一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，屬于植物快繁【技術(shù)領(lǐng)域】，包括以下步驟：1)選取消毒滅菌處理后的1～2cm莖尖或帶芽莖段作為外植體；2)將外植體放置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)生叢芽，15～20天繁殖出大量叢生芽；3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖；4)經(jīng)生根培養(yǎng)后，直接放入育苗袋移植獲得種苗。本發(fā)明解決了美國(guó)紅樹(shù)莓苗無(wú)性繁殖存在的種苗攜帶病毒、品種退化、產(chǎn)量低等問(wèn)題,無(wú)需采集大量外植體來(lái)獲得無(wú)菌苗，且不采取激素混用而達(dá)到提高增殖率和減少變異的目的，省去了組培苗營(yíng)養(yǎng)缽移栽的環(huán)節(jié)，提高移栽成活率，與傳統(tǒng)繁殖方式相比，產(chǎn)量提高約90％，對(duì)緩解市場(chǎng)供需矛盾有積極意義。
【專利說(shuō)明】一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物快繁【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]樹(shù)莓(blue raspberry)又稱木莓、覆盆子,是薔薇科懸鉤子屬植物,多年生小灌木類，屬漿果類果樹(shù)，約有450多種，主要分布在北半球的寒帶、溫帶，少數(shù)分布在熱帶、亞熱帶和南半球。目前，世界樹(shù)莓發(fā)展很快，主要有:俄羅斯、美國(guó)、智利、澳大利亞、波蘭、加拿大、英國(guó)等30多個(gè)國(guó)家。在國(guó)際市場(chǎng)上被譽(yù)為黃金水果“水果之王”。特別是美國(guó)紅樹(shù)莓，由于色美味香，口感獨(dú)特，且對(duì)多種現(xiàn)代病具有良好的預(yù)防和治療效果，歐美人稱其為“貴族水果”。我國(guó)栽培歷史較晚，近兩年市場(chǎng)上較為多見(jiàn)。其果實(shí)為聚合漿果柔嫩多汁、色澤宜人、風(fēng)味獨(dú)特、營(yíng)養(yǎng)豐富，屬于不飽和脂肪酸，可促進(jìn)前列腺素分泌荷爾蒙。樹(shù)莓果經(jīng)榨汁后可以制成果醬、果汁、果酒、果凍等，也可廣泛應(yīng)用于醫(yī)療保健、化妝品等方面。樹(shù)莓栽培周期短、見(jiàn)效快、分枝多、產(chǎn)量高、生長(zhǎng)快、受益長(zhǎng)，經(jīng)濟(jì)效益顯著。隨著我國(guó)果樹(shù)業(yè)的發(fā)展，樹(shù)莓將成為第三代無(wú)污染的綠色保健型水果。紅樹(shù)莓常規(guī)的繁殖方法有分根法、分株法、扦插法和壓條法等。但上述繁殖方法繁殖速度慢，對(duì)母本材料要求高，用量大，還受到季節(jié)的限制，難以進(jìn)行規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)和優(yōu)良品種的大面積推廣。此外，目前運(yùn)用組織培養(yǎng)方法繁殖生產(chǎn)種苗的方法成本較高、培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，在育苗過(guò)程中采取激素，對(duì)種苗的變異性和存活率。因此，需要尋找一種新的成本低、時(shí)間短、無(wú)激素培養(yǎng)、成活率高的無(wú)性繁殖方法來(lái)擴(kuò)大美國(guó)紅樹(shù)莓繁殖量，進(jìn)行美國(guó)紅樹(shù)莓苗木的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，以滿足市場(chǎng)需求。本發(fā)明采用獨(dú)特的培養(yǎng)配方，解決了目前美國(guó)紅樹(shù)莓苗無(wú)性繁殖存在的種苗攜帶病毒、品種退化、有效產(chǎn)量低等問(wèn)題。本發(fā)明之方法高效、快速，周期短、繁殖率高、成本低廉，無(wú)需通過(guò)采集大量外植體來(lái)獲得無(wú)菌苗，且不采取激素混用而達(dá)到提高增殖率和減少變異的目的，省去了組培苗營(yíng)養(yǎng)缽移栽的環(huán)節(jié)，提高移栽成活率，與傳統(tǒng)繁殖方式相比，產(chǎn)量提高約90 %，完全實(shí)現(xiàn)了美國(guó)紅樹(shù)莓優(yōu)良品種種苗的規(guī)?；蜆?biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，對(duì)緩解美國(guó)紅樹(shù)莓的市場(chǎng)供需矛盾有積極意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明解決的問(wèn)題在于提供一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，本方法是一種周期短、繁殖率高、無(wú)激素培養(yǎng)、成本低廉的無(wú)病毒攜帶的育苗方法。
[0004]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
[0005]快速繁殖美國(guó)紅樹(shù)莓的方法，包括以下步驟:
[0006]I)選取消毒滅菌處理后的美國(guó)紅樹(shù)莓的莖尖或帶芽莖段作為外植體:所截取的外植體為I?2cm莖尖或帶芽莖段；
[0007]2)將美國(guó)紅樹(shù)莓外植體放置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中直接誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生叢芽:將外植體轉(zhuǎn)接至叢生芽誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)基，15?20天繁殖出大量叢生芽；
[0008]3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖:將叢生芽轉(zhuǎn)接至生根壯苗培養(yǎng)基，約20天后，可獲得高7?9cm、根系發(fā)達(dá)、根莖粗壯的美國(guó)紅樹(shù)莓苗；
[0009]4)經(jīng)生根培養(yǎng)后，直接放入育苗袋移植獲得美國(guó)紅樹(shù)莓種苗
[0010]所述步驟I)中消毒滅菌方法是在無(wú)菌超凈臺(tái)中，將經(jīng)洗滌劑清洗過(guò)的I?2cm莖尖或帶芽莖段，依次在體積濃度為80%?90%的酒精中消毒處理30秒、在質(zhì)量濃度為1%的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之后用去離子水清洗2?3次。
[0011]所述步驟2)中叢生芽誘導(dǎo)劑增殖培養(yǎng)基的配置為MS固體培養(yǎng)基添加0.8?
1.0mg/Kg6-芐氨基嘌呤、25?35g/Kg蔗糖和4?6g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度23?25°C，相對(duì)濕度75?90%，光照時(shí)間10?12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000?5000Lx。
[0012]所述步驟3)中所述生根壯苗培養(yǎng)基為1/2MS固體培養(yǎng)基添加0.2?0.5mg/Kg乙酸、50?60g/Kg香蕉汁、165?200g/Kg番爺汁、8?12g/Kg活性炭、10?25g/Kg果糖和4?6g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度23?25°C，相對(duì)濕度75?90%，光照時(shí)間10?12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000?5000Lx。
[0013]所述步驟4)中的生根苗移至室外散射光下鍛煉6?10天后，取出生根苗，用清水將苗上培養(yǎng)基洗凈，放入質(zhì)量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I?2分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土 = 1:1，其中該混合基質(zhì)中含有質(zhì)量比為5%的珍珠巖，即得紅樹(shù)莓種苗。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果:
[0015]本發(fā)明采用獨(dú)特的培養(yǎng)配方，解決了目前美國(guó)紅樹(shù)莓苗無(wú)性繁殖存在的種苗攜帶病毒、品種退化、有效產(chǎn)量低等問(wèn)題。本發(fā)明之方法高效、快速，周期短、繁殖率高、成本低廉，無(wú)需通過(guò)采集大量外植體來(lái)獲得無(wú)菌苗，且不采取激素混用而達(dá)到提高增殖率和減少變異的目的，省去了組培苗營(yíng)養(yǎng)缽移栽的環(huán)節(jié)，提高移栽成活率，與傳統(tǒng)繁殖方式相比，產(chǎn)量提高約90%，完全實(shí)現(xiàn)了美國(guó)紅樹(shù)莓優(yōu)良品種種苗的規(guī)模化和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，對(duì)緩解美國(guó)紅樹(shù)莓的市場(chǎng)供需矛盾有積極意義。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。
[0017]實(shí)施例1
[0018]一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0019]I)將經(jīng)洗滌劑清洗過(guò)的2cm莖尖，依次在體積濃度為80%的酒精中消毒處理30秒、在質(zhì)量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之后用去離子水清洗2次。
[0020]2)處理后的莖尖轉(zhuǎn)接至叢生芽誘導(dǎo)劑增殖培養(yǎng)基中培植:在MS固體培養(yǎng)基添加0.8mg/Kg6-芐氨基嘌呤、25/Kg果糖和4g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度23°C，相對(duì)濕度75%，光照時(shí)間10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000LX。
[0021]3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖:將幼苗轉(zhuǎn)接至1/2MS固體培養(yǎng)基添加0.2mg/Kg乙酸、50/Kg香蕉汁、165/Kg番茄汁、8g/Kg活性炭、10/Kg果糖和4g/Kg瓊脂的生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度23°C，相對(duì)濕度75%，光照時(shí)間10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000LX，約30天后，可獲得高6cm、根系發(fā)達(dá)、根莖粗壯的美國(guó)紅樹(shù)莓苗。
[0022]4)生根苗移至室外散射光下鍛煉6天后，取出生根苗，用清水將苗上培養(yǎng)基洗凈，放入質(zhì)量濃度為I %的百菌清溶液中消毒2分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質(zhì)中含有質(zhì)量比為5%的珍珠巖，即得美國(guó)紅樹(shù)莓種苗
[0023]實(shí)施例2
[0024]一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0025]I)將經(jīng)洗滌劑清洗過(guò)的Icm帶芽莖段，依次在體積濃度為90%的酒精中消毒處理30秒、在質(zhì)量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之后用去離子水清洗2次。
[0026]2)處理后的莖尖轉(zhuǎn)接至叢生芽誘導(dǎo)劑增殖培養(yǎng)基中培植:在MS固體培養(yǎng)基添加
0.9mg/Kg6-芐氨基嘌呤、28/Kg果糖和5g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度25°C，相對(duì)濕度85%，光照時(shí)間11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度4000LX。
[0027]3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖:將幼苗轉(zhuǎn)接至1/2MS固體培養(yǎng)基添加0.3mg/Kg乙酸、50/Kg香蕉汁、185/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、15/Kg蔗糖和5g/Kg瓊脂的生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25°C，相對(duì)濕度90%，光照時(shí)間11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度4000LX，約30天后，可獲得高6cm、根系發(fā)達(dá)、根莖粗壯的美國(guó)紅樹(shù)莓苗。
[0028]4)生根苗移至室外散射光下鍛煉8天后，取出生根苗，用清水將苗上培養(yǎng)基洗凈，放入質(zhì)量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質(zhì)中含有質(zhì)量比為5%的珍珠巖，即得紅樹(shù)莓種苗
[0029]實(shí)施例3
[0030]一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0031]I)將經(jīng)洗滌劑清洗過(guò)的Icm帶芽莖段，依次在體積濃度為90%的酒精中消毒處理30秒、在質(zhì)量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之后用去離子水清洗2次。
[0032]2)處理后的莖尖轉(zhuǎn)接至叢生芽誘導(dǎo)劑增殖培養(yǎng)基中培植:在MS固體培養(yǎng)基添加Img/Kg6-芐氨基嘌呤、30/Kg果糖和6g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度23°C，相對(duì)濕度85 %，光照時(shí)間11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000Lx。
[0033]3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖:將幼苗轉(zhuǎn)接至1/2MS固體培養(yǎng)基添加0.3mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、180/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、12/Kg果糖和4g/Kg瓊脂的生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度23°C，相對(duì)濕度85%，光照時(shí)間12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000LX，約30天后，可獲得高6cm、根系發(fā)達(dá)、根莖粗壯的美國(guó)紅樹(shù)莓苗。
[0034]4)生根苗移至室外散射光下鍛煉6天后，取出生根苗，用清水將苗上培養(yǎng)基洗凈，放入質(zhì)量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質(zhì)中含有質(zhì)量比為5%的珍珠巖，即得紅樹(shù)莓種苗
[0035]實(shí)施例4
[0036]一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0037]I)將經(jīng)洗滌劑清洗過(guò)的2cm帶芽莖段，依次在體積濃度為80%的酒精中消毒處理30秒、在質(zhì)量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之后用去離子水清洗2次。
[0038]2)處理后的莖尖轉(zhuǎn)接至叢生芽誘導(dǎo)劑增殖培養(yǎng)基中培植:在MS固體培養(yǎng)基添加
0.8mg/Kg6-芐氨基嘌呤、30/Kg果糖和6g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度23°C，相對(duì)濕度90%，光照時(shí)間12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度5000Lx。
[0039]3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖:將幼苗轉(zhuǎn)接至1/2MS固體培養(yǎng)基添加0.2mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、200/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、15/Kg果糖和4g/Kg瓊脂的生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25°C，相對(duì)濕度90%，光照時(shí)間12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度5000LX，約30天后，可獲得高8cm、根系發(fā)達(dá)、根莖粗壯的美國(guó)紅樹(shù)莓苗。
[0040]4)生根苗移至室外散射光下鍛煉8天后，取出生根苗，用清水將苗上培養(yǎng)基洗凈，放入質(zhì)量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質(zhì)中含有質(zhì)量比為5%的珍珠巖，即得紅樹(shù)莓種苗。
[0041]實(shí)施例5
[0042]一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0043]I)將經(jīng)洗滌劑清洗過(guò)的2cm莖尖，依次在體積濃度為90%的酒精中消毒處理30秒、在質(zhì)量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之后用去離子水清洗2次。
[0044]2)處理后的莖尖轉(zhuǎn)接至叢生芽誘導(dǎo)劑增殖培養(yǎng)基中培植:在MS固體培養(yǎng)基添加
0.8mg/Kg6-芐氨基嘌呤、25/Kg果糖和6g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度25°C，相對(duì)濕度75%，光照時(shí)間12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度5000Lx。
[0045]3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖:將幼苗轉(zhuǎn)接至1/2MS固體培養(yǎng)基添加0.5mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、200/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、10/Kg果糖和6g/Kg瓊脂的生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25°C，相對(duì)濕度85%，光照時(shí)間10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度5000LX，約30天后，可獲得高8cm、根系發(fā)達(dá)、根莖粗壯的美國(guó)紅樹(shù)莓苗。
[0046]4)生根苗移至室外散射光下鍛煉6天后，取出生根苗，用清水將苗上培養(yǎng)基洗凈，放入質(zhì)量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質(zhì)中含有質(zhì)量比為5%的珍珠巖，即得紅樹(shù)莓種苗。
【權(quán)利要求】
1.一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)選取消毒滅菌處理后的美國(guó)紅樹(shù)莓的莖尖或帶芽莖段作為外植體； 2)將美國(guó)紅樹(shù)莓外植體放置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中直接誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生叢芽； 3)切割叢生芽放置于生根壯苗培養(yǎng)基中使其大量繁殖。 4)經(jīng)生根培養(yǎng)后，直接放入育苗袋移植獲得美國(guó)紅樹(shù)莓種苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟I)美國(guó)紅樹(shù)莓外植體進(jìn)行消毒滅菌處理:在無(wú)菌超凈臺(tái)中，將經(jīng)洗滌劑清洗過(guò)的I?2cm莖尖或帶芽莖段，依次在體積濃度為80%?90%的酒精中消毒處理30秒、在質(zhì)量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之后用去離子水清洗2?3次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟2)中所述叢生芽誘導(dǎo)劑培養(yǎng)基是MS固體培養(yǎng)基添加0.8?1.0mg/Kg6-芐氨基嘌呤、25?35g/Kg果糖和4?6g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度23?25°C，相對(duì)濕度75?90%，光照時(shí)間10?12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000?5000Lx。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟3)中所述生根壯苗培養(yǎng)基的配置為:1/2MS固體培養(yǎng)基添加0.2?0.5mg/Kg乙酸、50?60g/Kg香蕉汁、165?200g/Kg番爺汁、8?12g/Kg活性炭、10?25g/Kg果糖和4?6g/Kg瓊脂；培養(yǎng)條件為:溫度23?25°C，相對(duì)濕度75?90%，光照時(shí)間10?12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000?5000Lx。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種美國(guó)紅樹(shù)莓苗的無(wú)激素培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟4)中的生根苗移至室外散射光下鍛煉6?10天后，取出生根苗，用清水將苗上培養(yǎng)基洗凈，放入質(zhì)量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I?2分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土 = 1:1，其中該混合基質(zhì)中含有質(zhì)量比為5%的珍珠巖，即得紅樹(shù)莓種苗。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104170731SQ201410258289
【公開(kāi)日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年6月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月11日
【發(fā)明者】馬純 申請(qǐng)人:陜西恒富源林業(yè)有限公司