專利名稱：：通過金耳液體發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物發(fā)酵及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體為一種通過金耳液體發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法及其用途。
背景技術(shù)：
：糖尿病是目前中老年人的常見病和多發(fā)病，由糖尿病引起的并發(fā)癥嚴重危及人們的生命健康?，F(xiàn)有西藥類降糖藥物難免有副作用，而天然中藥類降糖藥物大多數(shù)降糖不明顯，同時受物種資源的限制。而以藥用真菌發(fā)酵生產(chǎn)降糖藥物則沒有上述缺點。金耳，是一種稀有野生名貴食用菌和藥用菌。該菌屬于銀耳屬的一種真菌，學名7>e,aawra油'^w,生長在殼斗科植物腐木上。其藥用價值在《本草綱目》、《中國藥用真菌》、《中國中藥大典宗旨》和《云南食用菌》等書籍中均有詳細介紹。金耳性溫寒，味甘，能化痰，止咳，定喘，調(diào)氣，平肝陽；臨床上治神經(jīng)衰弱，肺熱，哮喘，慢性支氣管炎，高血壓，肝炎等疾病。由于金耳生長在海拔1900-3300米。不易人工栽培，資源受到限制因此金耳的液體深層發(fā)酵，具有十分廣闊的應(yīng)用前景。近年來國內(nèi)外對金耳的研究主要集中于它的馴化栽培、營養(yǎng)成分分析、液體培養(yǎng)以及菌絲體內(nèi)多糖及藥效等方面。日本kiho等(BiolPharmBull,2001,24,1400-3)和華東師范大學瞿偉菁(營養(yǎng)學報.2004,26,300-303.)等人進行了菌絲體內(nèi)多糖降血糖作用的研究，證明了其多糖可開發(fā)成預防和治療糖尿病的保健品和(或)藥品的可能性；熊耀康(浙江中醫(yī)學院學報.2000,24,71-72;浙江中醫(yī)學院學報.1999,23，50-51)報道復方金耳能提高氣管平滑肌的松弛百分率，對氣管平滑肌有松弛作用，并能延長藥物引喘的潛伏期，故復方金耳具有較強的平喘作用。同時他們證明復方金耳可提高機體免疫功能和較強的止咳作用。李秀花楊莉莉等(山西醫(yī)科大學學報.2000,31,206-207)通過實驗提出金耳濃縮液有明顯提高小鼠非特異性免疫作用，并且呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系。劉春丼(天然產(chǎn)物的研究與開發(fā).2003,15，289-292.)報道金耳菌絲發(fā)酵產(chǎn)物能明顯對小鼠體內(nèi)血栓形成有顯著的抑制作用。張志才(食品科學.2005，26(11)，145—148)詳述了利用堿水解與超濾相結(jié)合生產(chǎn)金耳菌絲體胞內(nèi)多糖的方法。張志才(天然產(chǎn)物的研究與開發(fā).2006,18,613-616.)報道了金耳發(fā)酵液不含有多糖大孔樹脂提取物物具有顯著降低鏈脲佐菌素誘導的高血糖小鼠血清中葡萄糖濃度的作用,極顯著降低果糖胺和三磷酸甘油酯水平等功效，并申請了相關(guān)專利。本發(fā)明與上述文獻或相關(guān)專利區(qū)別在于本發(fā)明側(cè)重于菌絲體液體培養(yǎng)過程中去除菌絲體后的發(fā)酵液中多糖的提取方法及其被用于生產(chǎn)降血糖產(chǎn)品或藥品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供了一種以金耳為原料進行液體深層發(fā)酵的方法，由該發(fā)酵方法制備的金耳發(fā)酵液，該發(fā)酵液中含有胞外多糖類化合物，以及可以用此發(fā)酵液和胞外多糖粗品制備具有調(diào)節(jié)血糖作用的藥物或保健食品。本發(fā)明所使用的金耳菌種可選用任意一種金耳菌種，例如云南、西藏或山西的野生金耳經(jīng)常規(guī)組織分離得到的菌種。其以金耳為出發(fā)菌株，進行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，得到含有胞外多糖的金耳發(fā)酵液；其中所述的一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為葡萄糖510，玉米粉1525，黃豆餅粉310，KH2P0436，MgS0414，豆油0.20.5，組成單位為克/升為；加水至適當體積，起始pH值為5.87.0,接種量體積百分比為510%，培養(yǎng)溫度2230°C，攪拌速率卯150轉(zhuǎn)/分鐘，通風量l:0.3l:lv八Vm，培養(yǎng)時間2472小時；所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為含大量纖維素物質(zhì)粉末2555，玉米粉1020，麩皮510，黃豆餅粉310，KH2P0424，MgS0414，CaC030.51組成單位為克/升；消泡劑0.20.5，加水至適當體積，起始pH值為5.87.0:接種量510%v/v，培養(yǎng)溫度2230。C，攪拌速率90150轉(zhuǎn)/分鐘，通風量1:0.3lv/v/m，培養(yǎng)時間120180小時。具體的，在本發(fā)明所述的發(fā)酵工藝中，其中所述的斜面培養(yǎng)基是現(xiàn)有技術(shù)中常用的斜面培養(yǎng)基，例如常用的是PDA培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基的組成和所用可參見諸葛健，王正祥，工業(yè)微生物實驗技術(shù)手冊，1994:P367。由本發(fā)明的方法獲得的金耳發(fā)酵液為淡黃色到棕色的、有一定粘度的粘稠液體，其中含有菌絲體殘渣形成的沉淀，該發(fā)酵液中胞外多糖的含量可達0.31.5克/升。在本發(fā)明的發(fā)酵工藝中，上述各發(fā)酵步驟的培養(yǎng)基使用比為所述一級種子培養(yǎng)基的使用比為當本發(fā)明上述的一級種子罐的容積為50100L時，其中裝有的一級種子培養(yǎng)基的量相應(yīng)為30~70L;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的使用比為當本發(fā)明上述的發(fā)酵罐的容積為5002000L時，其中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基的量相應(yīng)為3001400L。在本發(fā)明的金耳深層發(fā)酵工藝中，所述發(fā)酵培養(yǎng)工藝適于在500L2000L的發(fā)酵罐中進行。根據(jù)本發(fā)明所述適于在5002000L的發(fā)酵罐規(guī)模進行的發(fā)酵培養(yǎng)工藝，結(jié)合本領(lǐng)域的基本知識可以進一步根據(jù)生產(chǎn)需要擴大發(fā)酵規(guī)模，以進行工業(yè)化規(guī)模的生產(chǎn)。本發(fā)明的另一目的是提供了一種以金耳為原料通過液體深層發(fā)酵生產(chǎn)金耳胞外多糖的工藝，其特征是將上述通過金耳液體深層發(fā)酵得到的發(fā)酵液進行超濾、酒精沉淀或者濃縮酒精沉淀得到胞外多糖粗品。由此方法獲得的胞外多糖可用于生產(chǎn)具有調(diào)節(jié)血糖的藥物或保健食品。具體的，本發(fā)明制備胞外多糖的方法為將得到的含有胞外多糖的金耳發(fā)酵液離心，將離心得到的上清液超濾，濾液經(jīng)濃縮，酒精沉淀，酒精洗漆，干燥得到的胞外多糖粗品；具體包括以下步驟(1)將所述含有多糖的金耳深層發(fā)酵液經(jīng)3000rpm離心；(2)得到的上清液用0.050.15微米的膜微濾；再用分子量450010000的膜超濾；(3)真空濃縮上一步驟獲得的濾液，所得到的濃縮液經(jīng)冷凍干燥后得到金耳多糖粗品，或者上一步的超濾液用四倍酒精沉淀，沉淀物酒精洗滌后烘干，得到金耳多糖。應(yīng)用本發(fā)明上述制備胞外多糖的總收率可達0.31克/升發(fā)酵液。所得到的粗品中多糖的含量可達3060%。選取空腹血糖水平在3.56.3mmol/L范圍的正常雄性昆明小鼠，以擰檬酸緩沖液(pH4.6)滅菌后配制的4%alloxan注射液，按體重2000mg/kg劑量一次性腹腔注射造型，72小時后，選擇血糖值大于1Ommol/L的小鼠隨機分為5組，每組12只，組間差異小于0.5mmol/L，設(shè)陽性對照(I)灌胃給予生理鹽水；陽性藥物(II:二甲雙胍)劑量120mg/kg體重；金耳胞外多糖粗品治療低、中、高三種劑量組(分別為III、IV、V組)，分別以20、40、80mg/kg體重灌胃。上述試驗給藥7d后，金耳胞外多糖組與對照組相比，治療組血糖均極顯著降低(p<0.01)，可見金耳胞外多糖7d即能顯著降低高血糖小鼠血糖。本發(fā)明經(jīng)試驗研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用本發(fā)明的發(fā)酵方法生產(chǎn)的發(fā)酵液及胞外多糖經(jīng)口服途徑給予高血糖小鼠可顯著降低其血糖和果糖胺，因此證實了金耳發(fā)酵液和胞外多糖具有制備具有降血糖功能的保健飲品或藥品的用途。應(yīng)用本發(fā)明的金耳深層發(fā)酵方法，可以大規(guī)?；蚬I(yè)化生產(chǎn)金耳發(fā)酵液，以及生產(chǎn)其次生產(chǎn)品胞外多糖和含有該多糖的藥物組合物。由于該藥物組合物中所含的金耳發(fā)酵液或由該發(fā)酵液制備的胞外多糖來源于天然菌種的發(fā)酵，因此沒有任何毒副作用，從而為糖尿病患者提供了理想的藥物。具體實施例方式為了進一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案所涉及的材料及工藝，給出了下述實施例。但這些實施例不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。金耳菌種的組織分離取云南野生金耳新鮮未開傘的子實體，削去菌柄基部和菌柄外表皮，用75°/。乙醇進行子實體表面消毒后，移人超凈工作臺，紫外燈照射20min。將解剖刀在酒精燈火焰上灼燒后放人無菌水中降溫，確保解剖刀溫度不會損傷子實體組織。將子實體一分為二，在菌柄內(nèi)(柄中)、菌柄與菌蓋交界處(交界)、菌蓋和菌褶處切割表皮內(nèi)組織，黃豆大小的小塊，切割時不能切透子實體表面組織。用無菌鑷子接人試管斜面培養(yǎng)基(即為PDA培養(yǎng)基)，每種組織各接10支，25-28。C暗培養(yǎng)，每天定時觀測菌絲生長污染情況，當長至4-10天時，用PDA培養(yǎng)基試管斜面轉(zhuǎn)接。實施例1金耳發(fā)酵液的制備1、在新配制的土豆培養(yǎng)基(諸葛健，王正祥，工業(yè)微生物實驗技術(shù)手冊，1994:P367)中接入實施例1得到的金耳菌種，培養(yǎng)溫度27'C，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有60mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共5瓶)，于27。C、150轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)24小時。其中所述搖瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖5，玉米粉15，黃豆餅粉5，KH2P043，MgS041，起始pH值為6.3。2、將上述搖瓶菌種接入裝有150mL擴大培養(yǎng)基的500mL三角瓶中(共24瓶)，接種量為每500mL三角瓶接入llmL搖瓶種子，于27°C、150轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)24小時。其中所述擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖5，玉米粉15，黃豆餅粉5，KH2P043，MgS041，起始pH值為6.3。3、將上述擴大培養(yǎng)的菌種3600mL接入裝有44.9L一級種子培養(yǎng)基的75L種子罐中，種子罐中發(fā)酵液的總體為48.5L;維持罐溫27°C,罐壓0.05MPa，攪拌速率120轉(zhuǎn)每分鐘，通風量1:0.6v/v/m，發(fā)酵時間85小時。其中種子罐中的一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖5，玉米粉15，黃豆餅粉8，KH2P043，MgS04l，消泡劑0.35，起始pH值為6.3。4、將48.5L—級種子菌種接入裝有600L發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOOL發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為648.5L。維持罐溫27'C，罐壓0.05MPa，攪拌速率100轉(zhuǎn)每分鐘，通風量1:0.5v/v/m，發(fā)酵時間144小時。其中發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖50，玉米粉IO,麩皮10，黃豆餅粉8，KH2P042，MgS041，CaC031，，消泡劑0.35，起始pH值為6.0。經(jīng)上述步驟后得到金耳發(fā)酵液，該發(fā)酵液桔黃色，具有香味，胞外多糖含量為1.5g/L，該發(fā)酵液菌絲體經(jīng)水洗、烘干，得干菌絲體，重為18Kg，實施例2金耳發(fā)酵液和胞外多糖粗品的制備此實施例所用的菌種為實施例1得到的菌種。1、在新配制的PDA培養(yǎng)基(諸葛健，王正祥，工業(yè)微生物實驗技術(shù)手冊，1994:P367)中接入組織分離法得到的金耳菌種，培養(yǎng)溫度25°C，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共3瓶)，22°C、120轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)36小時。2、將此搖瓶菌種接入裝有150mL擴大培養(yǎng)基的500mL三角瓶中(共10瓶)，接種量為每500mL三角瓶接入15mL搖瓶種子，25°C、120轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)36小時。3、將此擴大培養(yǎng)的菌種1500mL接入裝有28.5L—級種子培養(yǎng)基的50L種子罐中，種子罐中發(fā)酵液的總體為30L;維持罐溫25'C，罐壓0.05MPa，攪拌速率90轉(zhuǎn)每分鐘，通風量1:1v/v/m，發(fā)酵時間90小時。4、將30L—級種子菌種接入裝有320L發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為350L;維持罐溫25°C，罐壓0.05MPa，攪拌速率90轉(zhuǎn)每分鐘，通風量1:0.8Wv/m，發(fā)酵時間180小時，得到金耳發(fā)酵液。該發(fā)酵液為金耳保健飲品，菌絲體干重0.63Kg，該發(fā)酵液對胞外多糖含量為0.8g/L。上述步驟使用的各種培養(yǎng)基的配方如下?lián)u瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖5，玉米粉15，黃豆餅粉5，KH2P043，MgS041，起始pH值為6.3。一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖10，玉米粉10，黃豆餅粉8，KH2P043，MgS04l，消泡劑0.35，起始pH值為5.8。發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖50，玉米粉IO，麩皮15，黃豆餅粉8，KH2P042'MgS04l，CaC031，消泡劑0.35，起始pH值為6.0。5、將實施例2得到的發(fā)酵液，經(jīng)3000rpm離心30分鐘后，上清液用非極性大孔樹脂吸附吸附，流速為1/20柱體積/min，吸附結(jié)束后樹脂柱用大量水沖洗至無色后，用50%乙醇溶液洗脫，洗脫液經(jīng)真空濃縮，濃縮液冷凍干燥得到胞外多糖粗品，其中所含成分及含量類似于實施例3的胞外多糖粗品。最終獲得的胞外多糖類粗品得率為0.42克/升發(fā)酵液和胞外多糖粗品對體外非酶糖基化(AGEs)的抑制率的測試方法同實施例3。實施例3金耳發(fā)酵液和胞外多糖粗品的制備此實施例所用的菌種為實施例1得到的菌種。1、在新配制的PDA培養(yǎng)基(諸葛健，王正祥，工業(yè)微生物實驗技術(shù)手冊，1994:P367)中接入實施例l得到的金耳菌種，培養(yǎng)溫度25'C，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共3瓶)，22°C、120轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)36小時。2、將上述搖瓶菌種接入裝有150mL擴大培養(yǎng)基的500mL三角瓶中(共10瓶)，接種量為每500mL三角瓶接入15mL搖瓶種子，25°C、120轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)36小時。3、將上述擴大培養(yǎng)的菌種1500mL接入裝有28.5L—級種子培養(yǎng)基的50L種子罐中，種子罐中發(fā)酵液的總體為30L;維持罐溫25。C，罐壓0.05MPa，攪拌速率90轉(zhuǎn)每分鐘，通風量1:1v/v/m，發(fā)酵時間90小時。4、將30L上述一級種子菌種接入裝有320L發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為350L;維持罐溫25'C，罐壓0.05MPa，攪拌速率90轉(zhuǎn)每分鐘，通風量1:0.8v/v/m，發(fā)酵時間180小時。得到發(fā)酵液，該發(fā)酵液為金耳保健飲品，菌絲體干重7.35Kg。上述各步驟使用的培養(yǎng)基的配方如下-搖瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖5，玉米粉15，黃豆餅粉5，KH2P043，MgS041，起始pH值為6.3。擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖IO，玉米粉IO，黃豆餅粉5，KH2P043，MgS041，起始pH值為5.8。一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖10，玉米粉10，黃豆餅粉8，KH2P043，MgS04l，消泡劑0.35，起始pH值為5.8。發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)含大量纖維素物質(zhì)粉末50，玉米粉10，麩皮15,黃豆餅粉8，KH2P042，MgS04l，CaC031，消泡劑0.35，起始pH值為6.0。將上述發(fā)酵液經(jīng)3000rpm離心10分鐘；得到的上清液用0.050.15微米的膜微濾，收集濾液，再用分子量450010000的膜超濾濃縮；濃縮液進一步真空濃縮，所得到的濃縮液，冷凍千燥后得到金耳多糖粗品，或者將實施例3含有金耳多糖的金耳深層發(fā)酵液經(jīng)3000rpm離心IO分鐘；上清液用四倍酒精沉淀，沉淀物酒精洗滌后烘千，得到金耳多糖。所得到的金耳發(fā)酵液中的胞外多糖含量可35%;應(yīng)用本發(fā)明上述制備胞外多糖的總收率可達0.5克/升發(fā)酵液。。實施例4金耳發(fā)酵液的胞外多糖類組合物降低四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠血糖試驗。實驗動物昆明小白鼠，雄性，體重為21-26g，由中科院上海實驗動物中心提供。糖尿病小鼠模型制備雄性小鼠禁食24小時后，腹腔注射160-200ug/kg四氧嘧啶造模型，5天后禁食3-5小時，測血糖，血糖值〉10mmol/l為實驗性糖尿病模型鼠。實驗?zāi)Ｐ褪蟀唇?-5小時的血糖水平隨機分組，分為一個模型對照組和3個試驗組，試驗組分四個劑量(低劑量濃度為50mg/100mL，中劑量濃度為100mg/100mL，高劑量濃度為200mg/100mL)和陽性藥物(二甲雙胍，100mg/100mL)試驗組按照劑量標準分別灌胃，對照組灌以自來水。連續(xù)給予受試物30天，測空腹血糖值。三個實施例制得的發(fā)酵液或胞外多糖粗品降血糖試驗結(jié)果(下表)顯示中劑量組及高劑量組血糖值顯著低于與對照組的血糖值(P〈0.05或P<0.01)，低劑量組盡管低于對照組，但是無顯著性(P>0.05)。這顯示金耳胞外多糖具有降低四氧嘧啶誘導的糖尿病鼠血糖的作用。表不同實施例產(chǎn)品降血糖試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上已詳細描述了本發(fā)明的實施方案，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說很顯然可以做很多改進和變化而不會背離本發(fā)明的基本精神。所有這些變化和改進都在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、通過金耳液體發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法，其特征是以金耳為出發(fā)菌株，進行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，得到含有胞外多糖的金耳發(fā)酵液；其中所述的一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為葡萄糖5～10，玉米粉15～25，黃豆餅粉3～10，KH2PO43～6，MgSO41～4，豆油0.2～0.5，組成單位為克/升為；加水至適當體積，起始pH值為5.8～7.0，接種量體積百分比為5～10％，培養(yǎng)溫度22～30℃，攪拌速率90～150轉(zhuǎn)/分鐘，通風量1∶0.3～1∶1v/v/m，培養(yǎng)時間24～72小時；所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為含大量纖維素物質(zhì)粉末25～55，玉米粉10～20，麩皮5～10，黃豆餅粉3～10，KH2PO42～4，MgSO41～4，CaCO30.5～1組成單位為克/升；消泡劑0.2～0.5，加水至適當體積，起始pH值為5.8～7.0；接種量5～10％v/v，培養(yǎng)溫度22～30℃，攪拌速率90～150轉(zhuǎn)/分鐘，通風量1∶0.3～1v/v/m，培養(yǎng)時間120～180小時。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過金耳液體深層發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法，其特征是將得到的含有胞外多糖的金耳發(fā)酵液離心，將離心得到的上清液超濾，濾液經(jīng)濃縮，酒精沉淀，酒精洗滌，干燥得到的胞外多糖粗品；具體包括以下步驟(1)將所述含有多糖的金耳發(fā)酵液經(jīng)3000rpm離心；(2)得到的上清液用0.050.15微米的膜微濾；再用分子量450010000的膜超濾；(3)真空濃縮上一步驟獲得的濾液，所得到的濃縮液經(jīng)冷凍干燥后得到金耳多糖粗品，或者上一步的超濾液用四倍酒精沉淀，沉淀物酒精洗滌后烘千，得到金耳多糖。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過金耳液體深層發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法，其特征是上述各發(fā)酵步驟的培養(yǎng)基使用比為所述一級種子培養(yǎng)基的使用比為當上述的一級種子罐的容積為50100L時，其中裝有的一級種子培養(yǎng)基的量相應(yīng)為3070L;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的使用比為當上述的發(fā)酵罐的容積為5002000L時，其中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基的量相應(yīng)為3001400L。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過金耳液體深層發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法，其特征是金耳深層發(fā)酵工藝中，所述發(fā)酵培養(yǎng)工藝適于在500L2000L的發(fā)酵罐中進行。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2制備得到的胞外多糖的用途，其特征是用于制備預防或治療糖尿病的藥物或保健品。全文摘要本發(fā)明涉及生物發(fā)酵及醫(yī)藥領(lǐng)域，為一種通過金耳液體發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法以及用途。本發(fā)明以金耳為出發(fā)菌株，進行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，得到含有胞外多糖的金耳發(fā)酵液。通過對金耳液體深層發(fā)酵得到的發(fā)酵液進行超濾、酒精沉淀或者濃縮酒精沉淀得到胞外多糖粗品。其中胞外多糖的總收率可達0.3～1克/升發(fā)酵液，所獲得的胞外多糖純度在30～60％。由此方法獲得的胞外多糖可用于生產(chǎn)具有調(diào)節(jié)血糖的藥物或保健食品。文檔編號C12P19/00GK101182562SQ20071019017公開日2008年5月21日申請日期2007年11月20日優(yōu)先權(quán)日2007年11月20日發(fā)明者吳其飛,崔鳳杰,張志才,管國強,香肖,錢靜亞,黃達明申請人:江蘇大學