一種優(yōu)化的生產(chǎn)昆蟲病原線蟲的固體培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及優(yōu)化固體培養(yǎng)方法，提高昆蟲病原線蟲產(chǎn)量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 據(jù)世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國環(huán)境署報告，全世界每年有100多萬人農(nóng)藥中毒，其中2 萬人死亡。美國每年發(fā)生6. 7萬起農(nóng)藥中毒事故，在發(fā)展中國家情況更為嚴(yán)重。
[0003] 我國蔬菜農(nóng)藥污染已經(jīng)成為一個國民強烈關(guān)注的民生問題，尤其是我國韭菜上農(nóng) 藥檢出率和超標(biāo)率都在30%以上，屢有農(nóng)藥中毒事故發(fā)生，食品安全問題十分令人擔(dān)憂。眾 所周知，長期高頻次使用化學(xué)農(nóng)藥的大量使用會加速使昆蟲產(chǎn)生抗藥性，結(jié)果反而造成農(nóng) 戶只能過量使用或使用高毒性的農(nóng)藥，從而陷入防治害蟲的惡性循環(huán)。
[0004] 昆蟲病原線蟲是昆蟲的天敵，其作為一種理想的生物殺蟲劑，具有以下優(yōu)點：專性 寄生，寄主范圍廣；對寄主昆蟲具有主動搜尋能力；能夠從寄主昆蟲的自然開口（如口器、 氣門和肛門）、傷口或節(jié)間膜進入寄主昆蟲體內(nèi)，并且能夠迅速殺死寄主昆蟲；能夠在人工 培養(yǎng)基低成本大量培養(yǎng)；田間施用時可和多種化學(xué)農(nóng)藥混合使用，對人畜、植物及有益生物 及環(huán)境安全。由于昆蟲病原線蟲屬于環(huán)境友好型的生物天敵，歐美一些國家已經(jīng)豁免注冊 生產(chǎn)和生產(chǎn)銷售，并已經(jīng)廣泛應(yīng)用于地下害蟲甚至地上害蟲的防治之中。
[0005] 目前昆蟲病原線蟲的施用方法主要為將通過固體或液體培養(yǎng)出來的線蟲懸液噴 灑到農(nóng)作物或果樹上。固體基質(zhì)培養(yǎng)法能夠生產(chǎn)昆蟲病原線蟲，八十年代初，Bedding和 Wouts將海綿作填充劑分別加人雞內(nèi)臟或其他動物內(nèi)臟物質(zhì)以及加大豆粉、酵母膏、玉米油 等，實現(xiàn)了線蟲的固體基質(zhì)培養(yǎng)，大大的提高了昆蟲病原線蟲產(chǎn)量，使線蟲制劑生產(chǎn)規(guī)模由 小到大。同時，以海綿做為線蟲培養(yǎng)的充填劑，使線蟲的固體培養(yǎng)走向了工廠化。固體培養(yǎng) 基法生產(chǎn)昆蟲病原線蟲，需要投資規(guī)模小，需要勞動力較多，屬于勞動密集型技術(shù)，比較適 合我國當(dāng)前的國情。但是，固體培養(yǎng)基法培養(yǎng)線蟲時，生產(chǎn)過程需要無菌，需要穩(wěn)定的產(chǎn)量， 進而才能降低成本，提高昆蟲病原線蟲的競爭力，在更大范圍和面積上替代化學(xué)農(nóng)藥防治 有吾昆蟲。
[0006] 如何對現(xiàn)有的配方進行改進，提高固體法生產(chǎn)昆蟲病原線蟲，對完善和進一步推 廣固體法生產(chǎn)昆蟲病原線蟲技術(shù)，具有非常現(xiàn)實的研究和應(yīng)用意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 昆蟲病原線蟲固體培養(yǎng)基包括碳源、氮源等營養(yǎng)成分，主要包括豆粉、面粉、雞蛋 黃粉、橄欖油、酵母提取物、海綿和水。本發(fā)明的目的是優(yōu)化培養(yǎng)基，得到產(chǎn)量相對穩(wěn)定的昆 蟲病原線蟲固體培養(yǎng)基配方。通過優(yōu)化的培養(yǎng)基我們得到了昆蟲病原線蟲產(chǎn)量22萬-32萬 條線蟲/克培養(yǎng)基，而且該配方在培養(yǎng)期間，沒有染菌現(xiàn)象。本發(fā)明中優(yōu)化的固體培養(yǎng)基， 是一種能夠穩(wěn)定生產(chǎn)昆蟲病原線蟲固體培養(yǎng)基。將降低培養(yǎng)過程中雜菌感染的風(fēng)險，效果 穩(wěn)定。
[0008] 本發(fā)明利用優(yōu)化的固體培養(yǎng)基生產(chǎn)昆蟲病原線蟲。本發(fā)明所述的線蟲為昆蟲病原 線蟲。
[0009] 本發(fā)明中優(yōu)化的生產(chǎn)昆蟲病原線蟲的固體培養(yǎng)為：
[0010] 優(yōu)化的固體培養(yǎng)基配方：每12克培養(yǎng)基中包括豆粉（1. 79克），面粉（0. 31克），雞 蛋黃粉（〇. 1克），橄欖油（0.3克）、酵母提取物（0.2克），海綿（1.0克）和水（8.3克）。
[0011] 實施例1. 12克優(yōu)化的昆蟲病原線蟲固體培養(yǎng)基
[0012] 用豆粉（1.79克），面粉（0.31克），雞蛋黃粉（01克），橄欖油（0.3克）、酵母提 取物（〇. 2克），海綿（I. 0克）和水（8. 3克）混合配置得到12克克體培養(yǎng)基。
[0013] 實施例2. 36克優(yōu)化的昆蟲病原線蟲固體培養(yǎng)基
[0014] 用豆粉（5.37克），面粉（0.93克），雞蛋黃粉（0.3克），橄欖油（0.9克）、酵母提 取物（〇. 6克），海綿（3. 0克）和水（24. 9克）混合配置得到了 36克固體培養(yǎng)基。
[0015] 實施例3.應(yīng)用優(yōu)化的固體培養(yǎng)基增加昆蟲病原線蟲的產(chǎn)量
[0016] 按照實施例1所述，配置12克優(yōu)化的固體培養(yǎng)基，并依照傳統(tǒng)無菌培養(yǎng)步驟培養(yǎng) 昆蟲病原線蟲，增產(chǎn)效果明顯，產(chǎn)量達30萬條/克培養(yǎng)基，比對照增加了 37% (表1)。對 照培養(yǎng)基采用文獻報導(dǎo)方法配置（王麗芳等2010)。
[0017] 表1、優(yōu)化的固體培養(yǎng)基配方增加昆蟲病原線蟲產(chǎn)量的效果（單位：條/克培養(yǎng) 基）
[0018]
【主權(quán)項】
1. 一種優(yōu)化的生產(chǎn)昆蟲病原線蟲的固體培養(yǎng)基。其特征在于優(yōu)化的培養(yǎng)基為：每12克 培養(yǎng)基中包含豆粉（1. 79克），面粉（0. 31克），雞蛋黃粉（0. 1克），橄欖油（0. 3克）、酵母 提取物（〇. 2克），海綿（I. 0克）和水（8. 3克）。
2. 生產(chǎn)昆蟲病原線蟲的固體培養(yǎng)基包含橄欖油，其特征在于固體培養(yǎng)基中加入橄欖 油，顯著提高昆蟲病原線蟲的產(chǎn)量。
【專利摘要】本發(fā)明的目的是通過正交優(yōu)化設(shè)計，得到一種優(yōu)化的生產(chǎn)昆蟲病原線蟲的固體培養(yǎng)基配方。利用優(yōu)化的固體培養(yǎng)基，能夠顯著提高固體法生產(chǎn)昆蟲病原線蟲的產(chǎn)量。本發(fā)明有效解決了無菌條件下固體法生產(chǎn)昆蟲病原線蟲過程中，培養(yǎng)基容易染菌，且產(chǎn)量較低的實際問題。該方法將有效降低固體培養(yǎng)法生產(chǎn)昆蟲病原線蟲的成本，增產(chǎn)效果明顯，有利于昆蟲病原線蟲產(chǎn)品的推廣和應(yīng)用。
【IPC分類】A01K67-033
【公開號】CN104737986
【申請?zhí)枴緾N201310749476
【發(fā)明人】阮維斌, 陳文全, 黎永立
【申請人】南開大學(xué)
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2013年12月30日