專利名稱：新微生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是有關(guān)沒有溶血性的新微生物及其應(yīng)用的發(fā)明，詳細(xì)地講是有關(guān)對因增殖產(chǎn)生惡臭的有害菌(例如黃色葡萄球菌、肺炎桿菌等)具有抗菌活性的，因此可以除去諸如由排水處理設(shè)施發(fā)生的惡臭，對其它細(xì)菌(例如二氧甲基苯青霉素抗性的黃色葡萄球菌、病原性大腸桿菌0-157、軍團(tuán)菌等)也有高的抗菌活性的具有廣泛用途的新微生物及其應(yīng)用的發(fā)明。
另外本發(fā)明的新微生物中的抗菌活性不僅是由該新微生物的菌體外、內(nèi)生成物引起的，而且通過如下的機制也能發(fā)揮抗菌活性。
就是說，本發(fā)明的新微生物于20～40℃的培育條件下進(jìn)行培育，例如103個/g(ml)菌濃度大約在2小時可達(dá)到106個/g(ml)，而且在6小時以內(nèi)可達(dá)108個/g(ml)，從增殖開始就以通常沒有想到那樣的急劇增殖的速度繁殖。可是通常的細(xì)菌的增殖要經(jīng)過6小時左右的增殖準(zhǔn)備期(菌體置于新環(huán)境時，為適應(yīng)新環(huán)境開始增殖的準(zhǔn)備期)，即經(jīng)過所謂的“誘導(dǎo)期”，而本發(fā)明的新微生物幾乎沒有象上述那樣的“誘導(dǎo)期”，實際上培育開始后，在發(fā)生了迅速地而且是爆發(fā)式的細(xì)胞分裂后，就一直進(jìn)行著指數(shù)式增殖。這樣一來，在上述雜菌的誘導(dǎo)期內(nèi)，本發(fā)明的微生物一邊貪婪地消化循環(huán)中的營養(yǎng)成分，一邊進(jìn)行爆發(fā)式的繁殖，因此抑制了上述雜菌的繁殖，結(jié)果可以說表現(xiàn)出了對上述有害菌等的抗菌活性。即幾乎沒有誘導(dǎo)期，培育后迅速增殖的新微生物就抑制了有害菌的增殖。
在細(xì)菌中也存在著在比較高的溫度下也能增殖的高溫菌(例如單孢絲菌屬、諾卡式菌屬、鏈霉菌屬等放線菌、アルタナリア、曲霉屬、毛殼霉等真菌等)，而本發(fā)明的微生物經(jīng)極短的誘導(dǎo)期后就進(jìn)行爆發(fā)式增殖，因此在增殖系內(nèi)的溫度在達(dá)到50～60℃左右以前就產(chǎn)生了熱量，之后上述的高溫菌開始增殖，溫度進(jìn)一步升高，即使外部氣溫在30℃左右時溫度也接近100℃。
最近在排水處理技術(shù)中也盛行利用微生物的技術(shù)。排水處理中使用的微生物有很多種，其中主要的有以下一些。作為細(xì)菌有Zooglea、Sphaerotilus等，作為原生動物有阿米巴類、纖毛蟲類、鞭毛蟲類等，而作為藻類有藍(lán)藻類、綠藻類、硅藻類等。
這些微生物可以分解有機物以及一部分無機物，但在進(jìn)行分解時有時發(fā)出惡臭(氨、硫化氫等)以及產(chǎn)生發(fā)出惡臭的物質(zhì)，而且處理場產(chǎn)生的惡臭屢次作為社會問題引起人們的訴訟。就是說依據(jù)生物學(xué)的處理方法進(jìn)行排水處理，可以有效地進(jìn)行有機物質(zhì)或無機物質(zhì)的分解，但從處理場發(fā)生的惡臭仍然擱置在那沒有解決。特別是沉淀槽內(nèi)沉淀的活性污泥逐漸地成了厭氧性的，隨著厭氧菌的增殖產(chǎn)生了大量的惡臭，該污泥返送到曝氣槽時，大量的惡臭飄浮到排水處理場的周邊地區(qū)。
本發(fā)明人以上述發(fā)生的問題為背景銳意探索新的有用的微生物，結(jié)果終于從土壤中成功地分離出了新的有用的微生物，該微生物在分解有機物時不發(fā)生硫化氫、甲硫醇等引起的惡臭，而且對由于增殖產(chǎn)生惡臭的細(xì)菌Staphylococcus aureus和Klebsiella pneumonia等、二氧甲基苯青霉素抗性的黃色葡萄球菌、病原性大腸桿菌0-157、軍團(tuán)菌或綠濃菌等細(xì)菌有抗菌性，然后發(fā)現(xiàn)在廣泛領(lǐng)域內(nèi)可以利用該新的微生物，直至本發(fā)明完成。
本發(fā)明的新微生物是非溶血性枯草桿菌類緣菌，菌體體積是標(biāo)準(zhǔn)枯草桿菌(IFO3134株)的4倍以上，而且在37℃通過營養(yǎng)肉湯浸透培育時，由于培育初期幾乎沒有誘導(dǎo)期，103個/ml的初期菌在4小時后增加到107個/ml以上，由于協(xié)同效果，通過增殖發(fā)生的代謝能與上述標(biāo)準(zhǔn)枯草桿菌相比可達(dá)1萬倍以上，對黃色葡萄球菌、肺炎桿菌、二氧甲基苯青霉素抗性的黃色葡萄球菌、病原性大腸桿菌0-157、軍團(tuán)菌、綠濃菌、鐮刀霉菌、酵母霉菌、青霉菌、白癬菌以及蜘蛛狀霉菌有抗菌性。
作為本發(fā)明的新微生物的枯草桿菌類緣菌的具體例子如以下的OYK菌(國際保藏于通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術(shù)院生命工程工業(yè)技術(shù)研究所專利微生物保藏中心)。
(1)Bacillus sp.OYK-01-600(FERM BP-6394)、
(2)Bacillus sp.OYK-03-600(FERM BP-6395)、(3)Bacillus sp.OYK-04-000(FERM BP-6396)。
以下也將OYK-01-600、OYK-03-600、OYK-04-000菌簡單地稱之為[OYK]菌。
OYK菌消化蛋白質(zhì)后繁殖很快。而OYK菌具有不產(chǎn)生溶血素的特征，是對人安全性很高的菌。而將該菌對動物進(jìn)行靜脈注射、經(jīng)氣道、經(jīng)口服以及皮膚注射4種給菌方式可以確認(rèn)該菌的安全性。
另外OYK菌由于對黃色葡萄球菌、肺炎桿菌、二氧甲基苯青霉素抗性的黃色葡萄球菌、病原性大腸桿菌0-157、軍團(tuán)菌、綠濃菌、鐮刀霉菌(紅霉菌)有抗菌性，在給予高濃度的OYK菌后，使該菌的的效力顯著表現(xiàn)出來，所以有在很多方面被利用的可能。而該OYK菌在增殖時，由于不生成作為惡臭源、對人特別敏感的惡臭的甲硫醇、硫化氫、三甲基胺，所以即使用在需要防臭的場所也能發(fā)揮出其效果。
一般來說菌密度大有利于增殖，所以最初給予的菌濃度非常重要。本發(fā)明中理想的菌濃度是106～109個/g(ml)。
OYK菌即使在枯草桿菌種屬中也是比較大型的菌，例如它大約是枯草桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌(IFO-3134(0.4～0.6×1.5～3.2μm))體積的4倍(體積比)。然而OYK菌在培育開始后的初期增殖力有優(yōu)勢，因此可以產(chǎn)生大量的代謝能(標(biāo)準(zhǔn)菌只有在培育開始后4小時增殖6倍左右，而OYK菌可以大約80000倍的極高速度進(jìn)行增殖)。而且由于OYK菌是個兼性厭氧菌，所以在好氧、厭氧兩種條件下都有可能進(jìn)行極強的增殖。因此在進(jìn)行堆肥化時，會使有機廢棄物迅速升溫，然后促進(jìn)作為高溫菌的放線菌、真菌(絲狀菌)的活動，在縮短堆肥化期的同時可得到完全成熟的堆肥。
不用說，由于堆肥是被用于農(nóng)作物生長的肥料，堆肥化用的菌都有被農(nóng)作物或人吸收的可能性，所以上述菌的安全性特別重要。經(jīng)過高溫(70～80℃)完全成熟的堆肥無論是糞中含有的雜草種子，還是有害的感染菌可以說都被消滅了，換言之是被消毒了的肥料。最近這樣獲得的堆肥被用作肉牛棚的鋪料。作為鋪料使用的完全成熟的堆肥能給予牛舒服感，牛睡得好。若用不舒服的鋪料，肉牛不能睡，而站著，據(jù)說這樣會造成肉質(zhì)變硬，完全成熟的堆肥的其它的利用方法也正引起人們注目?？紤]到這一點，使用確認(rèn)安全性的菌、即OYK菌是合適的。本發(fā)明的新微生物的優(yōu)點在于抗菌防臭效果。因此用在諸如排水處理場進(jìn)行排水處理時不會發(fā)出惡臭。另外由于增殖速度極快，所以堆肥的制造即使在氣溫比較低的冬季時也很快，而且制造完全成熟型的堆肥成為可能。
另外從本發(fā)明的新微生物可以純化抗菌性物質(zhì)。由于該微生物從一開始就是從毒性小的土壤的微生物中分離出來的，就其抗菌物質(zhì)來說對人體也是比較安全的，所以不僅使在抑制尿布、生理用婦女衛(wèi)生巾或浴池水的雜菌增殖等以前不能使用的領(lǐng)域內(nèi)抗菌加工變成可能，而且對于象纖維領(lǐng)域內(nèi)的制品(衣料、毛巾等)那樣的以前一直進(jìn)行抗菌加工的制品也可以通過不曾見到的穩(wěn)妥的抗菌性進(jìn)行抗菌加工(不會引起過敏反應(yīng))。本發(fā)明的枯草桿菌類緣菌以原有狀態(tài)或孢子化狀態(tài)使用都是可能的，由于可以使該細(xì)菌的增殖速度迅速提高(使?jié)舛妊杆偕仙?，而且可以作成容易處理的形態(tài)，使該細(xì)菌包圍、附著或混入富營養(yǎng)源中制成菌體制劑使用更合適。
作為富營養(yǎng)源其主要成分理想的是蛋白質(zhì)。作為蛋白質(zhì)可以使用大豆、脫脂大豆、豆腐渣等大豆加工品和大豆渣、榨大豆制作的豆乳和將其濃縮的產(chǎn)品及其冷凍干燥產(chǎn)品、將大豆磨成粉末后分散或溶解于水等溶劑中的混合物、谷類中含有的谷蛋白、乳中含有的酪蛋白、將膠原用熱水處理的明膠、從魚粉中得到的魚蛋白等。此外作為營養(yǎng)源也可以使用米糠、麥糠、土豆、啤酒酵母、甘蔗等。
作為營養(yǎng)源例如使用大豆加工產(chǎn)品時，若是用固態(tài)成分多的營養(yǎng)源，可以將菌直接接種后，粉碎干燥后用。若是用液體營養(yǎng)源時，預(yù)先將水分除到某種程度，作成粘狀物，然后接種菌。作為接種的菌的形態(tài)以含有培養(yǎng)液的生菌狀態(tài)進(jìn)行。
作為固體制劑的形態(tài)沒有特別的限定，如粉末狀、粒狀、片狀、成型體等都可以。
作為營養(yǎng)源的添加物，考慮使用能給本發(fā)明的新微生物帶來好氧性環(huán)境的多孔物質(zhì)，例如咖啡糟、鋸屑、珍珠巖、沸石、活性炭等。
菌增殖中需要平衡的碳、氮、磷、硫4元素，大豆可以滿足。
另外可以將50℃以上高溫區(qū)增殖的高溫菌(放線菌和真菌等)以孢子化的粉體狀態(tài)摻入，作成本發(fā)明的菌體制劑。
通過使用上述那樣的營養(yǎng)源，可以得到確保菌濃度為1×108～1×1010個/g那樣的菌體制劑。
將上述的菌體制劑投入到有機性廢物(生垃圾)和排泄物中，促使發(fā)酵，進(jìn)行堆肥化。本發(fā)明的新微生物平均來說在10～50℃溫度范圍增殖活躍，迅速制造出為促進(jìn)在更高溫度下進(jìn)行發(fā)酵的菌的活動的環(huán)境。
而在高溫區(qū)OYK菌由于溫度上升死掉，或孢子化，作為營養(yǎng)源被高溫增殖菌攝入，幾乎滅絕。60℃前后，如果進(jìn)行將系統(tǒng)的上部和下部調(diào)換那樣的作業(yè)(翻轉(zhuǎn))，可以使未發(fā)酵物接觸菌體，也可以制造好氧環(huán)境，通過翻轉(zhuǎn)稍后就升溫可以消除暫時看到的溫度下降，整體向完全成熟堆肥推進(jìn)。
將含有高密度的細(xì)菌的菌體制劑投入到有機廢物，在適當(dāng)溫度下通過翻轉(zhuǎn)可促進(jìn)好氧發(fā)酵。好氧發(fā)酵時，多少會產(chǎn)生一些氨，但摻入的咖啡糟等多孔物質(zhì)可以吸附氨。由于增殖產(chǎn)生的能量可使溫度升高到50℃以上，由此促進(jìn)高溫發(fā)酵菌(放線菌、霉菌)的活動，溫度達(dá)70℃以上。這樣的高溫可以消滅有害的微生物和昆蟲，也促進(jìn)給植物發(fā)育帶來障礙的難分解有機物的分解，而且混在糞中的雜草種子也會死掉。這樣一來可以得到有機栽培所必需的安全的完全成熟的堆肥。
本發(fā)明的新微生物也可以用作由于厭氧發(fā)酵產(chǎn)生的不舒服的臭味(硫化氫、甲硫醇、三乙胺)的脫臭劑。作為脫臭劑，可以以原有狀態(tài)使用，也可以以孢子化的狀態(tài)使用，但最好是使用前項中敘述的菌體制劑。以防臭為目的，形狀上有孔盤狀、球狀、平板狀、多角形狀、網(wǎng)狀、多枝狀等形狀，最好是每單位重量的表面積大的形狀。在平板狀產(chǎn)品中利用沖孔、鉆孔等手段作一個孔也可以。另外將脫臭劑作成水溶性的使用范圍擴大就更理想。
將本發(fā)明的脫臭劑以原有狀態(tài)，或放入網(wǎng)狀容器內(nèi)可用于諸如廚房的排水(水槽)、排水管道(含排水口)、動物飼養(yǎng)場和動物處理場(屠宰場等)或醫(yī)療現(xiàn)場的污物處理場、醫(yī)療床和洗凈槽等地方。
當(dāng)將本發(fā)明的新微生物作為防臭劑使用時，該微生物所要求的最適條件列舉如下。(1)是對人溫和、而且能構(gòu)成高密度微生物群的菌體。(2)為了使高密度微生物群持續(xù)形成，要在多孔的營養(yǎng)源中(具有吸收臭氣功能的營養(yǎng)源等)培養(yǎng)。(3)具有即使在熱水中，形成孢子后也能生存的性質(zhì)。(4)可以抗低濃度的殘留氯。(5)每當(dāng)增殖時不產(chǎn)生惡臭，或即使產(chǎn)生也是微量的。(6)在高濕度環(huán)境下，分散于含有營養(yǎng)源的水溶性固態(tài)物質(zhì)中時，具有超出伴隨著增殖發(fā)出惡臭的其它微生物(雜菌)增殖的增殖能力。(7)生成抗菌物質(zhì)并分泌，抑制低濃度雜菌類的增殖。(8)即使進(jìn)入口中也是安全的。使用本發(fā)明的新微生物也可以對浴槽的水或浴槽的壁面和蓋上的雜菌的增殖進(jìn)行抑制和脫臭。也可以將本發(fā)明的新微生物包在相應(yīng)的生理用品中使用。這里所說的相應(yīng)的生理用品是指處理伴隨著人和其它動物的生理現(xiàn)象產(chǎn)生的分泌物、排泄物的用品，例如生理用衛(wèi)生紙、尿布、預(yù)防褥瘡的墊、貼身汗衫等，但并不限定于這些物品。上述的相應(yīng)的生理用品中，特別有效的是生理衛(wèi)生紙。因為經(jīng)血可以被由吸水性高的高分子材料或纖維材料構(gòu)成的吸水用品吸收，所以如果預(yù)先在該吸收用品中含有本發(fā)明的新微生物、例如OYK菌或菌體制劑，在抑制經(jīng)血吸收區(qū)域內(nèi)含有的有害雜菌的繁殖的同時也起到脫臭作用。在吸收排泄物或防漏的尿布中運用本發(fā)明的新微生物也起到同樣的作用效果。即尿布中運用新微生物時，在抑制排泄物中含有的、成為惡臭起因的雜菌的繁殖的同時，起到脫臭的作用，同時通過本發(fā)明的新微生物具有的抗菌活性預(yù)防感染也是有希望的。作為使相應(yīng)的生理用品中保持OYK菌或粉末狀的OYK菌的方法有各種各樣，當(dāng)難于固定菌時，也可以將粉末狀的菌混合在含有胨的生理鹽水中然后用噴霧器噴撒在相應(yīng)的物品上。相應(yīng)的物品濕潤的情況下可以直接撒粉末狀的菌。其它的方法，例如還有以下那樣的方法。即將裝到由水溶解墊制作的袋的內(nèi)部的東西安裝在相應(yīng)的生理用品上，或是使用水溶性的粘合劑將菌固定在上述水溶性墊的表面，然后安裝在相應(yīng)的生理用品上。作為水溶性材料可以用淀粉、酪蛋白、聚乙烯醇(PYA)、羧甲基纖維素(CMC)等。
人或其它動物長期臥床時，在與床接觸的皮膚部位起所謂的褥瘡。魚類在水槽中長時間保管時，由于魚之間的接觸有時損傷魚鱗，在魚體表面產(chǎn)生粘液。而鳥類有時翅膀表面的光澤會失去。狗和貓等寵物或牛、豬、羊、馬等家畜毛會變得不整齊。這些現(xiàn)象都是由體表面或獸毛的分泌物的蓄積以及魚類中附著于體表的餌料的殘留物的腐敗等原因引起的。就是說通過來自動物的體表面或獸毛的分泌物堆積、雜菌在該分泌物中繁殖就會引起上述那樣的異?，F(xiàn)象。有時綠濃菌等侵犯皮膚的菌進(jìn)行繁殖的情況也存在，會破壞常見菌的健全的繁殖分布。
由于OYK菌分解上述的分泌物、而且對有害菌表現(xiàn)出抗菌性，所以對于上述那樣的病例，通過將OYK菌向體表面撒布或涂布，會得到明顯地改善。為了將OYK菌直接地撒布或涂布于人或動物的皮膚、羽毛、獸毛，無論是用含有OYK菌的溶液，還是用孢子化的粉末都是很簡便的。使用粉末時，例如可用空氣噴霧器那樣的粉體撒布器直接撒布。撒布的OYK菌的孢子得到來自生物體的濕氣發(fā)芽，一邊消化分泌物，一邊增殖。增殖速度快，而且由于增殖時不產(chǎn)生氨，所以臭味一會兒就消失了，撒布場所爽快，有著與獸毛洗凈時同樣的感觸。對鳥的羽毛也會得到同樣的效果。而通過向魚類棲身的水槽投放OYK菌粉末，可以消除體表的粘液，鱗片即使損傷，治愈也很快。這種情況淡水魚最理想。撒布或涂布的OYK菌濃度是1×106～1×108個/g，即使與菌的富營養(yǎng)源合用也可以。作為本發(fā)明的抗菌商品除了上述的相應(yīng)的生理用品以外，還有OA儀器的套管、墊或筆箱等文具、FAX和電話機等通信儀器等。作為加溫商品例如有面狀的發(fā)熱體。菌體制劑如果帶有50～60％左右的濕度可以升溫到大約40～50℃這已得到確認(rèn)。因此將本發(fā)明的菌體制劑預(yù)先放入例如密封容器或密封袋內(nèi)，在開封時，暴露在濕氣的細(xì)菌開始增殖，由此產(chǎn)生的代謝能可以作為上述面狀發(fā)熱體的能源。附圖的簡單說明圖1是表示供防臭試驗的排水處理場中的排水設(shè)備和處理能力的說明圖。
圖2是表示比較OYK菌和B.subtilis標(biāo)準(zhǔn)菌的增殖速度的曲線圖。
圖3是將堆肥化溫度變化表示成曲線的圖。
圖4是將堆肥化溫度變化表示成曲線的圖。
圖5是將屋外堆肥化溫度變化表示成曲線的圖。
圖6是將實用試驗中堆肥化的溫度變化表示成曲線的圖。
圖7是表示本發(fā)明的脫臭劑形狀的斜視圖。
圖8是表示作為本發(fā)明的脫臭劑使固態(tài)物質(zhì)成形的狀態(tài)的斷面圖。
圖9是表示瓊脂培養(yǎng)基固定狀態(tài)的斷面圖。
圖10是OYK菌載體的斷面圖。
圖11是貼著浮子的OYK菌載體的斷面圖。
圖12是其它實施樣式的OYK菌載體的斷面圖。
圖13是表示將OYK菌載體用于浴槽的例子的斷面圖。
圖14是將代謝能作為熱能利用的裝置的斷面圖。
以下說明本發(fā)明的實施例，這些實施例是為了說明本發(fā)明的一個例子，并不限定本發(fā)明的范圍。
A.新微生物的篩選從土壤中分離出3株對由于增殖產(chǎn)生惡臭的細(xì)菌具有抗菌性的微生物。一般來說土壤菌毒性小，可以說從這樣的土壤中分離的3個OYK菌對人體也是安全的(溫和的)。
B.菌株的鑒定根據(jù)下面的①、②鑒定這里分離選出的菌體的菌學(xué)性質(zhì)。即依據(jù)以下記載進(jìn)行鑒定①Bergey’s Mannual of Determinative Bacteriology Vol.2(1986)，Eillismd & Eilkind U.S.A②R.E.Gordon，W.Chaynes，C.H.Pang.(1973)The GenusBacillus.Agr.Handbook No.427 United states department ofAgriculture.Washington D.C.試驗按以下手法進(jìn)行。
1.形態(tài)上的性質(zhì)(結(jié)果如下面[表1]所示)(1) 細(xì)胞的大小(2) 細(xì)胞的形狀(3) 細(xì)胞形態(tài)有無多樣性用倍率5,000～30000倍的電子顯微鏡觀察。試驗菌是從用普通的瓊脂平板培養(yǎng)基于37℃下培養(yǎng)1天后形成的菌落中獲得的。使用的普通瓊脂培養(yǎng)基由肉提取物5g、胨10g、NaCl15g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml組成。
(4) 有無運動性1)用西澤、菅原的方法將鞭毛染色，于電子顯微鏡(倍率10000倍)下觀察。第1種溶液由單寧酸100ml、日本藥典氯化鐵液1.5ml、福爾馬林2ml、1％NaOH1ml、蒸餾水100ml組成，第2種溶液由硝酸銀2g、日本藥典氨水少量、蒸餾水100ml組成。2)在半流動性普通瓊脂高層培養(yǎng)基上進(jìn)行穿刺培養(yǎng)，以培養(yǎng)基整體的混濁判定。使用的半流動性普通瓊脂培養(yǎng)基由肉提取物5g、胨10g、NaCl15g、瓊脂5g、蒸餾水1000ml組成。
(5) 有無孢子
1)將于普通肉湯培養(yǎng)基上振蕩培養(yǎng)的培養(yǎng)液于85℃加熱15分鐘后，轉(zhuǎn)向普通瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行混合稀釋培養(yǎng)，以菌落的出現(xiàn)進(jìn)行判斷。使用的普通肉湯由肉提取物3g、胨5g、蒸餾水1000ml組成。
2)用Wirtz法(Schaeffer-Fulton修改法)對孢子染色，以菌體為紅色、孢子為綠色進(jìn)行判斷。菌體的紅色來自0.5％藏紅水溶液，而孢子的綠色來自5％堿性孔雀石綠水溶液。(6) 孢子囊的形狀(7) 孢子形狀(8) 孢子的形成部位(9) 孢子的大小用Wirtz法(Schaeffer-Fulton修改法)對孢子染色，于倍率5000倍的電子顯微鏡觀察。試驗菌是從用普通的瓊脂平板培養(yǎng)基于37℃下培養(yǎng)1天后，于4℃在冷藏箱冷卻1天的菌落中獲得的。(10)革蘭氏染色以Hucker修改法進(jìn)行。陽性以結(jié)晶紫的紫色，陰性以對比染色的堿性藏花紅的紅色判定。試驗菌是從用普通的瓊脂平板培養(yǎng)基于37℃下培養(yǎng)1天后形成的菌落中獲得的。(11)抗酸性依據(jù)Ziiehl-Neeisen染色法進(jìn)行。陽性以苯酚品紅的紅色，陰性以對比染色的堿性孔雀石綠的綠色判定。試驗菌是從用普通的瓊脂平板培養(yǎng)基于37℃下培養(yǎng)1天后形成的菌落中獲得的。
表1形態(tài)學(xué)上的性質(zhì)<
>2.在各個培養(yǎng)基中的繁殖狀態(tài)(結(jié)果如下面的[表2][表3]所示)(1)普通瓊脂平板培養(yǎng)基[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)肉提取物5g、氯化鈉5g、胨10g、瓊脂15g(pH7.0±0.1)、蒸餾水1000ml[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在它上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×3日。(2)普通瓊脂斜面培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)同上[培養(yǎng)條件]在滅菌的試管內(nèi)斜面固定培養(yǎng)基，在它上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×3日。(3)普通肉湯液體培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)肉提取物5g、氯化鈉5g、胨10g、pH7.0±0.1[培養(yǎng)條件]向滅菌的試管加入培養(yǎng)基，將菌懸浮于培養(yǎng)基中。37℃×3日、170轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)。(4)明膠穿刺培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)肉提取物5g、氯化鈉5g、胨10g、明膠15g(pH7.0±0.1)[培養(yǎng)條件]在滅菌的試管高層固定培養(yǎng)基，進(jìn)行穿刺培養(yǎng)。25℃×7日。[繁殖以外的觀察項目]由于蛋白質(zhì)的消化引起的明膠液化。(5)石蕊汁液體培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)脫脂奶粉110g、石蕊適量、pH7.0±0.1[培養(yǎng)條件]向滅菌的試管加入培養(yǎng)基，將菌懸浮于培養(yǎng)基中。25℃×14日、靜置培養(yǎng)。[繁殖以外的觀察項目]乳糖分解時，由于酸的產(chǎn)生引起的牛奶的凝固乳糖分解時，由于凝乳酶的產(chǎn)生引起的牛奶的凝固乳糖分解時，由于凝乳酶的產(chǎn)生引起的乳清的析出。
表2于各個培養(yǎng)基中的繁殖狀態(tài)
表3
3.生理學(xué)性質(zhì)(1)(結(jié)果如[表4]所示)(1)硝酸鹽的還原[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)硝酸鉀1g、胨5g、[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。373×5日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]亞硝酸鹽的檢測將α-萘胺液1ml和對氨基苯磺酸1ml與培養(yǎng)基充分混合，如果成桃紅色，就判定為陽性。(2)脫氮反應(yīng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)1)硝酸鈉10g、肉提取物5g2)肉提取物5g[培養(yǎng)條件]向滅菌的試管中分別加入上述1、2培養(yǎng)基，各2支，其中懸浮一鉑金勺的菌。2支中一支再加上1～2cm的液體石蠟。37℃×1～3日、靜置培養(yǎng)。[觀察項目]硝酸鹽存在下有無厭氧繁殖觀察有無硝酸鹽、4支有無液體石蠟的試管的濁度、氣體產(chǎn)生來判定。(3)VP測試[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨5g、磷酸二氫鉀5g、葡萄糖5g[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。37℃×3日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]調(diào)查是否存在葡萄糖的分解產(chǎn)物乙?；谆状枷?ml培養(yǎng)液中加入α-萘酚溶液0.6ml和40％KOH水溶液0.2ml，如變成紅色，就判定為陽性。(4)MR測試[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨5g、磷酸二氫鉀5g、葡萄糖5g[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。37℃×3日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]調(diào)查由于葡萄糖分解產(chǎn)生的酸向1ml培養(yǎng)液中滴入甲基紅，紅色為陽性，黃色判定為陰性。(5)吲哚的產(chǎn)生[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨10g、氯化鈉5g[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。37℃×3日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]吲哚的檢測調(diào)查由氨基酸色氨酸有無產(chǎn)生吲哚的能力。向培養(yǎng)液中加入培養(yǎng)液的1/5～1/10的Kovac試劑(參照下面)，充分振蕩后，靜置，分為2層，上層如是紅色判定為陽性，若為黃色判定為陰性。<Kovac試劑>對二甲胺基苯甲醛5g、戊醇75ml、濃鹽酸25ml。(6)硫化氫的產(chǎn)生[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售TSI瓊脂培養(yǎng)基)肉提取物5g、葡萄糖1g、氯化鈉5g、檸檬酸鐵0.2g、胨15g、硫代硫酸鈉0.2g、乳糖10g、酚紅0.002g、白糖10g、瓊脂15g[培養(yǎng)條件]在滅菌的試管半斜面固定培養(yǎng)基，于高層部位進(jìn)行穿刺培養(yǎng)，于斜面進(jìn)行涂布培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]硫化氫的檢測斜面低的部位如果有黑的變異物判定為陽性。(7)淀粉水解[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)淀粉2g、肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。室溫×5日[觀察項目]淀粉的檢測將碘、碘化鉀液(參照下面)滴入可看到菌增殖的平皿，如濃的紫色消失判定為陽性。<碘、碘化鉀液>碘化鉀5g、碘4g/200ml。(8)酪蛋白的液化[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)脫脂乳2g、瓊脂5g[培養(yǎng)條件]上述培養(yǎng)基分別滅菌，混合固定于滅菌的平皿上，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]酪蛋白的殘留若是劃線部分的周圍看到透明部分，判定為陽性。(9)檸檬酸的利用[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售CIT瓊脂培養(yǎng)基)磷酸氫二鉀1g、磷酸氫二銨1g、檸檬酸鈉2g、硫酸鎂0.2g、氯化鈉5g、BTB 0.024g、瓊脂15g[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×1～3日[觀察項目]作為碳營養(yǎng)源只利用檸檬酸后有無繁殖培養(yǎng)基變藍(lán)或確認(rèn)菌的繁殖時，判定為陽性。(10)色素的生成[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨20g、甘油10g、K2SO410g、MgCl21.4g、瓊脂15g[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。25℃×5日[觀察項目]色素生成只在菌落周圍部位著色時判定為非水溶性色素、培養(yǎng)基整體著色時判定為水溶性各種色素的生成。(11)脲酶[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)尿素20g、胨2g、葡萄糖1g、氯化鈉5g、磷酸二氫鉀2g、0.2％酚紅6ml、瓊脂15g(其中瓊脂進(jìn)行121℃×15分鐘滅菌，其它進(jìn)行過濾滅菌)[培養(yǎng)條件]在滅菌的試管斜面固定培養(yǎng)基，在斜面進(jìn)行涂布培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]氨的檢測培養(yǎng)基變成紅色時判定為陽性。(12)氧化酶[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]是否存在細(xì)胞色素向平板上的菌落滴1％二甲基-對苯二胺水溶液，滴下顏色經(jīng)粉紅色變成黑色時，判定為陽性。(13)過氧化氫酶[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]是否存在過氧化氫酶是否存在催化過氧化氫分解的酶。向載玻片上滴一滴3％H2O2液，然后加1鉑金勺菌充分混合。氧氣氣泡多或持續(xù)產(chǎn)生時，判定為陽性。
表4生理學(xué)性質(zhì)(1)<t
4.生理學(xué)性質(zhì)(2)(結(jié)果如下面的[表5][表6]所示)(1)pH對繁殖的影響[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售的營養(yǎng)肉湯)肉提取物3g、胨5g、pH調(diào)節(jié)劑(酸H2SO41ml/100ml，堿NaOH4g/1,000ml)、pH的變化在3.6～10.9范圍變化15次。[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。37℃×1日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]有無繁殖++......繁殖良好+.......進(jìn)行繁殖-+......只有少量繁殖-.......極微量繁殖--......完全不繁殖(2)溫度對繁殖的影響[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售的普通瓊脂培養(yǎng)基)肉提取物5g、氯化鈉5g、胨10g、瓊脂15g(pH7.0±0.1)[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基固定于滅菌的平皿上，在上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)溫度分別變?yōu)?、10、20、30、37、40、50℃，各溫度下培養(yǎng)1天[觀察項目]有無繁殖++......繁殖良好+.......進(jìn)行繁殖-+......只有少量繁殖-.......極微量繁殖--......完全不繁殖(3)對氧的反應(yīng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售普通瓊脂培養(yǎng)基)肉提取物5g、氯化鈉5g、胨10g、瓊脂15g(pH7.0±0.1)[培養(yǎng)條件]以將菌與培養(yǎng)基混合稀釋的狀態(tài)高層固定于滅菌的試管后進(jìn)行培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]好氧、厭氧下有無繁殖只在表面繁殖............好氧性在表面和高層內(nèi)繁殖......兼性厭氧性只在高層內(nèi)繁殖..........偏向厭氧性(4)O-F測試[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨2g、氯化鈉5g、K2HPO40.3g、瓊脂3g、0.2％BTB15ml、葡萄糖10g(其中葡萄糖過濾滅菌，其它進(jìn)行121℃×15分鐘滅菌)[培養(yǎng)條件]向兩支滅菌試管灌注培養(yǎng)基，進(jìn)行高層固定。分別進(jìn)行穿刺培養(yǎng)，其中一支再加上1～2cm液體石蠟。37℃×3～4日[觀察項目]糖分解是以氧化方式進(jìn)行，還是以發(fā)酵方式進(jìn)行?！癘”......氧化方式的糖分解(只有在厭氧條件下變黃時)“F”......發(fā)酵方式的糖分解(無論是有氧、還是厭氧條件下都變黃時)(5)PPA測試[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)酵母提取物3g、苯丙氨酸2g、磷酸鈉1g、氯化鈉5g、瓊脂15ml[培養(yǎng)條件]在滅菌的試管斜面固定培養(yǎng)基，在斜面進(jìn)行涂布培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]苯丙氨酸有無脫氨基變成苯丙酮酸利用10％氯化鐵水溶液滴定，變綠時判定為陽性。(6)丙酸的利用[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)硫酸鎂0.2g、丙酸鈉2g、磷酸氫二鉀1g、磷酸氫二銨1g、氯化鈉5g、瓊脂10g、0.2％BTB溶液12ml[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]調(diào)查作為碳營養(yǎng)源只利用丙酸有無繁殖培養(yǎng)基變藍(lán)或確認(rèn)有菌的繁殖時，判定為陽性。(7)酪氨酸的分解[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)L-酪氨酸5g、肉提取物3g、胨5g、瓊脂15g(其中酪氨酸和營養(yǎng)瓊脂分別濕熱滅菌，然后進(jìn)行混合)[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×7～14日[觀察項目]酪氨酸有無分解在菌落的下面以結(jié)晶存在的酪氨酸溶解時，判斷為陽性。(8)卵黃反應(yīng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨10g、Na2HPO45g、KH2PO41g、NaCl 2g、MgSO40.1g、葡萄糖2g、卵黃15ml(其中除去卵黃以外，都進(jìn)行濕熱滅菌，然后加入無菌條件下得到的卵黃15ml，在冷藏室放置過夜。也要準(zhǔn)備不加卵黃的培養(yǎng)基)[培養(yǎng)條件]向2支滅菌的試管中分別灌注有無卵黃的培養(yǎng)基，在每支試管各懸浮一鉑金勺的菌。37℃×7日。在第1、3、5、7日進(jìn)行觀察。170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]有無白色沉淀與無卵黃相比，有卵黃的試管中，在試管的底部和表面看到白色沉淀物時，判定為陽性。(9)2％NaCl條件下的繁殖[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)肉提取物3g、胨5g、NaCl 20g[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。37℃×14日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]有無繁殖++......繁殖良好+.......進(jìn)行繁殖-+......只有少量繁殖-.......極微量繁殖--......完全不繁殖(10)5％NaCl條件下的繁殖(11)7％NaCl條件下的繁殖(12)12％NaCl條件下的繁殖(13)20％NaCl條件下的繁殖[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)將上述9中的NaCl變?yōu)?0g、120g、200g[培養(yǎng)條件]與上述9相同[觀察項目]與上述9相同(14)溶菌酶存在下的繁殖[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)肉提取物3g、胨5g、溶菌酶0.1g(溶菌酶在0.01N的HCl溶液中，煮沸20分鐘后，加入到營養(yǎng)肉湯內(nèi))[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。37℃×14日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。[觀察項目]有無繁殖++......繁殖良好+.......進(jìn)行繁殖-+......只有少量繁殖-.........極微量繁殖--......完全不繁殖(15)溶血素的產(chǎn)生[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中，市售的羊血液瓊脂培養(yǎng)基)酪蛋白的胰酶降解產(chǎn)物14.5g、大豆汁的木瓜蛋白酶的降解產(chǎn)物5.0g、氯化鈉5.0g、生長因子1.5g、瓊脂14.0g、去纖維的羊血5.0％。[培養(yǎng)條件]在滅菌的平皿上固定培養(yǎng)基，在其上面進(jìn)行劃線培養(yǎng)。37℃×1日[觀察項目]有無產(chǎn)生溶血素α型溶血......在菌落周邊有綠色帶(血紅蛋白變質(zhì))β型溶血......使菌落周邊透明(紅細(xì)胞膜破壞)
表5生理學(xué)性質(zhì)(2)
表6
5.碳源的酸和氣體的生成(結(jié)果如[表7]所示)(1)D-葡萄糖[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨1g、氯化鈉5g、瓊脂10g、0.2％BTB15ml、D-葡萄糖8g[培養(yǎng)條件]向滅菌試管灌注培養(yǎng)基，進(jìn)行高層固定。分別進(jìn)行穿刺培養(yǎng)。37℃×14日[觀察項目]酸的生成以BTB試劑變黃程度判定++......生成很多+.......生成-+......生成微量-.......沒有生成氣體的生成以高層部位有無龜裂判定++......生成很多+.......生成-+......生成微量-.......沒有生成(2)L-阿拉伯糖(3)D-木糖(4)D-甘露醇(5)D-甘露糖(6)D-半乳糖(7)D-山梨糖(8)肌醇(9)海藻糖(10)乳糖(11)麥芽糖(12)果糖[培養(yǎng)基組成](蒸餾水100ml中)將上述(1)的糖(D-葡萄糖)部分換成以上的(2)～(12)的糖。[培養(yǎng)條件]與上述(1)相同[觀察項目]與上述(1)相同表7碳源的酸及氣體的生成
6.鑒定結(jié)果OYK-01-600、OYK-03-600和OYK-04-000 3菌株根據(jù)下面的文獻(xiàn)進(jìn)行分類。①Bergey’s Mannual of Determinative Bacteriology Vol.2(1986)，Eillismd&Eilkind U.S.A②R.E.Gordon，W.Chaynes，C.H.Pang.(1973)The Genus Bacillus.Agr.Handbook No.427 United states department of Agriculture.Washington D.C.
表8鑒定結(jié)果(1)屬的鑒定
+90％以上陽性 -10％以下陽性 D因種屬而異 ND沒有有效的數(shù)據(jù)表9鑒定結(jié)果(2)種的鑒定
<p>表10
90％以上陽性 -90％以上陰性 d11～89％陽性 ND沒有有效的數(shù)據(jù)因此從[表8]可以認(rèn)為上述3株都屬于Bacillus屬，從[表9]、[表10]又可認(rèn)為都屬于B.subtilis的類緣菌，但根據(jù)厭氧條件下可以繁殖，由糖產(chǎn)生酸微弱，以及在7％NaCL條件下不能繁殖等現(xiàn)象又不能鑒定，所以判斷為新種，定為Bacillus sp.。
上述的變異株對伴隨增殖發(fā)出惡臭的菌具有抗菌性。培養(yǎng)該微生物，可以從其培養(yǎng)液中分離純化抗菌性物質(zhì)。直接將分離純化出的抗菌性物質(zhì)，或者將其溶解或分散于水等適當(dāng)?shù)娜軇┖笾苯踊蜻m當(dāng)稀釋后單獨組份、或與其它物質(zhì)組合的混合物，通過撒布、涂布、浸含、泡、栓、粘、掛、混入、添加、內(nèi)服、注射中的至少一種手段，直接或間接地給予希望抗菌、防臭的物品、或想讓其預(yù)先具備抗菌、防臭性能的物品，例如纖維制品、寢具、衣料、醫(yī)療品、衛(wèi)生儀器和備品、生理用品、鋪的物品、各種空調(diào)設(shè)備·空調(diào)器(含有空氣凈化裝置)的過濾器、包括內(nèi)外裝修的建材、家具、動物、動物飼養(yǎng)場、動物飼養(yǎng)機器、動物飼養(yǎng)用水和飼料、食器、藥品、污水或污水處理場或機器、微膠囊、旅客運輸車輛或船舶、航空的座椅也包括在內(nèi)的內(nèi)部裝修材料、尸體安置和喪葬用品等。
接下來用以下的實施例進(jìn)一步詳細(xì)地說明。
C.微生物具有的抗菌活性物質(zhì)的確認(rèn)(結(jié)果如[表11]所示)通過以下實驗確認(rèn)了Bacillus sp.OYK-01-600(FERM BP-6394)Bacillus sp.OYK-03-600(FERM BP-6395)、Bacillus sp.OYK-04-000(FERM BP-6396)分泌抗菌活性物質(zhì)。1.微生物懸浮液的調(diào)制(1)微生物OYK-01-600、OYK-03-600和OYK-04-000 3株。(2)前培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨10g、肉提取物5g、氯化鈉5g、瓊脂10g[培養(yǎng)條件]將瓊脂固定于滅菌平皿上，然后在其上面劃線培養(yǎng)保存菌。37℃×1日(3)正式培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨10g、肉提取物5g、氯化鈉5g將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中懸浮一鉑金勺的菌。37℃×1日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。2.抗菌試驗菌懸浮液的調(diào)制(1)抗菌試驗菌Klebsiella pneumoniae ATCC 4352，Staphylococcus aureus ATCC6538P。(2)前培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)小牛腦提取液200g、牛心臟提取液250g、腙胨10g、葡萄糖2g、氯化鈉5g、磷酸氫二鈉2.5g、瓊脂15g[培養(yǎng)條件]將瓊脂固定于滅菌平皿上，然后在其上面劃線培養(yǎng)保存菌。37℃×1日(3)正式培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨10g、肉提取物5g、氯化鈉5g[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的試管，其中加入②進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。Klebsiella pneumoniae......37℃×20小時、170轉(zhuǎn)/分Staphylococcus aureus......37℃×10小時、170轉(zhuǎn)/分(4)菌數(shù)的調(diào)整于滅菌的生理鹽水中將菌數(shù)調(diào)整到5～30×105個/ml。3.抗菌性試驗(1)試驗用培養(yǎng)基的制備1)將上述(4)的2個試驗菌的菌液分別取0.2ml混合稀釋在由胨10g、肉提取物5g、氯化鈉5g以及瓊脂10g組成的培養(yǎng)基(蒸餾水1000ml中)，在滅菌的平皿上固定。2)將由胨10g、肉提取物5g、氯化鈉5g以及瓊脂10g組成的培養(yǎng)基(蒸餾水1000ml中)在滅菌的平皿上固定。將上述(4)的2個試驗菌的菌液0.2ml用刮涂器涂布于其整個表面，進(jìn)行接種。(2)準(zhǔn)備與微生物比較抗菌性的菌為了與OYK-01-600、OYK-03-600和OYK-04-000 3株菌進(jìn)行比較，準(zhǔn)備含有大豆發(fā)酵桿菌的Bacillus subtilis的A、B、C3株菌。(3)微生物和抗菌性比較菌的接種將上述的「1.微生物的懸浮液的調(diào)整」中的(3)的OYK-01-600、OYK-03-600和OYK-04-000 3株菌和上述的(2)中的A、B、C3株菌、共計6株菌用下面的1)、2)的方法接種于上述(1)中制備的試驗用培養(yǎng)基上。1)在平皿中央放置青霉素管碟，其中注入各個菌液0.05ml。2)在平皿中央滴入各個菌液0.02ml。接種的平皿，進(jìn)行37℃×1日的靜置培養(yǎng)。(4)判定方法++...在供試菌的菌落的下面和周邊沒有試驗菌的增殖，確認(rèn)有2mm以上的增殖阻止帶(暈輪)+...在菌落的下面和周邊沒有試驗菌的增殖，確認(rèn)有0～2mm以上的增殖阻止帶(暈輪)+-...雖然沒有看到增殖阻止帶(暈輪)，但在供試菌的菌落內(nèi)沒有看到試驗菌的增殖。-......在供試菌的菌落內(nèi)的一部分看到試驗菌的增殖。--...在整個供試菌的菌落中都能看到試驗菌的增殖。ND...沒有進(jìn)行試驗。
表11確認(rèn)微生物具有抗菌活性物質(zhì)的測試結(jié)果
象[表11]那樣，可以確認(rèn)微生物在其增殖期內(nèi)，分泌出對Klebsiellapneumoniae和Staphylococcus aureus兩者都表現(xiàn)出抗菌活性的物質(zhì)。
D.通過微生物對排水處理場的防臭試驗(結(jié)果如[表12]所示)通過將Bacillus sp.OYK-01-600(FERM BP-6394)、Bacillussp.OYK-03-600(FERM BP-6395)、Bacillus sp.OYK-04-000(FERMBP-6396)投放到排水處理場對處理場周邊的防臭有效果可以通過以下實驗確認(rèn)。
1.供試驗用的排水處理場的概要(1) 場所和業(yè)種三重縣、洗滌業(yè)(2) 排水設(shè)備和處理能力參照圖1。2.防臭試驗方法(1) 微生物懸浮液的調(diào)制在本試驗中選擇Bacillus sp.OYK-01-600(FERM BP-6394)，用與上述的「1.微生物的懸浮液的調(diào)整」同樣的方法進(jìn)行微生物懸浮液的調(diào)整。(2) 向排水設(shè)備投放菌將上述(1)中調(diào)整的微生物懸浮液2.5L投放到圖1的排水處理設(shè)備原水槽。(3) 效果的判定1)判定者該工場員工3名2)判定基準(zhǔn)6階段臭氣強度表示法臭氣強度0＝無臭1＝能勉強感覺出臭(檢測閾值濃度)2＝了解到有種臭味的弱臭(認(rèn)知閾值濃度)3＝能輕易感覺到臭4＝很臭5＝極臭3)判定場所來自沉淀槽的活性污泥被送回到曝氣槽場所4)其它測定項目BOD、每ml投放菌的菌數(shù)表12在排水處理場進(jìn)行的防臭試驗結(jié)果
如[表12]所示，伴隨著微生物的增殖可以確認(rèn)臭氣強度的減少。可以認(rèn)為上述結(jié)果的獲得是由于該微生物在增殖時沒有產(chǎn)生使人感到不舒服的少量的硫化氫、甲硫醇、三乙基甲烷等，而且糖分解也不產(chǎn)生氣體的原因。其它微生物進(jìn)行增殖時，產(chǎn)生的氣體是否作為營養(yǎng)被消費了沒有進(jìn)行確認(rèn)。
另外確認(rèn)了Bacillus sp.OYK-03-600(FERM BP-6395)、Bacillussp.OYK-04-000(FERM BP-6396)也能得到與上述同樣的好結(jié)果。
E.微生物生成的分泌物的分離純化Bacillus sp.OYK-01-600(FERM BP-6394)、Bacillus sp.OYK-03-600(FERM BP-6395)、Bacillus sp.OYK-04-000(FERM BP-6396)分泌的對Klebsiella pneumoniae和Staphylococcus aureus表現(xiàn)出抗菌活性的物質(zhì)可以按下面的方式分離純化。(1) 微生物OYK-01-600、OYK-03-600和OYK-04-000 3株菌和為了比較包括納豆發(fā)酵桿菌的Bacillus subtilis A、B、C3株菌也進(jìn)行同樣的操作。(2) 前培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨10g、肉提取物5g、氯化鈉5g、瓊脂10g[培養(yǎng)條件]將瓊脂固定于滅菌平皿上，然后在其上面劃線培養(yǎng)保存菌。37℃×1日(3)正式培養(yǎng)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中)胨10g、肉提取物5g、氯化鈉5g[培養(yǎng)條件]將培養(yǎng)基加到滅菌的坂口燒瓶，其中懸浮一鉑金勺的②菌。37℃×2日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)。
2.菌體和分泌物的分離將得到的培養(yǎng)液于4℃、12000RPM進(jìn)行14分鐘的低溫離心分離。取出上清，用0.45μm的膜濾器抽濾。
3.分泌物的濃縮將得到的濾液轉(zhuǎn)移到梨型燒瓶，使濾液完全凍結(jié)在燒瓶的壁面后，用冷凍真空干燥機干燥48小時，得到粉末純化物。
F.微生物生成的物質(zhì)的抗菌力試驗(結(jié)果如[表13]所示)用下面的方法確認(rèn)從Bacillus sp.OYK-01-600(FERM BP-6394)、Bacillus sp.OYK-03-600(FERM BP-6395)、Bacillus sp.OYK-04-000(FERM BP-6396)的分泌物得到的認(rèn)為具有抗菌活性的分離純化物質(zhì)的抗菌力。
1.供試驗用物質(zhì)用上述「3.分泌物的濃縮」中得到的分泌物質(zhì)①Bacillus sp.OYK-01-600(FERM BP-6394)②Bacillus sp.OYK-03-600(FERM BP-6395)③Bacillus sp.OYK-04-000(FERM BP-6396)④Bacillus sp.A⑤Bacillus sp.B⑥Bacillus sp.C6種分泌物質(zhì)和作為抗菌力基準(zhǔn)藥劑采用的下面的⑦、⑧共計8種供試驗用物質(zhì)進(jìn)行試驗。⑦氯霉素(和光純藥工業(yè)(株)制抗生素、Mw323.13 CAS56-75-7，具有阻止蛋白質(zhì)合成作用、對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、立克次體、病毒有效，抗菌作用通常是抑制真菌的。抗菌測試用0.2ml的10mg/100ml的水溶液)⑧ニツカノンRB(日華化學(xué)(株)制的季銨系合成抗菌劑、對黃色葡萄球菌有很好的抗菌性，也有防霉菌性。有耐洗滌的抗菌防臭劑。抗菌測試用0.2ml的1ml/100ml的水溶液)。用上述共計①～⑧的8種試驗樣品進(jìn)行試驗。2.抗菌試驗菌上述的「2.抗菌試驗菌的懸浮液的調(diào)制」中得到的2種菌①Klebsiella pneumoniae ATCC 4352②Staphylococcus aureus ATCC 6538P。3.抗菌試驗方法(1)用培養(yǎng)液的白濁度判定的方法1)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售營養(yǎng)肉湯)肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g2)[培養(yǎng)條件]向滅菌試管加入5ml培養(yǎng)基，然后再加入試驗物質(zhì)0.02g和試驗菌懸浮液0.1ml，混合稀釋。37℃×1日、170轉(zhuǎn)/分振蕩培養(yǎng)3)[觀察項目]用日立制作所(株)制Model 100-20分光光度計測定培養(yǎng)液的透光率。測定波長475nm、表示單位％(Klebsiella pneumoniae菌數(shù)為5～30×108，透光率52％)。(2)用測定菌數(shù)判定的方法1)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售普通瓊脂培養(yǎng)基)肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g2)[培養(yǎng)條件]向滅菌平皿加入15ml培養(yǎng)基，其中混合稀釋溶解試驗物質(zhì)0.02g后進(jìn)行固定。其表面均勻地涂布0.2ml試驗菌懸浮液，進(jìn)行培養(yǎng)。3)[觀察項目]對平皿上增殖的菌落計數(shù)。表示單位指數(shù)部(例如、A×10B表示為「B」)。(3)通過觀察增殖阻止帶(暈輪)的判定方法1)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售普通瓊脂培養(yǎng)基)肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g2)[培養(yǎng)條件]向滅菌平皿加入15ml培養(yǎng)基，其表面均勻地涂布0.2ml試驗菌懸浮液，表面半干后在平皿中央放置固態(tài)形式的試驗物質(zhì)0.02g，進(jìn)行靜置培養(yǎng)。37℃×1日3)[觀察項目]測量出現(xiàn)的暈輪的最大直徑。表示單位mm。(4)青霉素管碟法1)[培養(yǎng)基組成](蒸餾水1,000ml中、市售營養(yǎng)肉湯)下層培養(yǎng)基肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g上層培養(yǎng)基肉提取物5g、胨10g、氯化鈉5g、瓊脂7g2)[培養(yǎng)條件]向滅菌平皿加入15ml下層培養(yǎng)基，在此層上面加上層培養(yǎng)基，其中4ml上層培養(yǎng)基中混合稀釋0.1ml試驗菌懸浮液。表面半干后將不銹鋼圓筒(內(nèi)徑6mm、外徑8mm、高10mm)從10～13mm高處垂直落在平皿中央。圓筒內(nèi)裝有試驗物質(zhì)0.02g溶解于0.2ml滅菌水的溶液，進(jìn)行靜置培養(yǎng)。37℃×1日3)[觀察項目]觀察管碟內(nèi)外發(fā)生的試驗菌的增殖。表示單位--...整個管碟內(nèi)都看到試驗菌的增殖+-...管碟內(nèi)一部分看到試驗菌的增殖+......管碟內(nèi)完全看不到試驗菌的增殖A......在管碟外觀察到最大直徑Amm(例如)的暈輪時。①保藏機關(guān)的名稱通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術(shù)院生命工學(xué)工業(yè)技術(shù)研究所專利微生物保藏中心地址郵編305-0046日本國茨城縣筑波市東1-1-3(TEL；0298-54-6029)②保藏日1998年6月29日③保藏號(1)FERM BP-6394(2)FERM BP-6395(3)FERM BP-6396
表13該微生物生成的物質(zhì)的抗菌試驗結(jié)果
試驗菌StStaphlococcus aureus，KlKlebsiella pneumoniaeND......沒有實施試驗就象[表13]所示那樣可以確認(rèn)微生物分泌的物質(zhì)具有抗菌效果。G.OYK菌體生成物的抗菌活性的測試作為OYK菌雖然用的是Bacillus sp.OYK-01-600，但用Bacillussp.OYK-03-600和Bacillus sp.OYK-04-000也會得到同樣好的結(jié)果。1.OYK菌體生成物的分離純化①菌體外生成物(1)使-82℃冷凍保存的菌種1ml解凍。(2)取4ml滅菌的BGG液體培養(yǎng)基(由大豆蛋白提取物和葡萄糖、谷氨酸鈉組成的培養(yǎng)基，以下同樣)加到試管內(nèi)，然后再向試管加入上述(1)得到的菌，37℃正式培養(yǎng)菌種24小時。(3)取100ml滅菌的BGG液體培養(yǎng)基加到坂口燒瓶中，然后再向燒瓶加入上述(2)得到的菌，37℃正式培養(yǎng)72小時。(OD＝10，pH＝7.9)(4)離心分離，取上清。(12000rpm×10min、4℃)(5)用膜濾器過濾上述(4)。(0.2μm膜)(6)將上述(5)中的濾液冷凍干燥。(7)將上述(6)冷凍干燥的樣品用3～4ml生理鹽水溶解。(8)在下面敘述到的抗菌測試中，滴入50μl的上述(7)溶解液。②菌體內(nèi)生成物(1)使-82℃冷凍保存的菌種1ml解凍。(2)取4ml滅菌的BGG液體培養(yǎng)基加到試管內(nèi)，然后再向試管加入上述(1)得到的菌，37℃培養(yǎng)菌種24小時。(3)取100ml滅菌的BGG液體培養(yǎng)基加到坂口燒瓶中，然后再向燒瓶加入上述(2)得到的菌，37℃正式培養(yǎng)72小時。(OD＝10，pH＝7.9)(4)離心分離，取沉淀。(12000rpm×10min、4℃)(5)向上述沉淀物加5ml的生理鹽水，分散沉淀物。(6)上述沉淀物分散后，加入20ml正丁醇，攪拌1小時，等待分為水層和醇層。(7)取出上述(6)中的醇層，用蒸發(fā)器使正丁醇蒸發(fā)。(8)然后移到干燥器進(jìn)一步干燥。(9)干燥后加入1ml生理鹽水，使純化物分散。(10)用膜濾器過濾(9)中分散液。(0.2μm膜)(11)在下面的抗菌測試中滴入50μl的上述(10)濾液。2.0YK菌菌體生成物的抗菌測試①供試菌體生成物(1)上述1.中的①得到的OYK菌菌體外生成物(2)上述1.中的②得到的OYK菌菌體內(nèi)生成物②對象試驗菌(1)Staphylococcus aoureus(ATCC 25923、黃葡萄球菌)(2)Klebsiella pneumoniae(ATCC 13883、肺炎桿菌)(3)MRSA1002(分離株、耐甲氧西林的黃葡萄球菌)(4)Escherichia coli 0-157(S180、大腸桿菌0-157)(5)Legionella pneumophilla(OCI 88171、Legionella菌)(6)Pseudomonas aeruginosa(IFO3452、綠濃菌(產(chǎn)生紅色色素))(7)Pseudomonas aeruginosa(ATCC27853、綠濃菌(產(chǎn)生藍(lán)色色素))(8)Fuzarium Proliferatum NirenbergS12(IFO6349、Fuzarium(紅霉菌))(9)Aspergillus niger van Tieghem S1(IFO6341、酵母霉菌)(10)Penisillium cittrinum Thom S5(IFO6352、青霉菌)(11)Trichophyton mentagrophytes(IFO5466、白癬菌)(12)Rhizopus stolonifer Lind S7(FERMS-7、蜘蛛網(wǎng)霉菌)。③試驗方法(1)對保存試驗菌在試驗菌各自的最適條件下進(jìn)行種培養(yǎng)。(2)將一定菌數(shù)的試驗菌菌液涂布于試驗菌各自的最適固態(tài)培養(yǎng)基上，放置直至半干。(3)將2種供試菌體生成物50μl(參照上述①)滴到上述(2)的培養(yǎng)基上。(4)于試驗菌的最適培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。(5)如果有抗菌活性，滴下的地方可看到增殖阻止帶(暈輪)。測定阻止帶的直徑(短直徑、長直徑)。結(jié)果記載于下面[表14]內(nèi)。
表14<
>H.OYK菌增殖速度試驗(參照圖2)本發(fā)明的新微生物培養(yǎng)開始后不需要誘導(dǎo)期，就開始迅速增殖。例如菌約103個/ml(g)的菌濃度于20～40℃的培養(yǎng)條件下，在6小時以內(nèi)就增加到108個/ml(g)以上。
圖2表示了Bacillus sp.OYK-01-600隨時間推移的增殖狀況。另外作為對照，圖中也給出了B.subtilis標(biāo)準(zhǔn)菌(IFO3134)的增殖狀況。圖2表示的曲線，縱軸取菌數(shù)的對數(shù)，橫軸為時間畫出的曲線。就象從該曲線了解到的那樣，本發(fā)明的OYK菌幾乎沒有誘導(dǎo)期，培養(yǎng)開始后就開始迅速增殖，約103個/ml(g)的菌濃度在5小時左右就達(dá)到108個/ml(g)以上。與此相比，B.subtilis標(biāo)準(zhǔn)菌(IFO3134)培養(yǎng)開始后，經(jīng)過6～8小時的誘導(dǎo)期后才真正開始增殖，達(dá)到約108個/ml(g)的菌濃度大約需要12小時。另外OYK菌的體積是上述標(biāo)準(zhǔn)菌體積的4倍，而且4小時后標(biāo)準(zhǔn)菌增殖6倍時，OYK菌增殖是20000倍，體積為標(biāo)準(zhǔn)菌的20000×4＝80000倍。如果單純比較體積，80000÷6＝13333...，體積大1萬倍以上。I.OYK菌的利用作為OYK菌雖然用的是Bacillus sp.OYK-01-600，但用Bacillussp.OYK-03-600(FERM BP-6395)和Bacillus sp.OYK-04-000(FERMBP-6396)也會得到同樣好的結(jié)果。(OYK菌的粉末化)以下對使OYK菌變成粉末的工序進(jìn)行說明。(1)使-82℃冷凍保存的菌種1ml解凍。(2)取4ml滅菌的BGG液體培養(yǎng)基加到試管內(nèi)，然后再向試管加入上述(1)解凍的菌，37℃培養(yǎng)菌種24小時。(3)取100ml滅菌的BGG液體培養(yǎng)基加到坂口燒瓶中，然后再向燒瓶加入上述(2)菌，37℃正式培養(yǎng)72小時。(OD＝10，pH＝7.9)此時的OD值大約為10，菌數(shù)是1×108個/ml。(4)將上述(3)的液體冷凍干燥，得到1g的菌粉末(也含有培養(yǎng)基成分)。菌數(shù)是1×1010個/g。
得到的菌粉OYK菌都被孢子化了。由此可以起到如下那樣的作用效果。即①由于被孢子化，只要考慮到防濕，就有可能在常溫下保存，不用擔(dān)心菌數(shù)的減少和菌的變異等。②用壓片強度為10噸左右的壓片機可以壓片。壓片不會引起菌數(shù)的減少。③為了作成片劑可以添加芳香劑、凝固劑、緩溶劑等必需的化學(xué)藥品。(以片劑形式的利用)
上述實施例得到的菌粉在添加促進(jìn)菌增殖的添加物(例如葡萄糖、谷氨酸鈉、大豆蛋白的提取物、培養(yǎng)基成分等)后，用壓片機可以作成片劑。如果將該片劑投放到生垃圾中，結(jié)果可以防止生垃圾發(fā)出惡臭。這是由于將上述片劑投放到生垃圾中，片劑被濕氣或水分溶解，孢子得到水分后以菌的方式開始活動，該OYK菌以超過發(fā)出臭氣的腐敗菌的增殖的速度增殖的緣故。另外由于OYK菌對大腸桿菌0-157也有抗菌活性，在廚房的四周使用上述的片劑，也可以用于防止食物中毒。(堆肥的制造例和制造的堆肥的效果)另外本發(fā)明的OYK菌在堆肥的制造過程中也表現(xiàn)出了有效的作用。特別是在制造過程中初期的發(fā)酵溫度上升中表現(xiàn)出有效作用。以下給出了一個例子。
牛糞700g升溫到50℃需要8天，而向700g牛糞中加入濃度1×108個/ml的OYK菌液(OYK-01-600)50ml后，只需要3天就達(dá)到50℃，縮短了時間。而就保持在40℃以上的時間來說，不添加菌時為6天，而添加了OYK菌的可保溫17天，可見保溫時間延長了。堆肥制造過程可以說是在各個溫度區(qū)域大多數(shù)菌和霉菌反復(fù)進(jìn)行著增殖、死亡、使高分子有機物低分子化的過程。在該循環(huán)中70℃的最高溫度下，菌以孢子生存，由于在升溫或降溫過程40℃附近增殖活躍，預(yù)計可縮短循環(huán)。另外由于OYK菌的特征是增殖時不發(fā)臭，所以可以防止制造過程中的甲烷、硫化氫臭味的擴散。(OYK菌的薄片化和其利用)為了使本發(fā)明的OYK菌的效果在醫(yī)療現(xiàn)場利用方便，進(jìn)行了嘗試。以下進(jìn)行詳細(xì)敘述。
使用密度為1500目的過濾網(wǎng)印染機將菌(OYK-01-600)濃度1×107個/ml的菌液和作為粘合劑添加的10％PVA(聚乙烯醇)的分散溶液印染在100g/m2的無紡織布上。在使水分蒸發(fā)后，用顯微鏡觀察上述無紡織布，結(jié)果可以確認(rèn)OYK菌被孢子化，在以繞在無紡織布的纖維上的狀態(tài)被固定。將該無紡織布裁成適當(dāng)?shù)膶挾?，然后貼在受褥瘡(綠濃菌引起的)折磨的患者的背部，使其躺在床單上觀察，確認(rèn)惡臭逐漸減少，褥瘡也漸漸痊愈。
上述實施例中雖然使用了無紡織布，但不限于此，使用合成樹脂纖維或天然的纖維織成的織物和編織物、合成樹脂片、合成樹脂發(fā)泡片等也可以。(池水凈化方面的利用)位于高爾夫球場內(nèi)的水池由于在象草坪施大量肥料時，肥料會流入池中，使之變成富營養(yǎng)狀態(tài)。這樣的水池有時帶有紅色的浮游生物會異常地增殖，由于其增殖，池中溶解的氧減少。由此會促進(jìn)厭氧菌的增殖、引起惡臭的發(fā)生。在這樣狀況的池中(400t水量規(guī)模)，投放10升OYK菌液(OYK-01-600、菌濃度1×108個/ml)，2周時間表面的紅色消失，透明度增加。其機制雖然還未闡明，但可以推側(cè)是由于OYK菌的增殖使得池水中的營養(yǎng)物減少，植物浮游生物死了的緣故。(作為脫臭劑的利用)富營養(yǎng)狀態(tài)的池中水的凈化效果、或者是上述「D.通過微生物對排水處理場的防臭試驗」中敘述的排水(廢水)處理場的防臭效果就如前面敘述的那樣，就象對奶牛和肉牛的飼養(yǎng)場、養(yǎng)雞場、養(yǎng)豬場中的惡臭制造堆肥的例子所見到的那樣，由于可以防止硫醇、硫化氫臭味的擴散，所以利用OYK菌的撒布脫臭是可能的。在屠宰場、手術(shù)室、衛(wèi)生污物、加工中的動物皮革就象上述[表12]和以下段落記載的那樣，OYK菌比分解蛋白質(zhì)、脂類、碳水化合物等時產(chǎn)生的惡臭的菌增殖的更快，所以可以防臭。撒布、混入、或附著的OYK菌無論是直接用菌液還是用孢子化的粉體都可以，甚至是用菌體內(nèi)生成物或菌體外生成物都可以得到同樣的效果。(在堆肥化中的利用[I])
為了研究OYK菌對發(fā)酵溫度帶來怎樣的影響，使用少量的牛糞在室內(nèi)(室溫18℃)進(jìn)行堆肥化試驗。樣品的組成如下。(1-1)牛糞400g(含水率60％)CFP40g(咖啡渣滓、含水率8％)豆腐渣粉末 20g(大豆蛋白源)OYK菌粉末 4g(菌濃度1×1010個/g)(1-2)牛糞 400g(含水率60％)將這些樣品放在暖水瓶內(nèi)，將樣品溫度變化畫成曲線，如圖3所示。第一天花費在準(zhǔn)備上，每6小時測一次溫度變化。圖中曲線(1-1)、(1-2)標(biāo)號與上述樣品號一致。
樣品(1-1)中的豆腐渣粉末作為OYK菌的營養(yǎng)源，有助于增殖，CFP是多孔物質(zhì)除了調(diào)整水分外，還有吸收產(chǎn)生的微量的氨臭氣和制造好氧環(huán)境的作用。而OYK菌粉末是培養(yǎng)液經(jīng)冷凍干燥的樣品，菌濃度為1×1010個/g。樣品(1-1)大約在一天內(nèi)就由室溫上升到70℃。OYK菌在10℃～55℃范圍活躍，而在30～40℃范圍最活躍，促進(jìn)牛糞溫度急劇上升，由于OYK菌的增殖多少會產(chǎn)生點氨，由于溫度和弱堿性會促進(jìn)放線菌等高溫菌的活動。由此如圖3曲線所示，推測大約在1天內(nèi)牛糞的溫度可達(dá)到70℃。
雖然2天后再度下降到室溫，但接著又上升到發(fā)酵溫度。
樣品(1-2)牛糞的溫度上升10℃左右，發(fā)酵不充分，沒有堆肥化。
而上述測試為了正確測定發(fā)酵溫度，樣品放到暖水瓶中，進(jìn)行強制通氣。(在堆肥化中的利用[II])為了調(diào)查牛糞含水率的影響，用下面那樣的樣品進(jìn)行同樣的試驗。室溫為18℃。將樣品溫度變化畫成曲線，如圖4所示。(2-1)牛糞400g(未調(diào)節(jié)水分，含水率80％)CFP 40g(咖啡渣、含水率8％)OYK菌粉末 4g(菌濃度1×1010個/g)(2-2)牛糞 400g(含水率60％)樣品(2-1)中，溫度由室溫連續(xù)上升達(dá)到最高溫度70℃。
樣品(2-2)中，溫度稍有上升，沒有超過30℃。(在堆肥化中的利用[III])參考上述實施例1～2，在屋外進(jìn)行堆肥化試驗。容量也增加到7t。試驗場所在靜岡縣下的堆肥化中心內(nèi)，于堆肥化困難的冬季進(jìn)行試驗。樣品在屋外堆成堆，上面蓋上墊子。(3-1)牛糞 5t(水分沒有調(diào)整，含水率80％)返回堆肥 1.5t(用于調(diào)整水分，含水率44％)CFP 150kg(咖啡渣、含水率8％)脫脂大豆糟 150kg(大豆蛋白源)OYK菌粉末 5kg(菌濃度1×1010個/g)將發(fā)酵溫度以及外部氣溫的變化畫成曲線，如圖5所示。由于是冬季，樣品的溫度也低，發(fā)酵溫度能否上升還是個懸念，但結(jié)果確認(rèn)1天內(nèi)上升20℃，看到從糞堆有蒸汽出現(xiàn)。然后看到與室內(nèi)試驗(上述)一樣的溫度上升，，最高溫度達(dá)到78℃。之后看到溫度下降，但就在此時進(jìn)行“翻轉(zhuǎn)”，看到發(fā)酵溫度再次上升。(菌體制劑的制作)雖然在上述實施例中是將菌直接作成粉體用的，但為了有效地將高濃度的菌有效地混入規(guī)模擴大的范圍內(nèi)就需要菌體制劑。下面說明菌體制劑的制作要領(lǐng)的一個例子。(1)于營養(yǎng)肉湯(肉提取物培養(yǎng)基)接種1％冷凍保存的OYK菌，37℃振蕩培養(yǎng)24小時。(2)浸水1日的圓大豆于121℃、2氣壓下，進(jìn)行高溫高壓滅菌蒸煮20分鐘。(3)將工序(2)滅菌蒸煮的圓大豆鋪在平底盤中。(4)在超凈臺內(nèi)將OYK菌液進(jìn)行噴霧接種。(5)接了種的圓大豆于37℃的恒溫室內(nèi)靜置培養(yǎng)2天，測定菌數(shù)。確認(rèn)菌數(shù)在1×108個/g以上。(6)將經(jīng)過工序(5)處理的接了種的培養(yǎng)基在60℃下充分干燥，用粉碎機粉碎成顆粒狀。在該狀態(tài)下OYK菌孢子化后繼續(xù)生存著。
這樣生成的顆粒物是本發(fā)明一例菌體制劑。而在上述(6)工序中，干燥物粉碎成顆粒狀，但其大小可以根據(jù)營養(yǎng)源的種類的不同而變化，可以在從微粒子開始的顆粒范圍內(nèi)適當(dāng)改變粒子的大小。其理由是由于同一重量下，粒子越細(xì)，菌的增殖點就越多。(菌體制劑在堆肥化方面的利用)由于確認(rèn)本發(fā)明的菌體制劑具有實用性，所以在靜岡縣下的堆肥化中心內(nèi)的發(fā)酵場進(jìn)行了使用菌體制劑的堆肥化試驗。該試驗是在堆肥化困難的冬季進(jìn)行的。
準(zhǔn)備的樣品如下。(4-1)牛糞 54t(水分沒有調(diào)整，含水率80％)CFP9t(咖啡渣、含水率8％)脫脂大豆糟 3t(大豆蛋白源)OYK菌粉末 50kg(大豆蛋白菌體制劑)(4-2)牛糞 54t(水分調(diào)整過)CFP9t(4-3)牛糞 54t(水分沒有調(diào)整，含水率80％)將發(fā)酵溫度以及外部氣溫的變化畫成曲線，如圖6所示。各個曲線的標(biāo)號就是樣品號。如樣品(4-2)所表示的那樣，只有CFP存在時，發(fā)酵溫度不充分，而樣品(4-3)中幾乎看不到發(fā)酵溫度的上升。由這些結(jié)果可以證明在實用條件下菌體制劑對發(fā)酵溫度的上升有很大的效果。樣品(4-1)在試驗開始后立刻看到溫度上升，以后繼續(xù)上升。其以后的狀態(tài)大致與圖5一樣，給出了可能實用的結(jié)果。
這樣制備的堆肥完全沒有糞臭，只有一點土味。而添加CFP對調(diào)節(jié)水分和保持好氧環(huán)境有效果，作為兼性的厭氧菌OYK菌好氧下比厭氧增殖效果更大，所以使OYK菌的活動更活躍。在溫度低的環(huán)境下的堆肥化，即使由于微生物的活動引起溫度上升，也會立刻被周邊的低溫區(qū)奪走熱，結(jié)果往往看不到溫度上升到40℃以上。然而混入OYK菌的牛糞由于OYK菌與標(biāo)準(zhǔn)菌相比在剛投放后會發(fā)生約1萬倍的異常增殖，因此溫度上升，高于周邊低溫區(qū)，反過來向周邊擴散熱，促進(jìn)已經(jīng)生存在周邊的微生物的增殖，使整體溫度上升接近80℃。這是高溫發(fā)酵菌增殖引起的。因此可以制造殺死了有害菌、雜草的種子的安全的完全成熟的堆肥。
在上述實施例中雖然說明的是作為本發(fā)明的菌體制劑用在牛糞上，但不用說對其它動物的排泄物(例如雞糞、馬糞)和生垃圾使用也有效。(菌體制劑在脫臭材料方面的利用)將粉末瓊脂1.5g、葡萄糖1g、谷氨酸鈉1g、大豆蛋白菌體制劑1g、咖啡渣10g溶解于100cc水中，充分?jǐn)嚢韬?，注入容器?nèi)。于20℃放置1日得到固態(tài)物。
將該固態(tài)物投放到廚房的排水口和生垃圾的收容箱內(nèi)，可以預(yù)防從排水口和生垃圾的收容箱內(nèi)的惡臭的擴散。這是由于放入的固態(tài)物雖然只有少量溶解，但OYK菌生成后會增殖，該OYK菌的增殖會抑制腐敗菌的增殖，阻止惡臭擴散的緣故。(菌體制劑的片劑)將含有大豆蛋白質(zhì)的菌體制劑、明膠的水溶物、以及咖啡渣(CFP)混練，使水分蒸發(fā)到混合物不分散的程度。然后用壓片機將混練物壓片，就得到片劑。明膠除了作為菌的蛋白源外，還起著粘合劑的作用，有維持形狀的效果。而CFP可使通氣良好。
在得到的片劑中，菌是以孢子化的狀態(tài)生存的。給該片劑水分，菌就會開始增殖，如果投放到例如有機污染的池中，該片劑會邊漂游，邊擴散到池表面，情況會更好。至于菌實際表現(xiàn)出其效果的條件，投放時高濃度是必要的，然后漸漸地分散擴大范圍，這樣一來菌的作用顯著，不久其效果會波及到整個池子。(盤狀脫臭劑的制作)以下就具有多個通孔的圓盤狀固態(tài)物的制作進(jìn)行說明。
將粉末瓊脂1g、葡萄糖1g、谷氨酸鈉1g、大豆蛋白菌體制劑1g以及咖啡渣100g混合溶解于100cc水中。對該混合液充分?jǐn)嚢瑁?20℃進(jìn)行高壓滅菌處理20分鐘。
由于上述混合液在70℃以上時具有流動性，所以可以將混合液(15)灌注到具有多個如圖8所示那樣的從底部向上延伸的凸部(13)的塑料制容器(14)中，然后漸漸冷卻到室溫。
將1×109個/ml的OYK菌濃縮液(16)0.1ml撒布到混合液(15)上，于室溫放置14小時。這樣一來使混合液(15)固化。由于混合液(15)一邊收縮一邊固化，所以固化后容易與容器(14)脫開，可以得到象圖7那樣的帶有很多孔(12)的圓盤狀的固態(tài)物(11)。(盤狀脫臭劑的利用)在上述實施例中是將固態(tài)物(11)作為脫臭劑用的。作為設(shè)置場所可以是廚房的污水槽的排水口以及放置在污水槽內(nèi)的裝生垃圾的網(wǎng)狀容器等。
在投放固態(tài)物(11)的場所，可以使惡臭的產(chǎn)生抑制到最小限度內(nèi)。這是OYK菌抑制促進(jìn)有機物腐敗的雜菌的增殖的結(jié)果。即固態(tài)物(11)通過與很多咖啡渣互相粘附形成許多孔，即成為好氧的環(huán)境，而固態(tài)物(11)對OYK菌來說也是營養(yǎng)物，所以該OYK菌增殖活躍。而且孔(12)在使固態(tài)物(11)的表面積增大的同時，也成了水流的出口。
另外也可以將上述實施例中用的粉末瓊脂的一部分改成糊劑。作為糊劑可以使用淀粉等天然高分子或丙烯酸系的合成高分子物質(zhì)。例如代替1g粉末瓊脂，可以使用0.2g的粉末瓊脂和0.8g的淀粉。另外可以用鋸末取代一部分咖啡渣。鋸末除了起到吸附添加到水中的營養(yǎng)物外，還有以其多孔物質(zhì)可以作為微生物增殖基地的作用。
作為使用多孔無機物質(zhì)的例子，有使?fàn)I養(yǎng)成分吸附到珍珠巖，然后再將菌接種到上面的例子，有使用將具有吸附臭氣功能的多孔無機物質(zhì)例如顆粒狀活性炭、沸石等無機顆粒適當(dāng)組合之后使吸收性能提高的合成吸附劑的例子。沸石對三甲基胺和甲烷醇的吸收效率高，隨著菌的增殖，在脫臭作用上有效。而對沸石進(jìn)行配合的處方如下水100cc、粉末瓊脂1g、葡萄糖1g、谷氨酸鈉1g、大豆蛋白質(zhì)1g、咖啡渣50g、沸石細(xì)顆粒5g。
(防止浴槽水中雜菌的繁殖)依據(jù)
使OYK菌增殖防止浴槽水中雜菌繁殖的方法。
首先將瓊脂粉末1.5g和為菌增殖用的營養(yǎng)成分谷氨酸鈉、葡萄糖和大豆蛋白質(zhì)溶解于100cc水中，經(jīng)120℃高壓滅菌處理20分鐘后，慢慢冷卻。在該混合液的粘度變大時，如圖9所示那樣將上述混合液涂布于四角形(15cm×10cm)的聚酯無紡織布(1a)上厚度為2mm，固化后，形成瓊脂培養(yǎng)基(2)。然后在該培養(yǎng)基(2)上撒布0.1ml OYK菌的濃縮液(約1×109個/ml)。
接下來如圖10所示那樣，在用聚酯無紡織布(1b)蓋到整個瓊脂培養(yǎng)基(2)的同時，在周邊部分用粘合劑將兩個無紡織布相互粘在一起，得到OYK菌載體(10)。
象圖11所示那樣，通過將浮子(3)貼到聚酯無紡織布(1a)的外面，可以使OYK菌載體(10)浮在熱水面上。該浮子(3)例如是由內(nèi)徑2mm的樹脂管的兩端封閉構(gòu)成的，沿著OYK菌載體(10)的四邊貼合。
另外如圖12所示那樣，在OYK菌載體(10)的端部裝一個輪狀的帶(4)，象圖13所示那樣，掛在設(shè)計在浴槽(5)上的栓(6)上也可以。這樣一來可以將OYK菌載體(10)設(shè)置在槽壁(8)上。也可以將OYK菌載體(10)用膠帶貼在浴槽蓋(圖中未示出)的里側(cè)。而在ジヤクジ-澡堂，在為使氣泡產(chǎn)生的空氣入口的過濾器處設(shè)置OYK菌載體(10)，試圖抑制由外來氣體侵入的雜菌的增殖，同時也有可能使供氣管的內(nèi)壁維持清潔。
另外將OYK菌用在24小時浴池(每次洗澡浴槽的水都不換，作成循環(huán)式，除垃圾，而且常時間保溫，無論何時都能洗澡的帶來舒服感的浴池)也可以防止浴槽水中的雜菌的繁殖。就是說，OYK菌繁殖后在澡水中漫出，通過24小時浴池的溫水循環(huán)途徑或循環(huán)裝置的內(nèi)部。增殖的OYK菌長時間流動，在抑制雜菌(例如軍團(tuán)菌)的增殖的同時，使雜菌增殖產(chǎn)生的惡臭減少。
另外使用上述實施例中得到的菌體制劑，也可以防止浴槽水中的軍團(tuán)菌等雜菌的繁殖。(生理用衛(wèi)生巾上的利用)在市售的女性用生理衛(wèi)生巾的吸收經(jīng)血的部位適量地封入一些OYK菌孢子化的粉末(1×109個/g)。封入的方式例如有將該粉末充填到加壓空氣式的撒布器內(nèi)，由該撒布器的噴射口撒布的方法。
封入的粉體一接觸經(jīng)血就發(fā)芽，消化經(jīng)血中含有的蛋白質(zhì)進(jìn)行增殖。OYK菌在弱酸性到弱堿性范圍和30℃附近的溫度范圍內(nèi)最活躍，而且由于初期的菌濃度非常高，所以可抑制其它雜菌的繁殖，在防止異臭擴散的同時，也可以使局部保持清潔。
另外也可以將上述的OYK菌的粉末和粉末狀營養(yǎng)源、例如大豆蛋白質(zhì)混合后用。此時可以將該混合物直接撒布到吸水材料上用，或封入到由水溶性的膜作成的扁平的袋內(nèi)，夾在吸水層中也是可以的。作為水溶性膜的材料例如可以使用淀粉(淀粉紙)、酪蛋白、明膠、PVA、CMC等。
另外也可以固定在鋪有數(shù)層OYK菌粉末的由很多層無紡織布構(gòu)成的吸水材料的內(nèi)部。即生理用衛(wèi)生巾的吸收經(jīng)血部分往往都是由數(shù)層無紡織布構(gòu)成的，只要其中的一層或2層以上的無紡織布上粘有OYK菌就可以。例如將添加了10％PVA(粘合劑)的分散溶液的菌濃度為1×107個/ml的OYK菌液用過濾網(wǎng)印染機印染在無紡織布上，然后在60℃左右干燥使OYK菌都孢子化。這樣一來多數(shù)OYK菌的孢子都以繞在無紡織布的纖維上的狀態(tài)被固定，將該無紡織布裁剪可以作成構(gòu)成吸收材料的一層無紡織布。(在尿布上的利用)在將OYK菌用在尿布上時，也可以使用印染有OYK菌中添加了粘合劑的分散溶液的無紡織布。
而OYK菌也不一定要以孢子化狀態(tài)附著，例如也可以將OYK菌投放到肉提取物和胨的混合粉末(營養(yǎng)肉湯)的7％溶液振蕩培養(yǎng)，在該溶液中浸漬無紡織布，使其含有OYK菌，然后除去水分后使用。此時OYK菌由于干燥被孢子化，繞在纖維上。(混入OYK菌的膜)將孢子化的OYK菌混合到淀粉、酪蛋白、明膠、PVA或CMC的水溶液中，使其分散。將該分散液以所定的厚度涂布成平的面，之后在50～70℃下干燥。接下來將干燥物從平的面上剝下來，得到保持著OYK菌的膜。
將這樣得到的膜鋪在例如上述的生理用衛(wèi)生巾中吸收經(jīng)血部分，或是用在尿布上。(作為熱能源的代謝能的利用)(參照圖14)在有機性廢棄物(例如家畜糞尿)的堆肥發(fā)酵過程中，伴隨著發(fā)酵溫度會升高。將廢棄物裝到帶有可拆卸的蓋的絕熱容器(31)內(nèi)，調(diào)節(jié)水分、營養(yǎng)成分(C/N比)、通氣量、溫度等，進(jìn)行最有效率的發(fā)酵，可以利用產(chǎn)生的多余的發(fā)酵熱。通常在家畜糞尿的發(fā)酵中，溫度只升到30～50℃，但通過添加OYK菌以及OYK菌和高溫菌的菌體制劑，在堆肥化初期階段迅速升溫，高溫菌(嗜熱菌)被活化，可獲得70～100℃的溫度。這里所說的剩余發(fā)酵熱利用期間是在堆肥化發(fā)酵過程中，即使進(jìn)行熱交換，也可以確認(rèn)溫度上升的期間。
溫度傳感器(38)測定容器內(nèi)的堆肥溫度，通過其溫度狀況可自動地控制閥門(39)。為了不妨礙發(fā)熱時水分蒸發(fā)，從空氣閥門(36)放出適量的水蒸氣，對于營養(yǎng)成分或水分不足，可以從投放口(35)向容器內(nèi)投放。通氣口設(shè)置在絕熱容器(31)的床面，使得相對于堆肥體積空氣通過時不產(chǎn)生極端的不均勻。而容器內(nèi)的發(fā)酵熱通過熱交換機(32)可以使用作為介質(zhì)的水、空氣、高分子液體等取出熱。為了使容器內(nèi)發(fā)酵均一化，使與攪拌馬達(dá)(33)連動的攪拌螺旋槳(34)轉(zhuǎn)動。攪拌也要根據(jù)發(fā)酵狀況，可以一天攪拌一次左右。
而在堆肥制造的一次發(fā)酵槽、二次發(fā)酵槽的床面、壁面和覆蓋堆肥的墊子上給熱交換機配上管子，也可以利用堆肥化過程中的發(fā)酵熱。在有機廢棄物的堆肥化發(fā)酵過程中，即使通過積極地通氣管理以及攪拌(翻轉(zhuǎn))，溫度也不上升時，可以認(rèn)為是一次發(fā)酵結(jié)束了。在該裝置中，如果處于堆肥溫度不上升的狀態(tài)，就可將從絕熱容器(31)倒出的發(fā)酵物作為堆肥用。
一般來說在堆肥化發(fā)酵過程中，溫度變化過程越長，營養(yǎng)成分(C/N比)的值越低。在該裝置中利用熱交換機不僅通過調(diào)節(jié)發(fā)酵溫度控制堆肥發(fā)酵本身制造完全成熟的堆肥，而且制造含有未分解的營養(yǎng)成分的堆肥也成為可能。
因此通過設(shè)置多個該裝置，可以將有機廢棄物的堆肥化發(fā)酵過程中的剩余發(fā)酵熱作為發(fā)酵初期階段需要的熱源利用，或是可以用作畜舍的床面的暖房、冬季融雪等的熱源，這關(guān)系到農(nóng)業(yè)環(huán)境的進(jìn)一步改善。
而如果用作洗奶牛等畜舍中的床和壁的溫水，對預(yù)防該奶牛的乳房炎非常有效。
另外也可以用在從廢棄物提取可燃性氣體的厭氧發(fā)酵手段上。即除了用來自上述裝置的溫水使厭氧發(fā)酵槽內(nèi)的廢棄物加溫，也可以將本發(fā)明的菌體制劑用在厭氧發(fā)酵的前階段，首先用菌體制劑使廢棄物升溫至40℃后，切換成厭氧環(huán)境，可使厭氧發(fā)酵高效進(jìn)行。(膠囊化的OYK菌的利用)下面敘述在將OYK菌或含有該菌的OYK菌體制劑封入膠囊或多層片劑，經(jīng)口服給予的人或家畜、或以栓劑給藥的人或家畜抑制糞臭中利用的方法。
OYK菌從其性質(zhì)看，雖然在pH6.1的環(huán)境下可進(jìn)行增殖，但在pH4.5時就不增殖。動物的胃中為pH2～3的強酸，在給予上述膠囊等，胃酸會使細(xì)菌死掉。為了使OYK菌以活的狀態(tài)到達(dá)腸，通過OYK菌的增殖抑制糞臭，必需使該OYK菌通過胃不妨礙小腸的作用到達(dá)直腸，以直腸內(nèi)的糞作為有機性營養(yǎng)成分?jǐn)z入使其增殖。作為這一方法有以下手段。即通過腸溶性的保護(hù)膜或膠囊將OYK菌或OYK菌體制劑包入或包衣，作成片劑、膠囊、栓劑等制劑都可以。
以下具體敘述。
將明膠14份(重量，下同)、甘油3份、低甲氧基果膠3份以及精制水80份混合均一，得到液體狀的包衣組成物。將該包衣物從環(huán)狀孔押出的同時，從在環(huán)狀孔的內(nèi)側(cè)設(shè)計的同心圓狀的內(nèi)孔口擠出OYK菌或OYK菌體制劑的混練品，將該復(fù)合注塑品放出到冷卻液中。由此可以得到5～10mmφ粒度的膠囊。將該膠囊在氯化鈉水溶液中浸漬數(shù)分鐘，干燥洗凈后，就得到了腸溶性的軟膠囊。
權(quán)利要求
1.一種新微生物，其特征是該新微生物是非溶血性枯草桿菌類緣菌，菌體體積是標(biāo)準(zhǔn)枯草桿菌(IFO3134株)的4倍以上，而且在37℃通過營養(yǎng)肉湯浸透培育時，由于培育初期幾乎沒有誘導(dǎo)期，103個/ml的初期菌在4小時后增加到107個/ml以上，由于協(xié)同效果，通過增殖產(chǎn)生的代謝能與上述標(biāo)準(zhǔn)枯草桿菌相比可達(dá)1萬倍以上。
2.一種新微生物，其特征是該新微生物屬于桿菌屬的枯草桿菌種的沒有溶血性的類緣菌，至少對黃色葡萄球菌、肺炎桿菌、二氧甲基苯青霉素抗性的黃色葡萄球菌、病原性大腸桿菌0-157、軍團(tuán)菌、綠濃菌、鐮刀霉菌、酵母菌、青霉菌、白癬菌以及蜘蛛狀霉菌具有抗菌性。
3.權(quán)利要求1或2記載的新微生物，其特征是至少是從Bacillussp.OYK-01-600(FERM BP-6394)、Bacillus sp.OYK-03-600(FERMBP-6395)、和Bacillus sp.OYK-04-000(FERM BP-6396)中選出的一種。
4.權(quán)利要求1～3中任一項記載的新微生物，其特征是用于制造堆肥。
5.通過權(quán)利要求4記載的新微生物制造的堆肥。
6.一種菌體制劑，其特征是通過將權(quán)利要求1～3中任一項記載的新微生物包圍、附著或混入到營養(yǎng)源中制成的。
7.權(quán)利要求6記載的菌體制劑，其特征是上述營養(yǎng)源以蛋白質(zhì)為主要成分。
8.權(quán)利要求7記載的菌體制劑，其特征是上述營養(yǎng)源中至少有一部分是由多孔性物質(zhì)組成。
9.權(quán)利要求8記載的菌體制劑，其特征是多孔性物質(zhì)是從咖啡渣、食用油的提取渣、豆腐渣、啤酒渣、椰子渣、果實渣滓等植物的種子榨的渣滓等食品的提取渣、鋸屑、稻皮等植物碎片當(dāng)中選出的至少一種。
10.權(quán)利要求6～9中任一項記載的菌體制劑，其特征是混有50℃以上高溫區(qū)能增殖的放線菌或絲狀菌等高溫菌。
11.權(quán)利要求6～10中任一項記載的菌體制劑，其特征是用于制造堆肥。
12.使用權(quán)利要求11記載的菌體制劑制造的堆肥。
13.一種加溫方法，使用權(quán)利要求6～10中任一項記載的菌體制劑，使其中含有的新微生物增殖時產(chǎn)生的代謝能作為熱源。
14.一種加熱裝置，使用權(quán)利要求6～10中任一項記載的菌體制劑，使其中含有的新微生物增殖時產(chǎn)生的代謝能作為熱能源。
15.一種制劑，通過腸溶性的保護(hù)膜或腸溶性膠囊包裹權(quán)利要求1～3中任一項記載的新微生物制成。
16.加溫裝置，包含有權(quán)利要求6～10中任一項記載的菌體制劑。
17.抗菌品，包含有權(quán)利要求6～10中任一項記載的菌體制劑。
全文摘要
通常桿菌放置到新的環(huán)境(培養(yǎng)基)時,在開始增殖前都存在數(shù)小時的所謂的增殖準(zhǔn)備期,但本發(fā)明的目的在于提供完全沒有準(zhǔn)備期的,立即開始增殖的非溶血性的Bacillus sp.OYK－01－600(FERM BP－6394)、Bacillus sp.OYK－03－600(FERM BP－6395)、和Bacillus sp.OYK－04－000(FERM BP－6396)等新微生物。其特征就象前面所敘述的那樣,在OYK菌對數(shù)增殖期間存在著數(shù)小時其它菌幾乎不增殖的時期,如果只看這數(shù)小時的話,OYK增殖的菌數(shù)是其它菌的數(shù)萬倍。OYK菌本身對有害菌(包括二氧甲基苯青霉素抗性的黃色葡萄球菌在內(nèi)的黃色葡萄球菌、包括0—157在內(nèi)的病原性大腸桿菌、軍團(tuán)菌、肺炎桿菌等)有抗菌性。象上述那樣增殖速度上的差異可抑制惡臭的發(fā)生和很多有害感染菌。若用在堆肥制造上,通過最重要的初期產(chǎn)生的熱量引起的發(fā)酵槽的溫度急劇上升,使得完全成熟堆肥的制造變得容易。
文檔編號C05F11/08GK1268173SQ98808468
公開日2000年9月27日 申請日期1998年9月3日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月3日
發(fā)明者小野光太郎, 山中則昭, 渡邊勝世 申請人:鷲興產(chǎn)株式會社