專利名稱：一種增加人體免疫力的保健食品及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種保健食品及其制備方法，特別是涉及一種增加人體免疫力的保健 食品及其制備方法。
背景技術(shù)：
免疫功能是人體健康的基礎，免疫功能失調(diào)或低下時，會降低機體對抗感染的能 力，降低識別和清除自身衰老的組織細胞能力，降低殺傷和清除異常突變細胞在體內(nèi)的能 力，導致人體抗病力與自愈力的下降。而現(xiàn)代社會，生活節(jié)奏的加快，競爭壓力的增大，使許 多人處于緊張的工作和學習狀態(tài)，機體長期處于這種緊張狀態(tài)就會抑制免疫功能；同時，緊 張的工作和學習讓更多的人不得不食用方便快餐，造成體內(nèi)營養(yǎng)素的失衡，如果機體長期 處于這種狀態(tài)，會使機體免疫力下降，最終導致機體的亞健康狀態(tài)。隨著亞健康人群逐漸增多，不少消費者希望通過食用保健品來改善身體狀況。目 前在市場上銷售的“增強免疫力”保健品多達上千種，在27項保健品中排名第一，銷售總額 也居第一位。因此，調(diào)節(jié)機體免疫力的保健食品具有巨大市場需求量。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供一種增加人體免疫力的保健食品。本發(fā)明的另一目的是提供上述保健食品的制備方法。技術(shù)方案一種增加人體免疫力的保健食品，它包括以下重量百分比組分蜂王 漿凍干粉33 48 %，沙棘果油18 33 %，玉米油23 38 %，蜂蠟0 4 %。其中，所述蜂王漿凍干粉由蜂王漿經(jīng)冷凍干燥，研磨而成。其中，所述沙棘果油由原料沙棘果油經(jīng)真空脫氣，加C02，萃取，分離而成。制備所述保健食品的方法，包括以下步驟(1)取蜂蠟、沙棘果油、玉米油加熱熔化，攪拌混勻；
(2)取蜂王漿凍干粉過篩；(3)按配方量將過完篩的蜂王漿凍干粉和步驟(1)得到的混合物料混合，攪拌均 勻后研磨，靜置抽真空至無氣泡產(chǎn)生，加壓出料并過篩，最后裝入膠囊中。其中，步驟(2)和步驟(3)中優(yōu)選80目篩。其中，步驟(3)靜止抽真空的真空度在0. 06 0. 08Mpa。其中，步驟(3)中研磨的速度為2400 2600r/min。其中，裝入膠囊的混合物料以0. 6g為宜。有益效果本發(fā)明選用具有增強免疫力功能明確的蜂王漿凍干粉和沙棘果油作為原 料，以現(xiàn)代制劑工藝進行加工，從而達到增強機體免疫力作用，無任何毒副作用，適合長期食用。
具體實施例方式實施例1
取32 %的沙棘果油(單位重量百分數(shù)，下同)、32 %的玉米油、1 %的蜂蠟加熱熔 化，攪拌混勻，取35%的蜂王漿凍干粉過80目篩，將過完篩的蜂王漿凍干粉和沙棘果油、玉 米油、蜂蠟混合，攪拌均勻后研磨，研磨速度為2400r/min，0. 06Mpa下靜置抽真空至無氣泡 產(chǎn)生，加壓出料并過篩，最后裝入膠囊中，每粒0. 6g。實施例2 取28%的沙棘果油(單位重量百分數(shù)，下同)、30%的玉米油、4%的蜂蠟加熱熔 化，攪拌混勻，取38%的蜂王漿凍干粉過80目篩，將過完篩的蜂王漿凍干粉和沙棘果油、玉 米油、蜂蠟混合，攪拌均勻后研磨，研磨速度為2600r/min，0. 07Mpa下靜置抽真空至無氣泡 產(chǎn)生，加壓出料并過篩，最后裝入膠囊中，每粒0. 6g。實施例3 取25%的沙棘果油(單位重量百分數(shù)，下同)、30. 8%的玉米油、2. 5%的蜂蠟加熱 熔化，攪拌混勻，取41. 7 %的蜂王漿凍干粉過80目篩，將過完篩的蜂王漿凍干粉和沙棘果 油、玉米油、蜂蠟混合，攪拌均勻后研磨，研磨速度為2500r/min，0. 08Mpa下靜置抽真空至 無氣泡產(chǎn)生，加壓出料并過篩，最后裝入膠囊中，每粒0. 6g。實施例4 取24%的沙棘果油(單位重量百分數(shù)，下同)、31 %的玉米油、2 %的蜂蠟加熱熔 化，攪拌混勻，取43%的蜂王漿凍干粉過80目篩，將過完篩的蜂王漿凍干粉和沙棘果油、玉 米油、蜂蠟混合，攪拌均勻后研磨，研磨速度為2400r/min，0. 07Mpa下靜置抽真空至無氣泡 產(chǎn)生，加壓出料并過篩，最后裝入膠囊中，每粒0. 6g。實施例5 取18 %的沙棘果油(單位重量百分數(shù)，下同)、32 %的玉米油、3 %的蜂蠟加熱熔 化，攪拌混勻，取47%的蜂王漿凍干粉過80目篩，將過完篩的蜂王漿凍干粉和沙棘果油、玉 米油、蜂蠟混合，攪拌均勻后研磨，研磨速度為2600r/min，0. 08Mpa下靜置抽真空至無氣泡 產(chǎn)生，加壓出料并過篩，最后裝入膠囊中，每粒0. 6g。實施例6 本發(fā)明增加免疫力功能實驗研究1.材料1. 1樣品由無錫市天賜康生物科技有限公司提供。1. 2試劑、實驗器材及動物1. 2. 1 試劑SRBC (綿陽紅細胞)，Hank’ s液，DNFB (2,4 二硝基氟苯)，SA緩沖液，瓊脂糖，印度 墨汁，Na2C03 (碳酸鈉)，RPMI1640培養(yǎng)液，雞紅細胞懸液，生理鹽水，YAC-1細胞。以上試劑 由四川省疾病預防控制中心提供。1. 2. 2實驗器材100 u微量注射器，二氧化碳培養(yǎng)箱，電子分析天平，723分光光度儀，離心機，手 術(shù)器械。1. 2. 3實驗動物四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供的昆明種小鼠160只，全雌，體重18_22g， 生產(chǎn)許可證號為SCXK(川)2004-16SPF級；試驗動物房為屏障系統(tǒng)，使用許可證號為川實動管 SYXK (川)2008-043。溫度 20-25 °C，相對濕度 40 70 %。2.實驗方法2. 1劑量選擇受試物設400mg/kg. BW、800mg/kg. BW、1200mg/kg. Bff三個劑量組(分別相當于人 體推薦攝入量的10倍、20倍、30倍)，分別稱取10. 00g、20. 00g、30. 00g受試物加蒸餾水至 250ml混勻，冷藏保存，用完再配，另設食用植物油陰性對照組，每組40只動物。分為免疫一 組、二組、三組、四組，其中一組用于小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗；二組用于NK細 胞活性測定及淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗；三組用于抗體生成細胞實驗、血清溶血素測定和遲發(fā)型 變態(tài)反應；四組用于小鼠碳廓清實驗。小鼠按10mg/kg.BW體重一次經(jīng)口灌胃，連續(xù)給予30 天，每周稱一次體重，調(diào)整灌胃體積。2. 2實驗步驟2. 2. 1小鼠碳廓清試驗連續(xù)灌胃30天后，于小鼠尾靜脈注射用4倍生理鹽水稀 釋的印度墨汁，按0. lml/10g墨汁注入后立即計時，于注入墨汁后第2、10min分別從內(nèi)眥 靜脈叢取血20 u 1，加到2mlNa2C03溶液中，以Na2C03溶液作空白對照，用723分光光度計在 600nm處測定光密度值。取血后處死小鼠，取肝、脾稱重，計算吞噬指數(shù)。2. 2. 2小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗(半體內(nèi)法)連續(xù)灌胃30天后，每只 小鼠腹腔注射20%的雞紅細胞懸液1ml，30分鐘后，頸椎脫白處死，將其固定在鼠板上，正 中剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液1ml，平均滴于 2張載玻片上，置濕盒37°C 30分鐘，取出在生理鹽水漂洗、晾干、固定，4% GiemsaPBS染色 3分鐘，蒸餾水漂洗晾干，鏡檢。計算吞噬百分率及吞噬指數(shù)。2. 2. 3遲發(fā)型變態(tài)反應(DTH)(足跖增厚法)灌胃30天后，給小鼠腹腔注射2%壓 積SRBC(0. 2ml/每鼠)致敏4天后，測量左后足跖厚度，然后再測量部位皮下注射20% (v/ v) SRBC (20 yl/每鼠)，于注射后24h測量左后足跖厚度，同一位測量三次，取平均值，以攻 擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來表示DTH的程度。2.2.4&)1^誘導的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗(107法)首先進行脾細胞懸液的制備。 將細胞濃度調(diào)整為3X 106個/ml，然后將細胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml， 一孔加75 u IConA液，另一孔作對照，置5% C02孵箱37°C培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔 輕輕吸去上清液0. 7ml加入0. 7ml不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/ ml) 50 y/孔繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，使紫色結(jié)晶完全溶解，然 后將每孔液體移入比色杯中，用723分光光度儀于570nm波長處比色測定光密度值。2. 2. 5抗體生成細胞檢測(Jernr改良玻片法)連續(xù)灌胃30天后，每只小鼠腹腔 注射2%壓積SRBC0. 2ml，將免疫5天半后的小鼠頸椎脫臼處死，取出脾臟放在盛有Hank's 液的平皿內(nèi)，制成脾細胞懸液。將瓊脂糖配成1 %水溶液，水浴煮30min，與等量雙倍Hank’ s 液混合，分裝小試管，每管0. 5ml，再向管內(nèi)加10% (用SA緩沖液配制)壓積SRBC50iU，脾 細胞懸液各20 yl做兩個平行樣，迅速混勻后，傾倒于瓊脂糖薄層玻片上，待瓊脂凝固后， 將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1. 5h，然后將補體加入到玻片架凹 槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1. 5h，計數(shù)溶血空斑數(shù)。2.2.6血清溶血素測定(血凝法)在連續(xù)灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射2% SRBC0. 2ml免疫，繼續(xù)灌胃5天后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置lh，剝離，2000r/min離心lOmin，收集血清，用生理鹽水將血清作倍比稀釋，每份稀釋12孔，將不同稀釋度的血清 置于血凝板中，每孔100 u 1，再加入0. 5% SRBC懸液100 u 1，混勻，置濕盒37°C 3h后觀察 結(jié)果，記錄每孔的凝集程度。計算抗體積數(shù)。2. 2. 7NK細胞活性測定(乳酸脫氫酶LDH測定法)連續(xù)灌胃30天后，頸椎脫臼處 死動物，取出脾臟，撕碎，過200目篩網(wǎng)后，用Hank’ s液洗3次，用完全RPMI1640培養(yǎng)液配 成2X 107個/ml細胞懸液。將各只小鼠的細胞懸液取300 yl分3孔置于96孔培養(yǎng)板中， 每孔100 iil，每孔加靶細胞(YAC-1細胞，4 X105個/ml) 100 iil，同時做靶細胞自然釋放孔 (靶細胞100 u 1+培養(yǎng)液100 u 1)及最大釋放孔(靶細胞100 u 1+2. 5% TritonlOO yl)各 8孔，37°C 5% C02培養(yǎng)4小時，取出1500r/min離心5min。將各孔上清液100 yl置于另一 培養(yǎng)板中，每孔再加入100 ill基質(zhì)液，10分鐘后加lmol/L的HCL30iU終止反應，在490nm 處測定0D值，計算NK細胞活性率。3.試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計試驗數(shù)據(jù)采用SPSS10. 0 for Windows軟件包處理。對照組與劑量組的數(shù)據(jù)經(jīng)方 差齊性檢驗，方差齊，進行方差分析，如P值小于0. 05，則用Durmett法進行兩兩比較；若方 差不齊，則進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，仍不齊，改用秩和檢驗，如P值小于0. 05，則用Durmett’sT3法進 行兩兩比較(P > 0. 05為非顯著性差異，P < 0. 05為顯著性差異)。4.結(jié)果4. 1本發(fā)明對小鼠體重的影響見表1-4。表1各組小鼠的初始體重(X士 S) 表2各組小鼠的中期體重(X士S) 表3各組小鼠的結(jié)束體重(X士S) 表4本發(fā)明對小鼠體重增重的影響》士S) 由表1-4可見，本發(fā)明免疫一組、免疫二組、免疫三組及免疫四組小鼠的初始體重 與陰性對照組相比，經(jīng)方差齊性檢驗，方差齊(P>0. 05)，且方差分析結(jié)果(P>0. 05)，說 明各組小鼠與陰性對照組之間的初始體重是均衡的。三個劑量組小鼠試驗中期、末期的體 重以及試驗期間小鼠體重的增長與陰性對照組相比，經(jīng)統(tǒng)計學處理，無顯著性差異(P > 0. 05)，即本發(fā)明對小鼠的體重增長無影響。4. 2本發(fā)明對小鼠單核_巨噬細胞吞噬功能的影響表5本發(fā)明對小鼠單核_巨噬細胞碳廓清功能的影響》士S)
劑量(mg/kg.BW)動物數(shù)(只)吞噬指數(shù)(a)P值0105.76 士 0.460.363400105.69±1.33800105.06 士 1.241200105.88 士 1.14由表5可見，連續(xù)灌胃30天后，三個劑量組小鼠的碳廓清能力與陰性對照組相比， 經(jīng)統(tǒng)計學處理，無顯著性差異(P > 0. 05)。表6本發(fā)明對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響》士S) 由表6可見，連續(xù)灌胃30天后，三個劑量組動物的吞噬率和吞噬指數(shù)與陰性對照 組相比，經(jīng)統(tǒng)計學處理，中、高劑量組吞噬指數(shù)有顯著性差異(P < 0. 05)。由表5、表6可見，本發(fā)明對小鼠單核_巨噬細胞吞噬功能試驗結(jié)果陽性。4. 3本發(fā)明對小鼠細胞免疫的影響表7本發(fā)明對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(DTH)的影響(叉士S) 由表7可見，連續(xù)灌胃30天后，三個劑量組小鼠的足跖腫脹度與陰性對照組相比， 經(jīng)統(tǒng)計學處理，無顯著性差異(P > 0. 05)表8本發(fā)明對ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗的影響》士S) 由表8可見，連續(xù)灌胃小鼠30天后，三個劑量組小鼠的淋巴細胞增殖能力與陰性 對照相比，經(jīng)統(tǒng)計學處理，無顯著性差異(P > 0. 05)。由表7、表8可見本發(fā)明對小鼠細胞免疫試驗結(jié)果為陰性。4. 4本發(fā)明對小鼠體液免疫的影響表9本發(fā)明對小鼠抗體生成細胞的影響》士S) 由表9可見，連續(xù)灌胃30天后，三個劑量組小鼠的溶血空斑數(shù)與陰性對照相比，經(jīng) 統(tǒng)計學處理，低、中劑量組有顯著性差異(P < 0. 05)。表10本發(fā)明對小鼠血清溶血素的影響》士S) 由表10可見，連續(xù)灌胃30天后，三個劑量組小鼠的抗體積數(shù)與陰性對照組相比， 經(jīng)統(tǒng)計學處理，低劑量組有極顯著性差異(P < 0. 05)由表9、表10可見，本發(fā)明對小鼠體液免疫試驗結(jié)果呈陽性。4. 5本發(fā)明對小鼠NK細胞活性的影響表11本發(fā)明對小鼠NK細胞活性的影響(叉士S)
8
由表11可見，連續(xù)灌胃30天后，三個劑量組小鼠NK細胞活性與陰性對照相比，經(jīng) 統(tǒng)計學處理，無顯著性差異(P > 0. 05)。本發(fā)明對小鼠的NK細胞活性試驗結(jié)果顯陰性。5.總結(jié)本發(fā)明連續(xù)灌胃小鼠30天后，對小鼠體重無明顯影響；對小鼠的細胞免疫試驗結(jié) 果陰性；對小鼠的NK細胞試驗結(jié)果陰性；對小鼠的體液免疫試驗，三個劑量組的溶血空斑 數(shù)與陰性對照組比較，低、中劑量組差異均有顯著性(P < 0. 05)，試驗結(jié)果陽性；對小鼠的 單核_巨噬細胞吞噬功能試驗，三個劑量組小鼠的吞噬率和吞噬指數(shù)與陰性對照組比較， 中、高劑量組差異有顯著性(P < 0. 05)，試驗結(jié)果陽性。依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》2003年版可以判定，本發(fā)明對動物具有增加 免疫力的功能。
權(quán)利要求
一種增加人體免疫力的保健食品，其特征在于它包括以下重量百分比組分蜂王漿凍干粉33～48％，沙棘果油18～33％，玉米油23～38％，蜂蠟0～4％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種增加人體免疫力的保健食品，其特征在于所述蜂王漿凍 干粉由蜂王漿經(jīng)冷凍干燥，研磨而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種增加人體免疫力的保健食品，其特征在于所述沙棘果油 由原料沙棘果油經(jīng)真空脫氣，加C02，萃取，分離而成。
4.制備權(quán)利要求1所述的一種增加人體免疫力的保健食品的方法，其特征在于包括以 下步驟(1)取蜂蠟、沙棘果油、玉米油加熱熔化，攪拌混勻；(2)取蜂王漿凍干粉過篩；(3)按配方量將過完篩的蜂王漿凍干粉和步驟(1)得到的混合物料混合，攪拌均勻后 研磨，靜置抽真空至無氣泡產(chǎn)生，加壓出料并過篩，后裝入膠囊。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備一種增加人體免疫力的保健食品的方法，其特征在于步 驟⑵和步驟(3)中選用80目篩。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備一種增加人體免疫力的保健食品的方法，其特征在于步 驟(3)靜止抽真空的真空度在0. 06 0. 08Mpa。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備一種增加人體免疫力的保健食品的方法，其特征在于步 驟(3)中研磨的速度為2400 2600r/min。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種增加人體免疫力的保健食品及其制備方法，所述保健食品由以下重量百分比的組分組成蜂王漿凍干粉33～48％，沙棘果油18～33％，玉米油23～38％，蜂蠟0～4％。該保健食品的制備方法為將蜂蠟、沙棘果油、玉米油加熱熔化，攪拌混勻，取蜂王漿凍干粉過篩，按配方量將過完篩的蜂王漿凍干粉和蜂蠟、沙棘果油、玉米油的混合物料混合，攪拌均勻后研磨，靜置抽真空至無氣泡產(chǎn)生，加壓出料并過篩，最后裝入膠囊。本發(fā)明在增強機體免疫力作用的同時無任何毒副作用，適合長期食用。
文檔編號A23L1/29GK101856113SQ20101013071
公開日2010年10月13日 申請日期2010年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月23日
發(fā)明者張國清, 潘亞蓮 申請人:無錫市天賜康生物科技有限公司