一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，包括以下步驟：（1）選材；（2）莖段消毒及芽啟動萌發(fā)培養(yǎng)；（3）無菌試管苗增殖培養(yǎng)；（4）生根培養(yǎng)；（5）煉苗移栽。本發(fā)明所述的獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法通過改良基本培養(yǎng)基及成分，同時輔助合理的培養(yǎng)方法，使得獼猴桃的外植體繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良種化程度高，以使得最終培育得到的獼猴桃的果實質(zhì)量及營養(yǎng)價值高，口感好，有利于獼猴桃的大力發(fā)展和推廣應(yīng)用。
【專利說明】一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，屬于植物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]獼猴桃的莖枝上容易產(chǎn)生不定根，跟上容易產(chǎn)生不定芽，適于獼猴桃繁殖的方式有很多種，如，扦插繁殖、壓條繁殖、嫁接繁殖和種子繁殖等。上述繁殖方法具有繁殖周期長、易感染真菌性病害、良種化程度降低，而劣質(zhì)種苗的使用又導(dǎo)致獼猴桃的果實質(zhì)量及營養(yǎng)價值降低，同時口感下降，這在一定程度上約束了獼猴桃的大力發(fā)展和推廣應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種培育周期短、可有效降低獼猴桃的染病幾率，提高其果實質(zhì)量和營養(yǎng)價值的獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法。
[0004]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
一種獼猴桃的增 殖繼代培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟:
(1)選材:選取生長健壯的基生枝用清水沖洗2-3h，然后用5%的多菌靈噴灑選取的枝條，用濾紙吸干莖段表面水分后備用；
(2)莖段消毒及芽啟動萌發(fā)培養(yǎng):將步驟(1)處理過的莖段置于超凈工作臺上，用75%的酒精消毒10-15s，然后用無菌水清洗3-5次,然后用0.1%的升汞滅菌浸泡5-8min，最后用無菌水沖洗3-5次后，用濾紙吸干水分，剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，然后，將莖段的基部插入芽啟動培養(yǎng)基上，每瓶接種3-5外植體，誘導(dǎo)頂芽和腋芽萌發(fā)，在溫度為20-22°C，光照強度1500— 2000 lx，光照時間14 h / d的條件下，進行15_20d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖伸長，40-50d后形成無菌試管苗；
(3)無菌試管苗增殖培養(yǎng):將步驟(2)所述的無菌試管苗切成1-2個腋芽的莖段接種在試管苗增殖繼代培養(yǎng)基上，每隔2-3周繼代一次，獲得大量無菌試管苗；
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的無菌試管苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)25-30d，至根長至2.0cm以上時，進行煉苗移栽；
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的試管苗首先在培養(yǎng)室適應(yīng)ld，然后在溫室條件下，清水洗滌3-5次后移栽到裝有混合育苗基質(zhì)的穴盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗10-15d后移栽進行常規(guī)管理。
[0005]進一步，所述的試管苗增殖繼代培養(yǎng)基包括改良MS +1.0~2.0mgl^BA+l.0~
1.5mgL 1KT + 0.1 ~0.3mgL 1NAA +3.0 ~3.5gL 1Phytagel + 2-3 mgL 1GA3+ 20gL 1 鹿糖,且pH值為5.8。
[0006]更進一步，所述的改良MS包括常量營養(yǎng)兀素、微量營養(yǎng)兀素和有機試劑。
[0007]其中，所述的常量營養(yǎng)元素的組分和其對應(yīng)的濃度為:硝酸鉀1900mg/L ;硫酸銨1650 mg/L ;七水硫酸鎂350 mg/L ;二水氯化韓400mg/L ;無水磷酸二氫鉀150mg/L ;乙二胺四乙酸二鈉35.6 mg/L ;七水硫酸亞鐵25.8 mg/L。[0008]所述的微量營養(yǎng)元素的組分和其對應(yīng)的濃度為:四水硫酸錳20.5mg/L ;硫酸鋅9.0mg/L ;硼酸 6.5 mg/L ;碘化鉀 0.5mg/L ;鑰酸鈉 0.3mg/L ;氯化鈷 0.05 mg/L，硫酸銅 0.02mg/L,
而所述的有機試劑的組分和其對應(yīng)的濃度為:鹽酸硫胺素10.0 mg/L ;煙酸1.5 mg/L ；鹽酸批B多醇1.5mg/L ;肌醇80.0 mg/L。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所述的獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法通過改良基本培養(yǎng)基及成分，同時輔助合理的培養(yǎng)方法，使得獼猴桃的外植體繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良種化程度高，以使得最終培育得到的獼猴桃的果實質(zhì)量及營養(yǎng)價值高，口感好，有利于獼猴桃的大力發(fā)展和推廣應(yīng)用。
【具體實施方式】
[0010]下面將結(jié)合具體實施例，詳細說明本發(fā)明的【具體實施方式】:
在本實施方式中，所有實施例中米用的改良MS均包括常量營養(yǎng)兀素、微量營養(yǎng)兀素和有機試劑，
且所述的常量營養(yǎng)元素的組分和其對應(yīng)的濃度為:硝酸鉀1900mg/L ;硫酸銨1650 mg/L ;七水硫酸鎂350 mg/L ;二水氯化鈣400mg/L ;無水磷酸二氫鉀150mg/L ;乙二胺四乙酸二鈉35.6 mg/L ;七水硫酸亞鐵25.8 mg/L。
[0011]所述的微量營養(yǎng)元素的組分和其對應(yīng)的濃度為:四水硫酸錳20.5mg/L ;硫酸鋅 g/L ;碘化鉀 0.5mg/L ;鑰酸鈉 0.3mg/L ;氯化鈷 0.05 mg/L，硫酸銅 0.02mg/L,
而所述的有機試劑的組分和其對應(yīng)的濃度為:鹽酸硫胺素10.0 mg/L ;煙酸1.5 mg/L ；鹽酸批B多醇1.5mg/L ;肌醇80.0 mg/L。
[0012]實施例1:
一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)選材:選取生長健壯的基生枝用清水沖洗2h，然后用5%的多菌靈噴灑選取的枝條，用濾紙吸干莖段表面水分后備用；
(2)莖段消毒及芽啟動萌發(fā)培養(yǎng):將步驟(1)處理過的莖段置于超凈工作臺上，用75%的酒精消毒10s，然后用無菌水清洗3次，然后用0.1%的升汞滅菌浸泡5min，最后用無菌水沖洗3次后，用濾紙吸干水分，剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，然后，將莖段的基部插入芽啟動培養(yǎng)基上，每瓶接種3個外植體，誘導(dǎo)頂芽和腋芽萌發(fā)，在溫度為20-22°C，光照強度1500—2000 lx，光照時間14 h / d的條件下，進行15d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖伸長，40d后形成無菌試管苗；
(3)無菌試管苗增殖培養(yǎng):將步驟(2)所述的無菌試管苗切成1-2個腋芽的莖段接種在試管苗增殖繼代培養(yǎng)基上，每隔2周繼代一次，獲得大量無菌試管苗，所述的試管苗增殖繼代培養(yǎng)基包括改良 MS +1.0mgL^1BA+1.0mgL^1KT + 0.1mgL^1NAA +3.0gL^phytagel + 2IiigL-1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值為 5.8 ；
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的無菌試管苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)25d，至根長至2.0cm以上時，進行煉苗移栽；
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的試管苗首先在培養(yǎng)室適應(yīng)ld，然后在溫室條件下，清水洗滌3次后移栽到裝有混合育苗基質(zhì)的穴盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗IOd后移栽進行常規(guī)管理。
[0013]利用實施例1所述的獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法對獼猴桃的外植體進行增殖培養(yǎng)，增殖繼代培養(yǎng)頻率為2周繼代一次，其新生苗按1:15-18的比例增長，且成活率為94.2%ο
[0014]實施例2:
一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)選材:選取生長健壯的基生枝用清水沖洗3h，然后用5%的多菌靈噴灑選取的枝條，用濾紙吸干莖段表面水分后備用；
(2)莖段消毒及芽啟動萌發(fā)培養(yǎng):將步驟(1)處理過的莖段置于超凈工作臺上，用75%的酒精消毒15s，然后用無菌水清洗5次，然后用0.1%的升汞滅菌浸泡8min，最后用無菌水沖洗5次后，用濾紙吸干水分，剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，然后，將莖段的基部插入芽啟動培養(yǎng)基上，每瓶接種5外植體，誘導(dǎo)頂芽和腋芽萌發(fā)，在溫度為20-22°C，光照強度1500—2000 lx，光照時間14 h / d的條件下，進行20d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖伸長,50d后形成無菌試管苗；
(3)無菌試管苗增殖培養(yǎng):將步驟(2)所述的無菌試管苗切成1-2個腋芽的莖段接種在試管苗增殖繼代培養(yǎng)基上，每隔3周繼代一次，獲得大量無菌試管苗，所述的試管苗增殖繼代培養(yǎng)基包括改良 MS +2.0mgL^1BA+1.5mgL_1KT + 0.3mgL_1NAA +3.SgI^phytagel + 3IiigI^1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值為 5.8 ；
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的無菌試管苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)30d，至根長至2.0cm以上時，進行煉苗移栽；
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的試管苗首先在培養(yǎng)室適應(yīng)ld，然后在溫室條件下，清水洗滌5次后移栽到裝有混合育苗基質(zhì)的穴盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗15d后移栽進行常規(guī)管理。
[0015]利用實施例2所述的獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法對獼猴桃的外植體進行增殖培養(yǎng)，增殖繼代培養(yǎng)頻率為2.5周繼代一次，其新生苗按1:16-18的比例增長，且成活率為92.6%。
[0016]實施例3:
一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)選材:選取生長健壯的基生枝用清水沖洗2h，然后用5%的多菌靈噴灑選取的枝條，用濾紙吸干莖段表面水分后備用；
(2)莖段消毒及芽啟動萌發(fā)培養(yǎng):將步驟(1)處理過的莖段置于超凈工作臺上，用75%的酒精消毒12s，然后用無菌水清洗4次，然后用0.1%的升汞滅菌浸泡6min，最后用無菌水沖洗4次后，用濾紙吸干水分，剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，然后，將莖段的基部插入芽啟動培養(yǎng)基上，每瓶接種4外植體，誘導(dǎo)頂芽和腋芽萌發(fā)，在溫度為20-22°C，光照強度1500—2000 lx，光照時間14 h / d的條件下，進行18d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖伸長，45d后形成無菌試管苗；
(3)無菌試管苗增殖培養(yǎng):將步驟(2)所述的無菌試管苗切成1-2個腋芽的莖段接種在試管苗增殖繼代培養(yǎng)基上，每隔2周繼代一次，獲得大量無菌試管苗，所述的試管苗增殖繼代培養(yǎng)基包括改良 MS +1.SmgL^BA+l.2mgL_1KT + 1.2mgL_1NAA +3.2gr1phytagel + 2.5IiigI^1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值為 5.8 ；
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的無菌試管苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)25-30d，至根長至2.0cm以上時，進行煉苗移栽；
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的試管苗首先在培養(yǎng)室適應(yīng)ld，然后在溫室條件下，清水洗滌4次后移栽到裝有混合育苗基質(zhì)的穴盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗12d后移栽進行常規(guī)管理。
[0017]利用實施例3所述的 獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法對獼猴桃的外植體進行增殖培養(yǎng)，增殖繼代培養(yǎng)頻率為3周繼代一次，其新生苗按1:18-20的比例增長，且成活率為94.5%ο
[0018]本發(fā)明所述的獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法通過改良基本培養(yǎng)基及成分，同時輔助合理的培養(yǎng)方法，使得獼猴桃的外植體繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高達90%以上，不易感染真菌性病害、良種化程度高，以使得最終培育得到的獼猴桃的果實質(zhì)量及營養(yǎng)價值高，口感好，有利于獼猴桃的大力發(fā)展和推廣應(yīng)用。
[0019]以上已以較佳實施例公開了本發(fā)明，然其并非用以限制本發(fā)明，凡采用等同替換或者等效變換方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)選材:選取生長健壯的基生枝用清水沖洗2-3h，然后用5%的多菌靈噴灑選取的枝條，用濾紙吸干莖段表面水分后備用； (2)莖段消毒及芽啟動萌發(fā)培養(yǎng):將步驟(1)處理過的莖段置于超凈工作臺上，用75%的酒精消毒10-15s，然后用無菌水清洗3-5次,然后用0.1%的升汞滅菌浸泡5-8min，最后用無菌水沖洗3-5次后，用濾紙吸干水分，剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，然后，將莖段的基部插入芽啟動培養(yǎng)基上，每瓶接種3-5外植體，誘導(dǎo)頂芽和腋芽萌發(fā)，在溫度為20-22°C，光照強度1500— 2000 lx，光照時間14 h / d的條件下，進行15_20d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖伸長，40-50d后形成無菌試管苗； (3)無菌試管苗增殖培養(yǎng):將步驟(2)所述的無菌試管苗切成1-2個腋芽的莖段接種在試管苗增殖繼代培養(yǎng)基上，每隔2-3周繼代一次，獲得大量無菌試管苗； (4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的無菌試管苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)25-30d，至根長至2.0cm以上時，進行煉苗移栽； (5)煉苗移栽:將步驟 (4)得到的試管苗首先在培養(yǎng)室適應(yīng)ld，然后在溫室條件下，清水洗滌3-5次后移栽到裝有混合育苗基質(zhì)的穴盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗10-15d后移栽進行常規(guī)管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的試管苗增殖繼代培養(yǎng)基包括改良MS +1.0~2.0mgL^1BA+1.0~1.5mgL_1KT + 0.1~0.3mgL_1NAA+3.0 ~3.5gL_1phytagel + 2-3 mgL_1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值為 5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的改良MS包括常量營養(yǎng)兀素、微量營養(yǎng)兀素和有機試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的常量營養(yǎng)元素的組分和其對應(yīng)的濃度為:硝酸鉀1900mg/L ;硫酸銨1650 mg/L ;七水硫酸鎂350mg/L ;二水氯化鈣400mg/L ;無水磷酸二氫鉀150mg/L ;乙二胺四乙酸二鈉35.6 mg/L ;七水硫酸亞鐵25.8 mg/L ο
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的微量營養(yǎng)元素的組分和其對應(yīng)的濃度為:四水硫酸錳20.5mg/L ;硫酸鋅9.0mg/L ;硼酸6.5 mg/L ;碘化鉀0.5mg/L ;鑰酸鈉0.3mg/L ;氯化鈷0.05 mg/L,硫酸銅0.02 mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種獼猴桃的增殖繼代培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的有機試劑的組分和其對應(yīng)的濃度為:鹽酸硫胺素10.0 mg/L ;煙酸1.5 mg/L ;鹽酸吡哆醇1.5mg/L ;肌醇 80.0 mg/L ο
【文檔編號】A01H4/00GK104012410SQ201410250424
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月9日
【發(fā)明者】趙蘭 申請人:趙蘭