專利名稱：生物發(fā)酵法工業(yè)化生產(chǎn)l-色氨酸的菌種固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物發(fā)酵的菌種培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，具體涉及生物發(fā)酵法工業(yè)化生產(chǎn)L-色氨酸的菌種固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
目前，生物發(fā)酵法生產(chǎn)L-色氨酸的研究基于實(shí)驗(yàn)室階 段，實(shí)驗(yàn)室階段的技術(shù)參數(shù)尚不能應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)，尤其 是菌種固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法將影響到L-色氨酸的生產(chǎn)率。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種生物發(fā)酵法工業(yè)化生產(chǎn)L-色氨酸的菌種固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，采用該菌種固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法得到的菌種應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)L-色氨酸，有利 于提高L-色氨酸的生產(chǎn)率。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:本明的菌種固體培養(yǎng)基由TC溶液中加入胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、瓊脂組成，最終濃度為20mg/l，培養(yǎng)基中的胰蛋白胨1%、酵母浸出粉0.5%、氯化鈉0.5%、瓊脂2.0%,其中濃度為20g/l的TC溶 液由鹽酸四環(huán)素溶解于濃度50%的乙醇溶液中制得。菌種固體培養(yǎng)方法依次包括以下步驟首先，菌種固體 培養(yǎng)基用2mo1/1的NaOH調(diào)pH為7.0分裝于10ml斜面試管 或50ml茄子瓶中，加塞包牛皮紙，121。C滅菌15分鐘，冷 卻至50-6(TC，傾斜45°攤平，待凝固放置恒溫箱培養(yǎng)；然 后，用接種環(huán)劃一環(huán)菌種直接均勻涂布在試管或茄子瓶空白 斜面上，放置37。C土1.0的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，長好后直 接上罐或放置2-5。C冰箱中備用。本發(fā)明的菌種在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，菌種來源浙江大 學(xué)，菌株是一種Escherichia coli K-12 W3110變種。本發(fā)明選用菌種在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，菌種培養(yǎng)良好， 有利于L-色氨酸的微生物發(fā)酵，提高了 L-色氨酸的生產(chǎn)率。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例，進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。應(yīng) 理解，這些實(shí)施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方 式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)例1:菌種固體培養(yǎng)基由TC溶液中加入胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、瓊脂組成，最終濃度為20mg/l，培養(yǎng) 基中胰蛋白胨1%、酵母浸出粉0.5%、氯化鈉0.5%、瓊脂 2.0%，其中濃度為20g/l的TC溶液由鹽酸四環(huán)素溶解于濃度 50%的乙醇溶液中制得。菌種固體培養(yǎng)方法:首先，菌種培養(yǎng)基用2mo1/1的NaOH 調(diào)pH為7.0分裝于10ml斜面試管中，加塞包牛皮紙，121 。C滅菌15分鐘，冷卻至50。C，傾斜45°攤平，待凝固放置 恒溫箱培養(yǎng)；然后，用接種環(huán)劃一環(huán)菌種直接均勻涂布在試 管空白斜面上，放置37。C士1.0的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，長 好后直接上罐或放置2。C冰箱中備用。實(shí)例2:菌種固體培養(yǎng)基由TC溶液中加入胰蛋白胨、 酵母浸出粉、氯化鈉、瓊脂組成，最終濃度為20mg/l，培養(yǎng) 基的胰蛋白胨1%、酵母浸出粉0.5%、氯化鈉0.5%、瓊脂 2.0%，其中濃度為20g/l的TC溶液由鹽酸四環(huán)素溶解于濃度 50%的乙醇溶液中的制得。固體菌種培養(yǎng)方法:首先，菌種培養(yǎng)基用2mo1/1的NaOH 調(diào)pH為7.0分裝于50ml茄子瓶中，加塞包牛皮紙，121°C 滅菌15分鐘，冷卻至55。C，傾斜45°攤平，待凝固放置恒 溫箱培養(yǎng)；然后，用接種環(huán)劃一環(huán)菌種直接均勻涂布在試管 或茄子瓶空白斜面上，放置37°C ±1.0的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小 時(shí)，長好后直接上罐或放置3"冰箱中備用。菌種在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，菌種來源浙江大學(xué)，菌株是 一種Escherichia coli K-12 W3110變種。實(shí)例3:菌種固體培養(yǎng)基由TC溶液中加入胰蛋白胨、 酵母浸出粉、氯化鈉、瓊脂組成，最終濃度為20mg/1，培養(yǎng) 基的胰蛋白胨1%、酵母浸出粉0.5%、氯化鈉0.5%、瓊2.0%,其中濃度為20g/l的TC溶液由鹽酸四環(huán)素溶解于濃度 50%的乙醇溶液中制得。菌種固體培養(yǎng)方法:首先，菌種培養(yǎng)基用2mo1/1的NaOH 調(diào)pH為7.0分裝于10ml斜面試管中，加塞包牛皮紙，121 。C滅菌15分鐘，冷卻至6(TC，傾斜45°攤平，待凝固放置 恒溫箱培養(yǎng)；然后，用接種環(huán)劃一環(huán)菌種直接均勻涂布在試 管空白斜面上，放置37。C士1.0的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，長 好后直接上罐或放置5"C冰箱中備用。菌種在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，菌種來源浙江大學(xué)，菌株是 一種Escherichia coli K-12 W3110變種。
權(quán)利要求
1.生物發(fā)酵法工業(yè)化生產(chǎn)L-色氨酸的菌種固體培養(yǎng)基，其特征在于菌種固體培養(yǎng)基由TC溶液中加入胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、瓊脂組成，最終濃度為20mg/l，培養(yǎng)基中胰蛋白胨的1％、酵母浸出粉0.5％、氯化鈉0.5％、瓊脂2.0％，其中濃度為20g/l的TC溶液由鹽酸四環(huán)素溶解于濃度50％的乙醇溶液中制得。
2. 生物發(fā)酵法工業(yè)化生產(chǎn)L-色氨酸的菌種固體培養(yǎng)方 法，其特征在于該培養(yǎng)方法依次包括以下步驟首先，菌種 培養(yǎng)基用2mo1/1的NaOH調(diào)pH為7.0分裝于9-10ml斜面試 管或50ml茄子瓶中，加塞包牛皮紙，121。C滅菌15分鐘， 冷卻至50-6(TC，傾斜45°攤平，待凝固放置恒溫箱培養(yǎng)； 然后，用接種環(huán)劃一環(huán)菌種直接均勻涂布在試管或茄子瓶空 白斜面上，放置37。C士1.0的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，長好后 直接上罐或放置2-5"C冰箱中備用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物發(fā)酵法工業(yè)化生產(chǎn)L-色 氨酸的菌種固體培養(yǎng)基，其特征在于菌種在固體培養(yǎng)基中 培養(yǎng)，菌種來源浙江大學(xué)，菌株是一種Escherichia coliK-12 W3110變種。
全文摘要
本發(fā)明公開了生物發(fā)酵法工業(yè)化生產(chǎn)L-色氨酸的菌種固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，菌種固體培養(yǎng)基由TC溶液中加入胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、瓊脂組成，最終濃度為20mg/l，培養(yǎng)基的胰蛋白胨1％、酵母浸出粉0.5％、氯化鈉0.5％、瓊脂2.0％，其中濃度為20g/l的TC溶液由鹽酸四環(huán)素溶解于濃度50％的乙醇溶液中的制得。菌種培養(yǎng)基用2mol/l的NaOH調(diào)pH為7.0裝于10ml斜面試管中，121℃滅菌15分鐘，冷卻至50-60℃，待凝固放置恒溫箱培養(yǎng)；用接種環(huán)劃一環(huán)菌種直接均勻涂布在試管或茄子瓶空白斜面上，放置37℃±1.0的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。本發(fā)明選用菌種在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，菌種培養(yǎng)良好，有利于L-色氨酸的微生發(fā)酵，提高了L-色氨酸的生產(chǎn)率。
文檔編號(hào)C12P13/00GK101323840SQ20081001996
公開日2008年12月17日 申請(qǐng)日期2008年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月14日
發(fā)明者李英輝 申請(qǐng)人:江蘇誠意藥業(yè)有限公司