì)hfg 12凝血酶原酶、hFas和 hTNFRl基因的miRNA模板，合成miRNA模板單鏈。2.將退火的hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl基因的miRNA模板雙鏈插入 miRNA 的表達(dá)載體 pcDNA 6.2-GW/EmGFP-miR。3.測(cè)序篩選未發(fā)生突變的hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl基因的miRNA表
達(dá)質(zhì)粒。二、miRNA pcDNA表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞水平試驗(yàn)分別檢測(cè)hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl的miRNA表達(dá)質(zhì)粒特異性地抑 制細(xì)胞系中hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl基因表達(dá)的效果。采用red-time PCR 和western-blot方法，從基因水平和蛋白水平驗(yàn)證hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl的 microRNA表達(dá)質(zhì)粒分別特異有效地抑制hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl基因在293T
細(xì)胞中的表達(dá)。三、miRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建利用Gateway 技術(shù)，分別將 hfgl2、hFas 和 hTNFRl 的 miRNA pcDNA 表達(dá)質(zhì)粒 和 pAd/CMV/V5-DEST 載體重組成 pAd_hfgl2、pAd-hFas、pAd-hTNFRl 腺病毒表達(dá)質(zhì) 粒。測(cè)序篩選未發(fā)生突變的pAd_hfgl2、pAd-hFas、pAd-hTNFRl腺病毒表達(dá)質(zhì)粒。


圖1是本發(fā)明實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)hFas-miRNA的干擾效果中，1.空白對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒的293T細(xì)胞)；2.陽(yáng)性對(duì)照組(僅轉(zhuǎn)染pcDNA3.0-Fas)；3.非相關(guān)對(duì)照組(pcDNA3.0-Fas+irrelevantmiRNA)；4.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hFas_miRNAl)；5.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hFas_miRNA2)；6.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hFas_miRNA3)。圖2是本發(fā)明western-blot檢測(cè)hFas-miRNA的干擾效果中，1.空白對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒的293T細(xì)胞)；2.陽(yáng)性對(duì)照組(僅轉(zhuǎn)染pcDNA3.0-Fas)；3.非相關(guān)對(duì)照組(pcDNA3.0-Fas+irrelevantmiRNA)；4.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hFas_miRNAl)；5.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hFas_miRNA2)；6.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hFas_miRNA3)。圖3是本發(fā)明實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)hfgl2_miRNA的干擾效果中，1 pcDNA3.1_hfgl2 ；2 phfg 12-miRNA 1+PcDNA3.1 -hfg 12 ；3 phfg 12-miRNA2+PcDNA3.1 -hfg 12 ；4 phfg 12-miRNA3+PcDNA3.1 -hfg 12 ；5 irrelevant miRNA+PcDNA3.1 -hfg 12 ；6 blank control。圖4是本發(fā)明western-blot檢測(cè)hfgl2_miRNA的干擾效果中，M: Marker, B Blank ；1 phfg 12-miRNA 1 +pcDNA3.1 -hfg 12 ；2 phfg 12-miRNA2+pcDNA3.1 -hfg 12 ；3 phfg 12-miRNA3+pcDNA3.1 -hfg 12 ；4 irrelevant miRNA+pcDNA3.1 -hfg 12 ；5 pcDNA3.1_hfgl2。圖5是本發(fā)明實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)hTNFRl-miRNA的干擾效果中，1.空白對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒的293T細(xì)胞)；2.陽(yáng)性對(duì)照組(僅轉(zhuǎn)染 pcDNA3.1_TNFRl)；3.非相關(guān)對(duì)照組(pcDNA3.1-TNFRl+irrelevantmiRNA)；4.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hTNFRl_miRNAl)；5.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hTNFRl_miRNA2)；6.實(shí)驗(yàn)組(pcDNA3.0-Fas+hTNFRl_miRNA3)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
本發(fā)明構(gòu)建了 hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl的miRNA表達(dá)質(zhì)粒，并在細(xì) 胞水平證實(shí)其干擾效應(yīng)，包括以下步驟(以構(gòu)建hFas-microRNA表達(dá)質(zhì)粒為例)一、pcDNA表達(dá)載體的構(gòu)建構(gòu)建hFas-miRNA 表達(dá)質(zhì)粒根據(jù) PubMed 上 hFas cDNA 序列，利用 Invitrogen 公司miRNA設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)、合成3對(duì)互補(bǔ)寡核苷酸單鏈。按照分子克隆操作過(guò)程，將ds Oligo 插入 microRNA 的表達(dá)載體 pcDNATM6.2-GW/EmGFP_miR，構(gòu)建 3 個(gè) hFas-miRNA 質(zhì)粒p-hFasmi-RNAl、p_hFasmiRNA2 和 p_hFasmiRNA3。測(cè)序篩選未發(fā)生突變的 hFas
基因的miRNA表達(dá)質(zhì)粒。二、miRNA pcDNA表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞水平試驗(yàn)研究microRNA表達(dá)體系在導(dǎo)入人體后是否能特異性結(jié)合到靶基因并有效表達(dá)，目前 國(guó)際上尚無(wú)能夠提供直接證據(jù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法，只能通過(guò)體外干預(yù)試驗(yàn)來(lái)間接反映上述 生物制劑的干預(yù)效果。發(fā)明人構(gòu)建了 hfgl2凝血酶原酶、hFas和hTNFRl的miRNA表達(dá) 質(zhì)粒，并對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)，過(guò)程如下(以hFas-miRNA表達(dá)質(zhì)粒體外抑制Fas基 因在293T細(xì)胞中的表達(dá)為例)材料miRNA 表達(dá)質(zhì)粒p-hFasmiRNAl、p_hFasmiRNA2 和 p_hFasmiRNA3，能夠表 達(dá)hFas-miRNA，用于抑制hFas基因的表達(dá)。非相關(guān)對(duì)照質(zhì)粒。pCDNA3.0-hFas hFas的真核基因表達(dá)載體，可通過(guò)轉(zhuǎn)染導(dǎo)入Fas基因使其在細(xì) 胞系中外源性表達(dá)。293T細(xì)胞人胚腎細(xì)胞。方法使用Iipofectamine2OOO 將 p-hFasmiRNAl、p_hFasmiRNA2 和 p_hFasmiRNA3 分 別與pcDNA3.0-hFaS共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，作為試驗(yàn)組；不轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒作為空白對(duì)照組； 另僅轉(zhuǎn)染pcDNA3.0-hFas作為陽(yáng)性對(duì)照組；共轉(zhuǎn)染非相關(guān)對(duì)照和pcDNA3.0_hFas作為非 相關(guān)對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后48h提取細(xì)胞RNA，real-time PCR檢測(cè)Fas基因mRNA的表達(dá)情 況。裂解細(xì)胞提取蛋白，western-blot檢測(cè)Fas蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果rea卜time PCR 禾口 western-blot 檢測(cè)到 293T 細(xì)胞內(nèi) p-hFasmiRNAl、 p-hFasmiRNA2和p_hFasmiRNA3在基因水平(附圖1)和蛋白水平對(duì)hFas的表達(dá)均具有 特異性抑制作用(附圖2)。系列體外試驗(yàn)均表明本發(fā)明涉及的新的生物制劑hfgl2凝血酶原酶、hFas和 hTNFRl的miRNA表達(dá)質(zhì)粒在細(xì)胞水平可有效地干預(yù)相應(yīng)目的基因的表達(dá)(附圖3、4、 5)。在轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞系 48 小時(shí)后，p-hfgl2miRNA 對(duì) hfgl2、p-hFasmiRNA 對(duì) hFas、 p-hTNFRI miRNA對(duì)hTNFRl在RNA水平上的抑制效率分別達(dá)到89.3 %、87.5 %和80 %。
聯(lián)合使用miRNA表達(dá)質(zhì)粒也顯示了相似的很好的干預(yù)效果。本項(xiàng)發(fā)明對(duì)于重型肝炎的治 療，尤其是在提高重型肝炎患者的存活率、延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間等方面具有深遠(yuǎn)而重大 的藥學(xué)意義。三、miRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
利用 Gateway 技術(shù)，分別將 hfgl2、hFas 和 hTNFRl 的 miRNA pcDNA 表達(dá)質(zhì)粒 和 pAd/CMV/V5-DEST 載體重組成 pAd_hfgl2、pAd-hFas、pAd-hTNFRl 腺病毒表達(dá)質(zhì) 粒。測(cè)序篩選未發(fā)生突變的pAd_hfgl2、pAd-hFas、pAd-hTNFRl腺病毒表達(dá)質(zhì)粒。
權(quán)利要求
1.重型肝炎相關(guān)基因hFasmicroRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建方法，采用pAd/ CMV/V5-DEST載體和hFas的pcDNA表達(dá)質(zhì)粒通過(guò)Gateway技術(shù)，構(gòu)建重組腺病毒 載體pAd-hFas，pcDNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建是將產(chǎn)生hFas的miRNA的雙鏈寡核苷酸插入 microRNA的表達(dá)載體pcDNA 6.2-GW/EmGFP-miR中，其特征在于所述的寡核甘酸 如下，產(chǎn)生hFas的miRNA的單鏈寡核苷酸序列為 5 ‘ -TGCTGTTAAGTTGGAGATTCATGAGAGTTTTGGCCACTG ACTGACTCTCATGACTCCAACCTTA-3 ‘。
2.按權(quán)利要求1所述的重型肝炎相關(guān)基因hFasmicroRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu) 建方法，其特征是pcDNA表達(dá)質(zhì)粒，其保藏的培養(yǎng)物名稱為大腸桿菌ToplO/ phFas-miRNA,已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO M207187。
全文摘要
重型肝炎相關(guān)基因hFas microRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建方法及其藥學(xué)用途，本發(fā)明涉及構(gòu)建了一組基因生物制劑，即構(gòu)建了重型肝炎相關(guān)的hFas基因的microRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒，其產(chǎn)生hFasmiRNA的單鏈寡核苷酸序列為5′-TGCTGTTAAGTTGGAGATTCATGAGAGTTTTGGCCACTGACTGACTCTCATGACTCCAACCTTA-3′。在細(xì)胞水平檢測(cè)microRNA干擾質(zhì)粒的有效性和特異性，建立hFasmicroRNA腺病毒表達(dá)質(zhì)粒應(yīng)用于治療重型肝炎。
文檔編號(hào)C12N15/861GK102010880SQ201010285909
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2008年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月18日
發(fā)明者嚴(yán)偉明, 習(xí)東, 寧琴, 朱傳龍, 王鳴, 羅小平, 郭健文, 高隨 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院