專利名稱：一種快速測定吊白塊的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種吊白塊的快速測定方法。
背景技術(shù)：
吊白塊的化學(xué)名稱為甲醛次硫酸氫鈉，分子式為NaHSO2·CH2O.2H2O，白色結(jié)晶，易溶于水，遇酸即分解為甲醛和二氧化硫，具有強烈的還原性、漂白性和防腐力。許多不法商販正是看中了吊白塊中甲醛的防腐作用和亞硫酸氫鈉的漂白作用而大量使用，以達(dá)到防腐增白，改善劣質(zhì)米面制品感官的目的。例如冰糖生產(chǎn)過程中加入吊白塊可以縮減生產(chǎn)工藝；加入蜜棗，可以改變外觀和延長保存時間；加入米粉，可以改善其口感和保鮮時間；在腐竹制作過程中加入，增加韌性等。據(jù)資料報道，在米粉中曾檢出過318mg/kg吊白塊；對饅頭、面餅等面制品的檢測，也發(fā)現(xiàn)吊白塊高達(dá)561mg/kg。然而，在食品中摻吊白塊，不但破壞食品的營養(yǎng)成份，而且食用后可導(dǎo)致消化道粘膜發(fā)炎、嘔吐、腹瀉，急性中毒可導(dǎo)致休克致死，對人的腎臟和神經(jīng)系統(tǒng)也有較大損傷，甚至具有致癌作用，吊白塊的LD50大鼠為2g/kg，人體攝入10g即可致死亡，因此，在食品中嚴(yán)禁加入吊白塊。
目前測定吊白塊的方法有變色酸法、乙酰丙酮法、鹽酸苯肼比色法、酚試劑法、示波極譜法、高效液相色譜法和氣相色譜法等，但這些方法不能滿足用于現(xiàn)場簡單快速測定的需要。為此，國內(nèi)有利用上述化學(xué)分析吊白塊的檢測原理設(shè)計的快速檢測吊白塊的專利方法，如“一種一次性速測包(ZL 02240397.3)”，“多功能現(xiàn)場比色測定儀(ZL 02234891.3)”，但這2個專利不是特異設(shè)計測定吊白塊的，因此，對吊白塊測定的特異性不強。
我們經(jīng)多年試驗研究，利用吊白塊分子中的甲醛能與蛋白質(zhì)的-NH2，-SH，-OH，-COOH等基團作用，生成次甲基衍生物，破壞酶的活性，酶的底物不能水解，加入顯色劑后出現(xiàn)顏色深淺的變化，從而建立一種快速、特異和簡便的吊白塊測定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以雞或鴨血清中的乙酰膽堿酯酶為原料，通過吊白塊分子對酯酶的抑制作用，使酯酶的底物乙酸萘酯不能分解，從而加入水溶性苯胺藍(lán)后的顏色變淺。最后通過顏色的深淺達(dá)到判斷樣品中是否含有吊白塊的目的。本方法所需成本低，操作簡便，能適于現(xiàn)場對食品中的吊白塊快速測定。
本發(fā)明是如下實現(xiàn)的本發(fā)明所述的一種快速測定吊白塊的方法包括如下步驟(1)在容器中加入純化的乙酰膽堿酯酶；(2)加入樣品液，對照用的加入等量蒸餾水；(3)加酶的底物乙酸萘酯；(4)加水溶性苯胺藍(lán)進(jìn)行顯色；(5)判斷結(jié)果。上述步驟(1)中加入的乙酰膽堿酯酶的濃度為0.25mg/mL，加入量為30～40μL。上述步驟(2)樣品液的加入量為300～400μL，對照用的加入等量蒸餾水300～400μL。上述步驟(3)酶的底物為無水酒精配置的4.5mg/mL乙酸萘酯，加入量為40～45μL。上述步驟(4)水溶性苯胺藍(lán)的濃度為0.001g/mL，加入量為50～60μL。
乙酰膽堿酯酶的純化方法為雞或鴨的新鮮血液室溫下凝固后，于0～4℃下放置過夜，取其上清液，所得上清液在16000r.p.m，0～4℃下離心5min，其上清液即為乙酰膽堿酯酶粗酶。然后將裝有乙酰膽堿酯酶粗酶的三角瓶放入冰水中，往粗酶液中緩慢攪拌加入硫酸銨，使酶液中硫酸銨的飽和度在50％～60％的范圍內(nèi)；所得溶液于16000r.p.m，0～4℃下離心10min，保留沉淀；沉淀再用蒸餾水溶解，并裝入分子量1萬的透析袋，于4℃冰箱內(nèi)透析48小時，其間換液8次，然后將透析后所得的酶液冷凍干燥即為純化的乙酰膽堿酯酶。
檢測樣品時，取2只離心管，在其中分別加入濃度為0.25mg/mL的乙酰膽堿酯酶，加入量為30～40μL，然后在其中1只離心管加入300～400μL蒸餾水用作對照，另1只離心管中加入等量可能含吊白塊的樣品浸泡液300～400μL，輕輕搖動并反應(yīng)10min后，加入40～45μL無水酒精配置的乙酸萘酯，再輕輕搖動并反應(yīng)5min后，加入0.001g/mL蒸餾水配置的苯胺藍(lán)50～60μL進(jìn)行顯色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對照為深藍(lán)色，樣品中吊白塊濃度越高，最后的藍(lán)顏色越淺，1000μg/mL的吊白塊樣品測定結(jié)果顯示的顏色近視黃色，而100μg/mL和10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)吊白塊含量的樣品測定結(jié)果顯示的顏色比對照的藍(lán)色明顯淺，表明用此方法檢測吊白塊的最低濃度為10μg/mL。
具體實施例方式
實例1從市場采集腐竹樣品5個，每個樣品取10g用10mL蒸餾水浸泡30分鐘待測。取6只離心管，在其中分別加入30μL 0.25mg/mL的乙酰膽堿酯酶液，然后在編號為第1號的離心管加入300μL蒸餾水作為對照，另5只離心管分別加入上述可能含吊百塊的5個樣品浸泡液各300μL，輕輕搖動并反應(yīng)10min后，6只離心管中分別加入40μL乙酸萘酯，輕輕搖動并反應(yīng)5min后，6只離心管中分別加入55μL水溶性苯胺藍(lán)進(jìn)行顯色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)編號為腐竹1、腐竹2和腐竹5的樣品的吊白塊呈陽性，而編號為腐竹3和腐竹4的樣品的吊白塊含量呈陰性，將同樣處理的上述樣品浸泡液用乙酰丙酮法測定吊白塊含量(參照方法乙酰丙酮法測定米粉中吊白塊含量，中國公共衛(wèi)生，2002，8986)，測定結(jié)果為腐竹1吊白塊含量為18.6mg/kg，腐竹2吊白塊含量為96.6mg/kg，腐竹5吊白塊含量為39.8mg/kg，而腐竹3和腐竹4樣品的吊白塊含量分別為8.3mg/kg和6.5mg/kg，均＜10.0mg/kg，與本專利測定的結(jié)果完全相符合。
實例2從市場采集米粉樣品5個，每個樣品取10g用10mL蒸餾水浸泡30分鐘待測。取6只離心管，在其中分別加入35μL 0.25mg/mL的乙酰膽堿酯酶液，然后在編號為第1號的離心管加入400μL蒸餾水作為對照，另5只離心管分別加入上述可能含吊百塊的5個樣品浸泡液各400μL，輕輕搖動并反應(yīng)10min后，6只離心管中分別加入45μL乙酸萘酯，輕輕搖動并反應(yīng)5min后，6只離心管中分別加入60μL水溶性苯胺藍(lán)進(jìn)行顯色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)編號為米粉1、米粉3和米粉5的樣品的吊白塊呈陽性，而編號為米粉2和米粉4的樣品的吊白塊含量呈陰性，將同樣處理的上述樣品浸泡液用乙酰丙酮法測定吊白塊含量(參照方法乙酰丙酮法測米粉中吊白塊含量，中國公共衛(wèi)生，2002，8986)，測定結(jié)果為米粉1吊白塊含量為157.0mg/kg，米粉3吊白塊含量為13.8mg/kg，米粉5吊白塊含量為165.0mg/kg，而米粉2和米粉4樣品的吊白塊含量7.8mg/kg和5.7mg/kg，均＜10.0mg/kg，與本專利測定的結(jié)果完全相符合。
以上實施例中從市場采集腐竹和米粉共10個樣品，分別用本發(fā)明的方法和乙酰丙酮法測定是否含吊白塊。腐竹和米粉各10g用10mL蒸餾水浸泡30分鐘，取浸泡液用本發(fā)明的方法和乙酰丙酮法同時測定，測定的結(jié)果見下表。

具體的測定結(jié)果表明用本發(fā)明的方法與衛(wèi)生部推薦的乙酰丙酮法測定的10個樣品是否含有吊白塊的結(jié)果的符合率達(dá)100％。
權(quán)利要求
1.一種快速測定吊白塊的方法，其特征在于如下步驟(1)在容器中加入純化的乙酰膽堿酯酶；(2)加入樣品液，對照用的加入等量蒸餾水；(3)加酶的底物乙酸萘酯；(4)加水溶性苯胺藍(lán)進(jìn)行顯色；(5)判斷結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測定吊白塊的方法，其特征在于上述步驟(1)中加入的乙酰膽堿酯酶的濃度為0.25mg/mL，加入量為30～40μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測定吊白塊的方法，其特征在于上述步驟(2)樣品液的加入量為300～400μL，對照用的加入等量蒸餾水300～400μL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測定吊白塊的方法，其特征在于上述步驟(3)酶的底物為無水酒精配置的4.5mg/mL乙酸萘酯，加入量為40～45μL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測定吊白塊的方法，其特征在于上述步驟(4)水溶性苯胺藍(lán)的濃度為0.001g/mL，加入量為50～60μL。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速測定吊白塊的方法，包括如下步驟(1)在容器中加入純化的乙酰膽堿酯酶，(2)加入樣品液，對照用的加入等量蒸餾水，(3)加酶的底物乙酸萘酯，(4)加水溶性苯胺藍(lán)進(jìn)行顯色，(5)判斷結(jié)果；該方法利用吊白塊分子對雞或鴨血清中純化的乙酰膽堿酯酶的抑制作用，使乙酰膽堿酯酶的底物乙酸萘酯不能分解，從而加入水溶性苯胺藍(lán)后顯示的顏色深淺不一致，達(dá)到判斷樣品是否含有吊白塊的目的；這是一種成本低，操作簡便快速，能適于現(xiàn)場特異測定食品中是否含有吊白塊的方法。
文檔編號C12Q1/46GK1715884SQ20051003594
公開日2006年1月4日 申請日期2005年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月15日
發(fā)明者趙肅清, 蔡燕飛, 張焜, 方巖雄, 黃玉婷, 金擇煥 申請人:廣東工業(yè)大學(xué)