選擇苦瓜苗期耐冷性鑒定取材時期的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于苦瓜種質(zhì)資源鑒定與評價技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種選擇苦瓜苗期耐冷 性鑒定取材時期的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 苦瓜（MomordicacharantiaL.)起源于東南亞的熱帶地區(qū)，廣泛分布于熱帶、亞 熱帶及溫帶地區(qū)，喜高溫，屬于冷敏性蔬菜，氣溫低于l〇°C生長發(fā)育不良，尤其是在春提早 栽培中，苗期遇低溫冷害天氣，往往生長緩慢，脅迫時間長了還會形成僵苗，停止生長，限制 了苦瓜的種植范圍和上市時節(jié)，制約苦瓜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
[0003] 進(jìn)行苦瓜耐冷育種，首要是對育種資源進(jìn)行耐冷性鑒定與評價。在苗期進(jìn)行耐冷 性鑒定與評價時多采用生理生化指標(biāo)法，由于不同育種資源對低溫冷害脅迫有不同的反應(yīng) 機(jī)制，耐冷性強(qiáng)的資源，在冷脅迫開始時，冷害對細(xì)胞的損害輕，其生理生化指標(biāo)變化不大； 相反，耐冷性弱的資源在脅迫開始時細(xì)胞就受損嚴(yán)重，反映在生理生化指標(biāo)變化大。如利用 此時的生理生化指標(biāo)進(jìn)行資源耐冷性鑒定與評價，就會降低鑒定的準(zhǔn)確性和可靠性。因此， 有必要確定苦瓜苗期耐冷性鑒定的適宜取材時期，然后測定相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行耐冷性鑒定與評 價，W提高鑒定與評價的準(zhǔn)確性和可靠性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種選擇苦瓜苗期耐冷性鑒定取材時期的方法， 該法能提高鑒定的準(zhǔn)確性、可靠性，適用于不同苦瓜資源的苗期耐冷性鑒定，為苦瓜耐冷育 種奠定了基礎(chǔ)。 陽〇化]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案：選擇苦瓜苗期耐冷性鑒定取材 時期的方法，利用已鑒定具有耐冷性差異的材料進(jìn)行低溫脅迫處理，取不同脅迫時期的功 能葉進(jìn)行生理生化指標(biāo)的測定，分析數(shù)據(jù)處理結(jié)果，結(jié)合已知供試材料的耐冷性，確定利用 生理生化指標(biāo)法進(jìn)行苦瓜苗期耐冷性鑒定的適宜取材時期。
[0006] 低溫脅迫處理是在10°C條件下對4葉1屯、苦瓜幼苗進(jìn)行脅迫處理。
[0007] 不同脅迫時期是低溫脅迫M、2d、如、6d、8tl0d。
[0008] 生理生化指標(biāo)包括可溶性蛋白質(zhì)含量、脯氨酸含量、丙二醒含量、超氧化物歧化酶 活性、過氧化物酶活性。
[0009] 上述選擇苦瓜苗期耐冷性鑒定取材時期的方法，包括W下步驟：
[0010] (1)培育幼苗；
[0011] (2)低溫脅迫下生理生化指標(biāo)的測定；
[001引 做數(shù)據(jù)處理；
[0013] (4)適宜取材時期的選擇。
[0014] 步驟（1)按W下操作進(jìn)行：將種子用清水浸泡6~化后沖洗干凈，用干凈濕潤紗 布包好置于30°C條件下恒溫催芽，按同一穴盤不同材料間隔方式點(diǎn)于穴盤中，按正常進(jìn)行 苗期管理。
[0015] 步驟（2)按W下操作進(jìn)行：將4葉1屯、的苗放入10°C條件下進(jìn)行冷脅迫處理，分 別于處理0d、2t4d、M、8d、10d取苦瓜功能葉，剪碎混均后進(jìn)行可溶性蛋白質(zhì)含量、脯氨酸 含量、丙二醒含量、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性生理生化指標(biāo)的測定。
[0016] ①測定可溶性蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法；
[0017] ②測定脯氨酸含量采用酸性巧=酬法；
[0018] ③測定丙二醒含量采用硫代己比妥酸法；
[0019] ④測定超氧化物歧化酶活性采用氮藍(lán)四挫還原法；
[0020] ⑥測定過氧化物酶活性采用愈創(chuàng)木酪法。
[0021] 步驟（3)按W下操作進(jìn)行：利用數(shù)據(jù)點(diǎn)折線圖、綜合隸屬函數(shù)值、相關(guān)性分析方法 對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。
[0022] 步驟（4)按W下操作進(jìn)行：根據(jù)數(shù)據(jù)點(diǎn)折線圖、綜合隸屬函數(shù)值、相關(guān)性分析方法 數(shù)據(jù)處理結(jié)果結(jié)合已知供試材料的耐性，確定利用生理生化指標(biāo)法進(jìn)行苦瓜苗期耐冷性鑒 定的適宜取材時期。
[0023] 針對目前苦瓜苗期耐冷性鑒定取材時期存在的問題，發(fā)明人建立了一種選擇苦瓜 苗期耐冷性鑒定取材時期的方法，利用已鑒定具有耐冷性差異的材料進(jìn)行低溫脅迫處理， 取不同脅迫時期的功能葉進(jìn)行生理生化指標(biāo)的測定，分析數(shù)據(jù)處理結(jié)果，結(jié)合已知供試材 料的耐冷性，確定利用生理生化指標(biāo)法進(jìn)行苦瓜苗期耐冷性鑒定的適宜取材時期。該法利 用低溫脅迫適宜時期的鑒定指標(biāo)進(jìn)行苦瓜耐冷性鑒定與評價，提高了鑒定與評價的可靠性 和準(zhǔn)確性，結(jié)果適用于不同苦瓜資源的苗期耐冷性鑒定，為苦瓜耐冷育種奠定基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0024] 圖1低溫脅迫下苦瓜可溶性蛋白質(zhì)含量指標(biāo)的變化圖。
[00巧]圖2低溫脅迫下苦瓜脯氨酸含量指標(biāo)的變化圖。
[0026] 圖3低溫脅迫下苦瓜丙二醒含量指標(biāo)的變化圖。
[0027] 圖4低溫脅迫下苦瓜超氧化物歧化酶活性指標(biāo)的變化圖。
[0028] 圖5低溫脅迫下苦瓜過氧化物酶活性指標(biāo)的變化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 實(shí)施例
[0030] 1.供試材料
[0031] 選用已鑒定的耐冷材料MC108、中間材料MC45和冷敏材料MC6,由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜研究所提供。
[0032] 2.試驗(yàn)方法及結(jié)果 陽〇3引 （1)培育幼苗
[0034] 將種子用清水浸泡6~化后沖洗干凈，用干凈濕潤紗布包好置于30°C條件下恒溫 催芽，按同一穴盤不同材料間隔方式點(diǎn)于穴盤中，按正常進(jìn)行苗期管理。
[0035] 似低溫脅迫下生理生化指標(biāo)的測定
[0036] 將4葉1屯、的苗放入10°C條件下進(jìn)行冷脅迫處理，分別于處理0d、2t4d、M、8d、 lOd取苦瓜功能葉，剪碎混均后進(jìn)行可溶性蛋白質(zhì)含量、脯氨酸含量、丙二醒含量、超氧化物 歧化酶活性、過氧化物酶活性等生理生化指標(biāo)的測定。實(shí)驗(yàn)設(shè)計為每處理3次重復(fù)，每重復(fù) 15株，每處理共45株苗，6個處理共270株苗。
[0037] 生理生化指標(biāo)的測定方法為：
[0038] ①測定可溶性蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法；
[0039] ②測定脯氨酸（Pro)含量采用酸性巧=酬法；
[0040] ③測定丙二醒（MDA)含量采用硫代己比妥酸燈BA)法；
[0041] ④測定超氧化物歧化酶（SOD)活性采用氮藍(lán)四挫（NBT)還原法；
[0042] ⑥測定過氧化物酶（POD)活性采用愈創(chuàng)木酪法。
[00創(chuàng) 做數(shù)據(jù)處理
[0044] 3. 1數(shù)據(jù)點(diǎn)折線圖處理用Excel完成。 W45] 低溫脅迫下生理生化指標(biāo)變化如圖1至5,在低溫脅迫下，耐冷性不同的材料，其 生理生化指標(biāo)的變化趨勢不完全一致，說明耐冷性不同苦瓜資源對冷害脅迫有不同的反應(yīng)