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一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法

文檔序號:277053閱讀:690來源:國知局
一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法,選擇外植體:選擇頂芽完全展開的生長健壯、無病蟲害的切花菊劍葉黃幼嫩葉片或者莖段;消毒;培養(yǎng):培養(yǎng)方式包括葉片組培和莖段組培;誘導芽體:誘導芽體階段分兩個時間段:第一段溫度為25℃,光照60%,時長10h,第二段溫度為24℃,光照0%,時長10h;繼代增殖:將誘導芽體經(jīng)繼代培養(yǎng)后,接種于培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基為MS+6-BA2mg/L+NAA0.3mg/L;誘導生根:成苗。本發(fā)明以切花菊品種‘劍葉黃’的葉片和莖段組織為外植體進行再生培養(yǎng),建立組培快繁體系,滿足切花菊市場的產(chǎn)品需求。
【專利說明】一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種切花菊的組織培養(yǎng)方法,尤其是涉及一種切花菊劍葉黃的組織培 養(yǎng)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 菊花是菊科菊屬多年生宿根草本植物,是世界四大切花之一。傳統(tǒng)上菊花主要以 扦插和分株進行繁殖,但這兩種方法易受季節(jié)和外界環(huán)境條件的限制,而且繁殖系數(shù)較低、 幼苗質(zhì)量較差。隨著花卉市場產(chǎn)品質(zhì)量要求的日益提高,越來越多的企業(yè)開始進行菊花種 苗的標準化和工廠化生產(chǎn),組織培養(yǎng)是這一生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵技術(shù)。切花菊品種'劍葉黃' 為重要的國產(chǎn)切花品種,花黃色,花徑4~7 cm,花期8~11月,設施條件下可周年生產(chǎn)。由于 其組培過程中愈傷組織誘導和生根誘導比較困難,嚴重阻礙了該品種的標準化和工廠化生 產(chǎn),國產(chǎn)切花菊品種所占份額較小。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 有鑒于此,本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種切花菊劍葉黃的組織 培養(yǎng)方法,該方法以切花菊品種'劍葉黃'的葉片和莖段組織為外植體進行再生培養(yǎng),建立 組培快繁體系,滿足切花菊市場的產(chǎn)品需求。
[0004] 為達到上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案: 一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法,包括如下步驟: 選擇外植體:選擇頂芽完全展開的生長健壯、無病蟲害的切花菊劍葉黃幼嫩葉片或者 莖段; 消毒:用流線型自來水沖洗外植體2小時候,放入燒杯中用無菌水浸泡2小時;然后在 無菌超凈工作臺上將材料浸入75%酒精中消毒10秒,無菌水沖洗4次,然后轉(zhuǎn)入0. 1%升汞 溶液中滅菌處理,葉片4min,莖段3min ;之后用無菌水清洗5次,用無菌濾紙吸干水分,然后 接種; 培養(yǎng):培養(yǎng)階段包括葉片組培和莖段組培;具體步驟如下: 誘導芽體:誘導芽體階段分兩個時間段:第一段溫度為25°C,光照60%,時長10h,第二 段溫度為24°C,光照0%,時長10h ; 繼代增殖:將誘導芽體經(jīng)繼代培養(yǎng)后,接種于培養(yǎng)基中; 誘導生根:誘導生根階段在光照培養(yǎng)箱中進行,培養(yǎng)分兩個時間段:第一段溫度為 25°C,光照60%,時長14h,第二段溫度為18°C,光照0%,時長10h ; 成苗:將有根的植株從培養(yǎng)瓶中取出,洗凈根部黏附的瓊脂,栽入珍珠巖基質(zhì)中;移栽 前期將空氣濕度保持在75%?85%之間,遮光率為40%,環(huán)境溫度控制在20°C?26°C,試管 苗在20天左右移栽成活,并長出新根新葉;經(jīng)1?2個月的管理,定植于富含腐殖質(zhì),經(jīng)過 滅菌處理的砂質(zhì)壤土中。
[0005] 作為優(yōu)選,所述葉片組培在誘導芽體之前先進行愈傷誘導:將外植體接種在 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L 或 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L 培養(yǎng)基上,培養(yǎng)的溫度為 24-25°C ;愈傷誘導階段第一周為暗期培養(yǎng),從第二周起光照時間為10h/d。
[0006] 作為優(yōu)選,所述誘導芽體的培養(yǎng)基為MS+6-BA 3mg/L+NAA 0? lmg/L或MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 2mg/L〇
[0007] 作為優(yōu)選,所述誘導生根的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0? lmg/L+TDZ 0? 15mg/L。
[0008] 本發(fā)明的有益效果是: 本發(fā)明克服了組培過程中愈傷組織誘導和生根誘導困難的問題,提升了產(chǎn)品質(zhì)量,完 善了切花菊市場的生產(chǎn)現(xiàn)狀。本發(fā)明以切花菊品種'劍葉黃'的葉片和莖段組織為外植體 進行再生培養(yǎng),建立組培快繁體系,滿足切花菊市場的產(chǎn)品需求。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0009] 圖1為本發(fā)明的流程圖。

【具體實施方式】
[0010] 下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步描述。
[0011] 如圖1所示,本發(fā)明包括如下步驟: 選擇外植體:選擇頂芽完全展開的生長健壯、無病蟲害的切花菊劍葉黃幼嫩葉片或者 莖段。
[0012] 消毒:用流線型自來水沖洗外植體2小時候,放入燒杯中用無菌水浸泡2小時;然 后在無菌超凈工作臺上將材料浸入75%酒精中消毒10秒,無菌水沖洗4次,然后轉(zhuǎn)入0. 1% 升汞溶液中滅菌處理,葉片4min,莖段3min ;之后用無菌水清洗5次,用無菌濾紙吸干水分, 然后接種。
[0013] 培養(yǎng):培養(yǎng)階段包括葉片組培和莖段組培;所述葉片組培包括愈傷誘導、誘導芽 體、繼代增殖、誘導生根及成苗步驟;所述莖段組培包括誘導潛伏芽、繼代增殖、誘導生根和 成苗步驟。
[0014] 葉片組培:具體步驟如下: 愈傷誘導:將外植體接種在 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0? 2mg/L 或 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 3mg/L培養(yǎng)基上(30克/升蔗糖和7克/升瓊脂粉,Ph5. 8-6),培養(yǎng)的溫度為24-25°C ; 愈傷誘導階段第一周為暗期培養(yǎng),從第二周起光照時間為l〇h/d ; 誘導芽體:培養(yǎng)基為MS+6-BA 3mg/L+NAA 0. lmg/L ;誘導叢生芽階段分兩個時間段:第 一段溫度為25°C,光照60%,時長10h,第二段溫度為24°C,光照0%,時長10h ; 繼代增殖:將誘導芽體經(jīng)繼代培養(yǎng)后,接種于培養(yǎng)基MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 3mg/L中; 誘導生根:培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0. lmg/L+TDZ 0. 15mg/L ;誘導生根階段在光照培養(yǎng)箱 中進行,培養(yǎng)分兩個時間段:第一段溫度為25°C,光照60%,時長14h,第二段溫度為18°C,光 照〇%,時長l〇h ; 成苗(組培苗馴化移栽):菊花的有根苗移栽成活容易,將有根的植株從瓶中用鑷子輕 輕夾出,洗凈根部黏附的瓊脂,栽入珍珠巖基質(zhì)中;移栽前期將空氣濕度保持在75%?85% 之間,遮光率為40%,環(huán)境溫度控制在20°C?26°C,試管苗在20天左右移栽成活,并長出新 根新葉;經(jīng)1?2個月的管理,定植于富含腐殖質(zhì),經(jīng)過滅菌處理的砂質(zhì)壤土中。
[0015] 表1.選試培養(yǎng)基對葉片愈傷組織誘導30天后的情況

【權(quán)利要求】
1. 一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法,其特征在于:包括如下步驟: 選擇外植體:選擇頂芽完全展開的生長健壯、無病蟲害的切花菊劍葉黃幼嫩葉片或者 莖段; 消毒:用流線型自來水沖洗外植體2小時候,放入燒杯中用無菌水浸泡2小時;然后在 無菌超凈工作臺上將材料浸入75%酒精中消毒10秒,無菌水沖洗4次,然后轉(zhuǎn)入0. 1%升汞 溶液中滅菌處理,葉片4min,莖段3min ;之后用無菌水清洗5次,用無菌濾紙吸干水分,然后 接種; 培養(yǎng):培養(yǎng)方式包括葉片組培和莖段組培;具體步驟如下: 誘導芽體:誘導芽體階段分兩個時間段:第一段溫度為25°C,光照60%,時長10h,第二 段溫度為24°C,光照0%,時長10h ; 繼代增殖:將誘導芽體經(jīng)繼代培養(yǎng)后,接種于培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基為MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 3mg/L ; 誘導生根:誘導生根階段在光照培養(yǎng)箱中進行,培養(yǎng)分兩個時間段:第一段溫度為 25°C,光照60%,時長14h,第二段溫度為18°C,光照0%,時長10h ; 成苗:將有根的植株從培養(yǎng)瓶中取出,洗凈根部黏附的瓊脂,栽入珍珠巖基質(zhì)中;移栽 前期將空氣濕度保持在75%?85%之間,遮光率為40%,環(huán)境溫度控制在20°C?26°C,試管 苗在20天左右移栽成活,并長出新根新葉;經(jīng)1?2個月的管理,定植于富含腐殖質(zhì),經(jīng)過 滅菌處理的砂質(zhì)壤土中。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法,其特征在于:所述葉片 組培在誘導芽體之前先進行愈傷誘導:將外植體接種在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 2mg/L或 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 3mg/L培養(yǎng)基上,培養(yǎng)的溫度為24-25°C;愈傷誘導階段第一周為暗 期培養(yǎng),從第二周起光照時間為l〇h/d。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法,其特征在于:所述誘導 芽體的培養(yǎng)基為 MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.1mg/L 或 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的一種切花菊劍葉黃的組織培養(yǎng)方法,其特征在于: 所述誘導生根的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0? lmg/L+IDZ 0? 15mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK104429959SQ201410719319
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月3日
【發(fā)明者】李永華, 張開明, 李永, 賀丹, 張凌, 王政, 雷雅凱, 張曼, 張淑梅, 蔣鶴 申請人:河南農(nóng)業(yè)大學
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