一種箭葉淫羊藿越冬芽快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種箭葉淫羊藿越冬芽快速繁殖方法，本方法以箭葉淫羊藿越冬芽為外植體，消毒后進行組織培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化，生根繁殖。愈傷組織分化出芽的分化率高達88.9%，且后期的增殖培養(yǎng)不需要更換培養(yǎng)基，增殖系數(shù)可達5.3。本發(fā)明操作簡單，繁殖率高，生產(chǎn)成本低，繁殖周期短，適宜于工廠生產(chǎn)應(yīng)用。
【專利說明】一種箭葉淫羊藿越冬芽快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物組培【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種箭葉淫羊藿越冬芽快速繁殖方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 箭葉淫羊藿Epimedium為小檗科箭葉淫羊藿屬多年生宿根性草本藥用植物，是我 國傳統(tǒng)補益類中藥，已有2000多年的栽培歷史，是中國應(yīng)用最為廣泛、最為悠久的中藥之 一。箭葉淫羊藿的傳統(tǒng)繁殖方式為通過地下根莖的無性繁殖及種子繁殖。種子繁殖發(fā)芽率 低，且生長緩慢。因此生產(chǎn)上大多采用分株繁殖的無性繁殖方式。這些方式均嚴(yán)格受生長 季節(jié)及氣候的限制，造成繁殖系數(shù)低，限制了箭葉淫羊藿的產(chǎn)業(yè)化和商品化生產(chǎn)。因此采用 組織培養(yǎng)法繁殖箭葉淫羊藿，是提高其繁殖率的有效途徑，對實現(xiàn)箭葉淫羊藿的規(guī)模化生 產(chǎn)具有重要意義。
[0003] 組織培養(yǎng)技術(shù)是目前最常用、最有效的無性繁殖方法，該技術(shù)利用植物體的器官、 組織細(xì)胞或原生質(zhì)體作為外植體，在一定條件下進行培養(yǎng)使之生長分化并發(fā)育成完整的植 株。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，植物組織培養(yǎng)技術(shù)日益成熟，目前已在上千園林、園藝及藥用植 物上廣泛應(yīng)用。目前，組培技術(shù)在箭葉淫羊藿生產(chǎn)上應(yīng)用不多，關(guān)于箭葉淫羊藿的組培技術(shù) 報道較少，現(xiàn)有的箭葉淫羊藿組培技術(shù)存在誘導(dǎo)率低，生根困難等難題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的內(nèi)容在于提供一種箭葉淫羊藿越冬芽快速繁殖方法，本方法是以箭葉淫 羊藿越冬芽為材料，進行箭葉淫羊藿組培繁殖，可以在較短時間內(nèi)，組培繁殖獲得大量的無 性種苗，該方法高繁殖率、方便、快捷、低成本、適宜大面積推廣，為其產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了可 能。
[0005] 為了達到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施：
[0006] 一種箭葉淫羊藿越冬芽快速繁殖方法，包括以下步驟：
[0007] 1)外植體消毒：取淫羊藿當(dāng)年秋季形成的分蘗芽即越冬芽。
[0008] 2)愈傷組織誘導(dǎo)：芽體消毒后，切去外層苞片，內(nèi)部初始分化的芽體切成 0.5cmX0. 5cm小塊，置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+2.Omg/L BA+4.0mg/L2,4-D+1.0mg/LIBA+3% (質(zhì)量體積比）蔗糖+0.8% (質(zhì)量體積比）瓊脂，pH 值調(diào)至6.0。1500?25001ux光照強度下，14h/天的光照進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24?26°C。 20天更換新培養(yǎng)基，培養(yǎng)基保持原配方（MS+2.0mg/LBA+4.0mg/L2,4-D+l.Omg/LIBA+3% 蔗糖+0. 8%瓊脂）不變，形成愈傷組織。
[0009] 3)芽的再生培養(yǎng)：將愈傷組織置于芽分化培養(yǎng)基：MS+1.Omg/LBA+1.Omg/L IBA+3 %蔗糖+0.8 %瓊脂，pH值調(diào)至6.0,進行芽的再生培養(yǎng)。1500?25001ux光照強度 下，14h/天的光照進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24?26°C，再生出芽。
[0010] 4)芽的增殖培養(yǎng)：將再生的高2-3cm的植株單棵切下，置于芽的分化培養(yǎng)基 MS+1.Omg/LBA+1.Omg/LIBA+3%蔗糖+0.8%瓊脂的培養(yǎng)基上進行芽增殖培養(yǎng)，pH值調(diào)至
[0011] 5)生根培養(yǎng)：切取叢生芽單個芽體，芽體高2-3cm，置于生根培養(yǎng)基中進行生根培 養(yǎng)，生根培養(yǎng)基組成為：MS+0. 5g/L活性炭+3 %蔗糖+0. 8 %瓊脂，培養(yǎng)基pH值調(diào)至6. 0。 1500?25001ux光照強度下，14h/天的光照進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24?26°C，形成白色須根。
[0012] 所述的越冬芽為箭葉淫羊藿每年秋季至次年初春地下部分形成的分蘗芽。
[0013] 以上所述的步驟中，步驟1)中外植體消毒的步驟具體為：將越冬芽表面刷洗干 凈，再于流水下沖洗30min?90min，晾干至芽體表面沒有水漬，無菌條件下，將晾干的越冬 芽置于滅過菌的廣口瓶中，用75% (體積比）的酒精溶液浸泡40s，倒掉酒精，再用0.1% (質(zhì)量體積比）的升汞溶液浸泡消毒IOmin?20min，消毒期間不斷搖晃廣口瓶以保證消毒 過程的均勻徹底。然后取出芽體置于另一滅過菌的廣口瓶中用無菌水清洗6-8遍，得到接 種材料；
[0014] 以上所述的步驟中，步驟3)中是先將步驟2)中形成的愈傷組織繼代三次后再進 行芽的再生培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基配方為MS+2.0mg/LBA+4.0mg/L2,4-D+1.0mg/LIBA+3%蔗 糖+0. 8%瓊脂，pH值調(diào)至6. 0,15001ux?25001ux光照強度下，14h/天的光照進行培養(yǎng)， 培養(yǎng)溫度24?26°C，20天繼代一次。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
[0016] 本發(fā)明由淫羊藿越冬芽形成的愈傷組織分化出芽，愈傷組織分化出芽的分化率高 達88. 9%，且后期的增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方與分化培養(yǎng)基相同，增殖系數(shù)可達5. 3。本發(fā)明 操作簡單，繁殖率高，生產(chǎn)成本低，繁殖周期短，適宜于工廠生產(chǎn)應(yīng)用。以一棵完整的淫羊藿 組培苗為例進行增殖培養(yǎng)，40天為一個增殖周期，增殖系數(shù)以5. 3計算，一年中可擴繁的苗 數(shù)見下表。
[0017]

【權(quán)利要求】
1. 一種箭葉淫羊藿越冬芽快速繁殖方法，包括以下步驟： 1) 外植體消毒：取淫羊藿當(dāng)年秋季形成的分蘗芽即越冬芽； 2) 愈傷組織誘導(dǎo)：芽體消毒后，切去外層苞片，內(nèi)部初始分化的芽體切成 0. 5cmX0. 5cm小塊，置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+2. 0 mg/ L BA+4.0 mg/L 2,4-D+l.O mg/L IBA+3%蔗糖+0.8%瓊脂，pH值調(diào)至 6.0;1500~25001ux 光 照強度下，14h/天的光照進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24~26°C ;20天更換新培養(yǎng)基，培養(yǎng)基保持原 配方不變，形成愈傷組織； 芽的再生培養(yǎng)：將愈傷組織置于芽分化培養(yǎng)基：MS+1.0 mg/L BA+1.0 mg/L IBA+3%蔗 糖+0. 8%瓊脂，pH值調(diào)至6. 0,進行芽的再生培養(yǎng)；1500~25001ux光照強度下，14h/天的光 照進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24~26°C，再生出芽； 4) 芽的增殖培養(yǎng)：將再生的高2-3cm的植株單棵切下，置于芽的分化培養(yǎng)基MS+1. 0 mg/L BA+1. 0 mg/L IBA+3%蔗糖+0? 8%瓊脂的培養(yǎng)基上進行芽增殖培養(yǎng)，pH值調(diào)至6. 0 ; 1500~25001ux光照強度下，14h/天的光照進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24~26°C，形成叢生芽； 5) 生根培養(yǎng)：切取叢生芽單個芽體，芽體高2-3cm，置于生根培養(yǎng)基中進行生根培 養(yǎng)，生根培養(yǎng)基配方為：MS+0. 5g/L活性炭+3%蔗糖+0. 8%瓊脂，培養(yǎng)基pH值調(diào)至6. 0 ; 1500~25001ux光照強度下，14h/天的光照進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24~26°C，形成白色須根。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的越冬芽為箭葉淫羊藿每年秋季至次年初春地下 部分形成的分蘗芽。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，步驟1)中外植體消毒的步驟具體為：將越冬芽表面刷 洗干凈，再于流水下沖洗30min~90min，晾干至芽體表面沒有水漬，無菌條件下，將晾干的越 冬芽置于滅過菌的廣口瓶中，用75%的酒精溶液浸泡40s，倒掉酒精，再用0. 1%的升汞溶液 浸泡消毒l〇min~20min，消毒期間不斷搖晃廣口瓶以保證消毒過程的均勻徹底；然后取出 芽體置于另一滅過菌的廣口瓶中用無菌水清洗6-8遍，得到接種材料。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，步驟3)中是先將步驟2)中形成的愈傷組織繼代三 次后再進行芽的再生培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基配方為MS+2. 0 mg/L BA+4. 0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L IBA+3%蔗糖+0. 8%瓊脂，pH值調(diào)至6. 0,15001ux~25001ux光照強度下，14h/天的光照進行 培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24~26°C，20天繼代一次。
【文檔編號】A01H4/00GK104472355SQ201410682416
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月24日
【發(fā)明者】王瑛, 呂海燕, 黃文俊 申請人:中國科學(xué)院武漢植物園