專利名稱：竹黃菌發(fā)酵制備天然蒽醌類色素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體的說，本發(fā)明涉及竹黃菌的液體深層發(fā)酵技術(shù)，以及應(yīng)用該發(fā)酵技術(shù)制備發(fā)酵液和式(I)的天然蒽醌類色素1，5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌的方法。本發(fā)明還涉及由該工藝制備的竹黃菌發(fā)酵液和式(I)的蒽醌類色素。
本發(fā)明首次實現(xiàn)了由竹黃菌發(fā)酵技術(shù)制備天然色素，對于竹黃的產(chǎn)業(yè)開發(fā)具有重要的意義。
背景技術(shù)：
色素也稱著色劑，以食品著色為主要目的的食品添加劑稱著色劑。由于來源不同，一般分為天然色素和合成色素兩大類。合成色素的優(yōu)點是顏色鮮艷，著色力強，不易褪色，用量較低，性能穩(wěn)定，但由于合成色素主要屬于苯胺類色素，其中有的在人體內(nèi)可以形成致癌物質(zhì)β-萘胺和α-氯基萘酚。因而天然色素開始重新為人們所重視。
隨著人們崇尚天然，追求健康和安全第一等生活方面的要求。食用天然色素的發(fā)展迅速。據(jù)資料統(tǒng)計，1971-1981年世界公開發(fā)表的食用色素專利數(shù)為126個，其中87.5％是食用天然色素。
食用天然色素迅猛發(fā)展，除了由于合成色素本身存在的安全性問題外，食用天然色素重新被人們所重視，還主要因為它具有以下的優(yōu)點(1)絕大多數(shù)天然色素?zé)o毒和無副作用，安全性高。
(2)很多天然色素中含有人體必需的營養(yǎng)物質(zhì)唯或其本身就是維生素或具有維生素性質(zhì)的物質(zhì)。如核黃素，β-胡蘿卜素等。
(3)有的天然色素具有一定的藥理功效，對某些疾病有預(yù)防治療作用，如蕓香苷天然食用黃色素具有使人維持毛細(xì)管正常抵抗能力和防止動脈硬化等功能，在醫(yī)學(xué)上一直作為治療心血管系統(tǒng)疾病的輔助藥物和營養(yǎng)增補劑。
(4)天然色素的著色色調(diào)比較自然，更接近于天然物質(zhì)的顏色。
食用天然色素的獲得或生產(chǎn)主要有三條途徑一是直接提取，二是人工合成，三是利用生物技術(shù)生產(chǎn)。為此，人們在努力去尋找新的天然色素資源，主要集中在動植物，礦物質(zhì)及微生物等方面。目前絕大多數(shù)品種的天然色素是采取直接提取的方法生產(chǎn)的。人工合成的方法只能生產(chǎn)極個別的具有天然色素化學(xué)組成和分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，如胡蘿卜素等。由于生物合成代謝的復(fù)雜性，許多天然色素物質(zhì)還難以在人工控制下化學(xué)合成，生產(chǎn)受到極大的限制。
近年來隨著生物技術(shù)的發(fā)展，利用生物技術(shù)生產(chǎn)天然色素已為人們開闊了廣泛的領(lǐng)域。利用微生物發(fā)酵的方法生產(chǎn)紅曲色素，類胡蘿卜素等多種天然色素已成為現(xiàn)實。目前也有人在研究利用植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)合成技術(shù)來生產(chǎn)食品添加劑。其中包括天然色素的生產(chǎn)，特別是基因工程技術(shù)的運用，使得該領(lǐng)域的研究充滿了誘人的前景。天然色素一般都是植物或微生物的次級代謝產(chǎn)物，含量很低。通過生物技術(shù)手段和措施提高產(chǎn)量也是人們研究的內(nèi)容之一。甚至有人在研究構(gòu)建一菌株中可產(chǎn)生多種色素的高效菌。
竹黃(Shiraia bambusicola P.Hennigs)又名赤團子、苦竹花、竹花、竹三七等，為藥用真菌竹黃的子座。該菌隸屬于子囊菌亞門，核菌綱，球殼目，肉座菌科，竹黃屬真菌。竹黃多生于衰敗或即將衰敗的竹林中，外觀形狀為不規(guī)則的多角形的塊狀或片狀，表面乳白色、灰白色或灰藍色相雜，質(zhì)輕、松脆、易破碎，藥用部分為其子座，尤其是苦竹的莖上，為名貴中藥。它主要寄主于箭竹屬(Fargesia Franch)和短惠竹屬(Brachystachyum)植物，主要分布在江西、浙江、江蘇、湖北、湖南、安徽、貴州、福建和云南等我國南方各省以及亞洲的日本。竹黃的藥用價值來源已久，早在明代李時珍的巨著《本草綱目》中就有如下記載“竹黃，又名天竺黃，味甘，寒，無毒。主治小兒驚風(fēng)、去諸風(fēng)熱、鎮(zhèn)心明目、滋養(yǎng)五臟…”，民間多用竹黃浸酒，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛、腰肌勞損、跌打損傷及虛寒胃痛、小兒驚風(fēng)、急性肝炎等等。竹黃的提取物中含有許多活性成分，具有很大的藥用價值。它具有清熱化痰、清心定驚、舒筋活絡(luò)、祛痛散淤等功效，現(xiàn)代的醫(yī)學(xué)研究表明，竹黃的藥用價值主要體現(xiàn)在抗炎、鎮(zhèn)痛，抗菌、抗腫瘤及毒副作用等方面。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對竹黃的生物學(xué)特性、化學(xué)成分、臨床應(yīng)用等方面進行了一系列的研究，取得了一些進展，竹黃獨特的生理生化性質(zhì)在醫(yī)藥、食品領(lǐng)域越來越受到人們的關(guān)注。
作為一種已知的菌種，涉及竹黃菌的分離和鑒定文獻例如魏景超，《真菌鑒定手冊》，上海科學(xué)技術(shù)出版社，上海市，1979年出版，p238；劉天惠，《食用菌概論》，中國展望出版社，北京市，1987出版，p26；和張灝、鄧丹，“竹紅菌素產(chǎn)生菌的篩選與鑒定“，生物技術(shù)，2002，12(4)，p19-20。
竹黃因其具有的藥用價值，以及其活性成分的生理生化性質(zhì)的進一步被研究，使得人們對這種名貴的中藥感到極大的興趣，它所包含的活性成份也逐漸被人們所發(fā)現(xiàn)。竹黃含有多種單體化合物，從福建仙游縣出產(chǎn)的竹黃中，經(jīng)醇提、硅膠柱色譜分離，得到10種結(jié)晶，已經(jīng)鑒定的除常見的化合物如甘露醇、硬脂酸等外，還有醌類衍生物，如竹紅菌甲素(Hypocrelline A，HA)、竹紅菌乙素(Hypocrelline B，HB)、羥基蒽醌等，并在其中還得到了頭孢素和硬脂酸乙脂。沈云修等人(竹黃的化學(xué)成分研究，中國中藥雜志，2002，127(9)，p674)通過柱色譜等方法從竹黃中分離純化得到了麥角甾醇，過氧麥角甾醇。其中屬于天然色素的活性成分的有竹紅菌素和1，8-二羥基蒽醌。
在竹黃的眾多活性成分中，竹紅菌素很早就被人們所認(rèn)識，因此對它的研究也較多。隨著竹黃的藥效成分被進一步的深入研究，更多的活性成分被人們所發(fā)現(xiàn)。如上文所述沈云修等人首次從竹黃中分離得到蒽醌類化合物。蒽醌類化合物通常包括蒽醌衍生物及其不同程度的還原產(chǎn)物，分子內(nèi)具有不飽和環(huán)二酮結(jié)構(gòu)(醌式結(jié)構(gòu))的一類天然色素有機化合物。由于不飽和環(huán)二酮結(jié)構(gòu)與二酚類結(jié)構(gòu)容易發(fā)生氧化還原反應(yīng)而互相轉(zhuǎn)變，所以作為生物體代謝物的某些醌類，易于參加生物體內(nèi)一些重要氧化還原反應(yīng)，在反應(yīng)過程中起到傳遞電子的作用，從而促進或干擾了這些生化反應(yīng)，表現(xiàn)出抗菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、瀉下、解痙、凝血等多種生物活性。蒽醌類化合物及其衍生物是天然產(chǎn)物中一類重要的化合物，他們通常具有顯著的生理活性，是大黃，蘆薈，虎杖，何首烏，茜草等中草藥的主要活性成分。它們是潛在的、重要的、巨大的天然藥物來源。由于蒽醌類化合物具有的營養(yǎng)價值功能，并且具有鮮艷的顏色，所以在食用色素方面也具有非常重要的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種制備下述式(I)的天然蒽醌色素的方法，所述蒽醌色素的化學(xué)名稱是1，5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌(1，5-dihydroxy-3-methoxy-7-methylanthraquinone)，是棕紅色固體粉末，該方法利用了大規(guī)模液體深層發(fā)酵技術(shù)，用已知的竹黃菌進行液體深層發(fā)酵，制備得到式(I)的天然蒽醌色素。式(I)化合物的結(jié)構(gòu)如下 所述方法包括以竹黃菌為出發(fā)菌株的發(fā)酵步驟和將發(fā)酵步驟獲得的發(fā)酵液進行分離純化的步驟，所述的發(fā)酵步驟包括對竹黃菌進行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，得到竹黃發(fā)酵液，將該發(fā)酵液經(jīng)分離純化后得到式(I)的蒽醌類色素。
本發(fā)明所使用的竹黃菌(Shiraia bambusicola P.Hennigs)是一種已知的菌種，可由菌種保藏機構(gòu)買到，其分離和鑒定的文獻例如魏景超，《真菌鑒定手冊》，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，上海市，1979年出版，p238；劉天惠，《食用菌概論》，中國展望出版社，北京市，1987出版，p26；以及張灝和鄧丹，“竹紅菌素產(chǎn)生菌的篩選與鑒定“，生物技術(shù)，2002，12(4)，p19-20。本申請引用上述現(xiàn)有技術(shù)文獻作為參考。
具體地，本發(fā)明方法中所述發(fā)酵步驟的液體搖瓶培養(yǎng)是將竹黃菌的斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的三角瓶中，培養(yǎng)溫度22～30℃，轉(zhuǎn)速120～160轉(zhuǎn)每分鐘，培養(yǎng)時間120～140小時，然后進行搖瓶擴大培養(yǎng)。
其中所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)葡萄糖15～35，土豆100～250。所述培養(yǎng)基的使用量是搖瓶培養(yǎng)基與三角瓶容積之比為3∶10左右。
本發(fā)明方法中所述發(fā)酵步驟的液體搖瓶擴大培養(yǎng)是將上述液體搖瓶培養(yǎng)得到的搖瓶菌種按5～10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶擴大培養(yǎng)基的三角瓶中進行擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22～30℃，轉(zhuǎn)速120～160轉(zhuǎn)每分鐘，90～96小時后轉(zhuǎn)接入一級種子罐進行培養(yǎng)。
其中所述擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)葡萄糖15～35，土豆100～250，起始pH值為5.5～7.0。所述培養(yǎng)基的使用量是擴大培養(yǎng)基與三角瓶容積之比為3∶10左右。
本發(fā)明方法中所述發(fā)酵步驟的一級種子培養(yǎng)是將上述步驟得到的搖瓶菌種按5～10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有一級種子培養(yǎng)基的種子罐中，培養(yǎng)溫度22～30℃，種子罐壓力0.05Mpa，攪拌速率90～150轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.3～1v/v/m，培養(yǎng)80～90小時后接入發(fā)酵罐進行發(fā)酵。
其中所述一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)葡萄糖15～35，土豆100～250，加水至適當(dāng)體積，起始pH值為5.5～7.0。所述培養(yǎng)基的使用量是當(dāng)一級種子培養(yǎng)的一級種子罐的容積為50～100L時，其中裝有的一級種子培養(yǎng)基的量相應(yīng)為30～70L。
本發(fā)明方法中所述發(fā)酵步驟的發(fā)酵培養(yǎng)是將上述步驟獲得的于種子罐中的菌種按5～10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度22～30℃，發(fā)酵罐壓力0.05Mpa，攪拌速率90～125轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.3～0.8v/v/m，培養(yǎng)90～120小時。
所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)乳糖15～35，硝酸鈉1.0～3.0，K2HPO40～1.5，MgSO40～0.75，起始pH值為4～8.0。所述培養(yǎng)基的使用量是當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵罐的容積為500～2000L時，其中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基的量相應(yīng)為300～1400L。
本發(fā)明方法中，在進行上述搖瓶培養(yǎng)之前，首先將竹黃菌菌種的斜面菌種接入新配制的斜面培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22～30℃，培養(yǎng)時間140～240小時。
其中所述的斜面培養(yǎng)基可以是本領(lǐng)域常用的斜面培養(yǎng)基，例如土豆培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基在多種教科書和論文中均有表述，例如參見檀耀輝、陶文沂、諸葛健等，《微生物學(xué)》，第二版，北京，中國輕工業(yè)出版社，p597，本申請引用該文獻作為參考。
本發(fā)明應(yīng)用竹黃菌發(fā)酵制備蒽醌類色素的方法中，在培養(yǎng)基中所述的土豆經(jīng)預(yù)處理后以土豆汁的形式加入，處理方法在多種教科書和論文中均有表述，參見上文所述文獻。
例如，本發(fā)明所使用土豆汁可用市場上銷售的普通土豆經(jīng)過處理獲得，處理方法是將200克土豆切成小塊，用沸水煮30min，用紗布濾去土豆渣，加水至1000mL，制成1000mL土豆汁，使用時作為液體直接加入。
本發(fā)明方法的上述發(fā)酵步驟所得到的竹黃發(fā)酵液為酒紅色到紅色的液體，其中的菌絲體為暗紅色。
因此，本發(fā)明的另一目的是提供了由本發(fā)明的發(fā)酵方法制備的竹黃菌深層發(fā)酵液，該發(fā)酵液中含有式(I)的蒽醌類色素。本發(fā)明的竹黃菌發(fā)酵液可直接作為食品添加劑使用，主要是作為色素使用，也可以將其進行分離純化，用于制備本發(fā)明式(I)的蒽醌類色素。
由本發(fā)明發(fā)酵步驟獲得的發(fā)酵液經(jīng)分離純化步驟制備本發(fā)明式(I)的蒽醌類色素的方法包括(1)將竹黃菌深層發(fā)酵獲得的發(fā)酵液離心分離，得到上清液；(2)將上述步驟獲得的上清液用有機溶劑萃?。?3)柱色譜分離，和(4)合并柱色譜分離的洗脫液，經(jīng)真空濃縮和冷凍干燥后，得到式(I)的蒽醌類色素。
其中用于萃取發(fā)酵液的上清液的有機溶劑可以是氯代烴，例如二氯甲烷、氯仿等；或是醚類溶劑如乙醚、甲乙醚等；或是酯類溶劑如乙酸乙酯、乙酸甲酯等，優(yōu)選的溶劑是氯仿、乙醚或乙酸乙酯。
其中所述柱色譜分離純化步驟可使用常規(guī)的柱色譜柱，優(yōu)選使用的色譜柱是硅膠柱和C18柱。當(dāng)使用所述的硅膠柱時，使用的洗脫液是正己烷-異丙醇。當(dāng)使用所述的C18柱時，使用的洗脫液是甲醇-水。
由本發(fā)明的方法制備的目的產(chǎn)物式(I)的蒽醌類色素是紅棕色的粉末。
本發(fā)明方法中，所述蒽醌類色素的產(chǎn)率可達7～10毫克/升。本文所用的術(shù)語目的產(chǎn)物的“產(chǎn)率”是指每1000ml發(fā)酵液所得到的色素的干重。
更具體地，本發(fā)明制備式(I)的蒽醌類色素的方法通過以下步驟來實現(xiàn)(1)將竹黃菌菌種的斜面菌種接入新配制的斜面培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22～30℃，培養(yǎng)時間140～240小時；(2)將步驟1得到的斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有上述搖瓶培養(yǎng)基的三角瓶中進行培養(yǎng)，其中搖瓶培養(yǎng)基與三角瓶容積之比為3∶10左右，培養(yǎng)溫度22～30℃，轉(zhuǎn)速120～160轉(zhuǎn)每分鐘，培養(yǎng)時間120～140小時；(3)將步驟2得到的搖瓶菌種按5～10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有上述搖瓶擴大培養(yǎng)基的三角瓶中進行擴大培養(yǎng)，其中擴大培養(yǎng)基與三角瓶容積之比為3∶10左右，培養(yǎng)溫度22～30℃，轉(zhuǎn)速120～160轉(zhuǎn)每分鐘，90～96小時后轉(zhuǎn)接入一級種子罐進行培養(yǎng)；(4)將步驟3得到的菌種按5～10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有上述一級種子培養(yǎng)基的種子罐中進行培養(yǎng)，當(dāng)一級種子罐的容積為50～100L時，其中裝有的一級種子培養(yǎng)基的量相應(yīng)為30～70L，培養(yǎng)溫度22～30℃，種子罐壓力0.05Mpa，攪拌速率90～150轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.3～1v/v/m，培養(yǎng)80～90小時后接入發(fā)酵罐進行發(fā)酵；(5)將種子罐中的菌種按5～10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有上述發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，得到發(fā)酵液；當(dāng)發(fā)酵罐的容積為500～2000L時，其中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基的量相應(yīng)為300～1400L，培養(yǎng)溫度22～30℃，發(fā)酵罐壓力0.05Mpa，攪拌速率90～125轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.3～0.8v/v/m，培養(yǎng)90～120小時；和(6)將上述步驟5獲得的發(fā)酵液進行離心分離，得到的上清液經(jīng)有機溶劑萃取，萃取液經(jīng)硅膠柱和C18柱進行色譜分離，得到的洗脫液經(jīng)真空濃縮和冷凍干燥后得到本發(fā)明的最終產(chǎn)物式(I)的蒽醌類色素，為紅棕色的固體粉末。
上述各步驟使用的培養(yǎng)基如前文所述。
本發(fā)明方法的發(fā)酵培養(yǎng)工藝適于在500～2000L的發(fā)酵罐規(guī)模進行，結(jié)合本領(lǐng)域的基本知識可以根據(jù)生產(chǎn)需要進一步擴大生產(chǎn)規(guī)模。本發(fā)明的另一目的是提供了應(yīng)用竹黃菌發(fā)酵方法制備的式(I)的蒽醌類色素1，5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌。
本發(fā)明的式(I)的蒽醌類色素是是棕紅色固體粉末，具有鮮艷的、類似天然物質(zhì)的顏色，將其作為食品添加劑，特別是作為色素使用時具有很多優(yōu)點，例如著色色調(diào)自然，更接近于天然物質(zhì)顏色；由于該化合物是由天然的竹黃菌經(jīng)發(fā)酵獲得，因此不含有任何化學(xué)合成方法可能帶來的、可能產(chǎn)生毒副作用的雜質(zhì)，具有天然色素?zé)o毒和無副作用，安全性高的優(yōu)點。
經(jīng)試驗證明，本發(fā)明的式(I)的蒽醌類色素還具有抗氧化和/或抑菌的作用，因此可作為抗氧化劑和/或抑菌劑使用。在將該化合物作為食品添加劑使用時，不僅具有色素的功能，而且還同時具有抗氧化和/或抑菌等多種有益于人體健康的功能，其應(yīng)用具有廣闊的前景。


圖1是本發(fā)明的方法制備得到的式(I)的天然蒽醌類色素1，5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌的HPLC色譜圖。
圖2是本發(fā)明式(I)色素對黑曲霉及米曲霉的抑菌作用試驗的照片。
具體實施例方式
為了進一步闡述本發(fā)明的技術(shù)，給出了下述實施例。但是，這些實施例不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實施例1竹黃菌發(fā)酵液的制備1.在新鮮的斜面培養(yǎng)基中接入竹黃菌菌絲體，竹黃菌(Shiraiabambusicola P.Hennigs)LBR-SB6菌種由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物研究所菌種保藏中心購買。作為一種已知的菌種，其分離和鑒定可參考上文所述相關(guān)文獻，例如魏景超，《真菌鑒定手冊》，上海科學(xué)技術(shù)出版社，上海市，1979年出版，p238等。培養(yǎng)溫度25℃，斜面培養(yǎng)基配方為(單位為克/升)葡萄糖25，土豆200，和瓊脂20。
待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL的三角瓶中(共5瓶)，于25.5℃、150轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)130小時。其中所述搖瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖25，土豆200，起始pH 6.3。
2.將上述搖瓶菌種接入裝有150mL擴大培養(yǎng)基的500mL三角瓶中(共24瓶)進行培養(yǎng)，接種量為每500mL三角瓶接入11mL搖瓶種子，于25.5℃、150轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)93小時。其中所述擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖20，土豆200。
3.將上述擴大培養(yǎng)的菌種3600mL接入裝有44.9L一級種子培養(yǎng)基的75L種子罐中進行培養(yǎng)，種子罐中發(fā)酵液的總體為48.5L；維持罐溫25.5℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率120轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.6v/v/m，發(fā)酵時間85小時。其中種子罐中的一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖20，土豆200。
4.然后將上述步驟得到的48.5L一級種子菌種接入裝有600L發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為648.5L。維持罐溫25.5℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率100轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.5v/v/m，發(fā)酵時間96小時。其中發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)乳糖20，硝酸鈉2.0，K2HPO41.0，MgSO40.5，KCl0.5。
得到625.7L竹黃發(fā)酵液，為酒紅色到紅色的液體，其中的菌絲體為暗紅色。
實施例2式(I)色素的制備1.將實施例1所得到的發(fā)酵液于3000轉(zhuǎn)/分鐘離心，獲得的上清液。
2.將100mL上述發(fā)酵上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)濃縮至約46mL，得發(fā)酵濃縮液。濃縮液用6mol/L的HCl調(diào)pH至3.0左右，加入等體積的氯仿萃取，氯仿萃取液抽濾，除去乳狀物，得清液約42mL，減壓蒸發(fā)濃縮至約2mL。
3.柱色譜純化(1)硅膠柱色譜層析柱規(guī)格玻璃柱；柱長×內(nèi)徑30mm×20mm；填料高度20mm；柱體積400mm填料規(guī)格柱色譜硅膠，粗孔(ZCX-II)200-300目，為青島海洋化工廠產(chǎn)品洗脫液正己烷—異丙醇上樣量1mL濃縮樣品洗脫方法待1mL濃縮樣品都吸附于硅膠柱層面后，用正己烷—異丙醇體積比為98∶2的洗脫液洗脫，洗脫液流速3mL/min，洗脫體積為200mm；然后換用正己烷—異丙醇為97∶3的洗脫液洗脫，洗脫體積為300mm，洗脫結(jié)束。
組分收集濃縮樣品經(jīng)正己烷—異丙醇梯度洗脫，樣品在硅膠柱中形成色帶，收集各3個色帶組分，各組分通過HPLC檢測，將每次收集的相同的組分合并。第二個色帶組分為目的產(chǎn)物。
HPLC檢測條件色譜柱Lichrospher C18(Column 4.6mm×250mm)；流動相85％甲醇的水溶液；流速1mL/min；柱溫30℃，檢測波長440nm。
本發(fā)明目的產(chǎn)物的HPLC圖譜見附圖1，其中于15.85分鐘時的峰是該化合物的標(biāo)志峰。
收集獲得的目的產(chǎn)物進行減壓蒸發(fā)濃縮，濃縮物用甲醇溶解后，用C18柱按照下述方法進行處理。
(2)C18柱色譜層析柱規(guī)格特制玻璃中壓層析柱；柱長×內(nèi)徑400mm×13mm，填料高度300mm填料規(guī)格C18填料粒徑為40-63um，為江蘇漢邦科技有限公司產(chǎn)品洗脫液甲醇-水上樣量1mL樣品洗脫方法待1mL濃縮樣品都吸附于C18柱層面后，用甲醇-水的體積比為30∶70的洗脫液洗脫，洗脫液流速3mL/min，洗脫體積為200mL，此后采用相同的流速，依次換用甲醇-水為40∶60和45∶55的洗脫液各200mL，最后采用甲醇-水為50∶50洗脫，洗脫體積為400mL。
樣品收集當(dāng)用去最后的洗脫液(甲醇-水為50∶50)約150mL時色素被洗脫，開始收集洗脫液，當(dāng)收集約100mL洗脫液時，色素被完全洗脫。
4.后處理將收集得到的100mL洗脫液進行減壓蒸發(fā)除去甲醇，冷凍干燥剩余的色素水溶液得到目的產(chǎn)物，為紅棕色粉末，干重為9.0毫克。
最終目的產(chǎn)物式(I)蒽醌色素的產(chǎn)率為9.0mg/L。
5.色素純度檢測HPLC檢測條件色譜柱Lichrospher C18(Column 4.6mm×250mm)；流動相0％-100％甲醇的水溶液梯度洗脫；流速1mL/min；柱溫30℃，檢測波長440nm。用此方法測得的該色素的純度為97.01％。
實施例3式(I)色素的制備此實施例所用的菌種及斜面培養(yǎng)基與實施例1相同。
1.在新鮮的斜面培養(yǎng)基中接入竹黃菌菌絲體，培養(yǎng)溫度25℃，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共3瓶)，于22℃、120轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)140小時；2.將上述搖瓶菌種接入裝有150mL擴大培養(yǎng)基的500mL三角瓶中(共10瓶)，接種量為每500mL三角瓶接入15mL搖瓶種子，于22℃、120轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)96小時；3.將上述擴大培養(yǎng)的菌種1500mL接入裝有28.5L一級種子培養(yǎng)基的50L種子罐中進行培養(yǎng)，種子罐中發(fā)酵液的總體為30L；維持罐溫22℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率90轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶1v/v/m，發(fā)酵時間90小時；4.將上述步驟得到的30L上述一級種子菌種接入裝有320L發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為350L；維持罐溫22℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率90轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.8v/v/m，發(fā)酵時間120小時；得到342L發(fā)酵液。
5.按照與實施例2相同的方法，對上述步驟得到的1000L發(fā)酵液進行分離純化，得到目的產(chǎn)物，為紅棕色的粉末，干重為7.5毫克，產(chǎn)率7.5毫克/升。
本實施例使用的各種培養(yǎng)基的配方如下?lián)u瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖15，土豆100，起始pH值為5.8。
擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖15，土豆100，起始pH值為5.8。
一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖15，土豆100，起始pH值為5.8。
發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)乳糖15，硝酸鈉1.5，K2HPO41.0，MgSO40.5，KCl0.5。
按照與實施例2所述最終產(chǎn)物蒽醌色素的純度測試方法測得其純度為96.9％。
實施例4式(I)色素的制備此實施例所用的菌種及斜面培養(yǎng)基與實施例1相同。
1.在新鮮的斜面培養(yǎng)基中接入竹黃菌絲體，培養(yǎng)溫度30℃，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共3瓶)，30℃、160轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)120小時；2.將上述搖瓶菌種接入裝有300mL擴大培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中(共12瓶)，接種量為每1000mL三角瓶接入15mL搖瓶種子，30℃、160轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)90小時；3.將上述擴大培養(yǎng)的菌種3600mL接入裝有66.4L一級種子培養(yǎng)基的100L種子罐中進行培養(yǎng)，種子罐中發(fā)酵液的總體為70L；維持罐溫30℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率90轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.3v/v/m，發(fā)酵時間80小時；4.將上述步驟得到的70L一級種子菌種接入裝有1330L發(fā)酵培養(yǎng)基的2000L發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為1400L；維持罐溫30℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率125轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.3v/v/m，發(fā)酵時間90小時；得到1302.2L發(fā)酵液。
5.按照與實施例2相同的方法，對上述步驟得到的1000mL發(fā)酵液進行分離純化，得到目的產(chǎn)物，為紅棕色的粉末，干重為7.0毫克，產(chǎn)率7.0毫克/升。
本實施例使用的各種培養(yǎng)基的配方如下?lián)u瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆150，起始pH值為7.0。
擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆150，起始pH值為7.0。
一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆150，起始pH值為7.0。
發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)乳糖15，硝酸鈉1.5，K2HPO40.75，MgSO40.25，KCl0.5。
按照與實施例2所述最終產(chǎn)物蒽醌色素的純度測試方法測得其純度為96.5％。
實施例5式(I)色素的制備此實施例所用的菌種及斜面培養(yǎng)基與實施例1相同。
1.在新鮮的斜面培養(yǎng)基中接入竹黃菌菌絲體，培養(yǎng)溫度26℃，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共4瓶)，26℃、150轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)136小時；2.將上述搖瓶菌種接入裝有300mL擴大培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中(共18瓶)，接種量為每1000mL三角瓶接入24mL搖瓶種子，26℃、150轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)94小時；3.將上述擴大培養(yǎng)的菌種5.25L接入裝有47.25L一級種子培養(yǎng)基的75L種子罐中進行培養(yǎng)，種子罐中發(fā)酵液的總體為52.5L；維持罐溫26℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率125轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.5v/v/m，發(fā)酵時間80小時；4.將上述步驟得到的52.5L一級種子菌種接入裝有547.5L發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為600L；維持罐溫26℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率100轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.5v/v/m，發(fā)酵時間108小時，得到588.5L發(fā)酵液；5.按照與實施例2相同的方法，對上述步驟得到的1000mL發(fā)酵液進行分離純化，得到目的產(chǎn)物，為紅棕色的粉末，干重為10.0毫克，產(chǎn)率10.0毫克/升。
本實施例使用的各種培養(yǎng)基的配方如下?lián)u瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖30，土豆200，起始pH值為6.8。
擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖30，土豆200，起始pH值為6.8。
一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖30，土豆200，起始pH值為6.8。
發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)乳糖30，硝酸鈉30，K2HPO40.5，MgSO40.25，KCl0.5。
竹黃菌發(fā)酵獲得蒽醌色素產(chǎn)量測試方法與實施例1相同。
按照與實施例2所述最終產(chǎn)物蒽醌色素的純度測試方法測得其純度為97.4％。
實施例6式(I)色素的制備此實施例所用的菌種及斜面培養(yǎng)基與實施例1相同。
1.在新鮮的斜面培養(yǎng)基中接入竹黃菌菌絲體，培養(yǎng)溫度28℃，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共3瓶)，28℃、135轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)128小時；2.將上述搖瓶菌種接入裝有150mL擴大培養(yǎng)基的500mL三角瓶中(共10瓶)，接種量為每500mL三角瓶接入15mL搖瓶種子，28℃、140轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)92小時；3.將上述擴大培養(yǎng)的菌種1500mL接入裝有28.5L一級種子培養(yǎng)基的50L種子罐中進行培養(yǎng)，種子罐中發(fā)酵液的總體為30L；維持罐溫28℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率130轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.4v/v/m，發(fā)酵時間84小時；4.將上述步驟得到的30L一級種子菌種接入裝有270L發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為300L；維持罐溫28℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率120轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.35v/v/m，發(fā)酵時間96小時；得到294.3L發(fā)酵液；
5.按照與實施例2相同的方法，對上述步驟得到的1000mL發(fā)酵液進行分離純化，得到目的產(chǎn)物，為紅棕色的粉末，干重為9.1毫克，產(chǎn)率9.1毫克/升。
本實施例使用的各種培養(yǎng)基的配方如下?lián)u瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆200，起始pH值為6.5。
擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆200，起始pH值為6.5。
一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆200，起始pH值為6.5。
發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)乳糖35，硝酸鈉3.5，K2HPO40.5，MgSO40.25，KCl0.5。
按照與實施例2所述最終產(chǎn)物蒽醌色素的純度測試方法測得其純度為97.3％。
實施例7式(I)色素的制備此實施例所用的菌種及斜面培養(yǎng)基與實施例1相同。
1.在新鮮的斜面培養(yǎng)基中接入竹黃菌菌絲體，培養(yǎng)溫度28℃，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共5瓶)，26℃、130轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)132小時；2.將上述搖瓶菌種接入裝有300mL擴大培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中(共14瓶)，接種量為每1000mL三角瓶接入25mL搖瓶種子，26℃、150轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)92小時；3.將上述擴大培養(yǎng)的菌種4200mL接入裝有55.8L一級種子培養(yǎng)基的100L種子罐中進行培養(yǎng)，種子罐中發(fā)酵液的總體為60L；維持罐溫24℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率110轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.8v/v/m，發(fā)酵時間80小時；4.將上述步驟得到的60L一級種子菌種接入裝有1140L發(fā)酵培養(yǎng)基的2000L發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為1200L；維持罐溫24℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率100轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.6v/v/m，發(fā)酵時間110小時，得到1810.2L發(fā)酵液。
5.按照與實施例2相同的方法，對上述步驟得到的1000mL發(fā)酵液進行分離純化，得到目的產(chǎn)物，為紅棕色的粉末，干重為9.5毫克，產(chǎn)率9.5毫克/升。
本實施例使用的各種培養(yǎng)基的配方如下?lián)u瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆250，起始pH值為6.0。
擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆250，起始pH值為6.0。
一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆250，起始pH值為6.0。
發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)乳糖35，硝酸鈉3.0，K2HPO41.5，MgSO40.5，KCl0.75。
實施例8式(I)色素的制備此實施例所用的菌種及斜面培養(yǎng)基與實施例1相同。
1.在新鮮的斜面培養(yǎng)基中接入竹黃菌菌絲體，培養(yǎng)溫度22℃，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有75mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共5瓶)，26℃、130轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)132小時；2.將上述搖瓶菌種接入裝有300mL擴大培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中(共14瓶)，接種量為每1000mL三角瓶接入25mL搖瓶種子，26℃、150轉(zhuǎn)每分鐘搖床培養(yǎng)92小時；3.將上述擴大培養(yǎng)的菌種4200mL接入裝有55.8L一級種子培養(yǎng)基的100L種子罐中進行培養(yǎng)，種子罐中發(fā)酵液的總體為60L；維持罐溫24℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率110轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.8v/v/m，發(fā)酵時間80小時；4.將上述步驟得到的60L一級種子菌種接入裝有1140L發(fā)酵培養(yǎng)基的2000L發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，發(fā)酵罐中發(fā)酵液的總體為1200L；維持罐溫24℃，罐壓0.05MPa，攪拌速率100轉(zhuǎn)每分鐘，通風(fēng)量1∶0.6v/v/m，發(fā)酵時間110小時，得到1851.6L發(fā)酵液；5.按照與實施例2的方法，對上述步驟得到的1000mL發(fā)酵液進行分離純化，得到目的產(chǎn)物，為紅棕色的粉末，干重為7.2毫克，產(chǎn)率7.2毫克/升。
本實施例使用的各種培養(yǎng)基的配方如下?lián)u瓶培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆250，起始pH值為5.5。
擴大培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆250，起始pH值為5.5。
一級種子培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)葡萄糖35，土豆250，起始pH值為5.5。
發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(單位為克/升)乳糖2.0，硝酸鈉3.5，K2HPO41.5，MgSO40.75，KCl0.25。
實施例9本發(fā)明式(I)色素的抗氧化性采用已知的DDPH(2，2-二苯基苦味肼，2，2-diphenyl-1-picrylhyrazyl)法進行測定(參見王威，常用天然色素抗氧活性的研究，食品科學(xué)，2003，24(6)，p96-100)。
測定方法在試管中加入0.01％的DDPH溶液2ml和2ml濃度為0.1mg/ml的色素樣品溶液，搖勻，于37℃水域中恒溫30min，在517nm下測定吸光度值。2ml甲醇代替色素樣品溶液，加入0.01％的DDPH溶液2ml，搖勻，以此為空白對照。
結(jié)果計算按下式計算羥自由基的清除率羥自由基的清除率＝[(Ao-As)/Ao]×100％式中Ao為空白吸光度，As為樣品吸光度。
按照上述DDPH法測得0.1mg/ml的色素溶液的羥基自由基清除率為22.3％。
根據(jù)上述文獻公開的內(nèi)容可知，采用同樣的測定方法，0.1mg/ml的紫膠紅素的自由基清除率為37.0％；上述數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的式(I)的蒽醌類色素具有一定的自由基清除作用。
實施例10本發(fā)明式(I)色素的抑菌作用采用雙層培養(yǎng)基，上下層培養(yǎng)基相同，均為察氏培養(yǎng)基。
察氏培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)蔗糖3，NaNO30.2，K2HPO40.1，MgSO47H2O0.05，KCl0.05，F(xiàn)eSO4·7H2O0.1在上述培養(yǎng)基中對黑霉菌和米曲霉分別進行斜面培養(yǎng)活化后，用5ml的無菌水將孢子洗下，制成孢子懸液備用。
用大口吸管吸取20ml已加熱熔化的察氏培養(yǎng)基注入無菌平皿中，均勻鋪滿皿底待凝固作為底層培養(yǎng)基，用移液管吸取1ml備用的孢子懸液，加至48℃保溫的50ml察氏培養(yǎng)基中，輕輕搖勻再用無菌大口吸管吸取10ml加至已凝固的底層培養(yǎng)基上，立即搖勻，制成含菌薄層平板。
結(jié)果如圖2所示，圖2說明了本發(fā)明式(I)色素對黑曲霉及米曲霉的抑菌結(jié)果。在圖2中，左圖為該色素對黑曲霉的抑菌照片，照片中上面兩個圈為抑菌圈，抑菌圈的大小為2.5cm；右圖為該色素對米曲霉的抑菌照片，照片中上面的圈為抑菌圈，抑菌圈的大小為1.2cm；圖2兩幅照片中下方的圈為空白對照，沒有產(chǎn)生抑菌圈。
本實施例的實驗說明式(I)的蒽醌類色素具有一定的抑菌作用。
以上已詳細(xì)描述了本發(fā)明的實施方案，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說很顯然可以做很多改進和變化而不會背離本發(fā)明的基本精神。所有這些變化和改進都在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.制備下述式(I)的天然蒽醌色素的方法，所述蒽醌色素的化學(xué)名稱是1，5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 所述方法包括以竹黃菌為出發(fā)菌株的發(fā)酵步驟和將發(fā)酵步驟獲得的發(fā)酵液進行分離純化的步驟，所述的發(fā)酵步驟包括對竹黃菌進行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，得到竹黃發(fā)酵液，將該發(fā)酵液經(jīng)分離純化后得到式(I)的蒽醌類色素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)葡萄糖15～35，土豆100～250；搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度24～30℃，轉(zhuǎn)速120～160轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時間120～140小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)葡萄糖15～35，土豆100～250，加水至適當(dāng)體積，起始pH值為5.5～7.0；擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是接種量5～10％(體積百分比)，培養(yǎng)溫度22～30℃，轉(zhuǎn)速120～160轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時間90～96小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)葡萄糖15～35，土豆100～250，加水至適當(dāng)體積，起始pH值為5.5～7.0；一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是接種量5～10％(體積百分比)，培養(yǎng)溫度22～30℃，攪拌速率90～150轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量1∶0.3～1v/v/m，培養(yǎng)時間80～90小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(單位為克/升)乳糖15～35，硝酸鈉1.0～3.0，K2HPO4 0～1.5，MgSO4 0～0.75，KCl 0～0.75加水至適當(dāng)體積，起始pH值為4～8.0；發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是接種量5～10％(體積百分比)，培養(yǎng)溫度22～30℃，攪拌速率90～125轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量1∶0.3～0.8v/v/m，培養(yǎng)時間90～120小時。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述發(fā)酵液的分離純化步驟包括將發(fā)酵步驟得到的發(fā)酵液離心分離，得到的上清液經(jīng)有機溶劑萃取、柱色譜分離和真空濃縮，然后將濃縮液冷凍干燥得到式(I)的蒽醌類色素。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其中用于萃取上清液的有機溶劑選自氯仿、乙醚和乙酸乙酯。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其中所述柱色譜分離步驟使用的色譜柱是硅膠柱和C18柱。
9.由權(quán)利要求1所述制備方法得到的發(fā)酵液和式(I)天然蒽醌色素1，5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌。
10.權(quán)利要求9的發(fā)酵液和式(I)天然蒽醌色素作為食品添加劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體的說本發(fā)明涉及竹黃菌深層發(fā)酵制備蒽醌類色素的方法，以及由該方法獲得的深層發(fā)酵液和式(I)的蒽醌類色素1，5－二羥基－3－甲氧基－7－甲基蒽醌。該方法包括以竹黃菌為出發(fā)菌株，進行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和深層發(fā)酵培養(yǎng)，和將所獲得的發(fā)酵液進行分離純化的步驟。本發(fā)明首次實現(xiàn)了通過竹黃菌深層發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)式(I)的蒽醌類色素，該化合物是棕紅色固體。由本發(fā)明的方法得到的發(fā)酵液和蒽醌類色素可用作色素作為食品添加劑，本發(fā)明的色素還具有抗氧化和/或抑菌作用。
文檔編號C12P7/24GK1884386SQ200610083188
公開日2006年12月27日 申請日期2006年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月9日
發(fā)明者石貴陽, 丁重陽, 張梁, 蔡宇杰, 樓志華 申請人:江南大學(xué)