專利名稱：體外細胞低溫保存的保護劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種體外低溫條件下保存血細胞的保護劑。
造血干細胞移植是治療白血病及惡性腫瘤的一項根本性措施，可使不少不治之癥患者啟死回生。造血干細胞的保存是造血干細胞移植，特別是外周血干細胞移植的一個重要技術(shù)環(huán)節(jié)。為了使收集到的干細胞達到能在體內(nèi)植入的閾劑量，需用血細胞分離器多次重復(fù)分離，首尾3-5天，在此期間，所分離的細胞保存在4-6℃冰箱中，但隨著保存時間的延長，造血干細胞的的死亡迅速增加。有人用二甲基亞砜和血型相同的血清作冷凍保存液4℃保存入骨髓(張效民等兩種骨髓保存方法在自體骨髓移植中的應(yīng)用。臨床血液學雜志1992；589)。本發(fā)明使用超氧化物歧化酶(SOD)作為4℃保存的低溫保護劑以長時間體外保存人造血干細胞，在這方面，國外曾有人報道在器官移植中將羊的離體心肺放在4℃條件下保存，在保存前和保存過程中灌注SOD，對改善器官功能和活存情況有良好效果(LeGY et al.Heart-Lung Protection from ischemic injury during 8 hour hypothermicpresservation.Acta Biomed Ateneo Parmense 1994；65181)。
本發(fā)明的目的在于提供一種體外造血干細胞低溫保存的保護劑。
本發(fā)明是在保養(yǎng)液中加入超氧化物歧化酶，以減低造血細胞的死亡。
本發(fā)明的具體實施方法如下1、造血干細胞懸液的制備以外周血干細胞制備為例，給供血者或病人自身輸注造血干細胞動員劑，待造血干細胞達到高峰時用血細胞分離器從肘靜脈分離單個核細胞2-4小時，每日或隔日分離1次，連續(xù)3-4次。
2、取凍干粉劑SOD，用生理鹽水溶解，稀釋至適當濃度，加入細胞懸液中，使SOD終濃度在0.16-6U/ml之間。在4-6℃冰箱保存1-7天，根據(jù)需要隨時可以取出按計劃給病人輸入。與此同時進行有核細胞計數(shù)、活細胞檢測和造血祖細胞培養(yǎng)，旨在給出病人移植的造血干細胞的數(shù)量。
3、如是自體骨髓保存，在采集的骨髓細胞懸液中按比例加入SOD后置于4-6℃冰箱保存，需要時從冰箱取出給病人輸注。
SOD進入人體后，在細胞外發(fā)揮清除超氧化物的作用，經(jīng)亞急性和慢性實驗，證明無明顯不良反應(yīng)。
本發(fā)明(體外細胞低溫保存的保護劑)實施后，與以往多種方法相比，具有以下優(yōu)點4-6℃條件下保存造血細胞，保養(yǎng)液中加SOD與常規(guī)不加SOD的方法比較，造血祖細胞回收率明顯不同。以保存入骨髓造血干細胞不同時間的CFU-GM產(chǎn)率為例，加SOD保存3天時CFU-GM活存率提高兩倍，保存5天提高5倍，從而可以明顯增加了輸入的干細胞的數(shù)量，減少了干細胞的分離次數(shù)。每減少一次分離，可節(jié)省經(jīng)費開支約2000元。
實施例4-6℃保存自體外周血造血干細胞當腫瘤病人注射造血干細胞動員劑后，在造血于細胞的高峰期通過血細胞分離器采集外周血干細胞，所采集的干細胞一般濃度在1-2×108/ml左右，4℃保存前用細胞培養(yǎng)液將細胞稀釋1-2倍，并使保存體系含人10％AB血清和0.16-6U/ml的SOD。上述體系置于4-6℃冰箱保存，保存期間防止冰箱溫度變化。一般情況所采集的外周血干細胞需在冰箱中保存3-5天。在此期間給病人進行大劑量放化療，并保證大部分藥物已從體內(nèi)清除。自體造血于細胞回輸時，從冰箱中取出保存體系，在無菌條件下取出約2ml進行造血祖細胞體外集落測定及細胞活性測定，加SOD保存3天時CFU-GM活存率提高兩倍，保存5天提高5倍。保存的細胞可不經(jīng)處理直接回輸給病人，不必再洗滌除去所加的SOD。
權(quán)利要求
1.一種人體外低溫條件下的血細胞保護劑，其特征是超氧化物歧化酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的這種超氧化物歧化酶，其特征可以是一種凍干粉劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的這種超氧化物歧化酶，其特征工作濃度為0.16-6U/ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及人造血干細胞移植時使用的造血干細胞低溫保護劑，其目的在于提高長時間低溫保存后造血干細胞的回收率。本發(fā)明在保存的人血細胞懸液中加入適量的超氧化物歧化酶(SOD)可明顯提高干細胞活存率。保存5天可提高活存4-5倍。其實施方法是將凍干粉劑SOD用生理鹽水稀釋，加入細胞懸液中，使之最終濃度為每毫升0.16-6U。然后置4-6℃冰箱保存。根據(jù)需要隨時從冰箱中取出細胞懸液，給病人輸注。由于在此劑量范圍內(nèi)SOD無毒副作用，因此在輸注前不需洗脫SOD。
文檔編號A01N1/02GK1158894SQ96109808
公開日1997年9月10日 申請日期1996年9月17日 優(yōu)先權(quán)日1996年9月17日
發(fā)明者馬恩普, 劉秀珍, 劉明東, 韓潁 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所