專(zhuān)利名稱(chēng)：以顏色為基礎(chǔ)的生化和免疫分析中的光譜測(cè)量的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及顏色為基礎(chǔ)的生化和免疫分析及試驗(yàn)，其中將分析或試驗(yàn)樣品進(jìn)行顏色特性具體是色彩角和/或色度的光譜測(cè)量。已經(jīng)證明使用這種測(cè)量的分析可用于廣范圍的藥物試驗(yàn)和篩選流程和診斷方法中產(chǎn)生定量或半定量的結(jié)果。
背景技術(shù)：
如下詳細(xì)所述，許多診斷試驗(yàn)依賴(lài)于目檢和對(duì)顏色的評(píng)估，該顏色是用產(chǎn)生顏色(與分析物即試驗(yàn)的具體化合物(如膽固醇)或樣品中存在的指示疾病(如癌癥)的特異性分子標(biāo)記物的量正相關(guān))的試劑處理生物材料樣品而產(chǎn)生的。
需要目測(cè)及對(duì)顏色變化評(píng)估的試驗(yàn)很方便且通常適宜用來(lái)初步主觀(guān)評(píng)估靶化合物或疾病標(biāo)記物的存在，但它們基本上不是定量的。
我驚訝地發(fā)現(xiàn)，用反射分光光度法測(cè)定色彩角和/或色度以及相關(guān)的特性，能得到至少半定量測(cè)定的分析結(jié)果。從一種或多種分析樣品顏色的規(guī)定特性的這種測(cè)量可以得到許多關(guān)于是否存在進(jìn)行性疾病(如癌癥)以及這些疾病發(fā)展階段的有價(jià)值信息。
以顏色為基礎(chǔ)的癌癥試驗(yàn)自美國(guó)專(zhuān)利5,162,202知道，檢查人類(lèi)患者的直腸粘液，可用來(lái)檢測(cè)直腸癌和大腸癌。在濾膜上收集粘液。用半乳糖氧化酶在磷酸鹽緩沖劑中的溶液浸泡來(lái)預(yù)處理纖維質(zhì)濾膜，然后冷凍干燥。使用時(shí)潤(rùn)濕此纖維質(zhì)濾膜，然后將此纖維質(zhì)濾膜與載有粘液樣品的濾膜接觸1-2小時(shí)。然后清洗此載有粘液的濾膜，與堿性品紅反應(yīng)15分鐘，清洗并干燥。品紅的脫色表明粘液中有癌性或前癌性條件的碳水化合物標(biāo)記物的存在。這種試驗(yàn)費(fèi)時(shí)而繁重，而且靈敏度不高，因此可能會(huì)得到錯(cuò)誤的陰性結(jié)果。
Shamsuddin的美國(guó)專(zhuān)利5,348,860(1994年9月20日)公開(kāi)了一種改進(jìn)的直腸粘液試驗(yàn)。在該方法中，收集粘液樣品，將其固定于一濾膜上，并用半乳糖氧化酶處理，使樣品中的任何鄰位半乳糖部分氧化成鄰位醛部分。這種氧化轉(zhuǎn)變可以用Schiff試劑來(lái)目測(cè)。這是一種更快速的方法。用這種方法試驗(yàn)為陰性的樣品可以用過(guò)碘酸進(jìn)一步氧化，然后再用Schiff試劑目測(cè)，以降低得到錯(cuò)誤陰性結(jié)果的可能性。
已知的粘液試驗(yàn)一直存在的問(wèn)題是需要對(duì)著色結(jié)果進(jìn)行目測(cè)和評(píng)估。雖然這種檢驗(yàn)足以作為初步主觀(guān)評(píng)估癌癥標(biāo)記物的存在與否，它依舊僅是定性的。這種檢驗(yàn)無(wú)法給出關(guān)于標(biāo)記物(所發(fā)現(xiàn)的，而且如果存在，本可以指示出癌癥的發(fā)展?fàn)顩r)的量和濃度的可靠定量信息。另外，培養(yǎng)樣品的培養(yǎng)基通常是纖維質(zhì)膜(如濾紙)，其本身可能含有參與顯色反應(yīng)的化合物。這就產(chǎn)生了會(huì)使試驗(yàn)結(jié)果的解釋復(fù)雜化的“背景”，從而降低了試驗(yàn)的靈敏度。這就需要對(duì)試驗(yàn)結(jié)果解釋非常有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員。
以顏色為基礎(chǔ)的對(duì)膽固醇含量的分析已經(jīng)穩(wěn)固地認(rèn)識(shí)到了患者高血清膽固醇含量與發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的傾向和以后冠心病發(fā)作、中風(fēng)和PVD發(fā)作的增加有關(guān)系，因此需要經(jīng)常監(jiān)測(cè)患者的膽固醇含量。通常，用提取的血液樣品來(lái)確定膽固醇含量。還用提取的血液樣品進(jìn)行許多其它的臨床試驗(yàn)，但這些試驗(yàn)中的大部分需要進(jìn)行試驗(yàn)的時(shí)間間隔比膽固醇分析長(zhǎng)。由于用于膽固醇分析的血液收集流程的侵入性，使許多患者不愿接受按需進(jìn)行的頻繁的膽固醇監(jiān)測(cè)。因此需要一種非侵入性的膽固醇試驗(yàn)。
估計(jì)皮膚中含有約11％體總膽固醇，主要是來(lái)自表皮類(lèi)固醇和由血管擴(kuò)散出來(lái)的膽固醇。已經(jīng)假設(shè)皮膚膽固醇的含量可能比血清膽固醇的量更能準(zhǔn)確反映動(dòng)脈粥樣硬化的程度。
Nikitin，YP，Gordenko，I.A.，Dolgov，A.V.和Filimonova，T.A.，“皮膚中的膽固醇含量及其與健康人和缺血性心臟病患者血清中脂質(zhì)系數(shù)的相關(guān)性”，Cardiology 1987 II，NO.10，第48-51頁(yè)，及其它文獻(xiàn)顯示了患者動(dòng)脈壁中的膽固醇含量和皮膚中的膽固醇含量間有密切的相關(guān)性。這表明有可能研究出皮膚試驗(yàn)來(lái)測(cè)定患者的膽固醇含量。Nikitin等人描述的方法包括體外切除和分析皮膚樣品，這種方法對(duì)臨床應(yīng)用而言是不切實(shí)際的。
Lopukhin等人的美國(guó)專(zhuān)利5,489,510和5,587,295描述了一種非侵入性診斷方法，該方法是在患者的皮膚上進(jìn)行的，能指示皮膚膽固醇含量。這些專(zhuān)利所述的方法中，以親和-酶促化合物的形式提供試劑(它們?cè)诒拘陨鲜请p功能的)。這些雙功能化合物A-B包含結(jié)合劑A，它能與皮膚上的膽固醇分辨性地形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而可以使整個(gè)雙功能化合物具有對(duì)膽固醇的親和力(如毛地黃皂苷)；還包含目測(cè)劑B，例如酶如過(guò)氧化物酶，它可以檢測(cè)與皮膚膽固醇結(jié)合的雙功能化合物。在進(jìn)行該試驗(yàn)時(shí)，結(jié)合劑A和目測(cè)劑B的復(fù)合物，可能還加上用來(lái)提高試驗(yàn)靈敏度的橋鍵形成劑C，即雙功能共軛物A-C-B，可以置于患者手掌的皮膚上。橋鍵形成劑C是合適的高分子量的多功能化合物如多糖或蛋白質(zhì)，其作用是將目測(cè)劑和結(jié)合劑隔開(kāi)從而將膽固醇-結(jié)合劑反應(yīng)的立體位阻最小化。在確保復(fù)合物結(jié)合于皮膚的膽固醇的適當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間過(guò)后，用清水充分清洗該手掌部位除去未結(jié)合的試劑。然后用指示劑D處理該結(jié)合的部位，與目測(cè)劑B反應(yīng)來(lái)顯色。膽固醇的含量越高，雙功能化合物與皮膚結(jié)合的程度也越大，從而顯色的程度也越高。
基于上述Lopukhin等人專(zhuān)利的膽固醇試驗(yàn)已經(jīng)在商業(yè)上研究成功并已進(jìn)入商業(yè)實(shí)踐。它包括提供含有試劑和比色卡或讀數(shù)計(jì)的試劑盒。小瓶含有大部分試劑，除去保護(hù)性蓋子后，使用者將其置于手掌上的試驗(yàn)部位。培養(yǎng)后，使用者涂上指示劑并在比色卡旁或用讀數(shù)計(jì)目測(cè)所發(fā)生的顏色變化。
這種試驗(yàn)的一個(gè)缺陷是需要目測(cè)顏色的變化。雖然這種試驗(yàn)很方便，可以由無(wú)經(jīng)驗(yàn)的人如患者進(jìn)行，但對(duì)得到的顏色變化的目測(cè)是主觀(guān)的且基本不能定量。這種試驗(yàn)可以給出膽固醇含量和潛在疾病問(wèn)題的有價(jià)值的指示，但不是醫(yī)生通常所需的定量測(cè)定類(lèi)型的方法。這種方法易受背景(即皮膚)的特性和顏色的影響。
本發(fā)明的一般目的是提供一種測(cè)定和測(cè)量以顏色為基礎(chǔ)的生化或免疫分析結(jié)果的新方法，其不依賴(lài)于主觀(guān)目測(cè)。本發(fā)明另一個(gè)更具體的目的是提供一種可定量測(cè)量生物樣品中靶化合物量的方法，而該樣品已經(jīng)歷過(guò)生化或免疫分析產(chǎn)生了與所述靶化合物正相關(guān)的顏色。
本發(fā)明的另一目的是提供用于癌癥診斷中的對(duì)體分泌物、液體、和半固體的新型試驗(yàn)方法及其使用的試劑盒。
本發(fā)明的另一目的是提供一種試驗(yàn)直腸粘液和其它分泌物、液體和半固體(包括糞便)和它們混合物的新方法及其使用的試劑盒，這種方法能克服或至少明顯減少一個(gè)或多個(gè)上述缺陷。在以下的說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)“結(jié)腸所含的半固體”指粘液、糞便和從患者直腸或結(jié)腸得到的其它液體或半固體和它們的混合物，可用作本發(fā)明方法中的可分析材料。
本發(fā)明的另一目的是提供用于膽固醇的非侵入性新型診斷方法。
本發(fā)明的另一且更具體的目的是提供能得到至少半定量結(jié)果的膽固醇試驗(yàn)方法。
發(fā)明概述為了克服基于對(duì)顏色變化目測(cè)要求的已有技術(shù)的診斷試驗(yàn)的缺點(diǎn)，本發(fā)明在其很廣的方面使用分光光度計(jì)可測(cè)定的某些具體參數(shù)，但這些參數(shù)不是本發(fā)明先前使用的。檢測(cè)并分析這些比色參數(shù)，可以提供靈敏度和特異性都很高的分析和診斷。在各種波長(zhǎng)測(cè)量分析或試驗(yàn)中所顯的顏色，并測(cè)量色彩角和/或色度提供是否存在靶化合物、疾病狀況或其它狀況的有價(jià)值信息，這就是以顏色為基礎(chǔ)的分析或試驗(yàn)的目標(biāo)。在有些情況下，有關(guān)的顏色特性如光亮度或飽和度的測(cè)量可以進(jìn)一步提高試驗(yàn)或分析的靈敏度。
在本發(fā)明的另一方面，提供一種診斷患者身體分泌的液體或半固體樣品的方法，以便找出分泌這些物質(zhì)的組織或器官異常的證據(jù)，所述的方法包括自患者采集液態(tài)或半固態(tài)分泌物樣品，將至少一部分樣品置于通常為白色的底質(zhì)上，在底質(zhì)上染色該樣品，讓其顯色，用分光光度計(jì)測(cè)定顯色樣品的規(guī)定顏色特性，并按所得到的具體顏色特性的值將樣品鑒別成正常或異常。
在本發(fā)明的另一方面，提供一種分析患者液態(tài)或半固態(tài)分泌物樣品的系統(tǒng)，測(cè)量樣品中顯現(xiàn)的具體顏色特性來(lái)診斷患者是否存在異常，這些顏色特征選自色彩角、色度或飽和度以及光亮度，所述的系統(tǒng)包括白色的非纖維質(zhì)底質(zhì)，帶有多孔“縐紋”的表面，用來(lái)放置顯色過(guò)程中的樣品；半乳糖氧化酶源，用于將半乳糖氧化酶置于底質(zhì)表面上對(duì)其上的樣品進(jìn)行選擇性酶促氧化；Schiff試劑源，用于將Schiff試劑加到底質(zhì)上氧化的樣品，進(jìn)行可分析物的顯色；將已顯色的樣品置于便攜式反射分光光度計(jì)的裝置中，所述的反射分光光度計(jì)能夠測(cè)量和記錄選自所述底質(zhì)上染色樣品的色彩角、色度或飽和度以及光亮度這些具體的顏色特性。
在本發(fā)明的又一方面，提供一種診斷接觸于直腸結(jié)腸的半固態(tài)樣品的方法，以提供患者異常的證據(jù)，所述的方法包括自患者采集接觸于結(jié)腸的半固態(tài)樣品，將至少一部分樣品置于白色底質(zhì)上，用半乳糖氧化酶將底質(zhì)上的樣品染色，再用Schiff試劑讓染色的樣品顯色，用分光光度計(jì)測(cè)量顯色樣品的顏色特性，并按所得到的具體顏色特性的值將樣品鑒定為正常和異常。
在本發(fā)明的另一方面，提供分析患者液態(tài)或半固態(tài)分泌物樣品的試劑盒，來(lái)診斷患者是否存在直腸異常，所述的試劑盒包括通常為白色的非纖維素底質(zhì)，用來(lái)接受樣品；半乳糖氧化酶源；Schiff試劑源；便攜式反射分光光度計(jì)，它能夠測(cè)量和記錄選自所述底質(zhì)上染色樣品的色彩角、色度或飽和度以及光亮度的規(guī)定顏色特性。
本發(fā)明的另一方面提供一種試驗(yàn)方法，將液態(tài)或半固態(tài)試劑置于患者的皮膚上，來(lái)使其與皮膚膽固醇結(jié)合，然后令該試劑顯色，顯示顏色的程度與皮膚中的膽固醇的量直接相關(guān)。用比色方法而不是目測(cè)來(lái)分析顯色的液態(tài)或半固態(tài)試劑來(lái)測(cè)量顯色的程度，從而至少可以半定量地獲得膽固醇含量。所選的比色參數(shù)如色彩角或色澤，它們是獨(dú)立于色彩密度、光強(qiáng)度或光亮度(L)的，只是衡量色澤的。這就基本消除了皮膚背景顏色所引入的不確定性，因此可以在患者皮膚表面進(jìn)行這種試驗(yàn)。儀器比色(分光光度)分析能得到至少半定量的客觀(guān)數(shù)據(jù)，顯示患者的膽固醇含量。
本發(fā)明的另一方面，提供一種測(cè)量患者皮膚膽固醇含量的方法，所述的方法包括在患者皮膚上施加能選擇性結(jié)合皮膚膽固醇的試劑；讓所形成的結(jié)合皮膚膽固醇的試劑進(jìn)行顯色化學(xué)反應(yīng)，形成有色復(fù)合物；將如此形成的有色復(fù)合物進(jìn)行分光光度分析，讀取有色復(fù)合物顏色的預(yù)定特性。
本發(fā)明的另一方面提供一種用于測(cè)量患者皮膚膽固醇含量的試劑盒，所述的試劑盒包含能與患者皮膚膽固醇結(jié)合，在皮膚上形成結(jié)合物的檢測(cè)劑的源；能與檢測(cè)劑-結(jié)合劑的結(jié)合物反應(yīng)形成光學(xué)改變的復(fù)合物的目試驗(yàn)劑的源；顯色劑的源和將顯色劑加到光學(xué)改變的復(fù)合物上使其顯色的裝置；容納并提供所述光學(xué)改變的復(fù)合物到便攜式反射分光光度計(jì)上的裝置，用以測(cè)定選自色彩角、色度或飽和度的顏色特性。
附圖簡(jiǎn)述在以下本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例的敘述中，其涉及上述關(guān)于測(cè)量患者皮膚膽固醇含量的方法和試劑盒的部分，將參考附圖。附圖中


圖1是本發(fā)明用于測(cè)量患者皮膚膽固醇含量的試驗(yàn)帶的示意圖；圖2是本發(fā)明用于測(cè)量皮膚膽固醇含量的分光光度讀數(shù)計(jì)在打開(kāi)狀態(tài)的示意圖；圖3是與圖2類(lèi)似的圖，但分光光度計(jì)處于關(guān)閉狀態(tài)；圖4是圖2和圖3所示分光光度計(jì)底座的詳圖。
優(yōu)選實(shí)施例詳述如上所述，申請(qǐng)人基本的發(fā)明即是使用比色測(cè)量具體是以顏色為基礎(chǔ)的分析的色度和/或色彩角的測(cè)量，可以以許多方式和實(shí)例獲得應(yīng)用。以下將詳細(xì)描述本發(fā)明的這兩個(gè)方面和一些優(yōu)選實(shí)施例，以各個(gè)標(biāo)題分開(kāi)。
適用于本發(fā)明所有方面的分光光度計(jì)是便攜式，以反射為基礎(chǔ)的，當(dāng)分光光度計(jì)的入射光從染色樣品反射回到儀器的接受器時(shí)，可以進(jìn)行顏色特性(如色彩角、光亮度和色度或飽和度)精確的測(cè)量。這種儀器是可以購(gòu)得的。合適儀器的一個(gè)優(yōu)選例子是X-Rite，Grand Falls，Michigan，U.S.A.的“CA22型分光光度計(jì)”。其所附的合適軟件可以與計(jì)算機(jī)相連，給出測(cè)試的染色樣品色彩角的精確讀數(shù)。該分光光度計(jì)接受大約400-700nm波長(zhǎng)范圍，即大部分可見(jiàn)光光譜的反射，適宜的間隔約為20nm。
已知可以以色彩角來(lái)定義和表示顏色?！吧式恰备拍畹亩x和討論可參見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)教科書(shū)，如Fred W.Billmeyer和Max Saltzman的“彩色技術(shù)原理”，John Wileyand Sons出版(具體參見(jiàn)其第1和第2章)，本文參考結(jié)合于此?！吧省笔菢悠放c其光亮度或光強(qiáng)度無(wú)關(guān)的顏色或色澤，一種顏色或色澤的“色彩角”定義為其在可見(jiàn)光完整光譜的標(biāo)準(zhǔn)三維橢圓連續(xù)譜的用角坐標(biāo)表示的反射波長(zhǎng)?？梢?jiàn)光(顏色)的連續(xù)譜表示在從0到360°角度范圍的標(biāo)度上。將在反射分光光度計(jì)上讀取的角度值轉(zhuǎn)化成線(xiàn)性形式，得到用于本發(fā)明方法中的轉(zhuǎn)化的“色彩角”。
(i)癌癥試驗(yàn)在本發(fā)明中驚訝地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)測(cè)量從適當(dāng)人體組織或器官的液態(tài)或半固態(tài)分泌物顯色的色彩角或上述其它規(guī)定的顏色特性，可以確定廣泛范圍的病癥的存在與否包括腸的病癥、肺的病癥、子宮病癥等。可用直腸粘液反應(yīng)和光譜光度分析來(lái)診斷結(jié)腸癌。因此，患直腸癌的人給出的直腸粘液樣品在所述的染色和顯色后，其色彩角數(shù)值比正常腸所得到的高。因此可用染色樣品的色彩角或其它規(guī)定的顏色特性來(lái)區(qū)分有腸的癌癥病變和沒(méi)有該病變的情況。具體說(shuō)，已發(fā)現(xiàn)癌癥病變樣品的色彩角通常在375-425°范圍，這是臨床樣品測(cè)定的頂點(diǎn)四分位數(shù)。另外，由于試驗(yàn)結(jié)果是用便攜式分光光度計(jì)分析的，因此無(wú)需技術(shù)人員來(lái)讀取試驗(yàn)結(jié)果。
用類(lèi)似的方法，可以診斷肺癌和肺癌前癥狀，是將肺粘液或痰液進(jìn)行類(lèi)似的顯色和分光光度分析。對(duì)宮頸粘液進(jìn)行這種試驗(yàn)可以診斷子宮頸的癌和癌前癥狀。也可類(lèi)似地分析精囊分泌物如精液，以分析生殖器官如睪丸的癌癥。還可類(lèi)似地分析喉道粘液，以檢測(cè)和診斷喉癌?？梢杂靡阎姆椒ǐ@得喉道和肺部的粘液，如支氣管窺鏡或細(xì)支氣管肺泡沖洗的辦法。乳頭吸出物是可以用于以本發(fā)明方法類(lèi)似地試驗(yàn)乳腺癌的體液。
本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例的另一顯著方面是使用多孔玻璃纖維膜，可在其上將樣品氧化并將其顯色。這種玻璃纖維材料基本沒(méi)有產(chǎn)生染色的殘余物，因此進(jìn)行酶促氧化時(shí)它沒(méi)有會(huì)參與隨后顯色反應(yīng)的殘余物。因此，有效地消除了可能混淆或干擾診斷試驗(yàn)的背景顯色。另外，這種膜的顏色是基本純白的，從而進(jìn)一步降低了讀取結(jié)果時(shí)的背景“干擾”。
用于本發(fā)明的玻璃纖維膜的另一特性是其表面空隙度，因此其上的粘液樣品可更好地鋪展，從而能露出樣品中附加的碳水化合標(biāo)記物來(lái)參與氧化和顯色反應(yīng)，從而改善試驗(yàn)方法的靈敏度。
用于本發(fā)明的玻璃纖維多孔膜的另一優(yōu)選例子是可以從Whatman Inc.Larboratroy Division購(gòu)得的商品名為“Whatman 934-AH玻璃纖維膜”的硼硅玻璃膜介質(zhì)，在高的流量下它具有高的負(fù)載能力和高的持留效率。推薦將其用于細(xì)胞收獲和液體閃爍計(jì)數(shù)方法。然而這僅是一個(gè)例子，還可用其它基本純白的玻璃纖維、無(wú)碳水化合物、表面空隙率適合于接觸結(jié)腸的半固態(tài)樣品進(jìn)行表面鋪展的底質(zhì)。
在用本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選方面的具體步驟中，用于結(jié)腸癌癥檢測(cè)和用酶促氧化反應(yīng)進(jìn)行顯色時(shí)，先從患者采取要試驗(yàn)的樣品。在操作者帶手套的手指上涂敷潤(rùn)滑劑。將手指插入患者的直腸，旋轉(zhuǎn)360°從而得到接觸結(jié)腸的代表性半固體(如直腸粘液)樣品。從直腸取出手指后，將樣品涂在白色濾膜的表面上，用適當(dāng)?shù)母采w物、保護(hù)物和鑒定物安置在直腸粘液試驗(yàn)卡上，分析該卡。
為了分析，從直腸粘液試驗(yàn)卡上除去背襯，在試驗(yàn)卡上加入50μl標(biāo)準(zhǔn)半乳糖氧化酶溶液。用標(biāo)準(zhǔn)方法培養(yǎng)10分鐘。然后將此卡浸泡在兩次蒸餾的水中30秒，然后加上1ml Schiff試劑3分鐘。隨后將此卡轉(zhuǎn)移到水中漂洗，共4次每次10分鐘，進(jìn)行顯色。然后干燥此卡，用上述類(lèi)型的便攜式分光光度計(jì)讀取色彩角確定得分。低于預(yù)定值(對(duì)直腸粘液樣品而言為350)的色彩角分?jǐn)?shù)表明是正常健康的組織源。超過(guò)預(yù)定值(對(duì)直腸粘液而言為370)的分?jǐn)?shù)表明為癌組織源。
而給出中間值的樣品可以還進(jìn)行全面的氧化來(lái)輔助最終的診斷?；谝阎谌魏螛悠分刑妓蠘?biāo)記物上僅有一部分鄰位羥基能被酶促氧化以顯色，因此可以再用一種強(qiáng)氧化劑(如高碘酸鹽)氧化所有殘留下的基團(tuán)，然后再次顯色并試驗(yàn)。如果與最初結(jié)果的差異很大，則表明樣品應(yīng)被分為它具有較高的初值。如果差異極小或沒(méi)有明顯差異，則可安全地將樣品分為具有較低分?jǐn)?shù)。
由這種方法從分光光度計(jì)簡(jiǎn)單讀取出的色彩角的值，操作者無(wú)需主觀(guān)上的判斷分析就可以確定從其采集樣品的人的結(jié)腸是否健康正?；蚧加邪c已有的診斷方法相比，大大降低了錯(cuò)誤陽(yáng)性和錯(cuò)誤陰性的幾率。采取相同的標(biāo)準(zhǔn)采樣、染色、培養(yǎng)和顯色步驟，且使用相同的標(biāo)準(zhǔn)試劑，在診斷實(shí)驗(yàn)室中在最小干擾和經(jīng)濟(jì)花費(fèi)的條件下可以采用本發(fā)明的這種新方法。
人體器官和組織的其它粘液樣品也可采取基本上類(lèi)似的試驗(yàn)方法。按照本發(fā)明，半乳糖氧化酶的酶促氧化及隨后用Schiff試劑的反應(yīng)是優(yōu)選的顯色反應(yīng)步驟。但本發(fā)明并非僅限于此。可以采用任何能給出癌癥顯色特征的選擇性反應(yīng)的步驟。例如，將樣品與Schiff試劑直接反應(yīng)(不用酶促反應(yīng)步驟)也可以用于顯色。在所有情況下，用分光光度分析所顯示的顏色來(lái)測(cè)量顏色的色澤或色彩的客觀(guān)參數(shù)例如色彩角就構(gòu)成了本發(fā)明的用途。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)上述的這些顏色參數(shù)是與各種癌的存在和發(fā)展?fàn)顩r相關(guān)聯(lián)的。
(ii)非侵入性膽固醇試驗(yàn)在本發(fā)明這個(gè)方面的優(yōu)選過(guò)程中，使用液態(tài)或半固態(tài)生化試劑，顯示決定于患者皮膚膽固醇含量的顏色，并對(duì)所顯示的顏色進(jìn)行分光光度分析。在本發(fā)明中，所顯示顏色的精確本性和特征(如色彩角所表征的)與形成的結(jié)合的復(fù)合物的量相關(guān)，從而與皮膚的膽固醇含量相關(guān)。這種顏色特性的測(cè)量是客觀(guān)的且至少是半定量的。因此，其讀數(shù)與背景皮膚的顏色無(wú)關(guān)，即背景皮膚顏色對(duì)其沒(méi)有明顯程度的影響。
通常以恰當(dāng)?shù)捻樞蛟诨颊咂つw表面上加上所有試劑，在皮膚表面上顯色，然后趁顯色復(fù)合物留在皮膚上時(shí)，用光譜光度計(jì)對(duì)其檢查，這是很方便的。整個(gè)測(cè)試可以在5分鐘內(nèi)完成。所選用于試驗(yàn)的皮膚區(qū)域應(yīng)是基本沒(méi)有皮脂腺的區(qū)域，因?yàn)檫@種皮脂腺會(huì)提供含膽固醇的血清，而這將干擾試驗(yàn)結(jié)果。腳底和手掌是這種合適的皮膚區(qū)域，而對(duì)本發(fā)明的試驗(yàn)而言手掌最方便。
試劑盒包括容納和提供顯色復(fù)合物用便攜式分光光度計(jì)進(jìn)行分析的裝置。合適的是能與皮膚粘著的帶子形式的容器，它帶有一個(gè)或多個(gè)通孔，從而使孔中所含的試劑可以與患者的皮膚接觸。容器的設(shè)計(jì)主要由分光光度計(jì)的物理特性決定。也可以不采用試劑用的容器，可以在試劑中加有觸變劑，從而將試劑的鋪展限制于皮膚表面上并防止試驗(yàn)試劑與對(duì)照試劑(施加在臨近的皮膚部位)相混合。
本發(fā)明還適用于其它以顏色為基礎(chǔ)的試驗(yàn)和分析，本發(fā)明的另一方面為非侵入性的膽固醇試驗(yàn)，結(jié)合于皮膚膽固醇的有色復(fù)合物的色彩角與皮膚膽固醇含量是相關(guān)聯(lián)的。
可用于本發(fā)明的合適化學(xué)試劑是在上述Lopukhin等人專(zhuān)利中所述的那些試劑，其內(nèi)容全部參考結(jié)合于此。這些試劑精確的選擇并非是本發(fā)明必需或限制性的特征，只要這些試劑互相聯(lián)合使用時(shí)可以因與皮膚膽固醇的結(jié)合而顯色。本文所用的術(shù)語(yǔ)“結(jié)合”指是會(huì)使一種化學(xué)物質(zhì)與另一種化學(xué)物質(zhì)連接的廣泛含義的化學(xué)反應(yīng)吸附以及特異性親和類(lèi)型“嚙合“的相互作用(通常在生化系統(tǒng)中發(fā)生)。
因此，從能分辨地與皮膚上的游離膽固醇形成穩(wěn)定復(fù)合物的物質(zhì)來(lái)選擇結(jié)合劑A，從而可以得到與膽固醇有親和力的完整雙功能化合物。當(dāng)它直接或通過(guò)橋鍵形成劑C化學(xué)結(jié)合于目測(cè)劑B之前或之后，它可與膽固醇直接反應(yīng)形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
適用于膽固醇結(jié)合劑A的化合物，其代表性種類(lèi)包括甾類(lèi)糖苷，它含有作為糖苷配基的呋甾醇(furostanole)或螺旋甾醇(spirostanole)系列的環(huán)戊烷菲烷片段和具有線(xiàn)性或支鏈結(jié)構(gòu)的3-10個(gè)單糖殘基的寡糖片段(Hinta P.H.“螺旋甾烷和呋甾烷系列甾類(lèi)糖苷的結(jié)構(gòu)和生物活性”，HIshinev，Stinza，1987第142頁(yè))，其中特別優(yōu)選的例子是funcoside C、D、E、F、G和I、薯蕷素、rocoside C、D和E、lanotigonine、毛地黃皂苷和番茄苷；三萜烯糖苷，它含有α或β-脂檀醇(amyryl)、羽扇烷、荷烷(hopane)、達(dá)瑪烷(dommarane)、羊毛甾烷(linostane)或全甾烷(holostane)系列的糖苷配基和含有支鏈或線(xiàn)性結(jié)構(gòu)糖殘基的寡糖(Deknnosidze G.E.，Chirva V.Y.，SergienkoT.V.，Uvarova N.L.“三萜烯糖苷的研究”，Tbilisi，Mesniereba，1982)；能分辨地與膽固醇形成復(fù)合化合物的疏水蛋白質(zhì)(Himov A.N.，Titova G.V.，Kozhenikov H.A.，Biochemister，1982，第47卷，No.2，第226-232頁(yè))；Himov A.N.，Hozhevinkov H.A.，Klyueva N.N.等人，Voprosy Meal.，Hhimii，1984，第30卷，No.3，第86-90頁(yè)；Titova G.V.，Hilyueva N.N.，Hozhevnikov H.A.等人，Biochemistry，1980，第45卷，No.1，第51-55頁(yè))；蛋白質(zhì)毒素，它能分辨地與膽固醇形成復(fù)合化合物。它們能從細(xì)菌、海洋微生物、昆蟲(chóng)和蛇提取(Dalin M.V.，F(xiàn)ish N.G.“微生物的蛋白質(zhì)毒素”，Moscow，Medicine，1980)；或多烯抗生素，它能分辨地與膽固醇形成復(fù)合化合物(I.J.Katzenstein，A.M.Spielvogel，A.W.Norman，J.Antibiot.，27，12，1974，第943-951頁(yè)；Jong Shan Shyng，Wang His-Hua，Clin.J.Microbiol.，1976，9，(1-2)，第19-30頁(yè)；Readio Josphine D.等人，Biochim.Biophys.Acta，1982，685(2)，第219-24頁(yè))；高親和力的酶，其底物是膽固醇且對(duì)膽固醇有高親和力。本文將上述所有出版物開(kāi)物都納入作為參考結(jié)合之。
膽固醇結(jié)合劑A的最佳選擇是毛地黃皂苷。
目測(cè)劑B通常是酶，因?yàn)槊?底物反應(yīng)產(chǎn)生的顏色變化是特別有用的。這些酶的優(yōu)選例子包括乙酰膽堿酯酶、酪氨酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖氧化酶、葡糖淀粉酶、β-D-半乳糖苷酶、過(guò)氧化物酶、堿性或酸性磷酸酶、α-胰凝乳蛋白酶和焦磷酸酶。過(guò)氧化物酶是最佳選擇，如辣根過(guò)氧化物酶(HRP)。
用橋鍵形成劑C能增強(qiáng)本方法的效果，并有利于所需A-C-B復(fù)合物的產(chǎn)生，而顏色是由該復(fù)合物顯色的，同時(shí)還保持著試劑A和B的官能團(tuán)活性。最優(yōu)選的A-C-B復(fù)合物是那些用甾類(lèi)糖苷(含有作為糖苷配基的呋甾醇或螺旋甾醇系列的環(huán)戊烷菲烷片段和具有線(xiàn)性或支鏈結(jié)構(gòu)的2-10個(gè)單糖殘基的寡糖片段如毛地黃皂苷)作為膽固醇親和結(jié)合劑A的A-C-B復(fù)合物。當(dāng)將毛地黃皂苷選作膽固醇結(jié)合劑A且將HRP選作目測(cè)劑時(shí)，理想的是用橋鍵形成劑C，因?yàn)镠RP的分子量相對(duì)較大，當(dāng)它直接結(jié)合于毛地黃皂苷時(shí)可能會(huì)在空間上阻礙毛地黃皂苷與皮膚膽固醇的反應(yīng)。作為用于此目的的橋鍵形成劑C，較佳地是用高分子量的多功能化合物。它們的使用可以對(duì)最終復(fù)合物中試劑A和C的比例有很大范圍的控制。這種高分子量多功能橋鍵形成劑C可以是各種多糖、蛋白質(zhì)或合成的聚合物，即任何含有伯胺、羧基、羥基、醛、鹵酸酐、混合的酸酐、亞氨醚、疊氮、羥基、順丁烯二酰亞胺、異氰酸酯或環(huán)氧官能團(tuán)的合適的高分子量化合物。丙烯酸或馬來(lái)酸或馬來(lái)酐和N-乙烯吡咯烷酮是最優(yōu)選的高分子量多功能橋鍵形成劑C。也可以用不對(duì)稱(chēng)的低分子量雙功能化合物，如溴化氰(bromocyan)、三氯三嗪或2-氨基-4，6-二氯-3-三嗪。
指示劑D通常含有所用酶的底物作為目測(cè)劑B，以及使酶和其底物的反應(yīng)能看見(jiàn)所需的其它化合物。當(dāng)用過(guò)氧化物酶作為目測(cè)劑B時(shí)，這些指示劑D的優(yōu)選例子是含有過(guò)氧化氫、N，N-二乙基-對(duì)-亞環(huán)己二烯基硫酸酯的化合物連同適當(dāng)穩(wěn)定劑的試劑。指示劑D和目測(cè)劑B選自本領(lǐng)域已知的與所選酶在反應(yīng)中能產(chǎn)生顏色的化合物。
為了進(jìn)行本發(fā)明的試驗(yàn)提供一種試劑盒。該試劑盒包括在適當(dāng)密封包裝(如帶有滴管的管形瓶或小瓶)中的所需的試劑，一個(gè)容器或其它容納裝置，在其中可進(jìn)行在患者皮膚上的顯色反應(yīng)，同時(shí)防止試劑鋪展的面積過(guò)大，并由其可將所顯現(xiàn)的顏色提供給測(cè)定記錄規(guī)定的顏色特性如色彩角的一個(gè)裝置如便攜式反射光譜光度計(jì)用于檢驗(yàn)和測(cè)定。該容器合適地是個(gè)膠粘帶，上面有一個(gè)或多個(gè)通孔，起初備有一保護(hù)背襯以保護(hù)膠粘劑。較佳地，該容器具有至少2個(gè)或3個(gè)孔，這樣就可以在測(cè)試實(shí)驗(yàn)的同時(shí)進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。為了便于測(cè)試實(shí)驗(yàn)和對(duì)照實(shí)驗(yàn)的正確進(jìn)行，這些孔制成眼睛看起來(lái)可以清楚地互相區(qū)別，例如形狀上不同。
附圖中的
圖1顯示了用于本發(fā)明的一種容器，它是長(zhǎng)方形試驗(yàn)帶10的形狀。此帶包括一個(gè)泡沫材料墊10、有一層由可剝離片14暫時(shí)保護(hù)的與皮膚相容的膠粘劑層12。用于試驗(yàn)的圓形截面的第一個(gè)中心孔16，穿透泡沫材料墊并穿透膠粘劑層12。用于陽(yáng)性對(duì)照目的的菱形截面的第二個(gè)孔18和用于陰性對(duì)照目的的方形截面的第三個(gè)孔，也類(lèi)似地在帶10的泡沫材料墊中提供，這兩個(gè)孔分別在中心孔16的兩邊。這些孔不同的形狀便于操作者進(jìn)行試驗(yàn)，因?yàn)椴僮髡呖梢哉_選擇用于其目的的孔。
較佳是在患者手掌的皮膚上進(jìn)行試驗(yàn)。將以膠粘帶形式的試劑用的容器暫時(shí)粘在皮膚上，讓孔的開(kāi)口底部與皮膚接觸。將試劑加入孔中，在孔內(nèi)顯色，然后無(wú)需將帶從皮膚上移開(kāi)就可用分光光度計(jì)讀取顏色。為此，使用構(gòu)成本發(fā)明另一方面的特別設(shè)計(jì)的分光光度計(jì)。這種分光光度計(jì)將讀數(shù)輸入計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析。這種分光光度計(jì)設(shè)計(jì)成能確保在試驗(yàn)孔上的正確對(duì)準(zhǔn)。
因此，本發(fā)明的一方面提供了適用于將試驗(yàn)樣品的顏色反射讀數(shù)的信號(hào)輸入計(jì)算機(jī)的分光光度計(jì)，這種分光光度計(jì)包括殼體；所述殼體中的發(fā)光器；所述殼體的開(kāi)孔的下部，發(fā)光器可通過(guò)該孔將投射過(guò)去；在所述下部的下表面的凹部，它適于裝在施加于患者皮膚表面的帶孔的試驗(yàn)帶上，從而讓分光光度計(jì)對(duì)準(zhǔn)于所述帶孔試驗(yàn)帶的孔中的試驗(yàn)樣品。較佳地，分光光度計(jì)的下部與殼體絞接，從而當(dāng)該下部打開(kāi)時(shí)它能方便地與試驗(yàn)帶正確配合，然后將該下部關(guān)閉到光度計(jì)的殼體上進(jìn)行測(cè)量。較佳地，在光度計(jì)的絞接的下部和殼體上都裝有觸點(diǎn)起開(kāi)關(guān)作用，從而當(dāng)下部與殼體閉合時(shí)分光光度計(jì)的燈打開(kāi)。
圖2、3和4示意地顯示了這種分光光度計(jì)。它具有殼體22，并裝有與適當(dāng)編程的計(jì)算機(jī)連接的電接線(xiàn)(沒(méi)有顯示)，用于分析讀數(shù)的結(jié)果。下部24在26處鉸接于殼體22上。下部24在28處開(kāi)有孔。有個(gè)槽子30在下部24的底表面寬度上延伸，并從最下表面朝上凸出。此槽子在下部的一邊閉合。槽子30的寬度設(shè)計(jì)得很精確，能緊密配合于圖4中的試驗(yàn)帶10。當(dāng)讀數(shù)時(shí)，將試驗(yàn)帶的一端與槽子的閉合端配合好，再加試驗(yàn)帶10在槽子30寬度中的配合，可以使試驗(yàn)孔16精確地對(duì)準(zhǔn)從讀數(shù)器的殼體22通過(guò)孔28發(fā)出的光束。分光光度計(jì)帶有合適的檢測(cè)裝置，用于從孔16中的樣品接受反射信號(hào)，并將信號(hào)傳送給計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析和讀數(shù)。殼體22和下部24分別具有觸點(diǎn)32、34，當(dāng)下部24關(guān)閉在殼體22上時(shí)，這兩個(gè)觸點(diǎn)就用作開(kāi)關(guān)，打開(kāi)用于測(cè)定的光。
現(xiàn)在描述一個(gè)具體的試驗(yàn)步驟，用的是本發(fā)明診斷實(shí)際試驗(yàn)的一個(gè)說(shuō)明性的(非限制性的)例子。
試劑盒包括裝有檢測(cè)溶液(毛地黃皂苷辣根過(guò)氧化物酶軛合物的水性緩沖液，含有作為防腐劑的0.01％溴硝基二惡烷和甲基異噻唑啉酮(methylisothiazolone)，1.5ml)的滴管瓶，帶有便于區(qū)分的有色蓋子(綠色)；裝有作為陽(yáng)性對(duì)照的含有更高濃度檢試驗(yàn)劑、和防腐劑(小于0.01％溴硝基二惡烷和甲基異噻唑啉酮)的類(lèi)似緩沖液的滴管瓶，帶有便于區(qū)分的有色蓋子(紅色)；裝有與皮膚膽固醇結(jié)合的檢測(cè)劑和PC試劑產(chǎn)生藍(lán)綠色的試劑(4.0ml 3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺、TMD、過(guò)氧化氫溶液，含5％N，N-二甲基甲酰胺作為防腐劑)溶液的指示劑滴管瓶，帶有便于區(qū)分的蓋子(藍(lán)色)；如
圖1所示的泡沫材料墊，在其上可以加上試劑；酒精海綿和使用說(shuō)明書(shū)。上述那些化學(xué)試劑可以在2-8℃的冰箱內(nèi)穩(wěn)定長(zhǎng)限保存。試劑盒也可包括與適當(dāng)編程計(jì)算機(jī)相連的圖2和3所示的分光光度計(jì)和與此分光光度計(jì)一起使用的校準(zhǔn)板。該試劑盒一般并不包括分光光度計(jì)，除非最初出售時(shí)帶有。同一分光光度計(jì)可以與后來(lái)“再加料”的那些滴管瓶再次使用。
起初，將校準(zhǔn)板插入分光光度計(jì)的夾緊裝置中，將其閉上，此時(shí)校準(zhǔn)板獲得照明，將校準(zhǔn)讀數(shù)送回到分光光度計(jì)和計(jì)算機(jī)中。最終接受到已成功完成校準(zhǔn)的信號(hào)。
用肥皂和清水清洗并沖洗患者的手，然后充分干燥。再用酒精海綿徹底清潔患者手掌的外表部分，要用足力氣確保徹底清潔。讓手干燥后，揭去試驗(yàn)帶10上的可剝離保護(hù)片14，然后將試驗(yàn)帶粘附于患者手掌已清洗干凈的皮膚區(qū)域。患者將手置于桌上放置的一片紙巾上，用力下壓確保該試驗(yàn)帶牢固地粘于手掌上。
然后，將各試劑加入試驗(yàn)帶泡沫材料墊的各相應(yīng)試劑孔中。一滴(42μl)檢測(cè)液加入圓形截面的試驗(yàn)孔16，一滴陽(yáng)性對(duì)照液加入菱形截面的孔18中，但此時(shí)在第三個(gè)方形孔20中不加液體。讓所加入的兩種溶液培養(yǎng)1分鐘，此時(shí)讓患者保持其接受試驗(yàn)的手不動(dòng)。然后讓患者反轉(zhuǎn)手掌，將泡沫材料墊壓向紙巾，從孔中除去液體。肉眼檢查確保墊子和試驗(yàn)孔已完全干燥。然后患者將手?jǐn)R在一平表面上休息，手掌朝上。
隨后，將一滴指示劑加到所有三個(gè)孔包括前面未使用的方形截面孔中，讓反應(yīng)進(jìn)行2分鐘，同時(shí)讓患者保持手不動(dòng)。此后立即將讀數(shù)器22在試驗(yàn)孔16上放置到位，閉合并讀取試驗(yàn)孔中所顯示的顏色的讀數(shù)，傳送到分光光度計(jì)并用計(jì)算機(jī)分析，得到色彩角的值。
對(duì)陽(yáng)性對(duì)照孔18和陰性對(duì)照孔20進(jìn)行肉眼觀(guān)察。如果陰性對(duì)照孔中的液體是無(wú)色的，而陽(yáng)性對(duì)照孔的液體是有色的，則試驗(yàn)有效。對(duì)陽(yáng)性對(duì)照顯示的顏色不進(jìn)行定量測(cè)量。這個(gè)顏色是從高濃度試劑溶液顯示的，皮膚上有極少量的膽固醇就顯示的顏色，只是表明試劑的有效性等(用于對(duì)照目的)。
棄去試驗(yàn)帶上殘留的液體，從手掌上除去試驗(yàn)帶，然后用酒精海綿清洗手掌。
用于本發(fā)明的分光光度計(jì)應(yīng)能測(cè)量試驗(yàn)樣品反射光的吸光度并將其合適計(jì)算轉(zhuǎn)化為色彩角的值。當(dāng)顏色是從上述辣根過(guò)氧化物酶-TMD反應(yīng)顯現(xiàn)時(shí)，在450nm的吸光度即A450nm是一種合適的測(cè)量值。已知實(shí)驗(yàn)獲得的450nm時(shí)吸光度光學(xué)密度與色彩角的下列關(guān)系式h°(度)＝490.45×A450nm+57.124上述關(guān)系式是如下確定的，測(cè)定一系列稀釋的反應(yīng)樣品在450nm時(shí)的光學(xué)密度，并測(cè)量相同樣品的色彩角，將結(jié)果繪制成回歸曲線(xiàn)獲得了此關(guān)系式。也可用相同的方法對(duì)所選定的其它顯色試驗(yàn)(用不同的酶-底物對(duì)，顯示出不同的顏色)計(jì)算出類(lèi)似的關(guān)系，以便將記錄的光學(xué)密度轉(zhuǎn)化成色彩角的測(cè)量值。
雖然以上已描述了優(yōu)選的診斷試驗(yàn)及其進(jìn)行所用的試劑盒，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解利用這種基于本文所公開(kāi)的色彩角或色度的測(cè)量可以進(jìn)行許多以顏色為基礎(chǔ)的試驗(yàn)和分析，例如(i)對(duì)固相免疫試驗(yàn)結(jié)果的定量，如斑點(diǎn)印跡、免疫色譜試驗(yàn)和流通試驗(yàn)(將樣品加到膜上，該膜的背后有一芯吸裝置，然后捕獲住靶分析物，并加入標(biāo)記檢測(cè)劑如酶或金標(biāo)記的抗體)給以標(biāo)記；
(ii)對(duì)用有色小珠進(jìn)行的以微細(xì)顆粒為基礎(chǔ)的分析的定量(iii)染色凝膠分析中替代密度測(cè)定法；(iv)對(duì)Western印跡分析的定量。
本發(fā)明的方法提供了一種簡(jiǎn)單的方法來(lái)定量這些結(jié)果，并從分析采集到補(bǔ)充信息，從而可對(duì)試驗(yàn)結(jié)果使用統(tǒng)計(jì)分析更加完善的方法。
對(duì)本發(fā)明的各種變化不能視為在本發(fā)明的精神和范圍之外，且所有對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯然的改進(jìn)都在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種在對(duì)分析物進(jìn)行生化或免疫試驗(yàn)中分析生物材料樣品的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟處理樣品使其顯示與樣品中分析物的量相關(guān)聯(lián)的顏色；測(cè)量至少一個(gè)選自所顯顏色的色彩角、色度、飽和度和光亮度的規(guī)定顏色特性；分析至少一種顏色特性的測(cè)量結(jié)果以確定分析物在樣品中存在與否或者其濃度。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生物材料樣品包含從需要診斷異常證據(jù)的病人采取的液態(tài)和半固態(tài)體分泌物，所述的分析物基本由樣品中指示癌的標(biāo)記物構(gòu)成，用所述至少一種顏色特性的測(cè)量值，按照得到的樣品顏色特性的值，將樣品分類(lèi)為正?；虍惓?。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的樣品是肺粘液、喉粘液、頸粘液或精液。
4.如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，將從患者采集到的樣品置于通常為白色的底質(zhì)上，所述的方法包括用酶反應(yīng)進(jìn)行所述樣品的顯色，測(cè)定至少一種選自所顯示顏色的色彩角、色度或飽和度和光亮度的規(guī)定顏色特性，然后按所顯示顏色的規(guī)定特性將樣品分類(lèi)為正常或異常。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生物材料樣品包含從需要診斷異常證據(jù)的患者采集的接觸結(jié)腸的半固體樣品；所述的分析物基本由指示異常的碳水化合物標(biāo)記物構(gòu)成；處理樣品的步驟包括將樣品置于通常為白色的底質(zhì)上，用半乳糖氧化酶將底質(zhì)上的樣品染色，并用Shifts試劑讓染色的樣品顯色，采用所述至少一種顏色特性的測(cè)量，按得到的顏色特性的值將樣品分類(lèi)為正?；虍惓！?br> 6.如權(quán)利要求1所述的分析生物材料樣品的方法，其特征在于，所述的生物材料樣品包含從需要診斷異常證據(jù)的患者采集的接觸結(jié)腸的半固體樣品；所述的分析物基本由指示異常的標(biāo)記物構(gòu)成；處理樣品的步驟包括將樣品置于通常為白色的底質(zhì)上，用酶反應(yīng)讓樣品顯色；采用至少一種規(guī)定顏色特性的測(cè)量，按所顯示顏色的規(guī)定特性將樣品分類(lèi)為正常或異常。
7.如權(quán)利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述的規(guī)定顏色特性是色彩角，并用分光光度計(jì)測(cè)定該色彩角。
8.如權(quán)利要求2-6任一所述的方法，其特征在于，所述的底質(zhì)是非纖維質(zhì)的。
9.如權(quán)利要求2-6任一所述的方法，其特征在于，所述的底質(zhì)是玻璃纖維。
10.如權(quán)利要求2-6任一所述的方法，其特征在于，所述的底質(zhì)是基本純白的。
11.如權(quán)利要求5-10任一所述的方法，其特征在于，所述的樣品主要是直腸粘液樣品。
12.一種用于分析從需要診斷異常證據(jù)的患者采集的液態(tài)或半固態(tài)體分泌物樣品的系統(tǒng)，其特征在于，通過(guò)測(cè)定樣品中所顯示顏色的預(yù)定的選自色彩角、色度或飽和度、和光亮度的規(guī)定特性，所述的系統(tǒng)包括帶有多孔“縐紋”表面的通常為白色的非纖維質(zhì)底質(zhì)用來(lái)在顯色過(guò)程中接受和容納樣品；半乳糖氧化酶源，用于將半乳糖氧化酶施加于底質(zhì)表面上對(duì)其上面的樣品進(jìn)行選擇性酶促氧化；Schiff試劑源，用于將Schiff試劑施加于底質(zhì)上經(jīng)氧化的樣品，讓其中的分析物顯色，將已顯色的樣品提供到能測(cè)定和記錄所述底質(zhì)上染色樣品的一個(gè)選自色彩角、色度或飽和度、和光亮度的規(guī)定顏色特性的便攜式分光光度計(jì)上去的裝置。
13.一種用于分析從需要診斷是否存在直腸異常的患者采集的接觸結(jié)腸的半固態(tài)樣品的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括通常為白色的非纖維質(zhì)底質(zhì)，用來(lái)接受樣品；Schiff試劑源；能測(cè)定和記錄所述底質(zhì)上染色樣品的至少一種選自色彩角、色度或飽和度、和光亮度的規(guī)定顏色特性的便攜式反射分光光度計(jì)。
14.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述的底質(zhì)是玻璃纖維。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生物材料樣品是患者的皮膚表面，且所述的分析物是皮膚膽固醇。
16.一種測(cè)定患者皮膚膽固醇含量的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟在患者的皮膚表面上施加選擇性結(jié)合于皮膚膽固醇的試劑；讓所形成的與皮膚膽固醇已結(jié)合的試劑進(jìn)行顯色化學(xué)反應(yīng)，形成有色復(fù)合物；對(duì)所生成的有色復(fù)合物進(jìn)行分光光度計(jì)分析，從而讀取有色復(fù)合物的選自色彩角、色度、飽和度和光亮度的規(guī)定特性。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述的選擇性結(jié)合于皮膚膽固醇的試劑選自(i)甾類(lèi)糖苷，它含有作為苷配基的苷配基呋甾醇或螺旋甾醇系列的環(huán)戊烷菲烷片段和具有線(xiàn)性或支鏈結(jié)構(gòu)的3-10個(gè)單糖殘基的寡糖片段，(ii)三萜烯糖苷，它含有α或β-脂檀醇、羽扇烷、何烷、達(dá)瑪烷、羊毛甾烷或全甾烷系列，和在支鏈或線(xiàn)性結(jié)構(gòu)中含有糖殘基的寡糖的糖苷配基，(iii)能分辨地與膽固醇形成復(fù)合化合物的疏水蛋白質(zhì)，(iv)能分辨地與膽固醇形成復(fù)合化合物的蛋白質(zhì)毒素，(v)能分辨地與膽固醇形成復(fù)合化合物的多烯抗生素，(vi)高親和力的酶，其底物是膽固醇且對(duì)膽固醇有高親和力，先用目測(cè)劑然后再用指示劑處理皮膚表面上所述的結(jié)合劑，形成所述的有色復(fù)合物。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，依次用橋鍵形成劑、目測(cè)劑和指示劑處理皮膚表面上所述的膽固醇結(jié)合劑，從而形成所述的有色復(fù)合物。
19.如權(quán)利要求17或18所述的方法，其特征在于，所述的膽固醇結(jié)合劑是毛地黃皂苷。
20.如權(quán)利要求17-19任一所述的方法，其特征在于，所述的目測(cè)劑是過(guò)氧化物酶，所述的指示劑含有過(guò)氧化氫、N，N-二乙基-對(duì)-亞環(huán)己二烯基硫酸酯及適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑。
21.一種測(cè)定人類(lèi)患者皮膚膽固醇含量的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括能與患者皮膚膽固醇結(jié)合并與其在皮膚上形成復(fù)合物的檢測(cè)劑的源；能與檢測(cè)劑結(jié)合劑復(fù)合物結(jié)合形成光學(xué)改變的復(fù)合物的目測(cè)劑的源；顯色劑的源和將顯色劑施加到光學(xué)改變的復(fù)合物上使其顯色的裝置；容納并將所述的光學(xué)改變的復(fù)合物提供到便攜式反射分光光度計(jì)上從而測(cè)定選自色彩角、色度或飽和度的規(guī)定顏色特性的裝置。
22.如權(quán)利要求21所述的試劑盒，其特征在于，所述的容納并將所述的光學(xué)改變的復(fù)合物提供給分光光度計(jì)的裝置包括呈皮膚粘性帶形式的容器，該容器上帶有至少一個(gè)通孔，讓所述通孔中含有試劑與患者的皮膚接觸。
全文摘要
本發(fā)明提供一種在對(duì)分析物進(jìn)行一些生化或免疫試驗(yàn)分析生物材料樣品的方法，所述的方法包括處理樣品使其顯示與樣品中分析物的量相關(guān)的顏色。在本發(fā)明中測(cè)量至少一種選自所顯顏色的色彩角、色度、飽和度和光亮度的規(guī)定顏色特性，如此測(cè)定的結(jié)果能確定分析物在樣品中存在與否或者其濃度。特別適用于通過(guò)對(duì)肺粘液、喉粘液、子宮頸粘液或精液的分析來(lái)檢測(cè)癌或癌癥前期的異常。
文檔編號(hào)C12Q1/26GK1399723SQ00813497
公開(kāi)日2003年2月26日 申請(qǐng)日期2000年8月4日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月6日
發(fā)明者M·J·伊夫利 申請(qǐng)人:Imi國(guó)際醫(yī)學(xué)創(chuàng)新股份有限公司