專利名稱：一種提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用紫外輻射提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇含量的方法。
背景技術(shù)：
紅豆杉系紅豆杉科(Taxaceae)紅豆杉屬(Taxus)的一類喬木和灌木，全世界共 11種，從歐亞大陸和北美的亞北極區(qū)到中美和東南亞的亞熱帶甚至熱帶地區(qū)均有分布。紫 杉醇是一種二萜類生物堿，經(jīng)臨床證明對治療卵巢癌、肺癌、結(jié)腸癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、黑色素 瘤、白血病等多種癌癥有特效，致使紫杉醇成為當(dāng)前最熱門的抗癌藥物之一。目前紫杉醇主要從樹皮中獲取，來源極其有限，這不僅破壞了紅豆杉資源和生態(tài) 平衡，也根本無法滿足人們對紫杉醇日益增長的需求。利用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)的方法，培養(yǎng) 紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)紫杉醇及其類似物是保護紅豆杉資源、擴大紫杉醇來源的一條有效途徑。 但是，紅豆杉細(xì)胞內(nèi)紫杉醇含量少，工業(yè)化成本高。因此，如何提高紅豆杉中紫杉醇的含量 成為人們十分管住的問題，同時也是一個難度較大的問題。植物體內(nèi)有一套防御系統(tǒng)來生成一類抗病蛋白來地獄外來病菌、害蟲和損傷等不 良環(huán)境，這些抗病蛋白可用于增加細(xì)胞壁強度，形成愈傷瘤、或作為一種溶菌酶，以及合成 植物抗生素等。植物抗生素主要包括兩大類萜類和已黃素類。紫杉醇是二萜類化合物，與 植物防衛(wèi)系統(tǒng)對抗昆蟲和病原菌侵襲產(chǎn)生植保素的合成路徑有部分重疊，作為誘導(dǎo)子的紫 外輻射能夠通過刺激植物防偽系統(tǒng)二促進(jìn)其中一些此生代謝的生物轉(zhuǎn)化。紫外輻射的主要 作用是可以調(diào)節(jié)代謝過程中的某些酶活性，并能對某些關(guān)鍵酶在轉(zhuǎn)錄水平上進(jìn)行調(diào)節(jié)。本發(fā)明的目的就是提供一種簡便、快速提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇含量 60% -140%的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，在于提供一種提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇的含量的方法，該方法可 以明顯提高紫杉醇的含量。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)。將紅豆杉細(xì)胞接種于B5固體培養(yǎng)基上，在24-26 攝氏度及黑暗條件下培養(yǎng)細(xì)胞，紅豆杉細(xì)胞生長周期為50-55天。50-55天后，收集成熟的 紅豆杉細(xì)胞，對其進(jìn)行紫外輻射。其技術(shù)特征在于培養(yǎng)50-55天的細(xì)胞收集照射紫外線。 其技術(shù)特征在于其特征在于紫外線波長為256nm-365nm，輻射時間為16-20小時。配制B5培養(yǎng)基，將紅豆杉細(xì)胞接種于B5培養(yǎng)基上，培養(yǎng)細(xì)胞的生長條件為24_26 攝氏度，暗培養(yǎng)。細(xì)胞生長至50-55天進(jìn)行紫外輻射，照射條件為紫外線波長256nm-365nm ；輻射 時間為16-20小時。紫外輻射后，將紅豆杉細(xì)胞晾曬烘干獲得成品，對干細(xì)胞采用高效液相色譜測定 紫杉醇的含量。通過對比試驗，驗證本發(fā)明的效果。本發(fā)明的效果是十分顯著的。以東北紅豆杉細(xì)胞進(jìn)行實驗，其結(jié)果是細(xì)胞中紫杉醇含量，進(jìn)行紫外輻射的細(xì)胞含量是常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞含量0. 6-1. 4倍。本發(fā)明的優(yōu)點在于，操 作簡單可靠，結(jié)果明顯，過程不污染環(huán)境。
具體實施例方式1、制備B5培養(yǎng)基。2、在B5培養(yǎng)基中接種東北紅豆杉細(xì)胞組織，接種比為細(xì)胞鮮重培養(yǎng)基= 5g ； 50ml ο3、紅豆杉細(xì)胞暗培養(yǎng)50-55天后，對其進(jìn)行紫外輻射，紫外線波長256nm-365nm ； 輻射時間為16-20小時。4、光照結(jié)束后，收集紅豆杉細(xì)胞，并干燥。5、檢測結(jié)果采用高效液相色譜的方法對不同紫外輻射時間的細(xì)胞進(jìn)行檢測，確定進(jìn)行16-20 小時輻射的紅豆杉細(xì)胞其紫杉醇含量提高量較多。表1紫外線照射實驗
權(quán)利要求
一種提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇含量的方法，是將紅豆杉細(xì)胞接種于B5固體培養(yǎng)基中，在溫度為24℃ 26℃及黑暗的條件下培養(yǎng)紅豆杉細(xì)胞；紅豆杉細(xì)胞生長周期為50 55天。50 55天后，收集成熟的紅豆杉細(xì)胞，對其進(jìn)行紫外輻射；其技術(shù)特征在于收集培養(yǎng)50 55天的紅豆杉細(xì)胞，收集起來的細(xì)胞照射紫外線。
2.按權(quán)利要求1所述的提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇含量的方法，其特征在于紫外線波長 為256nm-365nm，輻射時間為16-20小時，效果最佳。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇含量的方法。該方法將紅豆杉細(xì)胞接種在B5培養(yǎng)基中培養(yǎng)至細(xì)胞成熟，將成熟的細(xì)胞收集，進(jìn)行紫外輻射。通過紫外輻射的紅豆杉細(xì)胞，其紫杉醇含量大幅度提高，提高幅度為60％-140％。本發(fā)明采用的方法，操作簡單，成本極低，是提高紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇含量的有效方法。
文檔編號C12N13/00GK101942430SQ201010224890
公開日2011年1月12日 申請日期2010年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月13日
發(fā)明者劉漢石 申請人:大連普瑞康生物技術(shù)有限公司;陳梓;初穎