本發(fā)明屬于組培生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甜葉菊組培方法。
背景技術(shù)：
甜葉菊，是原產(chǎn)于南美洲巴拉圭的菊科甜葉菊屬多年生草本植物，由于甜葉菊所含的甜菊糖苷有制血糖、降低血壓、促進(jìn)新陳代謝以及治療糖尿病、肥胖癥、調(diào)節(jié)胃酸、恢復(fù)神經(jīng)疲勞的功效，并且物理、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，無(wú)發(fā)酵性特點(diǎn)，其制品有比較長(zhǎng)的保質(zhì)期，特別適合作為糖尿病、高血壓等病患者食品的甜味劑、保健品添加劑等，具有廣闊的市場(chǎng)前景和應(yīng)用范圍。
自我國(guó)于20世紀(jì)70年代年引種甜葉菊并成功擴(kuò)大種植以來(lái)，已經(jīng)有30余年的歷史，但由于甜菊的繁育特性，傳統(tǒng)的繁殖方式包括種子、扦插方式。但是用種子繁育的方法，成活率低；而扦插繁殖導(dǎo)致品質(zhì)退化，并且這兩種繁育方式時(shí)間長(zhǎng)、需要大量以莖尖、帶腋芽的莖段、種子等材料。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種甜葉菊組培方法，能降低繁殖的成本，生長(zhǎng)周期短、繁殖率高、方便管理、有利于工業(yè)化生產(chǎn)和自動(dòng)化監(jiān)控，大大的節(jié)約了人力、物力和田間作物的土地。
本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配制，將福美鋅400-600倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液400-600倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配制0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖干位置橫切出長(zhǎng)15-20 mm，寬10-15 mm的葉片條；
3）培養(yǎng)基方瓶和外植體的消毒，將培養(yǎng)基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡20-30分鐘，用無(wú)菌水沖洗2-4次，每次3-5分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡10-20分鐘，用無(wú)菌水洗凈，然后放入抑菌液B中浸泡20-30分鐘，用無(wú)菌水洗凈；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在28-30℃下，光暗培養(yǎng)15-20天，外植體分化出芽，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+萘乙酸0.1-0.3 mg/L+6-芐基嘌呤0.4-1.0 mg/L+瓊脂8-10 g/L；
5）芽生根成苗，當(dāng)步驟4）中的芽長(zhǎng)至3-5 cm，將其相互分開(kāi)成單株，并轉(zhuǎn)接至裝有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在28-30℃下，光暗培養(yǎng)20-25天，長(zhǎng)出多條根并出現(xiàn)白色根毛，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+吲哚乙酸0.1-0.2 mg/L+萘乙酸0.1-0.2 mg/L+瓊脂5-7 g/L+硫酸亞鐵0.5-1.5 mg/L；
優(yōu)選的，所述步驟3）中培養(yǎng)基方瓶的規(guī)格為500 ml。
優(yōu)選的，所述步驟4）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1300勒克斯，步驟5）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1800勒克斯。
本發(fā)明提供的甜葉菊組織培養(yǎng)方法，取材容易，可以迅速擴(kuò)繁出大量種源，能降低繁殖的成本，生長(zhǎng)周期短、繁殖率高、方便管理、有利于工業(yè)化生產(chǎn)和自動(dòng)化監(jiān)控，大大的節(jié)約了人力、物力和田間作物的土地。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配制，將福美鋅400倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液400倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配制0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖干位置橫切出長(zhǎng)15 mm，寬10 mm的葉片條；
3）培養(yǎng)基方瓶和外植體的消毒，將培養(yǎng)基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡20分鐘，用無(wú)菌水沖洗2次，每次3分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡10-分鐘，用無(wú)菌水洗凈，然后放入抑菌液B中浸泡20分鐘，用無(wú)菌水洗凈；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在28℃下，光暗培養(yǎng)15天，外植體分化出芽，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+萘乙酸0.1 mg/L+6-芐基嘌呤0.4 mg/L+瓊脂8 g/L；
5）芽生根成苗，當(dāng)步驟4）中的芽長(zhǎng)至3 cm，將其相互分開(kāi)成單株，并轉(zhuǎn)接至裝有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在28℃下，光暗培養(yǎng)20天，長(zhǎng)出多條根并出現(xiàn)白色根毛，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+吲哚乙酸0.1 mg/L+萘乙酸0.1 mg/L+瓊脂5 g/L+硫酸亞鐵0.5 mg/L；
所述步驟3）中培養(yǎng)基方瓶的規(guī)格為500 ml。
所述步驟4）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1300勒克斯，步驟5）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1800勒克斯。
實(shí)施例2
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配制，將福美鋅500倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液500倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配制0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖干位置橫切出長(zhǎng)18 mm，寬13 mm的葉片條；
3）培養(yǎng)基方瓶和外植體的消毒，將培養(yǎng)基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡25分鐘，用無(wú)菌水沖洗3次，每次4分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡15分鐘，用無(wú)菌水洗凈，然后放入抑菌液B中浸泡25分鐘，用無(wú)菌水洗凈；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在29℃下，光暗培養(yǎng)18天，外植體分化出芽，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+萘乙酸0.2 mg/L+6-芐基嘌呤0.7 mg/L+瓊脂9 g/L；
5）芽生根成苗，當(dāng)步驟4）中的芽長(zhǎng)至4 cm，將其相互分開(kāi)成單株，并轉(zhuǎn)接至裝有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在29℃下，光暗培養(yǎng)23天，長(zhǎng)出多條根并出現(xiàn)白色根毛，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+吲哚乙酸0.15 mg/L+萘乙酸0.15 mg/L+瓊脂6 g/L+硫酸亞鐵1.0 mg/L；
所述步驟3）中培養(yǎng)基方瓶的規(guī)格為500 ml。
所述步驟4）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1300勒克斯，步驟5）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1800勒克斯。
實(shí)施例3
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配制，將福美鋅600倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液600倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配制0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖干位置橫切出長(zhǎng)20 mm，寬15 mm的葉片條；
3）培養(yǎng)基方瓶和外植體的消毒，將培養(yǎng)基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡30分鐘，用無(wú)菌水沖洗4次，每次5分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡20分鐘，用無(wú)菌水洗凈，然后放入抑菌液B中浸泡30分鐘，用無(wú)菌水洗凈；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在30℃下，光暗培養(yǎng)20天，外植體分化出芽，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+萘乙酸0.3 mg/L+6-芐基嘌呤1.0 mg/L+瓊脂10 g/L；
5）芽生根成苗，當(dāng)步驟4）中的芽長(zhǎng)至5 cm，將其相互分開(kāi)成單株，并轉(zhuǎn)接至裝有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)基方瓶中，在30℃下，光暗培養(yǎng)25天，長(zhǎng)出多條根并出現(xiàn)白色根毛，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+吲哚乙酸0.2 mg/L+萘乙酸0.2 mg/L+瓊脂7 g/L+硫酸亞鐵1.5 mg/L；
所述步驟3）中培養(yǎng)基方瓶的規(guī)格為500 ml。
所述步驟4）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1300勒克斯，步驟5）中光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1800勒克斯。
以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。