專利名稱：鹿角靈芝及其提取物用于制備抗腫瘤、免疫賦活的藥物、食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然植物提取及應(yīng)用領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
迄今為止，在國(guó)內(nèi)外公開雜志中尚未發(fā)表有關(guān)鹿角靈芝(Ganodermaamboinense(Lam.)Pat.)生物活性的研究報(bào)告。最近，日本專利P2005-35898A(2005.2.10)、P2004-51504A(2004.2.19)及P2001-131083A(2001.5.15)對(duì)鹿角靈芝提出在預(yù)防腫瘤、提高健康機(jī)能、醫(yī)藥、健康食品及化妝品等方面的應(yīng)用做出了知識(shí)產(chǎn)權(quán)上的保護(hù)要求。但這些專利并沒有指定鹿角靈芝的確切學(xué)名，更未能在菌種分類名上做出確切說明或限定。目前我國(guó)及歐美仍未對(duì)鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)的生物活性做任何知識(shí)產(chǎn)權(quán)上的要求，也未在公開雜志上發(fā)表過任何論文。
鹿角靈芝分類學(xué)名為Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.，屬靈芝屬真菌，在特定環(huán)境中形成一種形狀像鹿角狀的生長(zhǎng)形態(tài)，故得其名。鹿角靈芝在天然靈芝中極為少見，但近年來人為特殊栽培技術(shù)管理下，鹿角靈芝栽培已獲得成功，作為一種新產(chǎn)業(yè)步入消費(fèi)市場(chǎng)。中國(guó)古代就已有對(duì)于靈芝臨床用途的描述，有著悠久的藥用歷史，被列為名貴中草藥。
靈芝是一種真菌，多為一年生，全世界共有百種以上。不同靈芝產(chǎn)品在有效成份方面存在極大的差異。例如，靈芝中的β-葡聚糖多含在柄部，因此傘部較小的鹿角靈芝的β-葡聚糖含量遠(yuǎn)大于其它靈芝。
靈芝含有如蛋白質(zhì)、纖維素、多肽、腺苷、生物堿、維生素、多糖類(β-葡聚糖)等多種藥理活性物質(zhì)。其中靈芝的藥效作用，特別是抗癌作用主要被認(rèn)為是來自于(1，3)-β-glucan(1，3-β-葡聚糖)(Agric Biol Chem.，492641-2653，1985)。有關(guān)(1，3)-β-葡聚糖的抗癌作用在上世紀(jì)60年代已被人們所關(guān)注(Nature，222p687.1969)。特別是日本的研究者在這方面進(jìn)行了比較多的研究。目前日本已有三種1，3(or 1，6-)-β-葡聚糖藥物應(yīng)用于臨床。其中有Ajinomoto Co.，Inc.研制的Lentinan(Nature，229634，1971)；Kaken Pharmaceutical Co.，Ltd.研制的Sizofiran(schizophyllan glucan)(Cancer，58865-872，1986)及Kureha Chemical研制的Krestin(J.Cancer Res.66679-681，1975)。其中，Lentinan和Sizofiran是肌內(nèi)注射用制劑、Krestin是口服用制劑。盡管這些作為機(jī)體應(yīng)答調(diào)節(jié)劑(Biological Response Modifiers；BRM)的作用無法與腫瘤化學(xué)治療藥物相比，但其臨床效果也已在一定程度上得到認(rèn)可。實(shí)際上，有關(guān)這類真菌的熱水提取物的抗癌作用也早已被人們所確認(rèn)(Cancer Res.，29734-735，1969)。
含有1，3(or 1，6-)-β-葡聚糖的(真菌類)植物是一種從調(diào)節(jié)機(jī)體應(yīng)答系統(tǒng)上發(fā)揮抗癌作用的BRM制劑，是否作為臨床用藥雖有爭(zhēng)議，但是，確有生物活性的1，3(or 1，6-)-β-葡聚糖作為預(yù)防癌癥、提高腫瘤放、化療的治療效果以及提高機(jī)體免疫系統(tǒng)機(jī)能的健康食品確是最合適的材料。此外，靈芝含有的活性成分中有些具有多種藥理作用，加之各種活性成份間的協(xié)同作用，因此可以從整體水平提高自然抵抗力，消除體內(nèi)自由基，調(diào)節(jié)免疫水平，提高細(xì)胞、組織生理活性等功能。上述這些作用表明靈芝具有扶正固本的作用，不僅能用來治療神經(jīng)衰弱、冠心病等，還能提高人體對(duì)其他疾病的抵御能力，全面平衡人體健康，廣泛的應(yīng)用使其藥理活性更為顯著，效果更為廣泛。
日本企業(yè)非常關(guān)注鹿角靈芝的市場(chǎng)動(dòng)態(tài)和正在加大力度從事栽培、成分分離及生物活性應(yīng)用方面的研究。例如，2005年2月由日本大學(xué)申請(qǐng)的日本專利(特開P2005-35898A)對(duì)鹿角靈芝作為癌癥預(yù)防劑方面提出知識(shí)產(chǎn)權(quán)的要求。Sakamoto Bio.Co.，Ltd也曾對(duì)鹿角靈芝在健康機(jī)能組成物(特開P2004-51504A)及鹿角靈芝提取活性物質(zhì)在醫(yī)藥、健康食品、化妝品方面應(yīng)用方面提出知識(shí)產(chǎn)權(quán)的要求(特開P2001-131083A)。但這些專利并沒有指定鹿角靈芝的學(xué)名，更未能在菌種分類名上作以確切說明或限定。歐美和中國(guó)國(guó)內(nèi)尚未對(duì)鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)的生物活性作任何知識(shí)產(chǎn)權(quán)上的要求也未在公開雜志上發(fā)表過任何論文。基于上述理由，本發(fā)明是提供一種以鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)及鹿角靈芝提取物為原料，制備具有抗癌作用，減輕腫瘤化學(xué)治療及放射治療的毒副作用，免疫賦活作用的藥品、健康食品及食品添加劑。確切說，本發(fā)明是提供一種以鹿角靈芝或鹿角靈芝提取物為原料制備可用于抗腫瘤，改善腫瘤引起的各種臨床癥狀，減少因腫瘤化學(xué)治療及放射治療引起的免疫低下等副作用，可以長(zhǎng)期服用，安全性高、無毒副作用的醫(yī)藥品、健康食品、食品添加劑及其組成物。此外，本發(fā)明也提示鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物所具有的免疫賦活作用可制備用于減輕和治療因免疫低下引起的臨床癥狀，也可作為因免疫賦活而增強(qiáng)的機(jī)體抵抗力的藥品、健康食品及食品添加劑及其組成物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供以鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物為原料，制備一種安全性高、無毒副作用的用于提高機(jī)體免疫力、預(yù)防各種因應(yīng)激負(fù)荷、免疫低下、病毒等因素誘發(fā)的癌癥的藥品、健康食品及食品添加劑及其組成物。
本發(fā)明還可以用于改善及緩解因腫瘤引起的各種臨床癥狀，也可以用于減少因腫瘤放、化療引起的包括造血功能低下、并發(fā)感染癥、消化系統(tǒng)功能低下在內(nèi)的各種生理機(jī)能上的非正常應(yīng)激反應(yīng)等各種副作用的治療藥物、健康食品或其組成物。所述的上述治療藥物或其組成物應(yīng)包括有效治療劑量的鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物，以及藥學(xué)上可接受的藥物載體。該治療劑或其組成物特別是對(duì)腫瘤或腫瘤放、化療引起的臨床癥狀的預(yù)防、治療有效，例如對(duì)造血功能低下、并發(fā)感染癥、消化系統(tǒng)功能障礙及由應(yīng)激反應(yīng)所引起的臨床癥狀有抑制或減輕作用。
本發(fā)明的另一發(fā)明目的在于提供以鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物為原料，制備用于提高免疫力，可以長(zhǎng)期服用、安全性高、無毒副作用的健康食品、食品及食品添加劑的用途。日常服用含有鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物的食品可以減輕和預(yù)防因免疫低下引起的感冒、各種急性或慢性炎癥、各種并發(fā)癥等臨床癥狀。
本發(fā)明所述的鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物是采用直接經(jīng)粉碎、超聲波破碎制得，鹿角靈芝提取物是鹿角靈芝經(jīng)加壓熱處理、高溫飽和水蒸汽處理、酶處理，或者采用熱水或水與低級(jí)醇類等極性溶劑的一種或二種以上的任意混合溶劑進(jìn)行提取得到的。
因?yàn)槭惺勐菇庆`芝免疫賦活劑多以水提取物為原料，所以一般用水提取即可，也可用不同濃度的低級(jí)醇類、丙酮等極性溶劑或任意混合溶劑來提取。在提取時(shí)，隨著醇的添加，鹿角靈芝中活性成分的提取率會(huì)有所增加。盡管用水提取效果不如用添加了一定醇的溶劑提取，但隨著水溫增加以及提取時(shí)間的延長(zhǎng)，也可以達(dá)到與醇提取法相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。因此，對(duì)鹿角靈芝中活性成分的提取而言，上述提取方法及其任意組合都可得到本發(fā)明所述的提取物。
鑒于鹿角靈芝提取物是以藥劑、健康食品或食品添加劑作為最終產(chǎn)品開發(fā)，故從安全性角度考慮提取溶劑盡量選擇水或含水乙醇為宜。鹿角靈芝與溶劑的比例以1∶1～50范圍為宜。提取溫度從室溫到溶劑沸點(diǎn)范圍內(nèi)。提取時(shí)間從10秒到24小時(shí)范圍都可以。在提取鹿角靈芝提取物時(shí)，根據(jù)需要也可以在溶劑中添加少量碳酸氫鈉、抗壞血酸鈉鹽(sodium ascorbate)等物質(zhì)。這些提取方法不會(huì)影響鹿角靈芝本來具有的生物活性。
本發(fā)明提供的鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物的使用量一般在0.01％至100％(W/W)，因?yàn)橥ǔｏ嬃咸砑訚舛纫话阍?.01％至100％(W/W)范圍較為適宜。在這個(gè)濃度范圍內(nèi)，鹿角靈芝提取物適于直接服用，容易被消費(fèi)者接受。當(dāng)然，作為添加物的鹿角靈芝提取物隨著加入量的增大，可能會(huì)出現(xiàn)苦澀感覺。其解決辦法可以根據(jù)市場(chǎng)需要及消費(fèi)者的心理要求改換劑型，例如使用片劑、顆粒劑、膠囊劑等劑型。低濃度鹿角靈芝提取物溶液可以作為日常飲料提供給消費(fèi)者。
本發(fā)明提供的鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物，可以用于制備提高機(jī)體免疫力，預(yù)防各種癌癥，改善及緩解因腫瘤引起的各種臨床癥狀，減少因腫瘤放、化療引起的各種生理機(jī)能上的非正常應(yīng)激反應(yīng)等各種副作用的治療藥物、健康食品或其組成物。當(dāng)然，鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物也可以與常用的賦形劑等醫(yī)藥用載體結(jié)合而后制劑化。必要時(shí)也可以添加一些防腐劑、抗氧化劑(antioxidant)、著色劑、甜味劑等制劑添加物。
比較適宜的鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物賦形劑，一般考慮有乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、結(jié)晶纖維素等。潤(rùn)滑劑一般應(yīng)采用硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉等。溶劑通常使用精制水、乙醇、丙二醇等。防腐劑一般采用氯丁醇、芐醇、二羥基乙酸等。抗氧化劑通常以亞硫酸鹽、抗壞血酸等比較適宜。
本發(fā)明提供的鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物，可以其原型、提取物或粉末添加到制品中用于口服。鹿角靈芝提取物也可與其它飲料原料結(jié)合制成一定的飲料制品，如含鹿角靈芝的碳酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、豆乳等。鹿角靈芝提取物食品還可以考慮制成餅干、巧克力類、糖果類、口香糖類、快餐點(diǎn)心類、果凍點(diǎn)心類、面包、豆腐、酸奶酪等日常食品。
本發(fā)明提供鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物作為抗癌、提高機(jī)體免疫力，減輕及改善腫瘤放、化療副作用為下述實(shí)驗(yàn)所證明。在使用抗腫瘤動(dòng)物模型的藥理實(shí)驗(yàn)中，鹿角靈芝提取物在投藥劑量達(dá)到50mg/kg以上時(shí)，即顯示出有效的抑制腫瘤的效果。本發(fā)明中鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物的投藥量，根據(jù)應(yīng)用者的健康狀況、年齡、性別及體重等條件可以調(diào)節(jié)。成人平均體重如以60Kg計(jì)，鹿角靈芝及鹿角靈芝提取物日口服量一般可以考慮在0.5g至10g范圍內(nèi)，分次服用。當(dāng)然10g以上也不存在副作用等問題。
本發(fā)明證明，單獨(dú)口服鹿角靈芝及其提取物可以有效地抑制荷瘤小鼠的S180腫瘤生長(zhǎng)。此外，本發(fā)明以注射抗癌化療藥物環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)誘發(fā)小鼠免疫及造血機(jī)能低下作為癌癥化學(xué)療法副作用的動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，評(píng)價(jià)鹿角靈芝改善腫瘤化療副作用及免疫賦活作用效果。結(jié)果顯示，鹿角靈芝提取物對(duì)腫瘤化療法誘發(fā)的小鼠紅、白細(xì)胞、脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)減少表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的改善活性。此外，本發(fā)明也發(fā)現(xiàn)鹿角靈芝提取物在改善及促進(jìn)腫瘤化療減少的CD4等細(xì)胞的恢復(fù)作用具有有意義的效果?；谏鲜鼋Y(jié)果確認(rèn)本發(fā)明成立。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明可以通過以下實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明，但并不僅僅局限于以下實(shí)施例。
實(shí)施例一鹿角靈芝提取物的制備干燥鹿角靈芝100g，切片后，使用粉碎機(jī)微粉碎、回收細(xì)粉化的鹿角靈芝并添加4000ml水溶液在30分鐘加壓條件下200℃熱處理二次。然后將提取液經(jīng)紗布濾過后，濃縮干燥即成。干燥提取物用于本發(fā)明的下列實(shí)施例。
實(shí)施例二鹿角靈芝及其提取物的制備干燥鹿角靈芝100g，切片后，使用粉碎機(jī)微粉碎、回收細(xì)粉化的鹿角靈芝并添加2000ml，50％乙醇加熱提取2小時(shí)。然后將提取液經(jīng)紗布濾過后，濃縮至無乙醇?xì)馕叮?％-20％的鹿角靈芝細(xì)粉混合，干燥后物于本發(fā)明的下列實(shí)施例。
實(shí)施例三鹿角靈芝及其提取物口服給藥的抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)使用Charles River Japan Inc.購(gòu)入的7周齡雄性ddY小鼠，1周飼養(yǎng)后，將1×106Sarcoma180 cells/0.1ml接種于小鼠右側(cè)前肢腋部皮下。每組10只小鼠，在腫瘤接種前一日開始分別口服給于0.1ml/10g不同濃度的鹿角靈芝提取液，連續(xù)給藥15日，對(duì)照組為水溶液。結(jié)果表示，不同濃度的鹿角靈芝提取液均顯示出一定的抑制Sarcoma180(S180)腫瘤成長(zhǎng)的作用，鹿角靈芝的抑瘤作用具有一定的劑量依賴性關(guān)系，結(jié)果見附圖1。
實(shí)施例四鹿角靈芝及其提取物増強(qiáng)環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)抗腫瘤作用的輔助作用實(shí)驗(yàn)使用Charles River Japan Inc.購(gòu)入的7周齡雄性C57BL/6mice小鼠，1周飼養(yǎng)后，將2×1063LL Lewis lung carcinoma cells/0.1ml接種于小鼠右側(cè)前肢腋部皮下。每組10只小鼠，在腫瘤接種后一日到四日連續(xù)4日腹腔內(nèi)注射150mg/kg(0.1ml/10g環(huán)磷酰胺(Shionogi & Co.，Ltd.)，對(duì)照組腹腔內(nèi)注射同容量生理鹽水。0.1ml/10g不同濃度的鹿角靈芝提取液在腫瘤接種前一日開始分別口服連續(xù)給藥15日，對(duì)照組為水溶液。腫瘤接種二十日后處死小鼠，摘除腫瘤并測(cè)定腫瘤重量。結(jié)果表示，不同濃度的鹿角靈芝提取液均顯示出一定的增強(qiáng)環(huán)磷酰胺對(duì)3LL(Lewis lung carcinoma)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用，結(jié)果見附圖2。實(shí)驗(yàn)證明并用鹿角靈芝能提高癌癥化學(xué)治療藥物的效果。
實(shí)施例五鹿角靈芝及其提取物促進(jìn)環(huán)磷酰胺(CY)引起的末梢白血球低下的恢復(fù)作用實(shí)驗(yàn)使用Charles River Japan Inc.購(gòu)入的7周齡雄性C57BL/6小鼠，1周飼養(yǎng)后，300mg/kg環(huán)磷酰胺(CY)以0.1ml/10g容量靜脈注射。每組5只小鼠，對(duì)照組靜脈注射同容量生理鹽水。500mg/kg(0.1ml/10g)的鹿角靈芝提取液在環(huán)磷酰胺處理前四日開始至環(huán)磷酰胺靜脈注射30分鐘前，連續(xù)5日分別口服給藥，對(duì)照組為水溶液。末梢血液是經(jīng)小鼠眼底靜脈采血后，由多項(xiàng)自動(dòng)血球分析儀(SYSEX K-1000)測(cè)定及細(xì)胞分類。結(jié)果表示，經(jīng)口給藥500mg/kg鹿角靈芝提取液顯示出可以促進(jìn)環(huán)磷酰胺引起白血球(Leukocytes102cells/μl)減少的恢復(fù)作用，結(jié)果見圖3。實(shí)驗(yàn)證明并用鹿角靈芝可以改善腫瘤化學(xué)治療的副作用。
實(shí)施例六鹿角靈芝及其提取物促進(jìn)環(huán)磷酰胺(CY)引起的脾臟細(xì)胞低下的恢復(fù)作用實(shí)驗(yàn)使用Charles River Japan Inc.購(gòu)入的7周齡雄性C57BL/6小鼠、1周飼養(yǎng)后，300mg/kg cyclophosphamide(CY)以0.1ml/10g容量靜脈注射。每組5只小鼠，對(duì)照組靜脈注射同容量生理鹽水。500mg/kg(0.1ml/10g)的鹿角靈芝提取液在CY處理前四日開始至CY靜脈注射30分鐘前，連續(xù)5日分別口服給藥，對(duì)照組為水溶液。小鼠CY投藥后即時(shí)處死并取出脾臟測(cè)定重量。結(jié)果表示，經(jīng)口給藥500mg/kg鹿角靈芝提取液顯示出可以在一定程度上減輕化療法CY引起的脾臟細(xì)胞減少，同時(shí)也能促進(jìn)脾臟細(xì)胞恢復(fù)作用，結(jié)果見圖4。實(shí)驗(yàn)證明并用鹿角靈芝可以改善腫瘤化學(xué)治療的副作用。
實(shí)施例七鹿角靈芝及其提取物促進(jìn)環(huán)磷酰胺(CY)引起的骨髓細(xì)胞自然増殖能力(spontaneous proliferation)低下的恢復(fù)作用實(shí)驗(yàn)使用Charles River Japan Inc.購(gòu)入的7周齡雄性ddY小鼠，飼養(yǎng)1周后，環(huán)磷酰胺(CY，300mg/kg)以0.1ml/10g容量靜脈注射。每組5只小鼠，對(duì)照組靜脈注射同容量生理鹽水。500mg/kg(0.1ml/10g)的鹿角靈芝提取液在CY處理前四日開始至CY靜脈注射30分鐘前，連續(xù)5日分別口服給藥，對(duì)照組為水溶液。小鼠CY投藥后即時(shí)處死并無菌取出大腿骨。切斷骨兩端后，將含20％牛胎血清的RPMI1640培養(yǎng)液由骨端面注入，回收骨髓細(xì)胞。然后調(diào)整骨髓細(xì)胞至2×105cells/well添加到96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入3H-thymidine 0.5μCi/well后培養(yǎng)5小時(shí)，測(cè)定放射線活性。結(jié)果表示，經(jīng)口服給藥500mg/kg鹿角靈芝提取液顯示出可以在一定程度上減輕化療法CY引起的骨髓增殖減少，同時(shí)也能促進(jìn)骨髓細(xì)胞恢復(fù)作用。證明并用鹿角靈芝可以改善腫瘤化療的副作用。
表1 鹿角靈芝對(duì)由環(huán)磷酰胺引起的小鼠骨髓細(xì)胞自然增殖能力低下的恢復(fù)作用

注0天時(shí)骨髓細(xì)胞的自然增殖能力為未經(jīng)環(huán)磷酰胺處理的小鼠的骨髓細(xì)胞自然增殖能力；各組別與單獨(dú)使用環(huán)磷酰胺組對(duì)比，進(jìn)行t檢驗(yàn)，*代表P＜0.01。
實(shí)施例八鹿角靈芝及其提取物促進(jìn)X線照射引起的造血功能低下的恢復(fù)作用實(shí)驗(yàn)使用Charles River Japan Inc.購(gòu)入的7周齡雄性ddY小鼠，1周飼養(yǎng)后，使用Hitachi Medical Corporation制MBR-1520型X線照射裝置、以1.16Gy/min(150kV，20mA.filter0.5mmAI+0.1mmCu)線量對(duì)小鼠進(jìn)行6Gy的全身照射。然后，將5×104cells/mouse的正常ddY小鼠骨髓細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射到被照射小鼠體內(nèi)。骨髓細(xì)胞注射8日后，取出脾臟觀察脾臟表面形成的克隆形成(CFU-s)數(shù)。0.1ml/10g不同濃度的鹿角靈芝提取液在X線照射前四日開始至X線照射30分鐘前，連續(xù)5日口服給藥，對(duì)照組為水溶液。結(jié)果表示，經(jīng)口給藥鹿角靈芝提取液顯示出可以在一定程度上減輕X線照射引起的造血功能低下。證明并用鹿角靈芝可以改善腫瘤放射治療的副作用。
鹿角靈芝提取物對(duì)脾臟克隆形成單位的影響

將5×104cells/mouse/0.2mlddY小鼠骨髓細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射到6Gy X射線照射小鼠體內(nèi)。8天后通過bouin著色方法分析小鼠脾臟細(xì)胞表面克隆形成單位的數(shù)量。各給藥組均與單獨(dú)照射空白組對(duì)比，進(jìn)行t檢驗(yàn)，*P＜0.05。
實(shí)施例力鹿角靈芝及其提取物對(duì)自然殺傷性細(xì)胞(natural killerNK)的賦活作用實(shí)驗(yàn)使用Charles River Japan Inc.購(gòu)入的7周齡雄性C57BL/6小鼠，1周飼養(yǎng)后，300mg/kg cyclophosphamide(CY)以0.1ml/10g容量靜脈注射。稅組5只小鼠，對(duì)照組靜脈注射同容量生理鹽水。500mg/kg(0.1ml/10g)的鹿角靈芝提取液在CY處理前四日開始至CY靜脈注射30分鐘前，連續(xù)5日分別口服給藥、對(duì)照組為水溶液。CY投藥后小鼠經(jīng)時(shí)處死并取出脾臟，使用組織研磨器(homogenizer)分離單細(xì)胞。用Tris-HCl(pH7.65)溶液低張?zhí)幚沓ゼt血球后回收淋巴細(xì)胞為殺傷作用性細(xì)胞。
NK細(xì)胞活性測(cè)定是將由脾臟回收的淋巴細(xì)胞調(diào)至2×106、1×106及5×105細(xì)胞/孔后，添加104細(xì)胞/孔的51Cr鉻酸鈉(100mCi，NEN，Boston，MA)標(biāo)記一小時(shí)YAC-1靶細(xì)胞。培養(yǎng)四小時(shí)后離心回收細(xì)胞上清液，測(cè)定上清液中的51Cr的γ放射線量。同位素最大釋放量(Maximum isotope release)是將1N HCl直接添加在YAC-1靶細(xì)胞回收的細(xì)胞上清液。同位素自然釋放量(Spontaneousisotope release)是來自只對(duì)YAC-1靶細(xì)胞添加RPMI 1640培養(yǎng)液的上清液。
此外，本發(fā)明也計(jì)算了30％細(xì)胞殺傷(cytolysis)時(shí)標(biāo)記細(xì)胞所需要的脾臟細(xì)胞數(shù)(30％細(xì)胞殺傷單位(1lytic unit 30)，LU30)，并計(jì)算出106cells脾臟細(xì)胞具有的NK細(xì)胞殺傷活性(LU30/106cells)。
結(jié)果表示，經(jīng)口給藥鹿角靈芝提取液顯示出可以在一定程度上減輕腫瘤化療治療CY引起的NK細(xì)胞殺傷活性的減少，證明并用鹿角靈芝可以改善腫瘤化學(xué)治療的副作用，賦活免疫活性，結(jié)果見附圖5。
實(shí)施例十鹿角靈芝及其提取物對(duì)自然殺傷性細(xì)胞(natural killerNK)的賦活作用實(shí)驗(yàn)使用的7周齡雄性C57BL/6小鼠由Charles River Japan Inc.購(gòu)入，飼養(yǎng)1周后，環(huán)磷酰胺(CY，300mg/kg)以0.1ml/10g容量靜脈注射。每組5只小鼠，對(duì)照組靜脈注射同容量生理鹽水。500mg/kg(0.1ml/10g)的鹿角靈芝提取液在CY處理前四日開始至CY靜脈注射30分鐘前，連續(xù)5日分別口服給藥，對(duì)照組為水溶液。CY投藥后小鼠經(jīng)時(shí)處死并取出脾臟，使用組織研磨器(homogenizer)分離單細(xì)胞。熒光染色后使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分類。結(jié)果表示，CY投藥后脾細(xì)胞大量減少，脾臟整體中的NK細(xì)胞活性下降。但106脾細(xì)胞的NK細(xì)胞比率減少并不顯著。經(jīng)口服給藥500mg/kg鹿角靈芝提取液顯示出在促進(jìn)脾細(xì)胞恢復(fù)的同時(shí)，也在一定程度上賦活NK細(xì)胞活性，證明并用鹿角靈芝可以改善癌化學(xué)療法劑的副作用，具有一定的免疫賦活作用，結(jié)果見附圖6。
發(fā)明效果迄今為止，人們?cè)趯?duì)癌癥病理生理進(jìn)行分析的同時(shí)，也注重對(duì)其治療藥物的研制和開發(fā)。但臨床應(yīng)用的抗癌化學(xué)療法劑多數(shù)具有副作用，在臨床使用劑量上受到一定限制，在效果上也多局限于暫時(shí)性的緩解，而不能從根本上達(dá)到治療目的。從上述角度出發(fā)，一種可以長(zhǎng)期服用而且安全性高的用于改善、治療癌癥性疾病、或提高癌化學(xué)治療藥物的作用的健康食品或醫(yī)藥品的研制為人們所期待。當(dāng)然，從預(yù)防觀點(diǎn)出發(fā)，可作為日常服用的抗癌藥物或緩解化學(xué)療法副作用的健康食品或食品添加物的則更為理想。近年來，人們非常關(guān)心天然物質(zhì)生理活性的研究，對(duì)傳統(tǒng)中草藥及天然植物類所具有生物功能更是特別關(guān)注。傳統(tǒng)中草藥已有數(shù)千年的歷史，這些傳統(tǒng)中草藥對(duì)健康的種種調(diào)節(jié)功能自古以來早已為人所知。
根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)可以證明本發(fā)明提供的鹿角靈芝或鹿角靈芝提取液是一種安全性高，來自天然的通過提高機(jī)體免疫系統(tǒng)，從而達(dá)到預(yù)防、改善和治療癌癥、免疫低下及上述原因引起的各種臨床癥狀的可用于制備長(zhǎng)期服用的、安全無毒副作用的藥物、食品添加劑、健康食品及其組成物。


圖1為鹿角靈芝提取物對(duì)接種S180瘤株小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用(橫坐標(biāo)為小鼠接種S180瘤株后的天數(shù)(小鼠灌胃給與鹿角靈芝(GaEx)提取物)；縱坐標(biāo)為腫瘤大小(平方毫米)；Water control代表空白對(duì)照組；GaEx代表鹿角靈芝提取物組，后面的數(shù)字代表灌胃給藥劑量。)圖2為不同劑量的鹿角靈芝提取液對(duì)環(huán)磷酰胺抗腫瘤效果的增強(qiáng)作用(橫坐標(biāo)為腫瘤重量(g)；Water control代表空白對(duì)照組；CY代表環(huán)磷酰胺；CY+GaEx代表環(huán)磷酰胺與不同劑量鹿角靈芝提取物聯(lián)合用藥組。)圖3為鹿角靈芝提取液對(duì)環(huán)磷酰胺引起的末梢白血球低下的恢復(fù)作用(橫坐標(biāo)為給與環(huán)磷酰胺后的天數(shù)；縱坐標(biāo)為白細(xì)胞數(shù)量(10e+2細(xì)胞/ul)；CY代表環(huán)磷酰胺；GaEx代表鹿角靈芝提取物；CY+GaEx代表環(huán)磷酰胺與鹿角靈芝提取物和并用藥。)圖4為鹿角靈芝提取液促進(jìn)環(huán)磷酰胺引起的脾臟細(xì)胞低下的恢復(fù)作用(橫坐標(biāo)為給與環(huán)磷酰胺后的天數(shù)；縱坐標(biāo)為脾臟重量(mg/鼠)；CY代表環(huán)磷酰胺；GaEx代表鹿角靈芝提取物；CY+GaEx代表環(huán)磷酰胺與鹿角靈芝提取物和并用藥。)圖5為鹿角靈芝及其提取物對(duì)自然殺傷性細(xì)胞(natural killerNK)的賦活作用(橫坐標(biāo)為給與環(huán)磷酰胺后的天數(shù)；縱坐標(biāo)為106cells脾臟細(xì)胞具有的NK細(xì)胞殺傷活性(LU30/106cells)；CY代表環(huán)磷酰胺；GaEx代表鹿角靈芝提取物；CY+GaEx代表環(huán)磷酰胺與鹿角靈芝提取物和并用藥。)圖6為環(huán)磷酰胺給藥五日時(shí)的脾臟細(xì)胞中NK細(xì)胞比率(左為單獨(dú)給與環(huán)磷酰胺300mg/kg，右為環(huán)磷酰胺300mg/kg與鹿角靈芝提取物500mg/kg共同給藥，M4區(qū)域代表NK細(xì)胞的數(shù)量)。
權(quán)利要求
1.鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)及其提取物為原料用于制備抗腫瘤或改善因腫瘤引起的臨床癥狀的藥物及食品的用途。
2.鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)及其提取物為原料用于制備提高腫瘤化學(xué)治療的效果及改善腫瘤化學(xué)治療引起的臨床癥狀的藥物及食品的用途。
3.鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)及其提取物為原料用于制備提高腫瘤放射治療的效果及改善腫瘤放射治療引起的臨床癥狀的藥物及食品的用途。
4.鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)及其提取物為原料用于制備提高免疫能力，改善因免疫低下引起的臨床癥狀的藥物及食品的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的用途，其特征在于以鹿角靈芝(Ganoderma amboinense(Lam.)Pat.)及鹿角靈芝提取物為原料可以制備用于治療腫瘤，改善腫瘤或腫瘤化學(xué)治療及放射治療引起的并發(fā)感染癥，改善腫瘤化學(xué)治療及放射治療引起的造血功能低下及上述原因引起的各種臨床癥狀的，可以長(zhǎng)期服用，安全、無毒副作用的醫(yī)藥品、食品添加劑、健康食品及化妝品或它們的組成物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的用途，其特征在于所述的用于上述目的的鹿角靈芝為天然鹿角靈芝直接經(jīng)粉碎、超聲波破碎制得，鹿角靈芝提取物是鹿角靈芝經(jīng)加壓熱處理、高溫飽和水蒸汽處理、酶處理，或者采用熱水或水與低級(jí)醇類等極性溶劑的一種或二種以上的任意混合溶劑進(jìn)行提取得到的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的用途，其特征在于所述的鹿角靈芝粉末或鹿角靈芝提取物在藥物或食品中的使用量為0.01％至100％(重量比)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種以鹿角靈芝(Ganodermaamboinense(Lam.)Pat.)及鹿角靈芝提取物為原料，以藥品、食品為使用范圍的具有抗腫瘤、免疫賦活活性的物質(zhì)。確切說，本發(fā)明是提供一種以鹿角靈芝及其提取物為原料制備用于改善和治療腫瘤患者的各種臨床癥狀，減輕因腫瘤放、化療引起的免疫低下等副作用，可以長(zhǎng)期服用，安全、無毒副作用的藥品、食品及其組成物。此外，本發(fā)明也提示鹿角靈芝及提取物具有的免疫賦活作用可以用于制備減輕和治療因免疫低下引起的臨床癥狀，也可作為通過免疫賦活作用而增強(qiáng)機(jī)體防御能力的藥品、食品及其組成物。
文檔編號(hào)A23L1/30GK1836674SQ20051003370
公開日2006年9月27日 申請(qǐng)日期2005年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月25日
發(fā)明者栗原博, 黃杰昌, 吳蓉蓉, 續(xù)潔琨 申請(qǐng)人:廣州萊泰制藥有限公司