專利名稱：一種抗生素殘留檢測系統(tǒng)及其容器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速、靈敏、便捷的檢測食品中抗生素殘留的系統(tǒng)及其容器，屬于微生物化學(xué)檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
1949年美國首次發(fā)現(xiàn)抗生素對畜禽有促生長作用，此后，許多國家將抗生素廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)，我國在20世紀(jì)50年代開始將抗生素作為飼料添加劑，其在防治動物疾病方面起到十分顯著的作用，取得了明顯的經(jīng)濟(jì)效益。但抗生素的不規(guī)范使用導(dǎo)致動物體內(nèi)藥物的滯留、蓄積，并以殘留的方式進(jìn)入人體內(nèi)和生態(tài)系統(tǒng)，給人類健康和環(huán)境帶來危害。隨著世界各國對食品安全性的重視加強，美國、歐盟等國家已相繼頒布一系列法律，禁止或限制抗生素的使用。牛奶是人們尤其是嬰幼兒的主要營養(yǎng)食品，牛奶中殘留抗生素會危害飲用者身體健康。
牛奶"無抗"在國際上是一個雷打不動的硬性市場準(zhǔn)入指標(biāo)。在歐美國家，"有抗奶"及其制品嚴(yán)禁在市場上銷售。2008年，農(nóng)業(yè)部頒發(fā)了《無公害牛奶標(biāo)準(zhǔn)》，把"無抗"列入其中，表明有關(guān)部門對"無抗奶"開始重視起來。
最近在國家新頒布的GB/T 4789.27-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗鮮乳中抗生素殘留檢驗中更是嚴(yán)格的規(guī)定了生鮮牛乳中的抗生素殘留限量，并且取消了 "無抗奶"的名稱，進(jìn)一步指向了牛奶行業(yè)中的"有抗奶"的檢測。
目前市場上出現(xiàn)的一些牛奶抗生素檢測儀，其造價成本高，不適合家庭、個人的廣泛使用。也有文獻(xiàn)報道將微生物方法與儀器分析方法相結(jié)合，用嗜熱脂肪芽孢桿菌作為指示菌，通過"阻抗分析儀"的自動檢測、分析，根據(jù)DT時間的產(chǎn)生，判斷牛奶中抗生素的殘留情況，但該方法尚在研究中，還未產(chǎn)生實質(zhì)性產(chǎn)品?，F(xiàn)在市場上的抗生素快速檢測試劑盒大多是國外進(jìn)口的設(shè)備與試劑，可以檢測內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類抗生素，但其成本很高，其他國產(chǎn)試劑盒也只能檢測內(nèi)酰胺類抗生素，可檢測的抗生素品種較少，因此，必須尋找快速、準(zhǔn)確、低成本的檢測技術(shù)，且可以檢測常用的抗生素品種，用來檢測牛奶中的抗生素是否超標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種檢測牛奶中抗生素的系統(tǒng)及其容器，可方便、快速地對市場上銷售的各種牛奶中是否含有抗生素進(jìn)行檢測，在2.5-3小時內(nèi)檢査出牛奶中所含的抗生素濃度是否超
過歐盟牛奶中抗生素要求最大殘留量(MRL)。可檢測e-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、
氨基配糖類、磺胺類及其它種類的抗生素共37種。本發(fā)明采用的技術(shù)方案
本發(fā)明提供一種用于盛放檢測培養(yǎng)基的容器，其開口端覆蓋著一層金屬薄膜，可以保持微生物的穩(wěn)定性、活性，還可防止交叉污染。
其中檢測培養(yǎng)基中接種有檢測微生物和指示劑，微生物的生長使培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化， 若樣品中存在的抗生素濃度高于檢測限，.微生物的生長受到抑制，培養(yǎng)基不發(fā)生顏色變化。
本發(fā)明對牛奶中抗生素濃度的檢測，是通過以下過程實現(xiàn)的
首先確定所需微孔數(shù)量，用刀沿微孔外側(cè)劃開金屬薄膜，取下所需數(shù)量，剩余的微孔板 需立即放回塑料袋中密封以防止微孔干結(jié)，并于4 8'C下儲存。
然后將要使用的微孔條安放到另一個空板架上，剝開微孔上的金屬薄膜，在每個微孔中 加入100)al待測牛奶樣品。
用粘膠薄膜或酶標(biāo)板條帽小心地密封微孔條，將其垂直放入已經(jīng)預(yù)熱至65'C的水浴或培 養(yǎng)器中培養(yǎng)2.5h。
從微孔底面觀察判定結(jié)果
陰性結(jié)果微孔顯示綠到黃色；陽性結(jié)果微孔顯示藍(lán)到紫色；若微孔顯示為綠到藍(lán)色 則為未知結(jié)果，表明抗生素濃度在檢測限附近，仍需繼續(xù)培養(yǎng)0.5h后再判定結(jié)果。
本發(fā)明的適用范圍快速檢測各種牛奶中抗生素濃度是否超過歐盟牛奶中抗生素要求最
大殘留量(MRL),操作簡單、快捷，檢測靈敏度高，無需專業(yè)人員操作，可以廣泛用于現(xiàn)
場樣品和大量樣品的快速檢測，'便于百姓在家庭中自行使用，也可用于工商執(zhí)法、食品安全、 市場的快速檢測。
圖表說明
圖l盛放檢測培養(yǎng)基的容器示意圖。 表l本發(fā)明可檢測的抗生素種類
表2本發(fā)明對各抗生素的檢測限與歐盟標(biāo)準(zhǔn)的最大殘留量比較.
具體實施例方式
檢測培養(yǎng)基制備的實施方式
實施例1
葡萄糖 5g/L .
蛋白胨 10g/L 瓊脂 4g/L .純水 1L 溴甲酚紫 0.01g/L
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然后接入濃度為105cfu/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬薄 膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。 實施例2
4葡萄糖 蛋白胨 瓊脂 純水
溴甲酚紫
5g/L
10g/L
4g/L
0.05g/L
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然后接入濃度為107cfii/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬薄 膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然后接入濃度為107cfu/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬 薄膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。 檢測實施方式 實施例l
如

圖1所示的一種盛放檢測培養(yǎng)基的容器，主要由以下組件組成
容器開口端101，容器封閉端102，檢測培養(yǎng)基103，金屬薄膜104。 將配制好的培養(yǎng)基裝入容器中，培養(yǎng)基體積約占容器體積的1/3，滅菌后，接入一定濃度 的嗜熱脂肪芽孢桿菌，用金屬薄膜封口后，置于4 8'C冷藏備用。 實施例2
本發(fā)明不能直接檢測酸奶等酸性物質(zhì)，如果檢測酸性物質(zhì)，應(yīng)先將pH值調(diào)整至7.0 7.2 范圍內(nèi)再進(jìn)行檢測。其他的檢測步驟如下-
1. 確定所需微孔數(shù)量，用刀沿微孔外側(cè)劃開金屬薄膜，取下所需數(shù)量，剩余的微孔板需 立即放回塑料袋中密封以防止微孔干結(jié)，并于4 8'C下儲存。
2. 將要使用的微孔條安放到另一個空板架上，剝開微孔上的金屬薄膜，在每個微孔中加 入100^1待測牛奶樣品。
3. 用粘膠薄膜或酶標(biāo)板條帽小心地密封微孔條，將其垂直放入已經(jīng)預(yù)熱至65'C的水浴 或培養(yǎng)器中培養(yǎng)2.5h。
4. 從微孔底面觀察判定結(jié)果-陰性結(jié)果綠-黃色； 陽性結(jié)果藍(lán)-紫色；
實施例3
葡萄糖 蛋白胨 瓊脂 純水
溴甲酚紫
O.lg/L
5g/L
10g/L
4g/L未知結(jié)果綠-藍(lán)色，抗生素濃度在試劑盒的檢測限附近，需繼續(xù)培養(yǎng)0.5h判定結(jié)果。 本發(fā)明可檢測的抗生素種類見表1:
抗生素種類
青霉素G氨芐西林阿莫西林苯甲異噁唑青霉素
鄰氯青霉素頭孢氨芐頭孢哌酮頭孢拉丁
頭孢匹林頭孢噻呋頭孢唑林乙氧萘(胺)青霉素
雙氯青霉素磺胺噻唑磺胺地索辛磺胺二甲瞎咬
磺胺嘧啶土霉素四環(huán)素氯四環(huán)素
泰樂菌素新霉素鏈霉素慶大霉素
雙氫鏈霉素卡那霉素林肯霉素甲氧芐氨嘧啶
氨苯砜
表1
實施例3
使用本發(fā)明的檢測系統(tǒng)，可以對食品中的e-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基配
糖類、磺胺類及其它種類的抗生素的殘留進(jìn)行檢測，檢測限如表2所示；
抗生素種類 e-內(nèi)酰胺類MRL (ppb)檢測限 (卯b) 本發(fā)明產(chǎn)品同類其他產(chǎn)品擾生素種類MRL Cppb )檢測限 (ppb) 本發(fā)明產(chǎn) 同類其他產(chǎn) 品 品
青霉素G4氨芐西林43 3
阿莫西林433苯甲異噁唑青霉 素3015 10
鄰氯青霉素303040頭孢氨芐10040 40
頭孢哌酮502020100
頭孢匹林101010io ioo
頭孢唑林502020頭孢噻啶-75
乙氧萘(胺)青霉素302020雙氯青霉素3010 5
磺胺類
摘胺噻唑1005030磺咹—甲叫A-'柳100 〗50
鍾柳磺妝地'々十l(X>50 10(1磺胺嘧啶 四環(huán)素類
氯四環(huán)素 大環(huán)內(nèi)酡類
鶴錄, 氨基配糖類 新霉素
卡麟素
其他抗生素 林i'.霉素
甲砜霉素
100
100
100
100
150
150
.幼
50
100
免 卿
鄰暨 柳 t鎖
1W) 50
750
100 5W
150
長檢i
130
實驗范W內(nèi)
750
鏈每索
大觀霉素
氨苯砜 新生萆紊
100
咖
50
200
10 0
■
700
實船范鬧內(nèi) 尖檢出
實驗范IUl'J
人w出
700
實驗范口I'J 夫檢出
表2
根據(jù)上表的檢測限與歐盟給出的最大殘留量比較，本發(fā)明產(chǎn)品的檢測精度可以滿足歐盟 標(biāo)準(zhǔn)，并且對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和氨基配糖類抗生素的檢測精度有顯著的提高，均高于現(xiàn)有 的檢測產(chǎn)品。且，使用本發(fā)明生產(chǎn)的產(chǎn)品其成本低于市場上的同類產(chǎn)品。
最后，應(yīng)當(dāng)指出，以上實施例僅是本發(fā)明較有代表性的例子。顯然，本發(fā)明的方案并不 限于上述的實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接 導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種快速檢測食品中抗生素殘留的檢測系統(tǒng)，由接種在檢測培養(yǎng)基中的檢測微生物及檢測指示劑組成，其特征在于，所述檢測微生物為嗜熱脂肪芽孢桿菌，所述指示劑為溴甲酚紫。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種快速檢測食品中抗生素殘留的檢測系統(tǒng)，其特征在于，所述的 檢測微生物的濃度為105-107cfU/ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種快速檢測食品中抗生素殘留的檢測系統(tǒng)，其特征在于，所述的 溴甲酚紫的濃度為0.01-0.1g/L。
4. 一種用于盛放檢測培養(yǎng)基的容器，該容器由開口端和封閉端組成，所述封閉端盛有檢測培 養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基占到容器總體積的1/3~1/2。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用于盛放檢測培養(yǎng)基的容器，其特征在于所述容器開口端采用 金屬薄膜封閉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種快速、靈敏、便捷的檢測食品中抗生素殘留的系統(tǒng)及其容器，屬于微生物化學(xué)檢測領(lǐng)域。該檢測系統(tǒng)由接種在檢測培養(yǎng)基中的檢測微生物和檢測指示劑組成。本發(fā)明還提供一種用于盛放檢測培養(yǎng)基的容器，該容器由開口端和封閉端組成，所述封閉端盛有檢測培養(yǎng)基，開口端用金屬薄膜封閉。使用本發(fā)明可以快速、準(zhǔn)確、低成本的檢測食品中的抗生素殘留。
文檔編號C12Q1/18GK101659984SQ20091009155
公開日2010年3月3日 申請日期2009年8月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月27日
發(fā)明者桑華春, 衛(wèi) 田 申請人:北京智云達(dá)科技有限公司