專利名稱：黃單胞菌、制備方法及其生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃單胞菌，特別涉及一種黃單胞菌Xanthomonas sp. S_96#、制備 方法及用其生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法。
背景技術(shù)：
由于微生物發(fā)酵多糖的流變學(xué)特性、耐鹽性能、增稠效果，使其應(yīng)用于油田開發(fā)方 面較之聚丙烯酰胺、CMC、變性淀粉及一些多糖植物(瓜爾膠等)有明顯的技術(shù)優(yōu)勢。其中黃 原膠是由黃單胞菌以碳水化合物為主要原料，經(jīng)發(fā)酵工程生產(chǎn)的一種作用廣泛的微生物 胞外多糖，而它作為一種卓越的油田鉆井泥漿添加劑，它的應(yīng)用被稱為70年代泥漿技術(shù)的 最新成就之一，其所獨(dú)有的在低剪切情況下的高粘度，使低濃度的鉆井液可以懸浮固體物 質(zhì)，即使在一定的高濃度酸堿鹽溶液中仍保持其性能，這一點(diǎn)尤其在海洋鉆井或其他苛刻 條件下更為重要，適用于三次采油和提高采率法采油，在美國和西歐，約有30% 40%的黃 原膠用于鉆井泥漿和三次采油。在近幾年發(fā)展起來的“聚合物驅(qū)油”新技術(shù)中，黃原膠用量 占聚合物的30% 40%左右，但由于現(xiàn)有黃單胞菌菌種耐溫性能差，生產(chǎn)的一些黃原膠產(chǎn)品 在高溫下粘度下降較快，影響了在某些方面的應(yīng)用，并且現(xiàn)有以黃原膠為主的生物多糖產(chǎn) 品也普遍存在水溶液粘度不穩(wěn)定，在高溫條件下產(chǎn)品質(zhì)量下降等問題，因此開發(fā)一種耐溫 型黃單胞菌菌種及生產(chǎn)耐高溫的微生物多糖就顯得非常重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對上述存在的缺陷而提供一種黃單胞菌Xanthomonas sp. S-96#、制備方法及用其生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，菌種耐溫性能好，生產(chǎn)出的黃原 膠多糖產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，加熱后產(chǎn)品粘度相比類似產(chǎn)品明顯升高，應(yīng)用指標(biāo)優(yōu)越，并改善了原 有類似產(chǎn)品生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)過程安全，可代替現(xiàn)有黃原膠產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于石油開發(fā)等對高 溫條件下粘度要求較高的行業(yè)。目前該黃單胞菌在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編100101，其保藏編號是CGMCCNo. 3624，菌種的拉 丁文名稱是Xanthomonas sp.，參據(jù)的微生物(株)S_96#，保藏日期是2010年02月01日。本發(fā)明所述的黃單胞菌菌株特征為在蔗糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)本菌株三天后觀 察，可形成飽滿、表面光滑、粘稠的黃色菌落，液體搖瓶培養(yǎng)三天可形成黃色粘稠的膠狀物 質(zhì)；菌株顯微鏡下鏡檢呈桿狀，有莢膜；革蘭氏染色陰性；能夠利用蔗糖，葡萄糖，淀粉水解 液作為碳源。上述黃單胞菌的制備方法，包括黃單胞菌菌懸液的制備、亞硝基胍誘變、紫外線誘 變、搖瓶篩選步驟，挑選發(fā)酵液粘度較高，耐溫性能好的菌落，分離上述黃單胞菌。上述黃單胞菌的制備方法，其詳細(xì)步驟為
Φ ·黃單胞菌菌懸液的制備將黃單胞菌接種于種子搖瓶中，在28士 1°C的條件下，振蕩培養(yǎng)18-24小時(shí)，，將種子 液多次離心并用緩沖液洗滌后制成菌懸液，其中種子培養(yǎng)基各組分按重量配比為蔗糖 0. 8-1. 2%，牛肉膏 0. 2-0. 5%，酵母粉 0. 3-0. 8%，調(diào)節(jié) PH 到 7. 0士0. 2 ；
·亞硝基胍誘變
在菌懸液中加入溶解好的亞硝基胍處理1-1. 5小時(shí)，將處理過的菌懸液多次離心洗滌 后稀釋涂布于平板上，36-38°C條件下培養(yǎng)三天；
③.紫外線誘變
挑取亞硝基胍誘變后生長健壯、良好的菌落，搖瓶培養(yǎng)后再制成菌懸液，吸取5-8ml菌 懸液置于帶有磁力攪拌器的直徑6cm的平板上，在暗光下用15W的紫外燈照射10-12min，然 后涂布于培養(yǎng)皿上，在暗光下36-38°C培養(yǎng)三天；
④.搖瓶篩選
挑選紫外燈誘變后培養(yǎng)皿上健壯飽滿、濕潤的大菌落進(jìn)行發(fā)酵搖瓶篩選，發(fā)酵搖瓶配 方蔗糖 3. 5-4. 0%，大豆蛋白 0. 5-0. 8%，CaC03 0. 2-0. 3%,余量為水，調(diào)節(jié) PH 到 7. 0士0. 2 ； 經(jīng)多次傳代后挑選粘度較高，菌苔豐滿，濕潤，有光澤，無不規(guī)則菌苔生成的菌落，分離 出上述黃單胞菌。所述的黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，包括以下步驟
(1)種子擴(kuò)大培養(yǎng)
Φ·一級種子罐
將種子培養(yǎng)基各組分按配比依次投入加好水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，采 用實(shí)消；降溫后，由接種口按0. 8-1. 2%的比例接入本發(fā)明的菌種，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽 滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
·二級種子罐
將種子培養(yǎng)基各組分按配比依次投入加好水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，采 用實(shí)消；降溫后，將無雜菌的一級種子罐中的種液按1:10比例壓入二級種子罐中，當(dāng)菌體 數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
(2)發(fā)酵按發(fā)酵培養(yǎng)基配比的要求進(jìn)行配料；將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基壓入發(fā)酵罐中，采
用實(shí)消；降溫后，在無菌條件下，將二級種子罐中的種液按1 :10比例壓入發(fā)酵罐中培養(yǎng)，當(dāng) 粘度不再升高時(shí)停罐，得到發(fā)酵液；
⑶提取將上述得到的發(fā)酵液升溫到70-80°C維持15-30min然后將發(fā)酵液降溫到
30-35°C后，加入到濃度為85-90%的酒精中，使黃原膠多糖呈纖維狀沉淀析出，用離心機(jī)分 離，真空干燥，然后粉碎包裝，得到本發(fā)明的耐溫型黃原膠多糖。所述的種子培養(yǎng)基包括按重量計(jì)的下列組分蔗糖0. 8-1. 2%，牛肉膏0. 2-0. 5%， 酵母粉0. 3-0. 8%，余量為水，調(diào)節(jié)PH到7. 0 士0. 2。
所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包括按重量計(jì)的下列組分蔗糖3. 5-4. 0%，大豆蛋白0. 5-0. 8% ，CaCO3 0. 2-0. 3%，余量為水，調(diào)節(jié) PH 到 7. 0 士 0. 2。一級種子罐、二級種子罐、發(fā)酵罐所述的實(shí)消，工藝條件為溫度119-130°c、壓力 0. 1-0. 12MPa，時(shí)間 25_60min。所述的一種黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，其詳細(xì)工藝步驟如下 U)種子擴(kuò)大培養(yǎng)
①.一級種子罐
將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖0.8-1. 2%，牛肉膏0.2-0.5%，酵母粉 0. 3-0. 8%)依次投入加好水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH到7. 0士0. 2 ；采用 實(shí)消，溫度119-130°C、壓力0. 1-0. 12MPa，時(shí)間25_60min ；降溫至28士 1°C時(shí)，在無菌條件 下，由接種口按1%的比例接入本發(fā)明的菌種，接種后菌種在28 士 1°C的條件下，培養(yǎng)18-24 小時(shí)，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
·二級種子罐
將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖0.8-1. 2%，牛肉膏0.2-0.5%，酵母粉 0. 3-0. 8%)依次投入加好水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH值到7. 0士0. 2 ； 采用實(shí)消、溫度119-130°C、壓力0. 1-0. 12MPa，時(shí)間25_60min ；降溫至28士 TC時(shí)，在無菌 條件下，將無雜菌的一級種子罐中的種液按1 :10比例壓入二級種子罐中；接種后菌種在 28士 1°C的條件下培養(yǎng)18-24小時(shí)，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
⑵發(fā)酵往發(fā)酵罐內(nèi)泵入已配好的發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量計(jì))蔗糖3. 5-4. 0%，大豆蛋白 0. 5-0. 8%，CaCO3 0. 2-0. 3%,余量為水，調(diào)節(jié) PH 值到 7. 0士0. 2，采用實(shí)消，溫度 119_130°C、 壓力0. 1-0. 12MPa，時(shí)間25-60min ；降溫至28士 1°C時(shí)，在無菌條件下，將二級種子罐中的種 液壓入發(fā)酵罐中，28士 1°C的條件下培養(yǎng)70士2小時(shí)，當(dāng)粘度不再升高時(shí)停罐，得到發(fā)酵液；
(3)提取開蒸汽將上述得到的發(fā)酵液升溫到70-80°C維持15-30min，然后開冷卻水將
發(fā)酵液降溫到30-35°C，按1 :3比例加入濃度為85-90%的酒精，混合攪拌15-30min，使 黃原膠多糖呈纖維狀沉淀析出，將沉淀物料泵入離心機(jī)進(jìn)行固液分離，分離的廢酒精液回 蒸餾塔儲罐，可以進(jìn)行多次酒精沉淀步驟進(jìn)行提純，固體物料經(jīng)擠壓脫水后在真空條件下 70-80°C干燥，然后粉碎包裝，得到本發(fā)明的黃原膠多糖。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明的黃單胞菌Xanthomonas sp. S~96#耐溫性能好，利 用本發(fā)明的菌種及方法得到的黃原膠多糖產(chǎn)品，耐溫性能較好，在高溫下粘度損失小，從而 可以充分發(fā)揮其性能優(yōu)勢，擴(kuò)大應(yīng)用領(lǐng)域和范圍，而且也解決了現(xiàn)有以黃原膠為主的生物 多糖產(chǎn)品也普遍存在水溶液粘度不穩(wěn)定，耐溫性能差，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定等問題，尤其改善了 產(chǎn)品的耐溫性，加熱后產(chǎn)品粘度相比類似產(chǎn)品明顯升高，應(yīng)用指標(biāo)優(yōu)越?？傊景l(fā)明的產(chǎn) 品可代替現(xiàn)有黃原膠產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于石油開發(fā)等對高溫條件下對粘度要求較高的行業(yè)。下述為本發(fā)明的耐溫型黃原膠多糖和現(xiàn)有黃原膠產(chǎn)品粘度參數(shù)比較，使用六速粘 度計(jì)進(jìn)行測定，測試結(jié)果如下
6
在大于90°C水浴中，加熱30士5分鐘后的測定結(jié)果
由以上兩個(gè)表格可以看出本發(fā)明的黃原膠多糖耐溫性遠(yuǎn)大于現(xiàn)有黃原膠產(chǎn)品，在加 熱過程中粘度不僅不降低，反而升高，由于其特殊的耐溫性因此可替代現(xiàn)有黃原膠產(chǎn)品應(yīng) 用于石油開采等高溫行業(yè)。


圖1所示為本發(fā)明的黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明，下面用具體實(shí)例來詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案。實(shí)施例1:
(1)耐溫型菌株的選育
①.黃單胞菌菌懸液的制備
將黃單胞菌接種于種子搖瓶中，在28士 rc的條件下，振蕩培養(yǎng)18-24小時(shí)，將種子液 多次離心并用緩沖液洗滌后制成菌懸液，其中種子培養(yǎng)基各組分按重量配比蔗糖1%，牛肉 膏0. 3%,酵母粉0. 5%,調(diào)節(jié)PH到7. 0 士 0. 2。@ .亞硝基胍誘變
在菌懸液中加入溶解好的亞硝基胍處理1-1. 5個(gè)小時(shí)，將處理過的菌懸液多次離心洗 滌后稀釋涂布于平板上，36-38 °C培養(yǎng)三天。③.紫外線誘變
挑取亞硝基胍誘變后生長健壯、良好的菌落，搖瓶培養(yǎng)后再制成菌懸液，吸取5ml菌懸 液置于帶有磁力攪拌器的直徑6cm的平板上，在暗光下用15W的紫外燈照射12min，然后涂 布于培養(yǎng)皿上，在暗光下36-38°C培養(yǎng)三天。④.搖瓶篩選
挑選紫外燈誘變后培養(yǎng)皿上健壯飽滿、濕潤的大菌落進(jìn)行發(fā)酵搖瓶篩選，發(fā)酵搖瓶配 方蔗糖3. 5%，大豆蛋白0. 5%，CaC03 0. 3%,余量為水，調(diào)節(jié)PH到7. 0士0. 2。經(jīng)多次傳代后挑選粘度較高，菌苔豐滿，濕潤，有光澤，無不規(guī)則菌苔生成的菌落， 得到本發(fā)明的黃單胞菌。實(shí)施例2
U)種子擴(kuò)大培養(yǎng)(T) · 一級種子罐
將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖1%、牛肉膏0. 3%、酵母粉0. 5%)依次投入加好 水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH到7.0士0.2 ；采用實(shí)消，溫度121°C、壓力 0. IMpa,時(shí)間45分鐘；降溫至28 士 1°C時(shí)，在無菌條件下，由接種口按1%的比例接種，接種 后菌種在28士 1°C的條件下，培養(yǎng)24小時(shí)，用生物顯微鏡檢測菌體生長情況，當(dāng)菌體數(shù)量較 多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
@) · 二級種子罐
將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖1%、牛肉膏0. 3%、酵母粉0. 5%)依次投入加好 水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH到7.0士0.2 ；采用實(shí)消、溫度121°C、壓力 0. IMpa,時(shí)間45分鐘；降溫至28士 1°C時(shí)，在無菌條件下，將無雜菌的一級種子罐中的種液 按1 :10比例壓入二級種子罐中；接種后菌種在28士 1°C的條件下培養(yǎng)24小時(shí)，用生物顯微 鏡檢測菌體生長情況，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
(2)發(fā)酵往發(fā)酵罐內(nèi)泵入已配好的發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量計(jì)):蔗糖4.0%，大豆蛋白0. 5%
，CaCO3 0.3%，余量為水，調(diào)節(jié)PH到7.0士0.2，采用實(shí)消，溫度121°C、壓力0. IMpa，時(shí)間 30分鐘；轉(zhuǎn)種降溫至28 士 1°C時(shí)，在無菌條件下，將二級種子罐中的種液壓入發(fā)酵罐中， 28士 1°C的條件下培養(yǎng)70小時(shí)，用NDJ-I粘度計(jì)測定粘度，當(dāng)粘度不再升高時(shí)停罐，得到發(fā) 酵液；
(3)提取開蒸汽將上述得到的發(fā)酵液升溫到70°C維持30min，然后開冷卻水將發(fā)酵液
降溫到35°C，按1 :3比例加入濃度為85%的酒精，混合攪拌30min，使黃原膠多糖呈纖維狀 沉淀析出，將沉淀物料泵入離心機(jī)進(jìn)行固液分離，分離的廢酒精液回蒸餾塔儲罐，可以進(jìn)行 多次酒精沉淀步驟進(jìn)行提純，固體物料經(jīng)擠壓脫水后在真空條件下80°C干燥，然后粉碎包 裝，得到本發(fā)明產(chǎn)品。
實(shí)施例3
U)種子擴(kuò)大培養(yǎng) φ.一級種子罐
將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖1. 2%、牛肉膏0. 4%、酵母粉0. 6%)依次投入加好 水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH到7. 0士0. 2 ；采用實(shí)消，溫度121°C、壓力 0. 12Mpa,時(shí)間50分鐘；降溫至28士 1°C時(shí)，在無菌條件下，由接種口按1. 2%的比例接種，接 種后菌種在28士 1°C的條件下，培養(yǎng)20小時(shí)，用生物顯微鏡檢測菌體生長情況，當(dāng)菌體數(shù)量 較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
·二級種子罐將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖1. 2%、牛肉膏0. 4%、酵母粉0. 6%)依次投入加好 水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH到7. 0士0. 2 ；采用實(shí)消、溫度121°C、壓力 0. 12Mpa,時(shí)間50分鐘；降溫至28士 1°C時(shí)，在無菌條件下，將無雜菌的一級種子罐中的種液 按1 :10比例壓入二級種子罐中；接種后菌種在28士 1°C的條件下培養(yǎng)20小時(shí)，用生物顯微 鏡檢測菌體生長情況，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；
(2)發(fā)酵往發(fā)酵罐內(nèi)泵入已配好的發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量計(jì)):蔗糖3. 5%，大豆蛋白0. 6%
，CaCO3 0.2%，余量為水，調(diào)節(jié)PH到7.0士0.2，采用實(shí)消，溫度121°C、壓力0. IMpa，時(shí)間 35分鐘；轉(zhuǎn)種降溫至28 士 1°C時(shí)，在無菌條件下，將二級種子罐中的種液壓入發(fā)酵罐中， 28士 1°C的條件下培養(yǎng)72小時(shí)，用NDJ-I粘度計(jì)測定粘度，當(dāng)粘度不再升高時(shí)停罐，得到發(fā) 酵液；
(:3)提取開蒸汽將上述得到的發(fā)酵液升溫到80°C維持25min，然后開冷卻水將發(fā)酵液
降溫到30°C，按1 :3比例加入濃度為90%的酒精，混合攪拌25min，使黃原膠多糖呈纖維狀 沉淀析出，將沉淀物料泵入離心機(jī)進(jìn)行固液分離，分離的廢酒精液回蒸餾塔儲罐，可以進(jìn)行 多次酒精沉淀步驟進(jìn)行提純，固體物料經(jīng)擠壓脫水后在真空條件下70°C干燥，然后粉碎包 裝，得到本發(fā)明產(chǎn)品。 本發(fā)明所述的具體參數(shù)可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整，并不是用來限制本發(fā)明。
權(quán)利要求
一種黃單胞菌Xanthomonas sp.S 96#，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號是CGMCCNo.3624。
2.如權(quán)利要求1所述的一種黃單胞菌的制備方法，其特征在于，包括黃單胞菌菌懸液 的制備、亞硝基胍誘變、紫外線誘變、搖瓶篩選步驟，挑選發(fā)酵液粘度較高，耐溫性能好的菌 落，分離上述黃單胞菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種黃單胞菌的制備方法，其特征在于，其詳細(xì)步驟為①.黃單胞菌菌懸液的制備將黃單胞菌接種于種子搖瓶中，在28士 1°C的條件下，振蕩培養(yǎng)18-24小時(shí)，，將種子 液多次離心并用緩沖液洗滌后制成菌懸液，其中種子培養(yǎng)基各組分按重量配比為蔗糖 0. 8-1. 2%，牛肉膏 0. 2-0. 5%，酵母粉 0. 3-0. 8%，調(diào)節(jié) PH 到 7. 0士0. 2 ；②.亞硝基胍誘變在菌懸液中加入溶解好的亞硝基胍處理1-1. 5小時(shí)，將處理過的菌懸液多次離心洗滌 后稀釋涂布于平板上，36-38°C條件下培養(yǎng)三天；③.紫外線誘變挑取亞硝基胍誘變后生長健壯、良好的菌落，搖瓶培養(yǎng)后再制成菌懸液，吸取5-8ml菌 懸液置于帶有磁力攪拌器的直徑6cm的平板上，在暗光下用15W的紫外燈照射10-12min，然 后涂布于培養(yǎng)皿上，在暗光下36-38°C培養(yǎng)三天；④.搖瓶篩選挑選紫外燈誘變后培養(yǎng)皿上健壯飽滿、濕潤的大菌落進(jìn)行發(fā)酵搖瓶篩選，發(fā)酵搖瓶配 方蔗糖 3. 5-4. 0%，大豆蛋白 0. 5-0. 8%，CaC03 0. 2-0. 3%,余量為水，調(diào)節(jié) PH 到 7. 0士0. 2 ；經(jīng)多次傳代后挑選粘度較高，菌苔豐滿，濕潤，有光澤，無不規(guī)則菌苔生成的菌落，分離 出上述黃單胞菌。
4.用權(quán)利要求1所述的黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，其特征在于，包括以 下步驟⑴種子擴(kuò)大培養(yǎng)①.一級種子罐將種子培養(yǎng)基各組分按配比依次投入加好水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，采 用實(shí)消；降溫后，由接種口按0. 8-1. 2%的比例接入本發(fā)明的菌種，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽 滿時(shí)轉(zhuǎn)種；②.二級種子罐將種子培養(yǎng)基各組分按配比依次投入加好水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，采 用實(shí)消；降溫后，將無雜菌的一級種子罐中的種液按1 :10比例壓入二級種子罐中，當(dāng)菌體 數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；⑵發(fā)酵按發(fā)酵培養(yǎng)基配比的要求進(jìn)行配料；將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基壓入發(fā)酵罐中，采 用實(shí)消；降溫后，在無菌條件下，將二級種子罐中的種液按1 :10比例壓入發(fā)酵罐中培養(yǎng)，當(dāng) 粘度不再升高時(shí)停罐，得到發(fā)酵液；⑶提取將上述得到的發(fā)酵液升溫到70-80°C維持15-30min然后將發(fā)酵液降溫到30-35°C后，加入到濃度為85-90%的酒精中，使黃原膠多糖呈纖維狀沉淀析出，用離心機(jī)分 離，真空干燥，然后粉碎包裝，得到本發(fā)明的耐溫型黃原膠多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，其特征在于 所述的種子培養(yǎng)基包括按重量計(jì)的下列組分蔗糖0. 8-1. 2%，牛肉膏0. 2-0. 5%，酵母粉 0. 3-0. 8%，余量為水，調(diào)節(jié)PH到7. 0 士0. 2。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，其特征在于 所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包括按重量計(jì)的下列組分蔗糖3. 5-4. 0%，大豆蛋白0. 5-0. 8%，CaCO3 0. 2-0. 3%，余量為水，調(diào)節(jié)PH到7. 0 士0. 2。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，其特征在 于一級種子罐、二級種子罐、發(fā)酵罐所述的實(shí)消，工藝條件為溫度119-130°C、壓力 0. 1-0. 12MPa,時(shí)間 25_60min。
8.根據(jù)權(quán)利要求4-7任一權(quán)利要求所述的一種黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方 法，其特征在于，其詳細(xì)工藝步驟如下⑴種子擴(kuò)大培養(yǎng)①.一級種子罐將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖0.8-1. 2%，牛肉膏0.2-0.5%，酵母粉 0. 3-0. 8%)依次投入加好水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH到7. 0士0. 2 ；采用 實(shí)消，溫度119-130°C、壓力0. 1-0. 12MPa，時(shí)間25_60min ；降溫至28士 1°C時(shí)，在無菌條件 下，由接種口按1%的比例接入本發(fā)明的菌種，接種后菌種在28 士 1°C的條件下，培養(yǎng)18-24 小時(shí)，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；②.二級種子罐將種子培養(yǎng)基各組分按重量配比(蔗糖0.8-1. 2%，牛肉膏0.2-0.5%，酵母粉 0. 3-0. 8%)依次投入加好水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，調(diào)節(jié)PH值到7. 0士0. 2 ； 采用實(shí)消、溫度119-130°C、壓力0. 1-0. 12MPa，時(shí)間25_60min ；降溫至28士 TC時(shí)，在無菌 條件下，將無雜菌的一級種子罐中的種液按1 :10比例壓入二級種子罐中；接種后菌種在 28士 1°C的條件下培養(yǎng)18-24小時(shí)，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時(shí)轉(zhuǎn)種；⑵發(fā)酵往發(fā)酵罐內(nèi)泵入已配好的發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量計(jì))蔗糖3. 5-4. 0%，大豆蛋白 0. 5-0. 8%，CaCO3 0. 2-0. 3%,余量為水，調(diào)節(jié) PH 值到 7. 0士0. 2，采用實(shí)消，溫度 119_130°C、 壓力0. 1-0. 12MPa，時(shí)間25-60min ；降溫至28士 1°C時(shí)，在無菌條件下，將二級種子罐中的種 液壓入發(fā)酵罐中，28士 1°C的條件下培養(yǎng)70士2小時(shí)，當(dāng)粘度不再升高時(shí)停罐，得到發(fā)酵液； 提取開蒸汽將上述得到的發(fā)酵液升溫到70-80°C維持15-30min，然后開冷卻水將 發(fā)酵液降溫到30-35°C，按1 :3比例加入濃度為85-90%的酒精，混合攪拌15-30min，使 黃原膠多糖呈纖維狀沉淀析出，將沉淀物料泵入離心機(jī)進(jìn)行固液分離，分離的廢酒精液回 蒸餾塔儲罐，可以進(jìn)行多次酒精沉淀步驟進(jìn)行提純，固體物料經(jīng)擠壓脫水后在真空條件下 70-80°C干燥，然后粉碎包裝，得到本發(fā)明的黃原膠多糖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黃單胞菌Xanthomonassp.S-96#、制備方法及用其生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，包括耐溫高粘菌株的選育、種子擴(kuò)大培養(yǎng)、發(fā)酵、提取等工藝步驟，本發(fā)明菌種耐溫性能好，生產(chǎn)出的黃原膠多糖產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，加熱后產(chǎn)品粘度相比類似產(chǎn)品明顯升高，應(yīng)用指標(biāo)優(yōu)越，并改善了原有類似產(chǎn)品生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)過程安全，可代替現(xiàn)有黃原膠產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于石油開發(fā)等對高溫條件下粘度要求較高的行業(yè)。
文檔編號C12R1/64GK101906390SQ20101013212
公開日2010年12月8日 申請日期2010年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月25日
發(fā)明者司書鋒, 孫正艷, 王新綱, 陳健 申請人:淄博中軒生化有限公司