明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，選取明日葉莖段，用流水沖洗,75％酒精溶液浸泡，無菌水沖洗，放入0.1％升汞溶液中消毒，之后再用無菌水沖洗；切段；種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30天莖段切口處長出愈傷組織團(tuán)；再將愈傷組織團(tuán)切塊,轉(zhuǎn)接至愈傷組織增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)20-30天對愈傷組織增殖；將增殖的愈傷組織切塊，轉(zhuǎn)接于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)30天分化產(chǎn)生叢生芽；將叢生芽基部的愈傷組織切除，分割為單個叢芽，將芽接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天得到再生植株幼苗；馴化練苗一周后移栽入滅菌處理的椰殼土中直至幼苗成活。本發(fā)明的有益效果是明日葉莖段做繁殖材料，成本低。
【專利說明】明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物培育【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)。

【背景技術(shù)】
[0002]明日葉藥食兩用，尤其在藥用方面的價(jià)值更是被各界公認(rèn)為極具發(fā)展?jié)摿Φ男屡d蔬菜。我國20多年前從日本引進(jìn)明日葉，目前國內(nèi)僅有少數(shù)幾家公司剛引種，栽培面積很小，原料在國際市場價(jià)格很高，需求量大。在生產(chǎn)過程中，明日葉植株通常在種植后1-2年即進(jìn)入繁殖期，開花結(jié)實(shí)后立即死亡。明日葉花期持續(xù)較長，果實(shí)結(jié)實(shí)率較低，在采收時種子成熟度不一，并且其果實(shí)為雙懸果，造成明日葉的種子發(fā)芽率極低，不易大規(guī)模栽培。如今明日葉種苗的繁育及栽培技術(shù)已成為制約明日葉及其加工品發(fā)展的瓶頸，而文獻(xiàn)中關(guān)于明日葉的種苗繁育及栽培報(bào)道甚少，導(dǎo)致市場上明日葉及其產(chǎn)品的價(jià)格居高不下。
[0003]鑒于以上因素，本研究旨在通過對明日葉莖段進(jìn)行離體培養(yǎng)的方法，獲得一套關(guān)于明日葉種子萌發(fā)及組織培養(yǎng)的方案，構(gòu)建明日葉的繁育體系。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，解決了明日葉種子發(fā)芽率低，市場上原材料不足、價(jià)格昂貴的問題。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是按照以下步驟進(jìn)行:
[0006](I)選取明日葉的莖，用流水沖洗，放入無菌操作臺上備用；
[0007](2)用75%酒精溶液浸泡，無菌水沖洗，放入0.1 %升汞溶液中消毒,之后再用無菌水沖洗；
[0008](3)用無菌濾紙吸干莖的水，然后切為莖段；
[0009](4)將莖段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于24°C培養(yǎng)箱中20001x光強(qiáng)下培養(yǎng)，光照條件為每天16小時光照，8小時黑暗，培養(yǎng)20-30天莖段切口處長出愈傷組織團(tuán)；
[0010](5)再將愈傷組織團(tuán)切塊，轉(zhuǎn)接至愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度25°C，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)20-30天對愈傷組織增殖；
[0011](6)將增殖的愈傷組織切塊，轉(zhuǎn)接于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)30天分化產(chǎn)生叢生芽；
[0012](7)將叢生芽基部的愈傷組織切除，分割為單個芽，將芽接種于生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度25°C，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)20天得到再生植株幼苗；
[0013](8)選取健壯幼苗于組培瓶中，移至自然環(huán)境條件下3天，打開組培瓶蓋3天馴化練苗，經(jīng)過馴化煉苗一周后移栽入滅菌處理的椰殼土中，上覆薄膜，澆水，保持空氣濕度，I周后逐漸打開薄膜，直至幼苗成活。
[0014]進(jìn)一步，所述步驟3中切成的莖段長度為Icm ;所述步驟5、步驟6切塊為1cm2。
[0015]進(jìn)一步,所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+lmg/L6-BA+lmg/L2, 4-D+3mg/LNAA ;所述愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA2mg/L+2，4-D1.5L ;所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BAlmg/L+NAA0.2/L ;所述生根培養(yǎng)基為 1/2MS+0.02mg/LNAA。
[0016]本發(fā)明的有益效果是采用明日葉莖段作為繁殖材料成本低。

【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0018]本發(fā)明采用MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，配置不同植物生長物質(zhì)的組合:
[0019]愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+lmg/L6-BA+lmg/L2，4_D+3mg/LNAA；
[0020]愈傷組織增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2mg/L+2，4-D1.5L ；
[0021]叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+6-BAlmg/L+NAA0.2/L ；
[0022]生根誘導(dǎo):l/2MS+0.02mg/LNAA。
[0023]本發(fā)明按照以下步驟進(jìn)行:
[0024](I)以明日葉莖為外植體，用流水沖洗15_20min后，放入無菌操作臺上備用。
[0025](2)在接種室，超凈工作臺上用75%酒精浸泡外植體30s后取出，無菌水沖洗3次，放入0.1 %升汞溶液中消毒7min，無菌水沖洗7次。
[0026](3)用無菌濾紙吸干莖的水份，然后切成Icm長的莖段。
[0027](4)將莖段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于24°C培養(yǎng)箱中20001x光強(qiáng)下培養(yǎng)，光照條件為每天16小時光照，8小時黑暗，培養(yǎng)20-30天至莖段切口處長出愈傷組織團(tuán)并增大。
[0028](5)再將愈傷組織團(tuán)均勻切割為Icm2，轉(zhuǎn)接至愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度25°C左右，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)20-30天愈傷組織可增殖至6cm2左右。
[0029](6)將增殖的愈傷組織切割為Icm2大小，轉(zhuǎn)接于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C左右，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)15-20天后愈傷組織再分化產(chǎn)生叢生芽，30天后叢生芽生長良好。
[0030](7)將叢生芽基部的愈傷組織切除，分割為單個芽，將芽接種于生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度25°C左右，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)20天后芽基部分化產(chǎn)生根，生長良好，得到再生植株幼苗。
[0031](8)選取健壯幼苗于組培瓶中，移至自然環(huán)境條件下3天，打開組培瓶蓋3天馴化練苗，經(jīng)過馴化煉苗一周后移栽入滅菌處理的椰殼土中，上覆薄膜，注意澆水，保持空氣濕度，I周后逐漸打開薄膜，并減少澆水頻率，成活率可達(dá)94%以上。
[0032]本發(fā)明構(gòu)建了明日葉的新型繁育體系，打破了由于種子發(fā)芽率低而造成的生產(chǎn)瓶頸，為規(guī)?；a(chǎn)提供了條件。
[0033]以上所述僅是對本發(fā)明的較佳實(shí)施方式而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施方式所做的任何簡單修改，等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，其特征在于按照以下步驟進(jìn)行: (1)選取明日葉的莖，用流水沖洗，放入無菌操作臺上備用； (2)用75%酒精與水溶液浸泡，無菌水沖洗，放入0.1 %升汞溶液中消毒，之后再用無菌水沖洗； (3)用無菌濾紙吸干莖的水，然后切為莖段； (4)將莖段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于24°C培養(yǎng)箱中20001x光強(qiáng)下培養(yǎng)，光照條件為每天16小時光照，8小時黑暗，培養(yǎng)20-30天莖段切口處長出愈傷組織團(tuán)； (5)再將愈傷組織團(tuán)切塊，轉(zhuǎn)接至愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度25°C，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)20-30天對愈傷組織增殖； (6)將增殖的愈傷組織切塊，轉(zhuǎn)接于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)30天分化產(chǎn)生叢生芽； (7)將叢生芽基部的愈傷組織切除，分割為單個芽，將芽接種于生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度25°C，光照條件為16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度3000Lx，培養(yǎng)20天得到再生植株幼苗； (8)選取健壯幼苗于組培瓶中，移至自然環(huán)境條件下3天，打開組培瓶蓋3天馴化練苗，經(jīng)過馴化煉苗一周后移栽入滅菌處理的椰殼土中，上覆薄膜，澆水，保持空氣濕度，I周后逐漸打開薄膜，直至幼苗成活。
2.按照權(quán)利要求1所述明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，其特征在于:所述步驟3中切成的莖段長度為Icm ;所述步驟5、步驟6切塊為1cm2。
3.按照權(quán)利要求1所述明日葉莖段組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，其特征在于:所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+lmg/L6-BA+lmg/L2，4-D+3mg/LNAA ;所述愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA2mg/L+2, 4-D1.5L ;所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BAlmg/L+NAA0.2/L ;所述生根培養(yǎng)基為 1/2MS+0.02mg/LNAA。
【文檔編號】A01H4/00GK104126509SQ201410363146
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年7月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月28日
【發(fā)明者】羅充, 辛柯, 姚紅艷, 馮曉英, 陳顯剛, 吳濤, 羅開源, 趙敏 申請人:貴州師范大學(xué)