鼓槌石斛種苗商品化生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食藥觀植物鼓槌石斛種苗商品化生產(chǎn)方法，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]鼓槌石斛（Dendrobium chrysotoxum)為蘭科石斛屬多年生附生草本植物,別名金弓石斛，是一種集食、藥、觀賞為一身石斛種類，鼓槌石斛花呈金黃色，莖呈紡錘形，觀賞價(jià)值極高，既可作切花和盆栽觀賞，花又可開(kāi)發(fā)系列鼓槌石斛茶、酒、鮮花餅等產(chǎn)品，鼓槌石斛花資源豐富，據(jù)報(bào)道含有22個(gè)化合物，具有美容明目、安神補(bǔ)血、抗癌解郁、降三高等功效；其莖可藥用，具有清熱解毒，增強(qiáng)免疫力等功效，由于鼓槌石斛資源花的差異大而顏色多，以唇瓣中心斑塊顏色為紫紅色最艷麗，莖的長(zhǎng)短、粗細(xì)差異大而形態(tài)多，以中桿莖粗的品質(zhì)及觀賞最佳；近年來(lái)，人們過(guò)渡采挖，加上自然條件下種子萌發(fā)率極低，導(dǎo)致野生資源瀕臨枯竭，那么選擇優(yōu)良鼓槌石斛進(jìn)行人工雜交授粉選育出新品種，進(jìn)行組培快繁育苗，為鼓槌石斛規(guī)?；N植提供大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，解決市場(chǎng)上原料緊缺，加快創(chuàng)新育種的進(jìn)程，對(duì)其資源的保護(hù)及開(kāi)發(fā)利用具有深遠(yuǎn)的意義。
[0003]近年來(lái)，有關(guān)鼓槌石斛組培繁殖有一些報(bào)道，通過(guò)組織培養(yǎng)試驗(yàn)也獲得一定的組培苗，但在石斛規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)上，培育的種苗根細(xì)而少，種胚萌發(fā)率低75%，污染率高達(dá)10%，種苗繁殖周期長(zhǎng)（8個(gè)月以上），種苗生產(chǎn)成本高達(dá)1. 2元/叢，因此，開(kāi)展鼓槌石斛有性系的組培繁育研究，提高鼓槌石斛種苗商品化生產(chǎn)技術(shù)，還存在以下問(wèn)題：
[0004]1、由于鼓槌石斛種質(zhì)資源性狀上差異較大，而在產(chǎn)量上遺傳性比較穩(wěn)定，莖、葉、花的生長(zhǎng)差異明顯，鼓槌石斛自然結(jié)果，在光照和水肥不足，果莢發(fā)育小而不好，品種的純度性低，導(dǎo)致萌發(fā)率低、增殖速度慢、種苗質(zhì)量差。
[0005]2、目前，鼓槌石斛種苗主要是采用分株繁殖，原材料浪費(fèi)大，發(fā)芽率低，難以滿足市場(chǎng)需求；而鼓槌石斛現(xiàn)有的組培技術(shù)，是以自然結(jié)果的果莢為外植體，種胚萌發(fā)率低、種苗生產(chǎn)速度慢、苗黃化嚴(yán)重、增殖倍數(shù)低等問(wèn)題使種苗生產(chǎn)速度慢、生根苗質(zhì)量差、煉苗和移栽成活率低、生長(zhǎng)慢，極大的影響了鼓槌石斛種苗商品化生產(chǎn)的規(guī)模和速度。
[0006]加快鼓槌石斛種苗商品化生產(chǎn)速度，降低成本，提高移栽成活率、鮮花產(chǎn)量、增加花觀賞價(jià)值及有效成份含量是急需解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種鼓槌石斛人工有性雜交授粉育種，培育良種，種苗商品化生產(chǎn)速度快、生產(chǎn)成本低、自然光煉苗和假植培育成活率高、出圃率高的種苗商品化生產(chǎn)方法。
[0008]鼓槌石斛種苗商品化生產(chǎn)方法，包括以下方法步驟：
[0009]良種選育方法：
(1)優(yōu)良母株選擇：
鼓槌石斛的盛花期為4?5月，選擇生長(zhǎng)健壯花期長(zhǎng)、花朵大而艷麗、植株形態(tài)美觀、有效成分高的優(yōu)良母株進(jìn)行種內(nèi)人工雜交異株異花授粉；
(2)雜交授粉方法:
①工具:直徑6cm培養(yǎng)皿一套，7cm小鑷子1把，75%酒精和棉球，套袋，標(biāo)簽；
②授粉方法:一般在早上10點(diǎn)以前，鑷子用75%酒精消毒后，將花藥取出放在培養(yǎng)皿中，再用鑷子去掉母本上花朵的藥帽，將父本的花藥小心放入母本花朵的柱頭窩內(nèi)，每授一朵花，鑷子、培養(yǎng)皿用75%酒精消毒后才能再使用，每穗花穗授粉5?8朵，授完粉后，用白色無(wú)紡布做成口袋套上，掛上標(biāo)簽，2?3天之內(nèi)不能澆水，加強(qiáng)大田管理，保證充足陽(yáng)光，提高果實(shí)的質(zhì)量，一般經(jīng)過(guò)150?180天果實(shí)成熟。
[0010]基本母液采用改良的MS(無(wú)水氯化鈣、鐵鹽濃度減半、肌醇不用)為Ma的制備方法:大量元素配成50倍液(用量20毫克/升)，微量元素配成200倍液(用量5毫克/升)，植物激素配成50倍液，所有藥劑用純凈水溶解定容，微量元素用低溫保存，母液保存不要超過(guò)一個(gè)月。
[0011]培養(yǎng)基的配制方法:按培養(yǎng)基的配方要求，稱取去皮的馬鈴薯或香蕉，按馬鈴薯或香蕉:水(體積比)=1: 3，用果汁機(jī)打碎成泥加入定容桶內(nèi)，量取母液和激素、稱取瓊脂和白糖，按瓊脂粉+白糖:母液+水(混合，體積比)=1: 5，用木棍邊攪邊加熱至沸騰加入定容桶內(nèi)，用純凈水定容，充分混合均勻，用1摩爾的NaOH (氫氧化鈉)和HC1 (鹽酸)溶液調(diào)PH值5.8-6.0，將培養(yǎng)液倒入不銹鋼桶內(nèi)放在恒溫磁力攪拌器(900?1000r/min)不停攪拌，用塑料杯趁熱分裝，分裝標(biāo)準(zhǔn):小瓶18?20瓶/L，大瓶9?10瓶/L ;培養(yǎng)基厚度:小瓶1.4?1.6cm，大瓶2.0?2.2cm，在123?125°C高溫下滅菌20分鐘，出鍋時(shí)擰緊瓶蓋，標(biāo)簽注明培養(yǎng)基編號(hào)、日期，放置3天后備用。
[0012]瓶苗培育:
(1)外植體選擇與消毒:
將成熟未開(kāi)裂的果莢用0.01 %洗衣粉沖洗干凈后，經(jīng)75 %酒精浸泡60秒，用0.1 %HgC12 (升汞)滅菌20分鐘，然后用無(wú)菌水沖洗5?6次，過(guò)濾紙吸干水分；
(2)培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件:
①原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):切開(kāi)消毒過(guò)的果莢，將種子接種于l/2Ma+NAA(a-萘乙酸)0.1毫克/升+2%馬鈴薯泥培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，暗培養(yǎng)5d，再轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)，5d后，種胚漫漫吸水膨大，逐漸撐破種皮，形成針尖樣淡綠色原球莖，培養(yǎng)45天后，誘導(dǎo)大量的類原球莖或分化小苗；
②增殖分化培養(yǎng):將分化的小苗接種于3/4Ma+6-BA(6-芐基腺嘌呤)0.1毫克/升+ΝΑΑ0.2毫克/升+8%馬鈴薯泥+2%香蕉泥培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖分化培養(yǎng)，苗間距1.5?2cm，2?3株/叢，培養(yǎng)50天后，長(zhǎng)成高2?3cm叢生苗，葉2?4片；
③壯苗生根培養(yǎng):將2?3cm高的叢生苗接種于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA (c [_萘乙酸)0.5毫克/升+AC (活性炭)0.5克/升+3 %馬鈴薯泥+7 %香蕉泥培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，苗間距2?2.5cm, 1?2株/叢，培養(yǎng)60天后，每叢苗高4?6cm，根長(zhǎng)3_4cm,生根數(shù)6?8條/株；
④培養(yǎng)條件:白糖20克/升，瓊脂粉4克/升，PH值5.8?6.0，培養(yǎng)溫度25±2°C，光照強(qiáng)度1600?20001x，光照時(shí)間12小時(shí)/天。
[0013]假植培育: (1)煉苗:選取生根苗株高3?5cm，根長(zhǎng)3cm以上，將瓶苗置于蔭蔽度75%的塑料大棚內(nèi)煉苗20d，苗瓶之間間隔1?2cm，通風(fēng)透氣，控制好光照；
(2)栽培基質(zhì):雜木屑:樹(shù)皮屑:腐質(zhì)土(混合，體積比)=1:1:1，假植前l(fā)-2d，將基質(zhì)配比好，均勻鋪在苗床上，苗床的標(biāo)準(zhǔn)(高80cm、寬120cm、長(zhǎng)10m)，用0.1 %?0.2 %高猛酸鉀等消毒液將基質(zhì)淋透消毒處理，基質(zhì)厚度為8?10cm,下層4cm為粗基質(zhì)，上層4cm為細(xì)基質(zhì)；
(3)移栽:移栽時(shí)將瓶苗取出，洗凈根上附著的培養(yǎng)基，用0.05%精甲、咯菌腈+0.1%百毒劑+0.01%硫酸銅混合液浸泡lOmin，撈起放在透氣塑料筐中晾干至根部發(fā)白后移栽，按3株/叢，株行距5cmX 5cm，移栽時(shí)根基部與基質(zhì)平，根不能外露，苗不能睡倒在基質(zhì)上，根據(jù)天氣情況，掌握澆水次數(shù)，保持基質(zhì)濕潤(rùn)，控制好光照，移栽10d后，可結(jié)合澆水噴一些低濃度葉面肥，培育60?90d后即可出圃移栽；
(4)出圃:將抽新根發(fā)新葉達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的苗，輕輕拔起，不要傷根，按10叢/捆，用2cm寬的報(bào)紙條纏緊，整齊放進(jìn)紙箱內(nèi)，標(biāo)明出苗日期和數(shù)量。
[0014]本發(fā)明技術(shù)方案具有以下有益效果:
選用鼓槌石斛良種進(jìn)行快繁；采用改良的基本培養(yǎng)基Ma與標(biāo)準(zhǔn)基本培養(yǎng)基MS相比無(wú)水氯化鈣、鐵鹽濃度減半、肌醇不用；附加物馬鈴薯和香蕉去皮直接打成泥，可減少用量，提高營(yíng)養(yǎng)成分，瓊脂粉、糖、母液加熱至沸騰，有利于培養(yǎng)基均勻溶解，降低污染率，本方法有效解決了鼓槌石斛優(yōu)良種苗的來(lái)源和種苗純度性，與常規(guī)種苗組培快繁相比，種胚萌發(fā)率提高到98%以上，生產(chǎn)成本降低20%，生長(zhǎng)周期縮短了 60天，污染率降低5%，煉苗、移栽成活率提高到95%以上；種苗假植培育60?90天，可出售或規(guī)?；耘啵c分株繁殖種苗種植相比，本發(fā)明培育鼓槌石斛種苗種植的每叢新抽生的幼芽增加5?7株。
【具體實(shí)施方式】
[0015]鼓槌石斛種苗商品化生產(chǎn)方法，包括以下方法步驟:
[0016]良種選育方法:
(1)優(yōu)良母株選擇:
鼓槌石斛的盛花期為4?5月，選擇生長(zhǎng)健壯花期長(zhǎng)、花朵大而艷麗、植株形態(tài)美觀、有效成分高的優(yōu)良母株進(jìn)行種內(nèi)人工雜交異株異花授粉；
(2)雜交授粉方法:
①工具:直徑6cm培養(yǎng)皿一套，7cm小鑷子1把，75%酒精和棉球，套袋，標(biāo)簽；
②授粉方法:一般在早上10點(diǎn)以前，鑷子用75%酒精消毒后，將花藥取出放在培養(yǎng)皿中，再用鑷子去掉母本上花朵的藥帽，將父本的花藥小心放入母本花朵的柱頭窩內(nèi)，每授一朵花，鑷子、培養(yǎng)皿用75%酒精消毒后才能再使用，每穗花穗授粉5?8朵，授完粉后，用白色無(wú)紡布做成口袋套上，掛上標(biāo)簽，2?3天之內(nèi)不能澆水，加強(qiáng)大田管理，保證充足陽(yáng)光，提高果實(shí)的質(zhì)量，一般經(jīng)過(guò)150?1