一種香蕉組培繁殖的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)生產技術領域，本發(fā)明涉及一種香蕉組培繁殖的方法。
【背景技術】
[0002] 香蕉（MusabalbisianaColla)是我國南方的重要熱帶水果之一，同時也是許多 地區(qū)的重要經濟收入來源，并且許多農戶依靠種植香蕉脫貧致富。大多數的栽培食用香蕉 都是單性三倍體AAA，具有高度的不育特性，主要靠無性繁殖，生產上通常利用吸芽進行繁 殖，種苗不足時，也可采用香蕉的地下莖切塊來繁殖種苗，但是該方法長期使用會累積許多 病毒，如：束頂病、花葉病等。造成嚴重的危害。另外，不良的香蕉種苗會導致生長不良，果 品不佳，收獲不統(tǒng)一等問題。香蕉組織培養(yǎng)技術能夠在短時間內快速繁殖出大量規(guī)格統(tǒng)一 的優(yōu)質的無病蟲害的健康種苗，并且，新品種的培育和引進也需要利用脫病毒和組培快繁 技術加快名優(yōu)品種的發(fā)展。香蕉組培技術是我國農業(yè)科研工作者在20世紀80年代后期研 發(fā)推廣，該技術的應用對我國香蕉產業(yè)的迅速發(fā)展起到了重大的推進作用，也使得種苗工 廠化生產得以實現，在短時間內將優(yōu)良品種大面積推廣，達到大規(guī)模商品化香蕉生產。但是 該產業(yè)經過20多年的應用，我們發(fā)現該技術存在不足，在生產應用中主要問題是：
[0003] 1.生產培養(yǎng)單周期時間長，香蕉組培生產中一般單周期培養(yǎng)（即接種到新培養(yǎng)基 到培養(yǎng)）時間為30天以上。
[0004] 2.由于生產周期長，導致生產場地周轉慢，占用大量培養(yǎng)架，從而導致廠房面積增 加。
[0005] 以上缺點是傳統(tǒng)組培生產中普遍存在的問題，在中國南方的熱帶及亞熱帶地區(qū)， 香蕉組培苗已經成為大宗種苗品種，每年都有超過上億株的市場需求，但是由于生產成本 在逐年的遞增（人工費用，場地租金等）極大的阻了種苗工廠化產業(yè)的發(fā)展，因此開發(fā)一種 新的香蕉組培繁殖的技術以克服原有培養(yǎng)方式的缺點，確保香蕉種苗產業(yè)的進一步發(fā)展。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明針對上述存在的問題，本發(fā)明提供了一種香蕉組培繁殖的方法，不僅能縮 短生產培養(yǎng)單周期和生長周期、減少生產占用面積，而且能提高育苗成活率，從而減少投資 資金，降低生產成本，提高工業(yè)化生產的利潤。
[0007] 本發(fā)明的方案是通過這樣實現的：
[0008] 種香蕉組培繁殖的方法，包括如下步驟：
[0009] (1)外植體的選取
[0010] 選取掛果2年以上，生長健壯，無病蟲害的蕉頭為外植體；
[0011] ⑵外植體的消毒處理
[0012] 將上述蕉頭先用清水清洗，再使用70%的酒精進行噴洗消毒，然后在無菌超凈臺 條件下，將蕉頭進行剝片，每剝開一層苞片后使用70%的酒精進行一次噴洗消毒，當露出莖 尖后停止剝片，使用滅菌后的刀切取l-2cm的生長點，放置于70%的酒精下浸泡5-10秒，再 用0. 2%升汞溶液消毒兩次，每次5-10分鐘，后用無菌水沖洗3-8次，將褐化部分切除，待 用；
[0013] (3)誘導愈傷組織培養(yǎng)
[0014] 將上述待用的外植體進行愈傷組織培養(yǎng)，
[0015] 所述愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：MS+NAA(萘乙酸）0.1~0.2mg/L+6-BA(6-芐 基腺嗓呤）〇? 3~0? 5mg/L+赤霉素0? 1~0? 3mg/L+5~8g/L瓊脂+20~30g/L鹿糖，PH 為5. 0-5. 5,在29~31 °C下暗培養(yǎng)8~15天，而后轉入27~30°C下進行8~13天的光培 養(yǎng)，得到愈傷組織；
[0016] ⑷分化培養(yǎng)
[0017] 將愈傷組織轉接到MS+IBA(吲哚乙酸）0. 2~0. 5mg/L+NAA(萘乙酸）0. 1~0. 3mg/ L+2, 4-D(生長素）0. 3~0. 5mg/L+10~15g/L瓊脂+30~50g/L蔗糖的分化培養(yǎng)基上培 養(yǎng)，PH為5. 5-6. 0,光照強度為2000-25001x，培養(yǎng)8-15d，愈傷組織分化得到香蕉苗；
[0018] (5)壯苗培養(yǎng)
[0019] 將香蕉苗轉接至壯苗培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，所述壯苗培養(yǎng)基成分為IBA(吲哚乙 酸）0? 3 ~0? 7mg/L+BA(分裂素）0? 3 ~0? 5mg/L+2, 4-D(生長素）0? 05 ~0?lmg/L+NAA(萘 乙酸）0? 3~0? 5mg/L+10~15g/L瓊脂+30~50g/L蔗糖，PH為5. 0-5. 5,光照強度為 1500-18001x，培養(yǎng) 8-15d;
[0020] (6)生根培養(yǎng)
[0021] 將壯苗培育后的香蕉苗轉接至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述生根培養(yǎng)基配方為 IBA(H引噪乙酸）2 ~5mg/L++BA(分裂素）0? 〇5 ~0?lmg/L+2, 4_D(生長素）0? 3 ~0? 6mg/ L+NAA(萘乙酸）2~5mg/L+0. 1~0. 2g/L活性炭+5~10g/L瓊脂+20~30g/L鹿糖，光照 強度為 2500-45001x，培養(yǎng) 3-8d;
[0022] (7)煉苗與移栽
[0023] 選取根系發(fā)達及健壯的香蕉幼苗，取出后洗凈根部培養(yǎng)基，在砂床上馴化10后， 即可作為移栽幼苗。
[0024] 本發(fā)明中，作為進一步說明，所述沙床濕度為50~80%;沙床的溫度控制在 20°C~35°C。
[0025] 本發(fā)明中，作為進一步說明，所述沙床用0. 1~0. 2%高錳酸鉀進行消毒。
[0026] 本發(fā)明的突出的實質性特點和顯著進步是：
[0027] 1、本發(fā)明針在愈傷組織培養(yǎng)期間添加赤霉素促進細胞分裂，縮短愈傷組織培養(yǎng)時 間，在壯苗培育期間和生根培養(yǎng)期間適當調整分裂素和赤霉素的比例，達到各期間培養(yǎng)的 目的，當在壯苗培養(yǎng)基中分裂素與生長素的比值高時，能促進苗生長，保證壯苗率；當在生 根培養(yǎng)基中分裂素與生長素的比值調低時，能促進根的生長，達到組培苗生根的需求，在生 根培養(yǎng)基中添加活性炭，有利于提高生根苗的質量，使生根苗生長健壯，根系長，有韌性，進 一步提高移栽后的成活率；在生根培養(yǎng)期間采用光照強度增強的方法，經過實驗發(fā)現，采用 這種方法，相比現有技術，幼苗生長時間較長、葉片有失綠情況，經過馴化定植大田后，要比 在低光強條件下的較綠較高的幼苗移栽成活率高（見表1、3)。
[0028] 2、采用本發(fā)明的方法不僅能縮短生產培養(yǎng)單周期和生長周期，而且在工業(yè)化生產 過程中能減少生產占用面積，提高育苗成活率，從而減少投資資金，降低生產成本，提高工 業(yè)化生產的利潤；在香蕉苗栽培生產領域中具有極大的推廣價值。
【具體實施方式】
[0029] 下面通過具體實施例進一步說明本發(fā)明，以使本發(fā)明的優(yōu)點和特征更易于被理 解，應該理解的是，本發(fā)明的實施例僅僅是用于本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0030] 實施例1 :
[0031] 一種香蕉組培繁殖的方法，包括如下步驟：
[0032] (1)外植體的選取
[0033] 選取掛果3年，生長健壯，無病蟲害的蕉頭為外植體；
[0034] (2)外植體的消毒處理
[0035] 將上述蕉頭先用清水清洗，再使用70%的酒精進行噴洗消毒，然后在無菌超凈臺 條件下，將蕉頭進行剝片，每剝開一層苞片后使用70%的酒精進行一次噴洗消毒，當露出莖 尖后停止剝片，使用滅菌后的刀切取Icm的生長點，放置于70%的酒精下浸泡5秒，再用 0. 2%升汞溶液消毒兩次，每次5分鐘，后用無菌水沖洗3次，將褐化部分切除，待用；
[0036] (3)誘導愈傷組織培養(yǎng)
[0037] 將上述待用的外植體進行愈傷組織培養(yǎng)，
[0038] 所述愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：MS+NAA(萘乙酸）0.lmg/L+6-BA(6-芐基腺嘌 呤）0? 3mg/L+赤霉素0?lmg/L+5g/L瓊脂+20g/L蔗糖，PH為5. 0,在29°C下暗培養(yǎng)8天，而 后轉入27°C下進行8天的光培養(yǎng)，得到愈傷組織；
[0039] ⑷分化培養(yǎng)
[0040] 將愈傷組織轉接到MS+IBA(吲哚乙酸）0. 2mg/L+NAA(萘乙酸）0.lmg/L+2, 4-D(生 長素）0. 3mg/L+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，PH為5. 5，光照強度為 20001x，培養(yǎng)8d，愈傷組織分化得到香蕉苗；
[0041] (5)壯苗培養(yǎng)
[0042] 將香蕉苗轉接至壯苗培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，所述壯苗培養(yǎng)基成分為IBA(吲哚乙 酸）0? 3mg/L+BA(分裂素）0? 3mg/L+2, 4-D(生長素）0? 05mg/L+NAA(萘乙酸）0? 3mg/L+10g/ L瓊脂+30g/L蔗糖，PH為5. 0,光照強度為15001x，培養(yǎng)8d;
[0043] (6)生根培養(yǎng)
[0044] 將壯苗培育后的香蕉苗轉接至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述生根培養(yǎng)基配方為 IBA(吲哚乙酸）2mg/L++BA(分裂素）0? 05mg/L+2, 4-D(生長素）0? 3mg/L+NAA(萘乙酸）2mg/L+0.lg/L活性炭+5g/L瓊脂+20g/L蔗糖，光照強度為25001x，培養(yǎng)3d;
[0045] (7)煉苗與移栽
[0046] 選取根系發(fā)達及健壯的香蕉幼苗，取出后洗凈根部培養(yǎng)基，在濕度50%，溫度為 20°C，使用0. 1 %高錳酸鉀進行消毒后的砂床上馴化10天后，即可作為移栽幼苗。
[0047] 實施例2 :
[0048] 一種香蕉組培繁殖的方法，包括如下步驟：
[0049] (1)外植體的選取
[0050] 選取掛果4年，生長健壯，無病蟲害的蕉頭為外植體；
[0051] (2)外植體的消毒處理
[0052] 將上述蕉頭先用清水清洗，再使用70%的酒精進行噴洗消毒，然后在無菌超凈臺 條件下，將蕉頭進行剝片，每剝開一層苞片后使用70%的酒精進行一次噴洗消毒，當露出莖 尖后停止剝片，使用滅菌后的刀切取2cm的生長點，放置于70%的酒精下浸泡10秒，再用 0. 2%升汞溶液消毒兩次，每次10分鐘，后用無菌水沖洗8次，將褐化部分切除，待用；
[0053] (3)誘導愈傷組織培養(yǎng)
[0054] 將上述待用的外植體進行愈傷組織培養(yǎng)，
[0055] 所述愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：MS+NAA(萘乙酸）0.2mg/L+6-BA (6-芐基腺嘌 呤）0?5mg/L+赤霉素0?3mg/L+5~8g/L瓊脂+30g/L蔗糖，PH為5. 5,在31°C下暗培養(yǎng)15 天，而后轉入30°C下進行13天的光培養(yǎng)，得到愈傷組織；
[0056] (4)分化培養(yǎng)
[0057] 將愈傷組織轉接到MS+IBA(吲哚乙酸）0. 5mg/L+NAA(萘乙酸）0. 3mg/L+2, 4-D(生 長素）0. 5mg/L+15g/L瓊脂+50g/L蔗糖的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，PH為6. 0,光照強度為25001x 下培養(yǎng)15d，愈傷組織分化得到香蕉苗；
[0058] (5)壯苗培養(yǎng)
[0059] 將香蕉苗轉接至壯苗培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，所述壯苗培養(yǎng)基成分為IBA(吲哚乙 酸）0? 7mg/L+BA(分裂素）0?lmg/L+NAA(萘乙酸）0? 5mg/L+15g/L瓊脂 +50g/L鹿糖，PH為 5. 5,光照強度為18001x下培養(yǎng)15d;
[0060] (6)生根培養(yǎng)
[0061] 將壯苗培育后的香蕉苗轉接至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述生根培養(yǎng)基配方為 IBA(吲哚乙酸）5mg/L+NAA(萘乙酸）5mg/L+0. 2g/L活性炭+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖，光照 強度為45001x，培養(yǎng)8d;
[0062] (7)煉苗與移栽
[0063] 選取根系發(fā)達及健壯的香蕉幼苗，取出后洗凈根部培養(yǎng)基，在濕度80%，溫度為 35°C，使用0. 2%高錳酸鉀進行消毒后的砂床上馴化后，即可作為移栽幼苗。
[0064] 實施例3 :