專利名稱：禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映體中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物法拆分制備手性環(huán)氧氯丙垸(epichlorohydrin,ECH)的方法， 具體涉及一種禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映體中的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
手性環(huán)氧氯丙烷是一種重要的手性醫(yī)藥中間體，如p-受體阻斷劑、L-肉堿、利萘唑 酮等多種手性藥物的合成均源自手性環(huán)氧氯丙垸。另外，鐵電液晶的合成也是以其作為 原料。手性環(huán)氧氯丙烷分別指(S)-環(huán)氧氯丙烷和(R)-環(huán)氧氯丙烷，它們兩者通常是以外消
旋體的混合形式存在，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
(R)-環(huán)氧氯丙垸 (S)-環(huán)氧氯丙烷 現(xiàn)有技術(shù)可以把手性環(huán)氧氯丙垸的制備方法主要分為三類直接合成法、外消旋體 化學(xué)拆分法以及生物法。
直接合成法主要應(yīng)用于上世紀(jì)80年代至90年代，由于其工藝路線過長，過程繁瑣，
反應(yīng)副產(chǎn)物也較多，目前已經(jīng)罕被使用。
化學(xué)拆分法是目前最常用的一種手性環(huán)氧氯丙垸制備方法?；瘜W(xué)拆分劑主要是利用
一種salen催化劑，它由salen配體和與之絡(luò)合的金屬兩部分構(gòu)成。該方法具有生產(chǎn)工藝 簡單，拆分效率高等優(yōu)點，但是由于salen催化劑使用的與之絡(luò)合的金屬多為鈷等重金 屬元素，對環(huán)境存在一定的污染。例如，每生產(chǎn)1噸的手性環(huán)氧氯丙垸，就要產(chǎn)生2噸 以上的含鈷等重金屬廢料，對環(huán)境的污染嚴(yán)重。
近年來，以酶作為催化劑制備手性環(huán)氧氯丙烷的生物法引起了人們的廣泛關(guān)注。生
物法由于其具有高度的立體選擇性、來源廣泛、生產(chǎn)成本低及綠色環(huán)保等優(yōu)點，己經(jīng)成 為了當(dāng)前不對稱合成手性環(huán)氧氯丙垸的主要方法之一。手性環(huán)氧氯丙烷的生物法主要可 以分為如下幾種方法
A、通過拆分成手性2,3-二氯-1-丙醇來制備手性環(huán)氧氯丙垸
1989年，Nakayama等人(JP 01047397)利用從假單胞菌(i^ewJowo朋;y sp.)或者 動物臟器中分離得到的脂酶(Lipase)作為生物催化劑，催化三丁酸甘油酯和外消旋的
32,3-二氯-1-丙醇的反應(yīng)，生成(S)-2，3-二氯-l-丙醇和(R)-丁酸-2,3-二氯-l-丙酯。其中 (S)-2,3-二氯-l-丙醇可以和堿反應(yīng)合成手性環(huán)氧氯丙烷。
2,3-氯-1-丙醇
O O
三丁酸甘油酯
Lip3se
(S)-2,3-氯-1-丙醇 (R)-丁酸-2,3"二氯-1-丙酯
NaOH < \ 戶，
OH -L>^/CI
CI
(S)-2,3-氯-1-丙醇 (R)-環(huán)氧氯丙垸 Kasai課題組(Agriculture Biology Chemistry, 1990， 54(12): 3185 3190; JP 02257895; Journal of Industrial Microbiology, 1992， 9: 97 101)禾!j用 一株子叚單胞菌(Pjewcsfowoww sp. 03《-29)立體選擇性地在外消旋的2,3-二氯-1-丙醇中降解掉其11型對映體，生成(8)-2，3-二氯-l-丙醇；此外，該課題組又利用一株產(chǎn)堿桿菌"/c"/扭w^ sp. DS-K-S38)降解掉 其S型對映體，生成(R)-2，3-二氯-l-丙醇(Journal of Industrial Microbiology, 1992,10: 37 43; JP 06211822; Tweede Reeks, 1997， 98: 203 213)。但是，Kasai課題組的方法原料
消耗大，有70%的底物被微生物吸收，下游分離工藝復(fù)雜，不適合工業(yè)化應(yīng)用。
ci
NaOH O.

2，3-氯-1-丙醇 ％
L>、/Cl (s)-環(huán)氧氯丙垸
(S)-2,3-氯-1-丙醇
(R)-環(huán)氧氯丙烷
B、以1，3-二氯-2-丙醇為原料直接制備手性環(huán)氧氯丙烷
1993年，日本的Fujio (JP 05219965)利用金桿菌"wm 6a"m'ww DH095)以1,3-二氯-2-丙醇作為底物生成了(R)-環(huán)氧氯丙垸；1998年，Yumine等人(JP 10210981)把 土壤桿菌UgroZ)a"m'wmra^o6ac&rDH094)中的鹵醇環(huán)氧化酶基因?qū)氪竽c桿菌中表 達，并用該酶將1，3-二氯-2-丙醇進行立體選擇性降解，制得了(S)-環(huán)氧氯丙烷；同年， Assis等人(Enzyme and Microbial Technology, 1998， 22: 545 551)發(fā)現(xiàn)節(jié)桿菌 "W/zraZ)"c加肌YM HlOa)能夠產(chǎn)生脫鹵酶來對1,3-二氯-2-丙醇進行手性拆分，生成
4(R)-環(huán)氧氯丙烷c
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C、通過脫鹵酶手性拆分外消旋2,3-二氯-l-丙醇
1999年，Spelberg等人(Tetrahedron: Asymmetry, 1999， 10: 2863 2870; EP 1158054) 發(fā)現(xiàn)了土壤桿菌Ugra6"c敏/ww AD1)產(chǎn)生的鹵醇脫鹵酶能夠脫去(11)-2,3-
二氯-l-丙醇分子上的氯原子，生成(S)-環(huán)氧氯丙垸和(S)-2，3-二氯-l-丙醇；到了 2004年， 該課題組(Tetrahedron: Asymmetry, 2004， 15: 1095 1102 )在這株土壤桿菌 "gro6acfen'wnraWo6acfef AD 1)進行拆分反應(yīng)的同時，向反應(yīng)體系中加入了 Nf離子， 成功地實現(xiàn)了環(huán)氧氯丙垸的動態(tài)動力學(xué)拆分，將另一個非目標(biāo)對映體經(jīng)酶催化后消旋 化，大大提高了原料的利用率，節(jié)約了生產(chǎn)成本。
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D、通過環(huán)氧水解酶(epoxide hydrolase)手性拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸 1991年，Weijers (Enzyme and Microbial Technology, 1991， 13:306 308)篩選出一 株諾卡氏菌(M^aW&H8)，可以直接對外消旋環(huán)氧氯丙垸進行手性拆分，在水解掉(S)-環(huán)氧氯丙垸之后，得到(R)-環(huán)氧氯丙烷對映體，該工藝簡單快捷，但最終的(R)-環(huán)氧氯 丙烷產(chǎn)率只有19%;次年，Wistuba等人(Chirality， 1992， 4: 178 184)用鼠肝酶微粒體 作為生物催化劑對一系列環(huán)氧化物進行了拆分測試，其中對環(huán)氧氯丙烷的立體選擇性不 強，所得(S)-環(huán)氧氯丙垸的e.e.o/。僅有90%，同時由于鼠肝的來源稀少，故該方法成本較 高；1994年，Matsui等人(JP 06261786)用一株節(jié)桿菌U";yokzc^" rw6e//^ ATCC 21495) 產(chǎn)的對外消旋環(huán)氧氯丙垸進行了拆分，得到(S)-環(huán)氧氯丙烷，但是其e.e.M僅有47.0^; 1996年，該課題組(JP 08256791; JP 08256792)又用分枝桿菌(Afyco6a"en'"m sp. E-l-71-2)來拆分，得到(S)-環(huán)氧氯丙垸，其e.e.Q/。提高到了 91.2%; 1997年，Weijers課 題組(Tetrahedron: Asymmetry, 1997， 8(4): 639 647)報道了膠紅酵母(及/wJo/on//" g/W/"&CIMW147)也具有拆分功能，但是由于其產(chǎn)酶量較低，故拆分效果并不理想， 最終生成的(R)-環(huán)氧氯丙垸的產(chǎn)率只有10%; 1998年，韓國的Lee課題組(Biotechnology Techniques, 1998， 12(3): 225 228)首先用一株黑曲霉(A;^g/〃w;y w/g^)對幾種環(huán)氧化物進行了拆分，其中得到(S)-環(huán)氧氯丙垸的e.e，/。僅有24。/。；次年，該課題組(Journal of Bioscience and Bioengineering， 1999, 88(3): 339 341)研究表明，該黑曲霉在多種有機溶 劑中也會顯現(xiàn)出生物活性，在有機體系中的反應(yīng)可以抑制底物環(huán)氧氯丙垸的無立體選擇 性地自發(fā)水解，最終生成(S)-環(huán)氧氯丙垸雖然e.e.y。達到100%，但是其產(chǎn)率最高只有 18%; 2004年，該課題組(BiotechnologyandBioprocessEngineering, 2004, 9:62 64; Journal of Industrial and Engineering Chemistry, 2007， 13(1): 159 162)將膠紅酵母 (及/wJwon^ g/w加&)的中的環(huán)氧水解酶基因?qū)氲疆叧嘟湍?戶/c/ /" Pastors)中表 達，增大了環(huán)氧水解酶的產(chǎn)量，雖然沒有向反應(yīng)體系中加入有機溶劑，但是由于拆分效 率的提高，反應(yīng)時間很短，環(huán)氧氯丙烷的自發(fā)水解可以忽略；同年，他們發(fā)現(xiàn)(Kongop Hwahak, 2004,15(1): 150 152)在重組體的凍干過程中加入吐溫20，會讓拆分反應(yīng)的速 率提高2.5倍，立體選擇性提高1.9倍，最終得到(R)-環(huán)氧氯丙烷的產(chǎn)率提高到了 76%; 該課題組(KongopHwahak,2004， 15(5): 528 532)還將膠紅酵母(i^offotora/ag/wri"")
的環(huán)氧水解酶的基因?qū)氲酱竽c桿菌(Esc/^7'cr似flC0//.)中，并利用表面活性劑提高了
產(chǎn)率達到34%; 丁奎嶺等人(ZL 200510023852.3)用從微生物中分離得到的環(huán)氧水解 酶ECU1001和ECU1040分別拆分得到了(S)-環(huán)氧氯丙烷和(R)-環(huán)氧氯丙烷，在反應(yīng)過程 中引入相轉(zhuǎn)移催化劑構(gòu)建微水體系，最終得到手性環(huán)氧氯丙垸的收率達到40%, e.e.% 達到99%。
OH
環(huán)氧氯丙烷
1-
epoxide hydrolase
0\ ， (S)-環(huán)氧氯丙垸 (R)-3-氯-1,2-丙二醇
0\ QH (R)-環(huán)氧氯丙烷 (S)-3-氯-1,2-丙二醇
綜合上述幾種生物拆分方法，目前外消旋環(huán)氧氯丙烷的市場價格最低，因此以外消 旋體作為原料進行手性環(huán)氧氯丙垸的制備具有較強的市場競爭力。但是，現(xiàn)有技術(shù)中均 是利用微生物發(fā)酵所產(chǎn)生的環(huán)氧水解酶來進行手性拆分且，微生物需要誘導(dǎo)才能產(chǎn)生環(huán) 氧水解酶，加之環(huán)氧水解酶的用量較大，而微生物發(fā)酵的來源既不方便也不經(jīng)濟；此外， 手性環(huán)氧氯丙烷的收率或產(chǎn)率也相對較低。因此，現(xiàn)有技術(shù)中利用環(huán)氧水解酶制備手性 環(huán)氧氯丙烷的應(yīng)用受到了極大的限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要實現(xiàn)的技術(shù)目的是提供一種拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映體中 的新應(yīng)用方法，使得該方法可以高效地立體選擇性水解外消旋環(huán)氧氯丙垸制備其單一對 映體的，以克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為
禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映體中的應(yīng)用。
具體的應(yīng)用方法包括
A、 環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備
將新鮮禽類肝臟組織剔除結(jié)締組織后用搗碎制成勻漿，用冷凍丙酮將勻漿脫水并制 備成冷凍丙酮粉后，再用乙酸乙酯對冷凍丙酮粉進行脫脂處理，最后將脫脂處理后的冷 凍丙酮粉低溫真空干燥、研碎，制備成的干燥丙酮粉即為含有環(huán)氧水解酶粗酶制劑；
B、 利用環(huán)氧水解酶粗酶制劑拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映體 將環(huán)氧水解酶粗酶制劑按0.1 30 g/L的加入量加入濃度為0.01 25 mol/L的外消
旋環(huán)氧氯丙垸底物溶液中，pH3 ll,進行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)溫度10 80°C，反應(yīng)時間0.5 150 h，反應(yīng)結(jié)束減壓蒸餾，分離得到環(huán)氧氯丙烷的手性對映體。
本發(fā)明所述的步驟B中的環(huán)氧水解酶粗酶制劑的加入量，更佳的加入量為0.5 20
g/L。
本發(fā)明所述的步驟B中的外消旋環(huán)氧氯丙垸底物溶液濃度，更佳的濃度為0.05 0.5 mol/Lo
本發(fā)明所述的步驟B中的pH值，更佳的為pH5 8。 本發(fā)明所述的步驟B中的反應(yīng)溫度，更佳的為20 6(TC。 本發(fā)明所述的禽類肝臟，包括雞肝、鴨肝、鵝肝、鴿肝。 本發(fā)明的有益效果在于
(1) 以禽類的肝臟組織制備的環(huán)氧水解酶粗酶制劑用于拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制 備手性對映體，不僅催化劑來源廣泛、制備容易，而且諸如鴨肝、鵝肝等家禽肝臟的價 格低廉，制得的酶粗酶制劑穩(wěn)定性高、易于保存，催化效率高，因此，使用禽類的肝臟 組織制備的環(huán)氧水解酶粗酶制劑可大幅度降低手性環(huán)氧氯丙烷的生產(chǎn)成本，且得到極高 的酶轉(zhuǎn)化率；
(2) 采用本發(fā)明所述的技術(shù)方案得到的環(huán)氧氯丙垸手性對映體可以通過常規(guī)的蒸 餾方法輕易地從酶轉(zhuǎn)化體系中分離，而副產(chǎn)物(R)-3-氯-l,2-丙二醇或(S)-3-氯-l，2-丙二醇
7也具有e.e.。/。在卯％以上的光學(xué)純度，可以利用其制備其它手性藥物中間體，因而整個 酶促反應(yīng)工藝基本上無廢棄物產(chǎn)生，無環(huán)境污染，催化劑價格低廉易得，具有非常良好 的工業(yè)化應(yīng)用前景，可以滿足迅速發(fā)展的醫(yī)藥工業(yè)和日用化學(xué)工業(yè)的需要。
具體實施例方式
本發(fā)明實施例中所使用的對手性對映體的測定方法為氣相色譜法，氣相色譜條件:
中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所色譜技術(shù)研究開發(fā)中心的ZKAT-Chiral B手性色譜柱， 乙醚作為溶劑，異丙醚作內(nèi)標(biāo)，汽化室150'C，柱溫10(TC， FID檢測器250 。C。 其中，產(chǎn)物手性環(huán)氧氯丙烷的轉(zhuǎn)化率的計算方法為
^W， _剩余環(huán)氧氯丙垸對映體的摩爾量 —初始環(huán)氧氯丙垸對映體的摩爾量
產(chǎn)物手性環(huán)氧氯丙垸的e.e.y。的計算方法為
M —風(fēng)
e.e.%of(R)-ECH =
或者e.e.% of (S)-ECH = Ms - A
其中，M代表手性環(huán)氧氯丙垸的摩爾量。
實施例l
A、 環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備
環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備將新鮮雞肝剔除結(jié)締組織，用組織搗碎機粉碎制成勻 漿，用2倍體積的冷凍丙酮(-20°C)將勻漿脫水，過濾去除丙酮，制備成冷凍丙酮粉。 用乙酸乙酯對冷凍丙酮粉進行脫脂處理，于35'C辜空干燥3h，研碎，制備成干燥丙酮 粉。lkg新鮮雞肝可制備210g干燥丙酮粉，并置于4t:冰箱中冷藏備用。
B、 利用環(huán)氧水解酶粗酶制劑拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映體 將0.0002moL的外消旋環(huán)氧氯丙垸溶于20mLpH值為3的乙酸鹽緩沖液中，得到
外消旋環(huán)氧氯丙垸含量為0.01 mol/L的底物溶液。將該底物溶液置于50 mL具塞錐形瓶 中，加入步驟A中所述的環(huán)氧水解酶粗酶制劑0.002 g，塞緊磨口瓶塞，于10 °C、120 r/min 的旋轉(zhuǎn)式水浴搖床上反應(yīng)0.5h。反應(yīng)結(jié)束后，過濾除去粗酶制劑，在2mmHg壓力下分 別80 'C下蒸出(S)-環(huán)氧氯丙烷和(R)-3-氯-l，2-丙二醇。用氣相色譜測試(R)-環(huán)氧氯丙垸的
8轉(zhuǎn)化率為88%,得到(S)-環(huán)氧氯丙烷的e.e.e/。為95%。
實施例2
A、 環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備
環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備將新鮮鴨肝剔除結(jié)締組織，用組織搗碎機粉碎制成勻 漿，用2倍體積的冷凍丙酮(-2(TC)將勻漿脫水，過濾去除丙酮，制備成冷凍丙酮粉。 用乙酸乙酯對冷凍丙酮粉進行脫脂處理，于4(TC真空干燥4h，研碎，制備成干燥丙酮 粉。lkg新鮮雞肝可制備220g干燥丙酮粉，并置于4'C冰箱中冷藏備用。
B、 利用環(huán)氧水解酶粗酶制劑拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映體
將0.5 moL的外消旋環(huán)氧氯丙垸溶于20 mL pH值為11的甘氨酸一氫氧化鈉緩沖液 中，得到外消旋環(huán)氧氯丙垸含量為25 mol/L的底物溶液。將該底物溶液置于50 mL具 塞錐形瓶中，加入步驟A中所述的環(huán)氧水解酶粗酶制劑0.6g，塞緊磨口瓶塞，于80'C、 120r/min的旋轉(zhuǎn)式水浴搖床上反應(yīng)150 h。反應(yīng)結(jié)束后，過濾除去粗酶制劑，在2 mmHg 壓力下分別80 'C下蒸出(S)-環(huán)氧氯丙垸和(R)-3-氯-l，2-丙二醇。用氣相色譜測試(R)-環(huán)氧 氯丙垸的轉(zhuǎn)化率為99%，得到(S)-環(huán)氧氯丙垸的".％為83%。
實施例3
A、 環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備
環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備將新鮮鵝肝剔除結(jié)締組織，用組織搗碎機粉碎制成勻 漿，用2倍體積的冷凍丙酮(-20'C)將勻漿脫水，過濾去除丙酮，制備成冷凍丙酮粉。 用乙酸乙酯對冷凍丙酮粉進行脫脂處理，于45'C真空干燥3h，研碎，制備成干燥丙酮 粉。lkg新鮮雞肝可制備210g干燥丙酮粉，并置于4"C冰箱中冷藏備用。
B、 利用環(huán)氧水解酶粗酶制劑拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映體
將0.001 moL的外消旋環(huán)氧氯丙垸溶于20 mL pH值為5的磷酸鹽緩沖液中，得到 外消旋環(huán)氧氯丙烷含量為0.05 mol/L的底物溶液。將該底物溶液置于50 mL具塞錐形瓶 中，加入步驟A中所述的環(huán)氧水解酶粗酶制劑0.01 g，塞緊磨口瓶塞，于20 °C 、 120 r/min 的旋轉(zhuǎn)式水浴搖床上反應(yīng)80h。反應(yīng)結(jié)束后，過濾除去粗酶制劑，在2mmHg壓力下分 別80 'C下蒸出(S)-環(huán)氧氯丙烷和(R)-3-氯-l，2-丙二醇。用氣相色譜測試(R)-環(huán)氧氯丙垸的 轉(zhuǎn)化率為93%，得到(S)-環(huán)氧氯丙垸的e.e /。為95%。
9實施例4
A、 環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備
環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備將新鮮鴿肝剔除結(jié)締組織，用組織搗碎機粉碎制成勻
漿，用2倍體積的冷凍丙酮(-2(TC)將勻漿脫水，過濾去除丙酮，制備成冷凍丙酮粉。 用乙酸乙酯對冷凍丙酮粉進行脫脂處理，于5(TC真空干燥2h，研碎，制備成干燥丙酮 粉。lkg新鮮雞肝可制備190g干燥丙酮粉，并置于4。C冰箱中冷藏備用。
B、 利用環(huán)氧水解酶粗酶制劑拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映體-
將0.01 moL的外消旋環(huán)氧氯丙烷溶于20 mL pH值為8的磷酸鹽緩沖液中，得到外 消旋環(huán)氧氯丙烷含量為0.5 mol/L的底物溶液。將該底物溶液置于50 mL具塞錐形瓶中， 加入步驟A中所述的環(huán)氧水解酶粗酶制劑0.4g，塞緊磨口瓶塞，于60'C、 120r/min的 旋轉(zhuǎn)式水浴搖床上反應(yīng)120 h。反應(yīng)結(jié)束后，過濾除去粗酶制劑，在2mmHg壓力下分 別80 'C下蒸出(R)-環(huán)氧氯丙垸和(S)-3-氯-l,2-丙二醇。用氣相色譜測試(S)-環(huán)氧氯丙垸的 轉(zhuǎn)化率為91%，得到(R)-環(huán)氧氯丙烷的e.e /。為97%。
10
權(quán)利要求
1、禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映體中的應(yīng)用。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映 體中的應(yīng)用，其特征在于所述的具體應(yīng)用方法為-A、 環(huán)氧水解酶粗酶制劑的制備將新鮮禽類肝臟組織剔除結(jié)締組織后用搗碎制成勾漿，用冷凍丙酮將勻漿脫 水并制備成冷凍丙酮粉后，再用乙酸乙酯對冷凍丙酮粉進行脫脂處理，最后將脫 脂處理后的冷凍丙酮粉低溫真空干燥、研碎，制備成的干燥丙酮粉即為含有環(huán)氧 水解酶粗酶制劑；B、 利用環(huán)氧水解酶粗酶制劑拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映體 將環(huán)氧水解酶粗酶制劑按0.1 30 g/L的加入量加入濃度為0.01 25 mol/L的外消旋環(huán)氧氯丙烷底物溶液中，pH3 11，反應(yīng)溫度在10 8(TC，進行轉(zhuǎn)化反 應(yīng)，反應(yīng)時間0.5 150h，反應(yīng)結(jié)束減壓蒸餾，分離得到環(huán)氧氯丙烷的手性對映 體。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映 體中的應(yīng)用，其特征在于所述的步驟B中的環(huán)氧水解酶粗酶制劑的加入量為 0.5 20g/L。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙垸制備手性對映 體中的應(yīng)用，其特征在于所述的步驟B中的外消旋環(huán)氧氯丙烷底物溶液的濃度 為0.05 0.5 mol/L。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映 體中的應(yīng)用，其特征在于所述的步驟B中的pH值為5 8。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映 體中的應(yīng)用，其特征在于所述的步驟B中的反應(yīng)溫度在20 60'C。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1至6之一所述的禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備 手性對映體中的應(yīng)用，其特征在于所述的禽類肝臟包括雞肝、鴨肝、鵝肝、鴿肝。
全文摘要
本發(fā)明涉及禽類肝臟在拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制備手性對映體中的應(yīng)用。將新鮮禽類肝臟組織剔除結(jié)締組織后用搗碎制成勻漿，用冷凍丙酮將勻漿脫水并制備成冷凍丙酮粉后，再用乙酸乙酯對冷凍丙酮粉進行脫脂處理，最后將脫脂處理后的冷凍丙酮粉低溫真空干燥、研碎，制備成的干燥丙酮粉即為含有環(huán)氧水解酶粗酶制劑；將環(huán)氧水解酶粗酶制劑按0.01～30g/L的加入量加入濃度為0.01～25mol/L的外消旋環(huán)氧氯丙烷底物溶液中，pH3～11，反應(yīng)溫度在10～80℃，進行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)時間0.5～150h，反應(yīng)結(jié)束減壓蒸餾，分離得到環(huán)氧氯丙烷的手性對映體。本發(fā)明的技術(shù)方案具有無廢棄物產(chǎn)生、無環(huán)境污染、禽類肝臟價格低廉易得，生產(chǎn)成本低等優(yōu)點。
文檔編號C12P17/02GK101580863SQ20091003272
公開日2009年11月18日 申請日期2009年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月26日
發(fā)明者凌岫泉, 盧定強, 歐陽平凱, 涂清波, 俊 王 申請人:南京工業(yè)大學(xué)