一種黑尾近紅鲌精子保存方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及精子保存技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種黑尾近紅舶精子保存方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黑尾近紅舶是我國(guó)長(zhǎng)江上游特有經(jīng)濟(jì)魚類，因過度捕撈、水利工程修建等，自然資源嚴(yán)重衰退;開展人工繁養(yǎng)，是資源保護(hù)和充分利用的重要舉措。在人工繁殖過程中，黑尾近紅舶鱗片易脫落受傷，不易操作，親本成活率低;黑尾近紅舶精子排出體外后保存時(shí)間較短，如4°C條件下，3h內(nèi)可保持80%成活率，7h內(nèi)成活率僅為50%;黑尾近紅舶遠(yuǎn)緣雜交育種過程中，因不同種類繁殖時(shí)間存在差異，有效育種時(shí)間短或雜交成活率低。利用精子保存液保存黑尾近紅舶精子，一是減少親本損耗和用量;二是準(zhǔn)確掌握精子活力，提高受精率和孵化率;三是延長(zhǎng)精子保存時(shí)間和遠(yuǎn)緣雜交育種時(shí)間，提高遠(yuǎn)緣雜交育種成活率，大規(guī)模培育新品種或新品系。而現(xiàn)有的精子保存液對(duì)精子保存效果存在保存時(shí)間短以及成本高等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種黑尾近紅舶精子保存方法，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
一種黑尾近紅舶精子保存方法，具體步驟如下:
(I)精子保存液的制備:按配比稱取各原料成分，用蒸餾水分別進(jìn)行溶解，混合均勻，加蒸餾水定容至100 mL；
精子保存液采用如下配方中的一種進(jìn)行配制:
Ai保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g,CaCl2 0.01g,MgS04.7H20 0.02g,NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 O-OlgjC6Hi2O6.H2O 0.10g，蒸餾水定容至10mL;
A2保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g,CaCl2 0.0lg,MgSO4.7H20 0.02g,NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 O-OlgjC6Hi2O6.H2O 0.10g，青霉素200X 14 IU、蒸餾水定容至100 mL；
Bi保存液配方:NaCl 0.7800g、KCl 0.0200gXaCl2 0.0210g、NaHC03 0.0021g、蒸餾水定容至10mL;
B2保存液配方:NaCl 0.7800g，KCl 0.0200g,CaCl2 0.021g,NaHCO3 0.0021g，青霉素200 X 14 IU，蒸餾水定容至10mL;
C1保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g,CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，蒸餾水定容至10mL；
C2保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g,CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，青霉素200 X 14IU，蒸饋水定容至10mL;
Di保存液配方:NaCl 0.743g，KCl 0.278g,CaCl2 0.029g,MgCl2.6H20 0.030g,NaHCO30.042g，蒸饋水定容至10mL;D2保存液配方:NaCl 0.743g，KCl 0.278g,CaCl2 0.029g,MgCl2.6H2O 0.030g,NaHCO30.042g，青霉素200 X 14 IU，蒸餾水定容至10mL ；
Ei保存液配方:NaCl 0.6903g，KCl 0.0946g，CaCl2 0.0300g,MgCl2.6H2O 0.0142g，Na2HPO4 0.0540g,NaHCO3 0.3999g，絡(luò)氨酸 0.0996g，甘氨酸 0.0412 g，牛血清白蛋白0.41 1g，蒸饋水定容至10mL;
E2保存液配方:NaCl 0.6903g，KCl 0.0946g，CaCl2 0.0300g,MgCl2.6H2O 0.0142g，Na2HPO4 0.0540g,NaHCO3 0.3999g，絡(luò)氨酸 0.0996g，甘氨酸 0.0412g，牛血清白蛋白0.41 1g，青霉素200 X 14 IU，蒸餾水定容至10mL ；
(2)精液采集:用毛巾擦干成熟黑尾近紅舶雄魚并排除尿液和糞便，避免精液污染;輕壓腹部，用吸管收集擠出的精液，采集過程避免陽(yáng)光或紫外線照射；
(3)精液存放:將采集的黑尾近紅舶精液置于經(jīng)滅菌消毒的干燥、潔凈且密封的容器中，精液與精子保存液的體積比為I: 5?10，采集結(jié)束后將盛有精液和保存液的容器置3?5°〇低溫避光保存。
[0005]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:黑尾近紅舶精子保存液的優(yōu)選方案為保存液配方C2:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g，CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，青霉素200 X 14 IU，蒸餾水定容至100mL，在4°C條件下，保存液配方C2使黑尾近紅舶精子活力達(dá)80%的保存時(shí)間為156 h。
[0006]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明通過以上技術(shù)方案，能有效延長(zhǎng)黑尾近紅舶精子體外存活時(shí)間，保持其受精活力，實(shí)現(xiàn)黑尾近紅舶的保護(hù)性開發(fā)和遠(yuǎn)緣雜交育種。該方法成本低廉、簡(jiǎn)短易操作，有效保存時(shí)間長(zhǎng)，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0007]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0008]為提高黑尾近紅舶精子體外保存活力，實(shí)現(xiàn)保護(hù)性開發(fā)，其精子保存液各成分用蒸餾水配制而成。
[0009](I)精子保存液的制備:按配比稱取各原料成分，用蒸餾水分別進(jìn)行溶解，混合均勻，加蒸餾水定容至100 mL；
精子保存液采用如下配方中的一種進(jìn)行配制:
Ai 保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g，CaCl2 0.0lg，MgS(k.7H20 0.02g, NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 0.0lg，C6Hi2O6.H2O 0.10g，蒸餾水定容至10mL;
A2保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g,CaCl2 0.0lg,MgSO4.7H20 0.02g,NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 0.0lg，C6Hi2O6.H2O 0.10g，青霉素200X 14 IU、蒸餾水定容至100 mL；
Bi保存液配方:NaCl 0.7800g、KCl 0.0200g、CaCl2 0.0210g、NaHC03 0.0021g、蒸餾水定容至10mL;
B2保存液配方:NaCl 0.7800g，KCl 0.0200g,CaCl2 0.021g,NaHCO3 0.0021g，青霉素200 X 14 IU，蒸餾水定容至10mL; Ci保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g，CaCl2 0.02g，NaH⑶3 0.21g，蒸饋水定容至10mL；
C2保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g，CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，青霉素200 X 14IU，蒸饋水定容至10mL;
Di保存液配方:NaCl 0.743g，KCl 0.278g，CaCl2 0.029g，MgCl2.6H2O 0.030g,NaHCO30.042g，蒸饋水定容至10mL;
D2保存液配方:NaCl 0.743