專(zhuān)利名稱(chēng)：親和取代的海鞘素和n－氧化海鞘素的制作方法
背景技術(shù)：
海鞘素(ecteinascidins)(Ets)是非常有效的抗腫瘤劑，最初從海洋被囊動(dòng)物Ecteinascidia turbinata中分離出來(lái)，尤其是Et 743、Et729、Et746和Et722表現(xiàn)出對(duì)腫瘤細(xì)胞系的顯著的體內(nèi)效力，所述腫瘤細(xì)胞系包括P388鼠白血病、B16黑素瘤、Lewis肺癌和小鼠中的人腫瘤異種移植模型。
Rinehart等繼續(xù)的研究在許多方面涉及提供充足量的這些化合物，以用于臨床實(shí)驗(yàn)、其抗腫瘤作用機(jī)制的研究和確定結(jié)構(gòu)活性關(guān)系。另外，其它Et化合物無(wú)論是較少的天然組分還是前體化合物，它們的發(fā)現(xiàn)將不僅提供其生物合成途徑的證據(jù)，而且在確定結(jié)構(gòu)活性關(guān)系方面，也應(yīng)該是有用的。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及幾種新發(fā)現(xiàn)的海鞘素(Et)化合物，所有這些化合物均分離自Ecteinascidia turbinata的提取物。對(duì)于先前發(fā)現(xiàn)的海鞘素化合物的詳細(xì)討論以及用于其分離和純化的方法，參見(jiàn)Sakai等，J.Amer.Chem.Soc.，1996，118，9017，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
本文報(bào)道的新的海鞘素化合物的結(jié)構(gòu)如下
1ET802，R1＝Ac，R2＝Me2ET760，R1＝H，R2＝Me3ET788，R1＝Ac，R2＝H
4ET858，R1＝Ac，R2＝Me
5ET815，R1＝Ac，R2＝Me
6ET717，R1＝H，R2＝Me
7ET776，R1＝Ac，R2＝H8ET789，R1＝Ac，R2＝Me(碎片ET 757)
9ET832，R1＝Ac，R2＝Me(碎片ET 813)附圖簡(jiǎn)述


圖1圖示用來(lái)從Ecteinascidia turbinata的提取物中分離Et 717、Et 815、Et 813、Et 729和Et 731的層析方法。
圖2圖示用來(lái)從Ecteinascidia turbinata的提取物中分離Et 729、Et 743、Et 788、Et 757、Et 789、Et 775、Et 745、Et 760、Et802、Et 858和Et 745的層析方法。
圖3圖示用來(lái)從Ecteinascidia turbinata的提取物中分離Et 771、Et 759A、Et 743和Et 729的層析方法。
圖4描述了Et 802的MS/MS裂解過(guò)程。
圖5描述了Et 760的MS/MS裂解過(guò)程。
圖6描述了Et 788的MS/MS裂解過(guò)程。
圖7A描述了Et 858的MS/MS裂解過(guò)程，圖7B描述了其碎片離子(m/z 800)的MS/MS裂解過(guò)程。
圖8描述了Et 717的MS/MS裂解過(guò)程。
圖9A描述了Et 789(8，R＝CH3)和Et 775(7，R＝H)的MS/MS裂解過(guò)程。圖9B描述了用草酸處理的Et 789反應(yīng)產(chǎn)物的MS/MS裂解過(guò)程。
發(fā)明詳述通過(guò)CCC、NP和RP柱層析和RP-C18 HPLC(如
圖1-3所述)從Ecteinascidia turbinata的提取物中，分離并純化了5種新的、親和取代的海鞘素化合物(本文命名為Et 802(1)、Et 788(2)、Et 760(3)、Et858(4)、Et 815(5))和3種新的N＝氧化海鞘素(本文命名為Et 717(6)、Et 775(7)和Et 789(8))。
根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)(HRFABMS，MS/MS裂解過(guò)程)和1D和2D-NMR波譜數(shù)據(jù)的詳細(xì)分析，確定了所述新Et化合物的結(jié)構(gòu)。圖4-9分別描述了Et 802、Et 760、Et 788、Et 858、Et 717和Et 789的MS/MS裂解過(guò)程。
某些所述新海鞘素化合物的波譜數(shù)據(jù)包括Et 802(1)HRFABMSm/z 803.2962，M+H離子，C41H47N4O11S，Δ＝3.1mDa；1H NMR，δ4.15(d，1，H＝1)，3.45(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.19(dd，1，2，H11)，3.09(d，12，H13)，2.98(d，15，H14a)，2.81(dd，12，15，H14b)，6.46(s，H15)，5.08(dd，2，8，H21)，5.24(d，11，H22a)，4.01(dd，1，11，H22b)，3.18(ddd，H3’a)，2.78(ddd，H3’b)，2.58(ddd，H4’a)，2.30(ddd，H4’b)，6.46(s，H5’)，6.36(s，H8’)，2.24(d，12，H12’a)，1.93(d，12，H12’b)，6.09(s，＝OCH2O＝)，6.03(s，-OCH2O＝)，3.52(s，7’OMe)，3.66(s，17OMe)，2.25(s，AcMe)，2.07(s，NMe)，2.24(s，16Me)，1.96(s，6Me)，2.03(s，NHCOMe)。
Et 788(2)HRFABMSm/z 789.2806，M+H離子，C40H45N4O11S，Δ＝1.0mDa；1H NMR，δ4.21(d，1，H-1)，3.45(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.24(dd，1，2，H11)，3.09(d，12，H13)，6.48(S，H15)，5.11(dd，2，8，H21)，5.30(d，11，H22a)，4.01(dd，1，11，H22b)，6.48(s，H5’)，6.39(s，H8’)，6.13(s，-OCH2O-)，6.07(s，-OCH2O-)，3.56(s，7’OMe)，3.67(s，17OMe)，2.25(s，AcMe)，2.24(s，16Me)，1.96(s，6Me)，2.03(s，NHCOMe)。
Et 760(3)HRFABMSm/z 761.2856，M+H離子，C39H45N4O10S，Δ＝0.2mDa；1H NMR，δ4.15(d，1，H-1)，3.56(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.32(dd，1，2，H11)，3.09(d，12，H13)，3.00(d，15，H14a)，2.86(dd，12，15，H14b)，6.52(S，H15)，5.11(dd，2，8，H21)，5.20(d，11，H22a)，4.01(dd，1，11，H22b)，3.18(ddd，H3’a)，2.78(ddd，H3’b)，2.58(ddd，H4’a)，2.30(ddd，H4’b)，6.38(s，H5’)，6.34(s，H8’)，2.24(d，12，H12’a)，2.03(d，12，H12’b)，5.98(s，-OCH2O-)，5.85(s，-OCH2O-)，3.54(s，7’OMe)，3.74(s，17OMe)，2.13(s，NMe)，2.29(s，16Me)，2.06(s，6Me)，2.12(s，NHCOMe)。
Et 858(4)HRFABMSm/z 859.3192，M+H離子，C44H51N4O12S，Δ＝3.2mDa；碎片離子m/z 800m/z 800.2825，M+H離子，C42H46N3O11S，Δ＝2.8mDa；Et 858，1H NMR，δ4.13(br.s，H-1)，3.41(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.36(d，3，H11)，2.79(d，13，H13)，3.01(d，12，H14a)，2.88(dd，12，13，H14b)，6.50(S，H15)，5.10(d，2，H21)，5.28(d，11，H22a)，4.09(dd，1.5，11，H22b)，3.18(ddd，H3’a)，2.62(ddd，H3’b)，2.53(ddd，H4’a)，2.45(ddd，H4’b)，6.43(s，H5’)，6.38(s，H8’)，2.25(d，12，H12’a)，2.14(d，12，H12’b)，6.08(s，-OCH2O-)，5.98(s，-OCH2O-)，3.57(s，7’OMe)，3.73(s，17OMe)，2.28(s，AcMe)，2.27(s，16Me)，2.01(s，6Me)，2.15(s，NHCOMe)，2.09(s，NHCOMe)，3.25(NHCOMe)，2.64(m，NHCOMe)。
Et 717(6)HRFABMSm/z 718.2435，M+H離子，C37H40N3O10S，Δ＝-0.1mDa；1H NMR，δ6.55(H15)，6.44(H8’)，6.38(H5’)，6.07，5.92(-OCH2O-)，5.78，4.09(H22a，b)，5.30(H1)，5.19(H21)，4.92(H4)，4.57(H11)，4.41(H3)，3.64(H13)，3.22，2.91(H14a，b)，3.00，2.85(H3’a，b)，2.61，2.38(H4’a，b)，3.74(17-OCH3)，3.54(7’-OCH3)，2.35(6-CH3)，2.27(16-CH3)，2.16(N-CH3)。
Et 775(7)HRFABMSm/z 776，C39H42N3O12S，Δ＝-0.0mDa。
Et 789(8)HRFABMSm/z 790，C40H44N3O12S，Δ＝-0.2mDa；在1H NMR中觀察到12N-CH3，δ2.65(單峰)。
這些新的海鞘素化合物中的幾種對(duì)L1210表現(xiàn)出非常有效的細(xì)胞毒性(參見(jiàn)表1)。
表1Et化合物對(duì)L1210的IC50ng/mlEt 802(1)7Et 788(2)0.5Et 760(3)32Et 858(4)0.4Et 815(5)0.4如上所示，本發(fā)明涉及生物活性化合物。這些化合物已經(jīng)以基本純的形式制備，即其純度足以允許進(jìn)行其物理學(xué)和生物學(xué)鑒定。如上所述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些化合物具有特定的抗腫瘤活性，因此它們可用作哺乳動(dòng)物、特別是人類(lèi)的藥物。因此，本發(fā)明的另一方面涉及含有本文鑒定的活性化合物的藥用組合物和使用這類(lèi)藥用組合物的治療方法。
本發(fā)明的活性化合物表現(xiàn)出抗腫瘤活性。因此，本發(fā)明也提供對(duì)哺乳動(dòng)物的治療方法，所述哺乳動(dòng)物為受對(duì)這些化合物敏感的惡性腫瘤影響的任何哺乳動(dòng)物，該方法包括給予所述受影響個(gè)體治療有效量的活性化合物或化合物的混合物、或其藥用組合物。本發(fā)明也涉及藥用制劑，所述藥用制劑包含作為活性組分的一種或多種本發(fā)明的化合物，本發(fā)明也涉及制備所述藥用制劑的方法。
藥用組合物的實(shí)例包括具有合適組成的任何固體(片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等)或液體(溶液、懸浮液或乳液)即用于經(jīng)口、局部或胃腸外給藥的組合物，它們可以含有純化合物，或與任何載體或其它藥理學(xué)活性化合物結(jié)合使用。當(dāng)胃腸外給予時(shí)，這些組合物可能需要是無(wú)菌的。
包含本發(fā)明化合物的藥用組合物的正確的劑量，將根據(jù)具體制劑、應(yīng)用方式以及特別是部位、宿主和待治療的細(xì)菌或腫瘤而變化。還應(yīng)該考慮其它因素，如年齡，體重、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速率、該宿主的身體狀況、藥物組合、反應(yīng)敏感性和該疾病的嚴(yán)重性?？梢栽谧畲竽褪艿膭┝糠秶鷥?nèi)，進(jìn)行連續(xù)或定期給藥。
也分離了幾種已知的海鞘素化合物，包括Et 743和Et 729，如以下表2所示。
表2分離的Et化合物的量部分A(550mg) 部分B(261mg) 部分C(40mg)Et 729 39.4mgEt 729 31.6mgEt 74310.2mgEt 731 11.1mgEt 743 0.9mg Et 7715.8mgEt 745 45.4mgEt 745 6.0mg Et 759A 3.5mgEt 759B46.4mgEt 802(1) 1.4mg*Et 597 3.4mg Et 788(2) 0.2mg*Et 717(6) 2.6mg*Et 760(3) 1.0mg*Et 815(5) 5.1mg*Et 858(4) 0.5mg*Et 814(9) 5.9mg*Et789(8) 1.5mg*Et 775(7) 0.5mg**-新的海鞘素化合物已經(jīng)詳細(xì)描述了本發(fā)明，包括其優(yōu)選的實(shí)施方案。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，考慮本說(shuō)明書(shū)時(shí)，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改和/或改進(jìn)，這仍在以下權(quán)利要求書(shū)中提出的本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)。
權(quán)利要求
1.基本純的海鞘素717，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
2.基本純的海鞘素815，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
3.基本純的海鞘素814，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
4.基本純的海鞘素802，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
5.基本純的海鞘素788，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
6.基本純的海鞘素760，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
7.基本純的海鞘素858，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
8.基本純的海鞘素789，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
9.基本純的海鞘素775，不含Ecteinascidia turbinata的細(xì)胞碎片。
10.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 717的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
11.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 815的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
12.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 814的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
13.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 802的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
14.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 788的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
15.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 760的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
16.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 858的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
17.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 789的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
18.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 775的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
19.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 717的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
20.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 815的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
21.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 814的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
22.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 802的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
23.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 788的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
24.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 760的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
25.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 858的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
26.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 789的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
27.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為Et 775的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
全文摘要
已經(jīng)從Ecteinascidia turbinata的提取物中分離出5種新的親核取代的海鞘素(Et)化合物。通過(guò)層析技術(shù),已經(jīng)純化了這些化合物,并已經(jīng)測(cè)定其結(jié)構(gòu)和生物活性。這5種親核取代的Et化合物在本文中已經(jīng)命名為Et802(1)、Et788(2)、Et760(3)、Et858(4)和Et(815)(5)。也獲得了3種新的N－氧化海鞘素化合物,它們?cè)诒疚闹幸呀?jīng)命名為Et717(6)、Et775(7)和Et789(8)。這些新發(fā)現(xiàn)的Et化合物中的某些表現(xiàn)出對(duì)L1210的非常有效的細(xì)胞毒性。
文檔編號(hào)A01K35/00GK1261254SQ98806076
公開(kāi)日2000年7月26日 申請(qǐng)日期1998年4月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月15日
發(fā)明者K·L·萊恩哈特, 周桐 申請(qǐng)人:伊利諾伊大學(xué)評(píng)議會(huì)