專利名稱：適用于大量生產分枝桿菌的一種培養(yǎng)基配方及配制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種菌苗的培養(yǎng)基配方及配制方法。確切說，本案涉及一種大量生產分枝桿菌的培養(yǎng)基配方及配制方法(不包括麻風分枝桿菌)。
背景技術：
分枝桿菌為放線菌分枝桿菌屬，主要有結核分枝桿菌復合群、非結核分枝桿菌和麻風分枝桿菌。與人類健康關系最密切的要屬結核分枝桿菌和牛分枝桿菌。20世紀初法國科學家Calmette和Guerin將一株從牛乳房分離出的牛型結核菌在甘油馬鈴薯培養(yǎng)基上傳代，經過13年230代將強毒牛型結核菌變成無毒菌株。也就是現在世界上應用最廣泛的預防結核病的卡介苗。
卡介苗除用于預防結核病外，從20世紀60年代在國內外還廣泛的應用于其它疾病的治療。如1976年Moralcs首次報告應用卡介苗膀胱灌注治療表淺膀胱癌，卡介苗作為一種有效的免疫佐劑已經在防治膀胱腫瘤方面取得了良好效果。國內卡介苗在防治上呼吸道感染、哮喘、過敏性鼻炎、腎炎、等疾病中也取得了明顯療效。隨著近年對分枝桿菌(主要是卡介菌和母牛結核菌)防治疾病機理研究的進展，證實了卡介菌和母牛結核菌不僅是一種良好的免疫增強劑，而且是一種良好的免疫調節(jié)劑，最新的研究成果顯示，卡介菌及其成份提取物在過敏性疾病的防治上有非常廣闊的應用前景。
目前卡介菌和母牛結核菌培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法大多還采用傳統的蘇通液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，產量受到一定的限制，很難滿足醫(yī)藥市場上對卡介菌及其提取物和母牛結核菌的需求，國內只有很少幾個廠家生產少量的卡介菌提取物和母牛結核菌制品供應市場。
蘇通液體培養(yǎng)基成分磷酸二氫鉀 0.5g硫酸鎂 0.5g檸檬酸 2.0g檸檬酸鐵銨 0.05g谷氨酸鈉 4.0g甘油 30.0ml蒸餾水 970.0ml膽鹽瓊脂培養(yǎng)基成分膽鹽 1.5g蛋白胨 20.0g氟化鈉 5.0g乳糖 10.0g蒸餾水 1000.0ml瓊脂 20.0g結晶紫 0.001g中性紅 0.03g
改良蘇通液體培養(yǎng)基成分L-天門冬素 2.0g磷酸鉀 1.6g硫酸鎂(7·H2O) 0.25g甘油 20.0ml檸檬酸鈉(2·H2O)1.25g蒸餾水 加至 950.0ml檸檬酸鐵銨 0.05g小牛血清 50.0ml磷酸氫二鈉 3.4g蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基成分同改良蘇通液體培養(yǎng)基，將其中L-天門冬素改用味精代替，每1000ml液體培養(yǎng)基中加味精16.0g。加熱溶解后分裝于卡介菌專用培養(yǎng)管中，每管30.0ml，然后再加入經處理的馬鈴薯斜面一塊，121℃高壓滅菌30分鐘，取出放冷后備用。
馬鈴薯斜面制備過程繁瑣也使卡介菌培養(yǎng)基大批量生產受到限制，在該過程，用一個2.6cm直徑的不銹鋼管在洗凈去皮的馬鈴薯打孔使之成圓柱形，然后對角切成兩個斜面，放入1％碳酸鈉溶液中浸泡2～3小時，用自來水沖洗2～3小時，取出馬鈴薯斜面放入蒸餾水中泡30分鐘。
液體培養(yǎng)基雖可采用自動化灌裝大批量生產，但用瓶培養(yǎng)時占用培養(yǎng)箱面積大，而且必須將卡介菌接種于液體表面，一旦接種的卡介菌沉入培養(yǎng)液中則不能生長繁殖，故接種操作難度大，而且必須輕輕放入培養(yǎng)箱中。
蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基是用接種鏟將卡介菌均勻涂抹接種于馬鈴薯斜面上，斜放在架子上。使其中蘇通液體培養(yǎng)基浸泡在馬鈴薯斜面的周圍而又不能浸泡著接種的卡介菌。輕輕放入培養(yǎng)箱中。操作繁瑣，技術要求高。
長期以來人們一直期望有一種易于大批量制作，配制方法簡便、所有分枝桿菌(麻風分枝桿菌除外)都能生長良好的、并為接種、收獲等后續(xù)操作提供便利的培養(yǎng)基配方及配制方法。
本發(fā)明提供的分枝桿菌培養(yǎng)基配方和配制方法，可用于所有分枝桿菌的大批量生產(麻風分枝桿菌除外)。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供的培養(yǎng)基配方和配制方法，適用于大批量生產分枝桿菌，其中術語“馬鈴薯”意指土豆洗凈去皮后切碎。和現有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于提供的培養(yǎng)基配方和配制方法，成本低，PH穩(wěn)定，配制簡便易行，可實現機械化灌裝，培養(yǎng)效果好，適用于大批量生產分枝桿菌。培養(yǎng)基最優(yōu)選方案每管可產卡介菌2.5～3.5克，較為優(yōu)選的方案每管可產卡介菌2.0～2.5克；優(yōu)選方案每管可產1.5克。目前最多采用的蘇通液體培養(yǎng)基，每瓶可產卡介菌4.0克，但培養(yǎng)技術繁瑣、培養(yǎng)室面積大，人力物力投入多，成本高于本發(fā)明提供方法的數倍。
具體實施例方式本發(fā)明的培養(yǎng)基配方如下
成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 10～15g(2)K2HPO42.8～3.5g(3)KH2PO40.8～1.2g(4)ZnSO40.004～0.001g(5)CuSO40.004～0.001g(6)MgSO40.3～0.9g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.4～2.0g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.02-0.10克(9)丙三醇70～100.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 200～300g(11)瓊脂粉 9.0～3.0g(12)蒸餾水 1000.0ml大量生產分枝桿菌的一種培養(yǎng)基優(yōu)選配方如下成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 12～14g(2)K2HPO42.9～3.3g(3)KH2PO40.9～1.1g(4)ZnSO40.003～0.002g(5)CuSO40.003～0.002g(6)MgSO40.4～0.7g(7)Na3C6H5O7.2H2O1.6～1.9g
(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.04-0.08克(9)丙三醇80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 240～280g(11)瓊脂粉 8.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml大量生產分枝桿菌的一種培養(yǎng)基的最優(yōu)選配方如下成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 9.0～11g(2)K2HPO43.0～3.1g(3)KH2PO40.9～1.0g(4)ZnSO40.002～0.001g(5)CuSO40.002～0.001g(6)MgSO40.5～0.6g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.7～1.8g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.02-0.06克(9)丙三醇80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 250～270g(11)瓊脂粉 6.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml本發(fā)明提供的大量生產分枝桿菌培養(yǎng)基配制方法為，將上述成分(1)(2)(3)(9)(10)(12)混勻加熱煮沸后，再加入配方中其他成份用攪拌機充分混勻后定量灌裝于培養(yǎng)管內，加塞后高壓15磅30分鐘滅菌，冷卻后即可用于分枝桿菌培養(yǎng)用。
本發(fā)明提供的大量生產分枝桿菌培養(yǎng)基配方及配制方法，不僅使培養(yǎng)基的制作降低了成本，而且為分枝桿菌大量生產的后續(xù)操作(如接種操作、收獲操作)提供了極大的方便。較傳統方法所使用的人力減少一半以上，而且還可使分枝桿菌的產量提高5倍。本發(fā)明對緩解醫(yī)藥市場分枝桿菌及其提取物制劑的供需矛盾起到重要作用。
本領域的科技人員觀看該說明書內容后，可對培養(yǎng)基配方進行各種修改和變動，但任何修改或變動都在申請待批的權利要求書的保護范圍之內。
權利要求
1.適用于大量生產分枝桿菌的一種培養(yǎng)基，其特征在于成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 10～15g(2)K2HPO42.8～3.5g(3)KH2PO40.8～1.2g(4)ZnSO40.004～0.001g(5)CuSO40.004～0.001g(6)MgSO40.3～0.9g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.4～2.0g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)220.02-0.10克(9)丙三醇 70～100.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 200～300g(11)瓊脂粉 9.0～3.0g(12)蒸餾水 1000.0ml
2.根據權利要求1所述的適用于大量生產分枝桿菌的一種培養(yǎng)基，其特征在于成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素)12～14g(2)K2HPO42.9～3.3g(3)KH2PO40.9～1.1g(4)ZnSO40.003～0.002g(5)CuSO40.003～0.002g(6)MgSO40.4～0.7g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.6～1.9g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)220.04-0.08克(9)丙三醇 80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 240～280g(11)瓊脂粉 8.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml
3.根據權利要求1所述的適用于大量生產分枝桿菌的一種培養(yǎng)基，其特征在于成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 9.0～11g(2)K2HPO43.0～3.1g(3)KH2PO40.9～1.0g(4)ZnSO40.002～0.001g(5)CuSO40.002～0.001g(6)MgSO40.5～0.6g(7)Na3C6H5O7.2H2O1.7～1.8g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.02-0.06克(9)丙三醇 80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 250～270g(11)瓊脂粉 6.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml
全文摘要
本發(fā)明提供一種生產分枝桿菌的培養(yǎng)基配方及配制方法，該培養(yǎng)基的配方如下，成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素)9.0～11g；(2)K
文檔編號C12N1/20GK1737115SQ20041005814
公開日2006年2月22日 申請日期2004年8月17日 優(yōu)先權日2004年8月17日
發(fā)明者李麗平 申請人:李麗平