專利名稱：改良液固一步解脲支原體培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種改良液固一步解脲支原體培養(yǎng)基，特別是一種解脲脲原體和人 型支原體液固一歩法培養(yǎng)基及其制備方法。包括(1)固體培養(yǎng)基(2)液體培養(yǎng)基，其主要成分 是蛋白胨、氯酚紅、胰蛋白胨、復合生長因子、酵母浸膏、馬血清、氯化鈉、混合抗生 素、尿素、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽。該培養(yǎng)基能夠檢測生殖道支原體陽性結果， 具有指導臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。解脲支原體是人類 泌尿生殖道的條件致病性病原體，它可引起泌尿生殖道多種疾病的發(fā)生。該培養(yǎng)基采用優(yōu)質(zhì) 的支原體基礎培養(yǎng)基，富含高營養(yǎng)物和其所需的基質(zhì)(尿素)及特殊的抑菌劑，并添加氯酚 紅指示劑組成，可快速準確地檢測出臨床標本中的解脲支原體。引起非淋菌性尿道炎的支原 體有解脲支原體、人型支原體和生殖支原體。不同的支原體使用不同的培養(yǎng)基。包括液體和 固體培養(yǎng)基。檢測解脲支原體和人型支原體最可靠的方法是先接種于液體培養(yǎng)基，待有生長 后(液體顏色發(fā)生改變)，再接種于固體培養(yǎng)基上，72小時后，如無菌落生長可視為陰性。 生殖支原體主要用于液體培養(yǎng)基14天后無生長可視為陰性。檢測方法復雜、時間長、準確性 差。
背景技術：
本發(fā)明的目的在于提供一種解脲與人型支原體改良液固一步法解脲支原體培養(yǎng) 基，對泌尿生殖道標本支原體進行快速檢測，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基比較.改良液固一步法解脲支原 體培養(yǎng)基以布氏肉湯為基礎，并增加小牛血清含量;將傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的抑菌劑青霉素改為萬古 霉素、氟康唑與多粘菌素；將解脲培養(yǎng)基中的酚紅指示劑改為氯酚紅.結果改良液固一步法解 脲支原體培養(yǎng)基與其它類培養(yǎng)基相比具備下列特點改良液固一步法解脲支原體培養(yǎng)基營養(yǎng) 豐富、配制簡單、選擇性強和變色靈敏，與傳統(tǒng)培養(yǎng)基比較，檢出率高,污染小，臨床應用效果 滿意.接種樣本24小時后，即能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀察菌落生長情況，檢測 方法簡單、時間短、準確性強
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、 冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種改良液固一步法解脲支原體培養(yǎng)基。
本發(fā)明選擇的培養(yǎng)基配方如下(克/每升蒸餾水)蛋白胨9.0-10;氯酚紅0.05-0.06; 胰蛋白胨2. 5-6. 0;復合生長因子10. 0-20. 0;酵母浸膏2. 0-4. 0;無菌馬血清80-100ml氯 化鈉5.0-6.0;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑與多粘菌素)10-15ml; 尿素0.5-0.6;半 胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-4. 0;瓊脂粉(固體)14. 0-16. 0。蒸餾水加至1000。 pH6.3士0.3 (25°C)培養(yǎng)基呈橙黃色、澄清透明。
培養(yǎng)基中含有蛋白胨、酵母抽提物、馬血清、生長因子等營養(yǎng)物，并加有尿素、精氨酸底物 及酚紅指示劑；當有Uu和Mh生長時，尿素和精氨酸被分解，生成的堿性物質(zhì)引起pH值上升， 培養(yǎng)基由黃變紅。培養(yǎng)基內(nèi)加有混合抗生素，可抑制泌尿生殖道中G+、 G-細菌和真菌生長。 養(yǎng)基中不加葡萄糖，分別加入精氨酸及尿素，觀察pH變化情況。Mg不能水解精氨酸及尿素， 因此不發(fā)生pH變化。脲原體產(chǎn)生的集落稍大而呈深棕色，故甚易檢出。
解脲支原體和人型支原體將先接種于液體培養(yǎng)基，待有生長后(液體顏色發(fā)生改變)，再
3接種于固體培養(yǎng)基上，72小時后，觀察無菌落生長。而改良液固一步法，接種樣本24小時 后，即能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀察菌落生長情況，檢測方法簡單、時間短、準 確性強。人型支原體菌落則呈典型"煎蛋"樣，直徑可達200-300um。生殖道支原體集落常小得 多，且外觀很多都不典型。培養(yǎng)到的微生物需作品種鑒定，而分離過程中常規(guī)測定的某些非 特征，可能提拱線索。如由生殖泌尿道分離到的標本，產(chǎn)生堿性顏色改變而使含精氨酸的基 質(zhì)混濁，則以含人型支原體的可能性最大；在含脲基質(zhì)中產(chǎn)生類似改變，則幾可肯定為脲原 體。提高了試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性。 本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是
1) 、將蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化鈉、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽按比
例進行加溫、溶解；
2) 、將復合生長因子、瓊脂(液體基不加瓊脂)按比例加熱溶解于蒸餾水中，冷至54。C;
3) 、將溶解的i)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷卻后調(diào)rae. 1-6. 3;
4) 、加氯酚紅、分裝后，壓力蒸汽滅菌115。C， 20-30min。冷至5(TC，在無菌條件下加
馬血清、混合抗生素、尿素混合均勻；
5) 、在無菌條件下將固體基分裝試管，制備成斜面培養(yǎng)基；冷卻凝固；
6) 、在無菌條件下將液體基分裝凝固的斜面培養(yǎng)基里，每支加2ml，冷藏備用。 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)改良液固一步法解脲支原體培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富、配制簡單；(2)
選擇性強、變色靈敏、檢出率高、污染小，臨床應用效果滿意；(3)接種樣本24小時后，即 能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀察菌落生長情況，檢測方法簡單、時間短、準確性強； (4)靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明 按照下表所列數(shù)據(jù)(克/每升蒸餾水)及其所述步驟進行配置 配方一
蛋白胨9.0-10.0;氯酚紅0.05-0.06;胰蛋白胨2.5-6.0;復合生長因子10.0-20.0; 酵母浸膏2.0-4.0;無菌馬血清80-100ml氯化鈉5.0-6.0;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑 與多粘菌素)10-15ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-4. 0; 瓊脂粉(固體)14.0-16.0。蒸餾水加至1000。 pH6.3±0.3 (25°C)培養(yǎng)基呈橙黃色、澄清透 明。
配方二
蛋白胨 9.5-10.0; 氯酚紅0.05-0.06; 胰蛋白胨4.5-6.0; 復合生長因子 15.0-20.0;酵母浸膏3.0-4.0;無菌馬血清85-100ml氯化鈉5.5-6.0;混合抗生素(萬古 霉素、氟康唑與多粘菌素)12-15ml; 尿素0.5-0.6;半胱氨酸鹽酸鹽0.1-0.2;精氨酸 鹽酸鹽3.5-4.0;瓊脂粉(固體)15,0-16.0。蒸餾水加至1000。 p朋.3±0. 3 (25°C)培養(yǎng)基 呈橙黃色、澄清透明。配方三
蛋白胨9. 0-9. 5;氯酚紅0.05-0. 06;胰蛋白胨4. 5-5. 5;復合生長因子10. 0-18. 0; 酵母浸膏2.0-3.0;無菌馬血清80-90ml氯化鈉5.0-5.5;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑 與多粘菌素)10-13ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-3. 5; 瓊脂粉(固體)14.0-15.0。蒸餾水加至1000。 p朋.3士0.3 (25°C)培養(yǎng)基呈橙黃色、澄清透 明。
權利要求
1、本發(fā)明涉及一種改良液固一步解脲支原體培養(yǎng)基，特別是一種解脲脲原體和人型支原體液固一步法培養(yǎng)基包括(1)固體培養(yǎng)基(2)液體培養(yǎng)基及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸餾水)蛋白胨9.0-10；氯酚紅0.05-0.06；胰蛋白胨2.5-6.0；復合生長因子10.0-20.0；酵母浸膏2.0-4.0；無菌馬血清80-100ml氯化鈉5.0-6.0；混合抗生素(萬古霉素、氟康唑與多粘菌素)10-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸鹽酸鹽0.1-0.2；精氨酸鹽酸鹽3.0-4.0；瓊脂粉(固體)14.0-16.0；蒸餾水加至1000；pH6.3±0.3(25℃)培養(yǎng)基呈橙黃色、澄清透明。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種改良液固一步解脲支原體培養(yǎng)基，特別是一種解脲脲原體和人型支原體液固一步法培養(yǎng)基及其制備方法。其主要成分是蛋白胨、氯酚紅、胰蛋白胨、復合生長因子、酵母浸膏、馬血清、氯化鈉、混合抗生素、尿素、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽。該培養(yǎng)基能夠檢測生殖道支原體陽性結果，具有指導臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)改良液固一步法解脲支原體培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富、配制簡單；(2)選擇性強、變色靈敏、檢出率高、污染小，臨床應用效果滿意；(3)接種樣本24小時后，既能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀察菌落生長情況，檢測方法簡單、時間短、準確性強；(4)靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好。
文檔編號C12Q1/04GK101565732SQ20081009341
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月21日 優(yōu)先權日2008年4月21日
發(fā)明者奕 曲 申請人:奕 曲