本發(fā)明涉及一種玫瑰育苗方法，屬于育苗技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有的玫瑰育苗方法，主要是采用扦插的方法，插穗的長度一般選擇大于10cm，如果插穗的長度小于10cm，插穗內(nèi)儲(chǔ)存的營養(yǎng)物質(zhì)少，插穗扦插過程中因?yàn)轲B(yǎng)分供應(yīng)不足而死亡，因此造成成活率較低。

cn102612971a公開了玫瑰扦插繁殖方法，其采集的扦插紙條為橫徑不小于1cm、長50-70cm的一年生健壯紙條；

cn103918535a公開了一種大馬士革玫瑰的育苗方法，其采集的插穗長度為10-15cm。

但是插穗的長度選擇的太長，則需要一定量的母本植株作為接穗的來源，造成繁殖系數(shù)低，母本植株種節(jié)利用率低，總體的增殖數(shù)量少。

而常規(guī)的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，優(yōu)點(diǎn)是：繁殖系數(shù)高，繁殖速率高，但缺點(diǎn)是：技術(shù)含量高，需要多種激素配合使用，一般先誘導(dǎo)愈傷組織，再誘導(dǎo)芽分化，步驟較多、培育周期較長，培養(yǎng)的組培苗移栽入杯苗時(shí)，需要煉苗時(shí)間長，煉苗過程中，成活率受到影響。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種玫瑰育苗方法，以實(shí)現(xiàn)以下發(fā)明目的：

（1）提高玫瑰育苗的成活率；

（2）提高玫瑰育苗的繁殖系數(shù)和繁殖效率，提高母本植株種節(jié)利用率，減少接穗的使用量，減少對(duì)母本植株的影響；

（3）縮短育苗時(shí)間。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

一種玫瑰育苗方法，包括以下步驟：外植體材料的選擇，浸泡處理，消毒處理，扦插培養(yǎng)，擴(kuò)繁、生根培養(yǎng)，轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)杯。

以下是對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)：

所述浸泡處理，將幼嫩莖段，在含有1%pvp、3%的甲殼素、3.5%的海藻多糖、92.5%的水的混合溶液中，浸泡7-10s，取出。

所述扦插培養(yǎng)，將幼嫩莖段，按照生長方向，垂直插入含有扦插培養(yǎng)基中，插入深度為0.5cm；每天16h光照，8小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間為20天。

所述扦插培養(yǎng)基的組成為：ms固體培養(yǎng)基與氨基寡糖素、巖藻聚糖硫酸酯、大米多肽、三硬脂酸甘油酯的質(zhì)量比例為：100:0.2:1.5:2:1。

所述擴(kuò)繁、生根培養(yǎng)，包括以下階段：

第一階段：光照度每天12h光照，12小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為27℃；培養(yǎng)10天；

第二階段：光照度每天10h光照，14小時(shí)黑暗，光照度為1800lx，環(huán)境溫度為37℃；培養(yǎng)48h；

第三階段：光照度每天16h光照，8小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為15℃；培養(yǎng)48h；

第四階段：光照度每天12h光照，12小時(shí)黑暗，光照度為2800lx，環(huán)境溫度為2℃；培養(yǎng)24h；

第五階段：光照度每天8h光照，16小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為22℃；培養(yǎng)1周。

所述擴(kuò)繁、生根培養(yǎng)，所使用的培養(yǎng)基的組成為：ms固體培養(yǎng)基與氨基寡糖素、巖藻聚糖硫酸酯、大米多肽、三硬脂酸甘油酯、iba、腐殖酸、藻膠酸的質(zhì)量比例為：100:0.2:1.5:2:1：0.0002:2:3。

所述轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)杯，培養(yǎng)1周后，噴濕保護(hù)液一次；所述保護(hù)液中，以使用濃度計(jì)，香菇多糖為100mg/l、tdz（噻苯?。?.02mg/l、茉莉酸甲酯為0.05mg/l、多胺為50mg/l，精氨酸為20mg/l，乙氧基改性聚三硅氧烷為80mg/l。

所述外植體材料的選擇，選擇已正常開花2年的玫瑰植株，選取當(dāng)年生、無病蟲害、生長旺盛、直徑為1.5-2.0mm的幼嫩莖段；剪切幼嫩莖段的下端，將幼嫩莖段剪成2-3cm長；然后下端剪成斜切口，下端切口切面與插穗的徑向平面的夾角為60-65℃。

所述擴(kuò)繁、生根培養(yǎng)，生根率達(dá)99.5%以上，每棵玫瑰苗生根數(shù)量為5-8條。

所述轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)杯，將擴(kuò)繁、生根培養(yǎng)后獲得的苗高4-5cm的小苗，種植于營養(yǎng)杯中，保持空氣濕度85%以上，培養(yǎng)溫度25℃，光照度每天14h光照，10小時(shí)黑暗，光照度為2000lx；生長15天后，放置于室外，上面搭遮陽網(wǎng)；待苗高17cm以上時(shí)，可以進(jìn)行出圃。

由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明達(dá)到的技術(shù)效果是：

（1）本發(fā)明所述玫瑰育苗方法，成活率達(dá)99.4%以上，出圃后移栽成活率達(dá)99.0%以上，培育的玫瑰苗的整齊度高，苗木的高度差在1.2cm以內(nèi)，生根率達(dá)99.5%以上，移栽時(shí)，每棵玫瑰苗生根數(shù)量為12-13條，根的長度為3.6-4cm。

（2）本發(fā)明通過自我離體繁育，解決了扦插枝條來源的問題，無需消耗大量的玫瑰枝條，提高了繁殖效率和繁殖系數(shù)，每棵玫瑰植株，以截取3-4個(gè)幼嫩莖段計(jì)算，每次增殖9-12倍；母本植株種節(jié)利用率達(dá)96%以上。

（3）本發(fā)明和傳統(tǒng)組織培養(yǎng)相比，將增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)合二為一，不需經(jīng)過不定芽的分化培養(yǎng)，成苗和生根的繁瑣操作；省略煉苗階段，縮短了育苗周期，整個(gè)育苗周期為60天；并且克服了傳統(tǒng)組織培養(yǎng)需要添加多種外源激素，造成不定芽的玻璃化問題、愈傷組織難分化問題。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。以下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干調(diào)整和改進(jìn)。這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1一種玫瑰育苗方法

包括以下步驟：

步驟1、外植體材料的選擇

在每年的春天3-4月，選擇已正常開花2年的玫瑰植株，選取當(dāng)年生、無病蟲害、生長旺盛、直徑為1.5-2.0mm的幼嫩莖段；剪切幼嫩莖段的下端，將幼嫩莖段剪成2-3cm長；然后下端剪成斜切口，下端切口切面與插穗的徑向平面的夾角為60-65℃。

所述幼嫩莖段，為含有腋芽的莖段。

步驟2、浸泡處理

將步驟（1）所述幼嫩莖段，在含有1%pvp、3%的甲殼素、3.5%的海藻多糖、92.5%的水的混合溶液中，浸泡7-10s，取出。

步驟3、消毒處理

將經(jīng)過步驟（2）處理的幼嫩莖段，用75%的酒精浸泡并搖動(dòng)殺菌1min后取出，用無菌水沖洗3次，再以0.1%的氯化汞浸泡5min，然后用無菌水沖洗3次。

步驟4、扦插培養(yǎng)

將步驟（3）經(jīng)過消毒處理的幼嫩莖段，按照生長方向，垂直插入含有扦插培養(yǎng)基的錐形瓶中，插入深度為0.5cm，將錐形瓶密封；每天16h光照，8小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間為20天。

所述扦插培養(yǎng)基的組成為：

ms固體培養(yǎng)基與氨基寡糖素、巖藻聚糖硫酸酯、大米多肽、三硬脂酸甘油酯的質(zhì)量比例為：100:0.2:1.5:2:1

具體制備方法為：

（1）制備母液：

氨基寡糖素、巖藻聚糖硫酸酯、大米多肽、三硬脂酸甘油酯先配置成一定濃度的母液，其中氨基寡糖素的含量為2%、巖藻聚糖硫酸酯的含量為15%、大米多肽的含量為20%、三硬脂酸甘油酯的含量為10%，其余為水，攪拌溶解后，進(jìn)行過濾除菌，然后加熱至60℃；

（2）ms培養(yǎng)基的各原料混合均勻，經(jīng)過滅菌后，冷卻至70℃；

（3）將加熱至60℃的母液與冷卻至70℃的ms培養(yǎng)基，在無菌條件下進(jìn)行混合均勻，調(diào)節(jié)ph為5.8-6.0，然后將混合后的培養(yǎng)基，均勻的分裝在錐形瓶中，冷卻、凝固。

母液與ms培養(yǎng)基的質(zhì)量比例為：1:10。

步驟5、擴(kuò)繁、生根培養(yǎng)

將步驟（4）的扦插苗生長至6-7cm時(shí)，將扦插苗拔出，剪切成3段，每段長2cm，繼續(xù)扦插于新的培養(yǎng)基中，進(jìn)行以下五個(gè)階段的培養(yǎng)過程：

第一階段：光照度每天12h光照，12小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為27℃；培養(yǎng)10天；

第二階段：光照度每天10h光照，14小時(shí)黑暗，光照度為1800lx，環(huán)境溫度為37℃；培養(yǎng)48h；

第三階段：光照度每天16h光照，8小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為15℃；培養(yǎng)48h；

第四階段：光照度每天12h光照，12小時(shí)黑暗，光照度為2800lx，環(huán)境溫度為2℃；培養(yǎng)24h；

第五階段：光照度每天8h光照，16小時(shí)黑暗，光照度為2500lx，環(huán)境溫度為22℃；培養(yǎng)1周。

所述培養(yǎng)基組成為：

ms固體培養(yǎng)基與氨基寡糖素、巖藻聚糖硫酸酯、大米多肽、三硬脂酸甘油酯、iba(吲哚丁酸)、腐殖酸、藻膠酸的質(zhì)量比例為：100:0.2:1.5:2:1：0.0002:2:3

具體制備方法為：

（1）制備母液：

氨基寡糖素、巖藻聚糖硫酸酯、大米多肽、三硬脂酸甘油酯、iba、腐殖酸、藻膠酸先配置成一定濃度的母液，其中氨基寡糖素的含量為2%、巖藻聚糖硫酸酯的含量為15%、大米多肽的含量為20%、三硬脂酸甘油酯的含量為10%，iba(吲哚丁酸)含量為0.002%、腐殖酸含量為20%、藻膠酸含量30%，其余為水，攪拌溶解后，進(jìn)行過濾除菌，然后加熱至60℃；

（2）ms培養(yǎng)基的各原料混合均勻，經(jīng)過滅菌后，冷卻至70℃；

（3）將加熱至60℃的母液與冷卻至70℃的ms培養(yǎng)基，在無菌條件下進(jìn)行混合均勻，調(diào)節(jié)ph為5.8-6.0，然后將混合后的培養(yǎng)基，均勻的分裝在錐形瓶中，冷卻、凝固。

母液與ms培養(yǎng)基的質(zhì)量比例為：1:10。

生根率達(dá)99.5%以上，每棵玫瑰苗生根數(shù)量為5-8條。

步驟6、轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)杯

將步驟5中獲得的苗高4-5cm的小苗，根部的培養(yǎng)基清洗干凈，種植于含有混合基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，壓實(shí)基質(zhì)，保持空氣濕度85%以上，但葉片不積水，培養(yǎng)溫度25℃，光照度每天14h光照，10小時(shí)黑暗，光照度為2000lx，培養(yǎng)1周后，噴濕保護(hù)液一次；

生長15天后，放置于室外，上面搭遮陽網(wǎng)，按花木杯苗進(jìn)行常規(guī)管理即可；待苗高17cm以上時(shí)，可以進(jìn)行出圃，出圃前的成活率達(dá)99.4%以上，出圃后移栽成活率達(dá)99.0%，玫瑰苗的整齊度高，苗木的高度差在1.2cm以內(nèi)，移栽時(shí)，每棵玫瑰苗生根數(shù)量為12-13條，根的長度為3.6-4cm。

所述保護(hù)液中，以使用濃度計(jì)，香菇多糖為100mg/l、tdz（噻苯?。?.02mg/l、茉莉酸甲酯為0.05mg/l、多胺為50mg/l，精氨酸為20mg/l，乙氧基改性聚三硅氧烷為80mg/l。

所述混合基質(zhì)，以重量份計(jì)，包括：硝基纖維素20份、植金石10份、珍珠巖10份、蜂窩煤渣2份、蘑菇渣3份、松針1份、楨樹葉2份、鋸末3份、水苔草0.5份、松樹皮0.6份；

所述蘑菇渣、松針、楨樹葉、鋸末、水苔草、松樹皮需要進(jìn)行自然發(fā)酵腐熟，按照常規(guī)工藝進(jìn)行即可。

本發(fā)明通過自我離體繁育，解決了扦插枝條來源的問題，無需消耗大量的玫瑰枝條，同時(shí)提高了繁殖效率和繁殖系數(shù)，每棵玫瑰植株，以截取3-4個(gè)幼嫩莖段計(jì)算，每次增殖9-12倍。

本發(fā)明和傳統(tǒng)組織培養(yǎng)相比，不需要形成愈傷組織或形成不定芽，再通過分化培養(yǎng)，成苗和生根；克服了傳統(tǒng)組織培養(yǎng)需要添加多種外源激素，造成不定芽的玻璃化問題、愈傷組織難分化問題。

本發(fā)明減少了煉苗階段，移栽成活率高，達(dá)99.0%以上。

本發(fā)明的步驟1、浸泡處理；步驟4、扦插培養(yǎng)的扦插培養(yǎng)基的組成；步驟5、擴(kuò)繁、生根培養(yǎng)中的五個(gè)階段的培養(yǎng)過程以及培養(yǎng)基的組成；步驟6、轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)杯中的保護(hù)液的組成以及混合基質(zhì)的組成對(duì)本發(fā)明的技術(shù)效果做出突出的技術(shù)貢獻(xiàn)。

上述步驟（4）-（5）要保證無菌條件。

除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)，本發(fā)明所述的比例，均為質(zhì)量比例。

最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。