煙草專用微生物肥及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種新型的煙草專用微生物肥，由復(fù)合菌劑5-25重量份和載體75-95重量份組成，所述復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌1.6-8億cfu/g、地衣芽孢桿菌1.6-8億cfu/g、哈茨木霉0.4-2.0億cfu/g和刺孢吸水鏈霉菌0.4-2.0億cfu/g，所述載體為菜籽餅、豆粕餅和芝麻餅經(jīng)過微生物發(fā)酵、腐熟后，干燥過篩后的粉狀物。所述微生物肥中含有拮抗真菌致病菌菌株、防治土壤病原菌繁殖菌株、改善土壤環(huán)境菌株等，所述載體為經(jīng)過發(fā)酵處理的三餅肥。本發(fā)明還提供所述微生物肥的制備方法。本發(fā)明提供的煙草專用微生物肥為粉劑，能吸水保濕，施用時(shí)主要作為底肥，可增加土壤肥力，協(xié)助農(nóng)作物營養(yǎng)吸收，預(yù)防多種農(nóng)作物病害，有效提高煙葉品質(zhì)和產(chǎn)量。
【專利說明】煙草專用微生物肥及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)用肥領(lǐng)域，具體地說，涉及一種煙草專用微生物肥及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]農(nóng)業(yè)是國民經(jīng)濟(jì)的基礎(chǔ)產(chǎn)業(yè)，農(nóng)業(yè)的發(fā)展關(guān)系到國民經(jīng)濟(jì)的全局。同時(shí)，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)周期性長，受客觀環(huán)境的影響比較大，因此國家對(duì)農(nóng)業(yè)的發(fā)展非常重視，對(duì)從事農(nóng)業(yè)科技研究、開發(fā)、生產(chǎn)經(jīng)營等單位的審批往往要經(jīng)歷一個(gè)較長過程。湖南泰谷生物科技股份有限公司在正式成立農(nóng)用微生物研究院之前，就已經(jīng)開始從事相關(guān)農(nóng)用微生物方面的研發(fā)工作。
[0003]湖南是全國煙葉生產(chǎn)大省，高附加值農(nóng)業(yè)是湖南最重要的農(nóng)業(yè)發(fā)展方向。長期以來，由于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大量使用化肥、化學(xué)農(nóng)藥及殺菌劑等化學(xué)物質(zhì)，使得土壤結(jié)構(gòu)不斷遭到破壞，土壤有機(jī)質(zhì)得不到補(bǔ)充，土壤微生態(tài)環(huán)境失去平衡，從而使土壤板結(jié)嚴(yán)重，保水能力大大降低，土壤病原微生物大量繁殖，特別是煙草種植業(yè)受到特定的地理?xiàng)l件和種植制度的限制以及單一計(jì)劃市場的制約，長期連茬種植，病、蟲危害嚴(yán)重，煙葉品質(zhì)下降，煙農(nóng)不得不加大用肥用藥量，由此形成惡性循環(huán)。食用了含有大量有害物質(zhì)的農(nóng)產(chǎn)品，給人們的健康帶來嚴(yán)重地危害。因此，如何充分利用高科技手段，生產(chǎn)和應(yīng)用高效生物有機(jī)肥、高效生物菌劑和高效生物農(nóng)藥，對(duì)于增進(jìn)人民身體健康，促進(jìn)社會(huì)發(fā)展進(jìn)步顯得尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種能夠有效防止煙草生長中病害滋生，減少農(nóng)藥和化肥施用、且促進(jìn)煙草的生長和品質(zhì)提高的新型煙草專用微生物肥。
[0005]本發(fā)明的另 一目的是提供所述微生物肥的制備方法及應(yīng)用。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種煙草專用微生物肥由復(fù)合菌劑5-25重量份和載體75-95重量份組成。所述復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)1.6-8 億 cfu/g、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) 1.6-8 億 cfu/g、哈茨木霉(Trichoderma harzianum) 0.4-2.0 億 cfu/g 和刺抱吸水鏈霉菌(Streptomyceshygrospinosus) 0.4-2.0億cfu/g ;所述載體為菜籽餅、豆柏餅和芝麻餅經(jīng)過微生物發(fā)酵、腐熟后，干燥過篩后的粉狀物。
[0007]優(yōu)選地，所述微生物肥由復(fù)合菌劑10-20重量份和載體80-90重量份組成。所述復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌1.6-6.4億cfu/g、地衣芽孢桿菌1.6-6.4億cfu/g、哈茨木霉0.4-1.6億cfu/g和刺孢吸水鏈霉菌0.4-1.6億cfu/g。
[0008]更優(yōu)選地，所述微生物肥由復(fù)合菌劑15重量份和載體85重量份組成。所述復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌約4.8億cfu/g、地衣芽孢桿菌約4.8億cfu/g、哈茨木霉約1.2億cfu/g和刺孢吸水鏈霉菌約1.2億cfu/g。
[0009]前述的微生物肥，用于發(fā)酵菜籽餅、豆柏餅和芝麻餅的微生物包括枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、哈茨木霉和地衣芽孢桿菌，四種微生物的活菌數(shù)比為4:1:0.5:4。
[0010]前述的微生物肥，所述枯草芽孢桿菌的保藏編號(hào)為ACCC10118、地衣芽孢桿菌的保藏編號(hào)為ACCC10613、哈茨木霉的保藏編號(hào)為ACCC31707、刺孢吸水鏈霉菌的保藏編號(hào)為ACCC40018。
[0011]ACCC代表中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心。
[0012]本發(fā)明提供的煙草專用微生物肥為粉劑。
[0013]本發(fā)明還提供所述微生物肥的制備方法，包括如下步驟:
[0014](I)復(fù)合菌劑的制備
[0015]1.芽孢桿菌混合孢子粉的制備:將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌原始菌種在無菌條件下分別依次進(jìn)行斜面培養(yǎng)、搖床培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)后，將得到的發(fā)酵液按等重量比混合，經(jīng)過濃縮干燥制備成芽孢桿菌混合孢子粉；
[0016]I1.哈茨木霉孢子粉的制備:將哈茨木霉原始菌種在無菌條件下分別依次進(jìn)行斜面培養(yǎng)、搖床培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、固體發(fā)酵產(chǎn)孢后，將得到的完全產(chǎn)孢的培養(yǎng)基分別浸在清水中制成孢子懸浮液，從而得到哈茨木霉孢子懸浮液，然后將得到的哈茨木霉孢子懸浮液濃縮干燥制備成哈茨木霉孢子粉；
[0017]II1.刺孢吸水鏈霉菌菌粉的制備:將刺孢吸水鏈霉菌原始菌種在無菌條件下分別依次進(jìn)行斜面培養(yǎng)、搖床培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)后，經(jīng)過濃縮干燥制備成刺孢吸水鏈霉菌菌粉；
[0018]IV.將上述制得的芽孢桿菌混合孢子粉、哈茨木霉孢子粉、刺孢吸水鏈霉菌菌粉按比例混合，即得復(fù)合菌劑；
[0019](2)載體的制備`
[0020]將菜籽餅、豆柏餅、芝麻餅和發(fā)酵專用復(fù)合菌劑按8:8:8:1的重量比混勻，調(diào)節(jié)水分至50%-60%，堆高1.0-1.5米，堆慪40-60天；
[0021]發(fā)酵初始時(shí)覆蓋薄膜，待發(fā)酵堆中心溫度在50°C以上時(shí)撤去薄膜，當(dāng)發(fā)酵堆中心溫度超過65°C時(shí)用翻堆機(jī)翻堆，發(fā)酵前25天適當(dāng)補(bǔ)水，使得發(fā)酵堆水分維持在50%-60% ;如此反復(fù)操作，待發(fā)酵堆顏色變咖啡色或黑色，同時(shí)發(fā)酵堆溫度降至40°C，水含量在30%以下結(jié)束發(fā)酵，將發(fā)酵好的餅肥干燥、粉碎、過篩，即得載體；其中，發(fā)酵專用復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌約4億cfu/g、釀酒酵母約I億cfu/g、哈茨木霉約0.5cfu億/g和地衣芽孢桿菌約4億cfu/g ；
[0022](3)煙草專用微生物肥的制備:按比例稱取復(fù)合菌劑和載體，混勻后即得煙草專用微生物肥。
[0023]具體地，上述步驟1、I1、III為:
[0024]1.芽孢桿菌混合孢子粉的制備:
[0025]a.斜面培養(yǎng):將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，原始菌種在無菌條件下分別接種于斜面培養(yǎng)基上，在28 ±2 °C條件下培養(yǎng)36-48小時(shí)；
[0026]b.搖床培養(yǎng):將步驟a培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于種子培養(yǎng)基中，在pH6.5-7.0、30°C條件下，140-160r/min 搖床培養(yǎng) 12-18 小時(shí)；
[0027]c.發(fā)酵罐培養(yǎng):將步驟b培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在pH7.5-8.0、罐壓0.5kg、30°C、通風(fēng)量1:0.8-1.1條件下，培養(yǎng)48-56小時(shí)后，活菌數(shù)大于1.0X109cfU/mL，80%菌體成為芽孢時(shí)下罐，得到發(fā)酵液；
[0028]d.將步驟c中得到的發(fā)酵液按等重量比混合，經(jīng)過濃縮干燥制備成芽孢桿菌混合孢子粉。
[0029]其中，步驟a中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:葡萄糖15g、魚蛋白胨5g、酵母膏5g、瓊脂15g和水1000mL ;步驟b中使用的種子培養(yǎng)基配方如下:葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆餅粉5g、KH2PO40.5g、MgSO40.2g和水1000mL ;步驟c中使用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:玉米粉26kg、豆餅粉16kg、硫酸銨4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg和消泡劑50mL，加水至600L。
[0030]I1.哈茨木霉孢子粉的制備:
[0031]e.將哈茨木霉原始菌種在無菌條件下分別接種于斜面培養(yǎng)基上，在28±2°C條件下培養(yǎng)48小時(shí)；
[0032]f.搖床培養(yǎng):將步驟e培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于種子培養(yǎng)基中，在pH6.5-6.8、30°C條件下，160-200r/min搖床培養(yǎng)約24小時(shí)；
[0033]g.發(fā)酵罐培養(yǎng):將步驟f培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基，在ρΗ6.5-6.8、罐壓0.5kg、27-28°C、通風(fēng)量為1:0.6-0.8，在培養(yǎng)約48小時(shí)后，菌絲體占總體積的20%時(shí)終止發(fā)酵，進(jìn)行固體發(fā)酵產(chǎn)孢；
[0034]h..固體發(fā)酵產(chǎn)孢:將步驟g經(jīng)過發(fā)酵罐培養(yǎng)后的菌絲體接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，培養(yǎng)144-168小時(shí)，待哈茨木霉90%產(chǎn)孢時(shí)停止發(fā)酵；
[0035]1.將步驟h中 完全產(chǎn)孢的發(fā)酵物料浸在清水中制成孢子懸浮液，從而得到哈茨木霉孢子懸浮液；
[0036]j.將上述步驟i中得到的哈茨木霉孢子懸浮液濃縮干燥制成孢子粉。
[0037]其中，步驟e中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:葡萄糖20g、土豆汁200g、瓊脂20g和水lOOOmL，pH自然；步驟f中使用的種子培養(yǎng)基配方如下:白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂0.2g、氯化鈉0.2g和水1000mL ;步驟g中使用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:淀粉12kg、豆餅粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸鎂
0.12kg、氯化鈉0.12kg、消泡劑50mL，加水至600L ;步驟h中的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:棉籽殼、玉米粉和麩皮按5:2:13重量比混合組成的固體料中加入水，即得固體發(fā)酵培養(yǎng)基，固體料與水的重量比為1:0.6。
[0038]II1.刺孢吸水鏈霉菌菌粉的制備:
[0039]k.在無菌條件下，將刺孢吸水鏈霉菌菌種接種于斜面培養(yǎng)基上，于28°C下培養(yǎng)5-6 天；
[0040]1.搖床培養(yǎng):將步驟k培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于種子培養(yǎng)基中，在28°C條件下，220r/min搖床培養(yǎng)約24小時(shí)；
[0041]m.發(fā)酵罐培養(yǎng):在無菌條件下，將步驟I培養(yǎng)的菌種接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中,在初始pH7.5、罐壓0.5kg、28 °C、通風(fēng)量1:0.5_1，培養(yǎng)48小時(shí)后，放罐收集發(fā)酵液，經(jīng)濃縮干燥后制得孢子粉。
[0042]其中，步驟k中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:可溶性淀粉20g、KNO3I g>NaCl0.5g,K2HPO40.5g、MgS040.5g、FeS040.lg、瓊脂粉 18g和蒸餾水 lOOOmL，ρΗ7.2-7.4 ;步驟
1、m中使用的培養(yǎng)基配方如下:玉米淀粉20g、豆粉10g、NaC10.5g、K2HP040.5g、(NH4) 2S045g、CaC033g、消泡劑 0.5g 和蒸餾水 lOOOmL, ρΗ7.5。
[0043]本發(fā)明還提供所述微生物肥在煙草種植中的應(yīng)用。[0044]施用方法:
[0045]①可作為專用基肥，每畝用量50_100kg ;也可作為輔助基肥，配合煙草公司指定基肥使用，每畝用量10-20kg,可溝施、穴施、地面撒施；
[0046]②特別適宜作基肥；
[0047]③施用本品后要及時(shí)灌水，肥效更佳；
[0048]④施用本品后要及時(shí)覆土或耕地，勿使本品暴露于陽光下；
[0049]⑤嚴(yán)禁與殺菌劑直接混合使用；
[0050]⑥存放于陰涼干燥處。
[0051]所述煙草專用微生物肥具有吸水保濕，增加土壤肥力，協(xié)助農(nóng)作物吸收營養(yǎng)，提高煙株防病抗逆能力，減少煙草花葉病、赤星病、黑脛病等病害發(fā)生，顯著提高煙葉品質(zhì)和產(chǎn)量。
[0052]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0053](一)本發(fā)明的煙草專用微生物肥中，微生物種類搭配合理，哈茨木霉和刺孢吸水鏈霉菌組合能抑制真菌性致病菌，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混配能在煙草根部繁殖形成優(yōu)勢菌落抑制病原體的繁殖，能很好地改善連茬種植引起的土壤環(huán)境惡化的情況。這四種微生物還能產(chǎn)特異性的酶和游離氨基酸，煙草吸收后能顯著提升煙的香味和品質(zhì)。另外，本發(fā)明采用了發(fā)酵腐熟后的菜籽餅、豆柏餅、芝麻餅為主要載體，對(duì)廢棄物進(jìn)行了回收及有效利用，能產(chǎn)生很好的經(jīng)濟(jì)效益，通過微生物發(fā)酵腐熟后的三柏混合物能釋放出可供煙草吸收的氮、磷、鉀，作為基肥施用能`保證煙草生長的所需營養(yǎng)物質(zhì)，長期使用能很好地改善土壤品質(zhì)。
[0054](二)本發(fā)明的有效菌制備方法先進(jìn)科學(xué)，簡便可行，孢子數(shù)含量高，存活時(shí)間長，能在土壤中快速繁殖，形成優(yōu)勢菌落，促進(jìn)煙草的健康生長。
[0055](三)本發(fā)明的煙草專用微生物肥在田間的應(yīng)用效果好。通過煙草田間種植應(yīng)用試驗(yàn)，結(jié)果表明:使用本品的煙草植株各農(nóng)藝性狀表現(xiàn)較對(duì)照組好；畝產(chǎn)量比常規(guī)施肥方法高出14.19%，畝產(chǎn)值比常規(guī)施肥方法高出15.05%;在防治煙草病害方面表現(xiàn)突出，使用本品，植株發(fā)病非常少，尤其在土傳病害的防治方面表現(xiàn)更佳；施用本品的上等煙比例比常規(guī)施肥法高，烘烤出來的煙成色比對(duì)照組的要鮮艷，香味也更濃郁。
【具體實(shí)施方式】
[0056]以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0057]實(shí)施例1煙草專用微生物肥及其制備方法
[0058]煙草專用微生物肥含以下重量份計(jì)的原料:
[0059]復(fù)合菌劑15份；
[0060]載體85份。
[0061]所述復(fù)合菌劑中有效活菌總含量為10億cfu/g,構(gòu)成如下:
[0062]哈茨木霉L2億cfu/g;
刺孢吸水鏈霉菌L2億cfu/g;
#萆芽贏桿菌4J億cfu/g;
地衣芽抱桿菌4.8億cfu/g。
[0063]上述煙草專用微生物肥的制備方法，包括如下步驟:
[0064](I)復(fù)合菌劑的制備
[0065]1.芽孢桿菌混合孢子粉的制備:
[0066]a.斜面培養(yǎng):將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，原始菌種在無菌條件下分別接種于斜面培養(yǎng)基上，在28 ±2 °C條件下培養(yǎng)48小時(shí)；
[0067]b.搖床培養(yǎng):將步驟a培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于種子培養(yǎng)基中，在pH7.0、30°C條件下，160r/min搖床培養(yǎng)18小時(shí)；
[0068]c.發(fā)酵罐培養(yǎng):將步驟b培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在pH8.0、罐壓0.5kg、30°C、通風(fēng)量1: 1.1條件下，培養(yǎng)48-56小時(shí)后，活菌數(shù)大于
1.0X 109cfu/mL，80%菌體成為芽孢時(shí)下罐，得到發(fā)酵液；
[0069]d.將步驟c中得到的發(fā)酵液按等重量比混合，經(jīng)過濃縮干燥制備成芽孢桿菌混合孢子粉。
[0070]其中，步驟a中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:葡萄糖15g、魚蛋白胨5g、酵母膏5g、瓊脂15g和水1000mL ;步驟b中使用的種子培養(yǎng)基配方如下:葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆餅粉5g、KH2PO40.5g、MgSO40.2g和水1000mL ;步驟c中使用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:玉米粉26kg、豆餅粉16kg、硫酸銨4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg和消泡劑50mL，加水至600L。
[0071]I1.哈茨木霉孢子粉的制備:
[0072]e.將哈茨木霉原始菌種在無菌條件下分別接種于斜面培養(yǎng)基上，在28±2°C條件下培養(yǎng)48小時(shí)；
[0073]f.搖床培養(yǎng):將步驟e培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于種子培養(yǎng)基中，在pH6.8、30°C條件下，200r/min搖床培養(yǎng)約24小時(shí)；
[0074]g.發(fā)酵罐培養(yǎng):將步驟f培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基，在ρΗ6.5-6.8、罐壓0.5kg、27-28°C、通風(fēng)量為1:0.6-0.8，在培養(yǎng)約48小時(shí)后，菌絲體占總體積的20%時(shí)終止發(fā)酵，進(jìn)行固體發(fā)酵產(chǎn)孢；
[0075]h..固體發(fā)酵產(chǎn)孢:將步驟g經(jīng)過發(fā)酵罐培養(yǎng)后的菌絲體接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，培養(yǎng)168小時(shí)，待哈茨木霉90%產(chǎn)孢時(shí)停止發(fā)酵；
[0076]1.將步驟h中完全產(chǎn)孢的發(fā)酵物料浸在清水中制成孢子懸浮液，從而得到哈茨木霉孢子懸浮液；
[0077]j.將上述步驟i中得到的哈茨木霉孢子懸浮液濃縮干燥制成孢子粉。
[0078]其中，步驟e中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:葡萄糖20g、土豆汁200g、瓊脂20g和水lOOOmL，pH自然；步驟f中使用的種子培養(yǎng)基配方如下:白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂0.2g、氯化鈉0.2g和水1000mL ;步驟g中使用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:淀粉12kg、豆餅粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸鎂0.12kg、氯化鈉0.12kg、消泡劑50mL，加水至600L ;步驟h中的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:棉籽殼、玉米粉和麩皮按5:2:13重量比混合組成的固體料中加入水，即得固體發(fā)酵培養(yǎng)基，固體料與水的重量比為1:0.6。
[0079]II1.刺孢吸水鏈霉菌菌粉的制備:
[0080]k.在無菌條件下，將刺孢吸水鏈霉菌菌種接種于斜面培養(yǎng)基上，于28°C下培養(yǎng)5-6 天；
[0081]1.搖床培養(yǎng):將步驟k培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于種子培養(yǎng)基中，在28°C條件下，220r/min搖床培養(yǎng)約24小時(shí)；
[0082]m.發(fā)酵罐培養(yǎng):在無菌條件下，將步驟I培養(yǎng)的菌種接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中,在初始pH7.5、罐壓0.5kg、28 °C、通風(fēng)量1:1，培養(yǎng)48小時(shí)后，放罐收集發(fā)酵液，經(jīng)濃縮干燥后制得孢子粉。
[0083]其中，步驟k中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:可溶性淀粉20g、KNO3I g>NaCl0.5g, K2HPO40.5g、MgS040.5g、FeS040.lg、瓊脂粉 18g 和蒸餾水 lOOOmL, ρΗ7.4 ;步驟 1、m中使用的培養(yǎng)基配方如下:玉米淀粉20g、豆粉10g、NaCl0.5g、K2HPO40.5g、(NH4)2S045g、CaC033g、消泡劑 0.5g 和蒸餾水 lOOOmL, ρΗ7.5。
[0084]IV.將上述制得的芽孢桿菌混合孢子粉、哈茨木霉孢子粉、刺孢吸水鏈霉菌菌粉按比例混合，即得復(fù)合菌劑。
[0085](2)載體的制備
[0086]將菜籽餅、豆柏餅、`芝麻餅和發(fā)酵專用復(fù)合菌劑按8:8:8:1的重量比混勻，調(diào)節(jié)水分至60%,堆高1.2米,堆慪60天。
[0087]發(fā)酵初始時(shí)覆蓋薄膜，待發(fā)酵堆中心溫度在50°C以上時(shí)撤去薄膜，當(dāng)發(fā)酵堆中心溫度超過65°C時(shí)用翻堆機(jī)翻堆，發(fā)酵前25天適當(dāng)補(bǔ)水，使得發(fā)酵堆水分維持在60% ;如此反復(fù)操作，待發(fā)酵堆顏色變咖啡色或黑色，同時(shí)發(fā)酵堆溫度降至40°C，水含量在30%以下結(jié)束發(fā)酵，將發(fā)酵好的餅肥干燥、粉碎、過篩，即得載體；其中，發(fā)酵專用復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌約4億cfu/g、釀酒酵母約I億cfu/g、哈茨木霉約0.5cfu億/g和地衣芽孢桿菌約4 億 cfu/g。
[0088](3)煙草專用微生物肥的制備:按比例稱取復(fù)合菌劑和載體，混勻后即得煙草專用微生物肥。
[0089]實(shí)施例2煙草專用微生物肥及其制備方法
[0090]煙草專用微生物肥含以下重量份計(jì)的原料:
[0091]復(fù)合菌劑5份；
[0092]載體95份。
[0093]所述復(fù)合菌劑中有效活菌總含量為> 4億cfu/g,構(gòu)成如下:
[0094]哈茨木霉0.4億efu/g;
刺孢吸水鏈霉菌0.4億ef u/g;
枯萆芽孢桿菌1.6億efu/g;
地衣芽孢桿菌1.6億cfu/g?
[0095]其余同實(shí)施例1。
[0096]實(shí)施例3煙草專用微生物肥及其制備方法
[0097]煙草專用微生物肥含以下重量份計(jì)的原料:
[0098]復(fù)合菌劑25份；
[0099]載體75份。
[0100]所述復(fù)合菌劑中有效活菌總含量為> 20億cfu/g，構(gòu)成如下:
[0101]
哈茨木霉2億cfu/g;
刺孢吸水鏈霉菌2億cfu/g;`
[0102]
枯草芽孢桿菌8億cfu/g;`
地衣芽孢桿菌8億CfuZgss
[0103]其余同實(shí)施例1。
[0104]實(shí)施例4煙草專用微生物肥及其制備方法
[0105]煙草專用微生物肥含以下重量份計(jì)的原料:
[0106]復(fù)合菌劑10份；
[0107]載體90份。
[0108]所述復(fù)合菌劑中有效活菌總含量為> 4億cfu/g，構(gòu)成如下:
[0109]
哈茨木霉0.4億cfti/g;
刺孢吸水鏈霉菌0,4億cf u/g；
枯萆芽孢桿菌1.6億cfu/g;
地衣芽孢桿菌1.6億cfc/^
[0110]其余同實(shí)施例1。
[0111]實(shí)施例5煙草專用微生物肥的田間肥效試驗(yàn)
[0112]1.試驗(yàn)?zāi)康?
[0113]驗(yàn)證煙草專用微生物肥對(duì)煙草生長及品質(zhì)提升的顯著效果。
[0114]2.試驗(yàn)材料:
[0115]植株:供試烤煙品種為G80(由龍山縣煙草公司提供)。
[0116]肥料:煙草專用微生物肥、專用基肥、專用追肥、提苗肥、硫酸鉀、生物餅肥。[0117]試驗(yàn)點(diǎn):在湖南省吉首市龍山縣召市鎮(zhèn)大興村。供試土壤主要農(nóng)化特性見表1，前茬作物為水稻。
[0118]3.試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0119]3.1實(shí)驗(yàn)分5組，每組種植面積20m2，每個(gè)組別做3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。
[0120]實(shí)驗(yàn)組A:每組分別取實(shí)施例1中制備的煙草專用微生物肥500g加適量基肥(以煙草公司指導(dǎo)施加量為準(zhǔn))混勻做基肥施用。其他常規(guī)施肥按煙草公司指導(dǎo)量正常施用。
[0121]實(shí)驗(yàn)組B:每組分別取實(shí)施例1中制備的煙草專用微生物肥500g，然后再加適量基肥(以煙草公司指導(dǎo)施加量為準(zhǔn))混勻做基肥施用。其他常規(guī)施肥按煙草公司指導(dǎo)量的90%正常施用。
[0122]實(shí)驗(yàn)組C:每組分別取供試基質(zhì)500g加適量基肥(以煙草公司指導(dǎo)施加量為準(zhǔn))混勻做基肥施用。其他常規(guī)施肥按煙草公司指導(dǎo)量正常施用。
[0123]實(shí)驗(yàn)組D:常規(guī)施肥，以煙草公司指導(dǎo)量為準(zhǔn)。
[0124]實(shí)驗(yàn)組E:不施加任何肥料。
[0125]A、B、C、D四組常規(guī)施肥煙草公司指導(dǎo)施加量為固定值，五組前茬作物一致都是水稻。煙草公司施肥指導(dǎo)施加量見表2。
[0126]3.2試驗(yàn)實(shí)施 :
[0127]按3.1執(zhí)行，并做好田間管理、記錄、分析和計(jì)產(chǎn)工作。
[0128]3.2.1田間管理及試驗(yàn)記錄:
[0129]五個(gè)組別各項(xiàng)處理的管理措施應(yīng)一致，并進(jìn)行試驗(yàn)記錄；
[0130]a)供試煙草的品種；
[0131]b)注明試驗(yàn)地點(diǎn)、試驗(yàn)時(shí)間、方法設(shè)計(jì)、小區(qū)面積、小區(qū)排列、重復(fù)次數(shù)(采用圖表的形式);
[0132]c)試驗(yàn)地地形、土壤質(zhì)地、土壤類型、前茬作物種類；
[0133]d)施肥時(shí)間、方法、數(shù)量及次數(shù)等；
[0134]e)試驗(yàn)期間的降水量及灌水量；
[0135]f)病蟲害防治情況及其它農(nóng)事活動(dòng)等；
[0136]g)作物的生長狀況田間調(diào)查，包括移苗成活率、長勢、生育期(各處理生育期情況見表3)。及病蟲發(fā)生情況等。
[0137]3.2.2收獲和計(jì)產(chǎn)
[0138]a)分次收獲(收獲時(shí)機(jī)根據(jù)按煙草公司指導(dǎo)進(jìn)行、烘烤條件一致)、計(jì)產(chǎn)，最后累加；
[0139]b)計(jì)產(chǎn)時(shí)評(píng)定煙草質(zhì)量，煙草質(zhì)量評(píng)定由龍山縣召市鎮(zhèn)煙草站執(zhí)行。
[0140]3.2.3作物品質(zhì)、土壤肥力和抗逆性等記錄
[0141]記錄煙草專用微生物肥對(duì)煙草品質(zhì)提升、土壤肥力的提升及抗病能力。
[0142]3.3效果評(píng)價(jià)
[0143]3.3.1作物農(nóng)藝性狀對(duì)比情況見表4。
[0144]3.3.2產(chǎn)量效果評(píng)價(jià)
[0145]進(jìn)行煙草專微生物菌肥處理與其它各處理間的產(chǎn)量差異分析。增產(chǎn)差異顯著水平的試驗(yàn)點(diǎn)數(shù)達(dá)到總數(shù)的2/3以上者，判定該產(chǎn)品有增產(chǎn)效果。產(chǎn)量情況見表5。[0146]3.3.3品質(zhì)效果評(píng)價(jià)
[0147]記錄煙葉路黃時(shí)間、一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)煙葉的比率，各組別做比較。分級(jí)情況見附表
[0148]3.3.4抗逆性效果評(píng)價(jià)
[0149]抗逆性包括抑制病蟲害發(fā)生(病情及發(fā)病率記錄)、抗旱、克服連作障礙等方面?？鼓嫘灾笜?biāo)比對(duì)照應(yīng)提高20%以上的效果明顯。病情情況見表6。
[0150]3.3.4 土壤改良效果評(píng)價(jià)
[0151]測定土壤中的微生物種群與數(shù)量、有機(jī)質(zhì)、速效磷、速效鉀、速效氮、pH等指標(biāo)。測定時(shí)間為移栽施用前、然后是每月取土壤樣一次進(jìn)行測定直至煙草采收結(jié)束。肥效效果見表7。
[0152]3.3.5安全指標(biāo)評(píng)價(jià)
[0153]對(duì)試驗(yàn)作物以及土壤進(jìn)行農(nóng)藥殘留、重金屬等有毒有害物質(zhì)含量的測定，以評(píng)價(jià)煙草專用微生物肥對(duì)其是否具有降解和轉(zhuǎn)化功能。
[0154]附錄A (規(guī)范性附錄)
[0155]基質(zhì)無菌檢驗(yàn)方法
[0156]A.1 取樣
[0157]從基質(zhì)樣品中隨機(jī)取樣。
[0158]A.2樣品檢驗(yàn)
[0159]A.2.1培養(yǎng)基制備
[0160]分別配制NY/T1114-2006 中 Al、A9、All、A13 四種培養(yǎng)基。
[0161]A.2.2菌懸液的制備
[0162]稱取樣品IOg(精確到0.01g)，加入帶玻璃珠的IOOmL的無菌水中，靜置20min，在旋轉(zhuǎn)式搖床上200r/min充分振蕩30min,制成菌懸液。
[0163]A.2.3加樣及培養(yǎng)
[0164]在預(yù)先制備好的四種固體培養(yǎng)基平板上分別加入0.1mL菌懸液，并用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于培養(yǎng)基平板表面，重復(fù)3次，于適宜溫度條件下培養(yǎng)2d-7d。以無菌水作空白對(duì)照。
[0165]A.2.4滅菌效果鑒定
[0166]空白對(duì)照無菌落出現(xiàn)，而其它培養(yǎng)平板上菌落總數(shù)≤5個(gè)，則該樣品可用作基質(zhì)試驗(yàn)。反之，須重新滅菌?？瞻讓?duì)照有菌落出現(xiàn)，須重做無菌檢驗(yàn)。
[0167]4.試驗(yàn)結(jié)果
[0168]試驗(yàn)嚴(yán)格按照試驗(yàn)方案 進(jìn)行，移栽后無死苗現(xiàn)象，成活后長勢除E處理外均表現(xiàn)正常，煙株打頂后即從6月底開始連續(xù)兩個(gè)月干旱天氣，嚴(yán)重影響了煙株的正常生長發(fā)育，沒有進(jìn)行灌水。試驗(yàn)結(jié)果如表4-7所示，試驗(yàn)證明該產(chǎn)品能有效提高煙草畝產(chǎn)值，減少煙草病蟲害的發(fā)生，提聞煙葉品質(zhì)。
[0169]表1供試土壤的主要農(nóng)化性狀
[0170]
【權(quán)利要求】
1.一種煙草專用微生物肥，其特征在于，由復(fù)合菌劑5-25重量份和載體75-95重量份組成； 所述復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) 1.6-8億cfu/g、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis) L 6-8 億 cfu/g、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)0.4-2.0 億 cfu/g 和刺抱吸水鏈霉菌(Streptomyces hygrospinosus)0.4-2.0 億 cfu/g ;所述載體為菜籽餅、豆柏餅和芝麻餅經(jīng)過微生物發(fā)酵、腐熟后，干燥過篩后的粉狀物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物肥，其特征在于，由復(fù)合菌劑10-20重量份和載體80-90重量份組成； 所述復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌1.6-6.4億cfu/g、地衣芽孢桿菌1.6-6.4億cfu/g、哈茨木霉0.4-1.6億cfu/g和刺孢吸水鏈霉菌0.4-1.6億cfu/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物肥，其特征在于，由復(fù)合菌劑15重量份和載體85重量份組成； 所述復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌4.8億cfu/g、地衣芽孢桿菌4.8億cfu/g、哈茨木霉1.2億cfu/g和刺孢吸水鏈霉菌1.2億cfu/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物肥，其特征在于，用于發(fā)酵菜籽餅、豆柏餅和芝麻餅的微生物包括枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、哈茨木霉和地衣芽孢桿菌，四種微生物的活菌數(shù)比為4:1:0.5:4。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物肥，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌的保藏編號(hào)為ACCC10118、地衣芽孢桿菌的保藏編號(hào)為ACCC10613、哈茨木霉的保藏編號(hào)為ACCC31707、刺孢吸水鏈霉菌的保藏編號(hào)為ACCC4001`8。`
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的微生物肥，其特征在于，所述微生物肥為粉劑。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述微生物肥的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)復(fù)合菌劑的制備 `1.芽孢桿菌混合孢子粉的制備:將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌原始菌種在無菌條件下分別依次進(jìn)行斜面培養(yǎng)、搖床培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)后，將得到的發(fā)酵液按等重量比混合，經(jīng)過濃縮干燥制備成芽孢桿菌混合孢子粉； I1.哈茨木霉孢子粉的制備:將哈茨木霉原始菌種在無菌條件下分別依次進(jìn)行斜面培養(yǎng)、搖床培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、固體發(fā)酵產(chǎn)孢后，將得到的完全產(chǎn)孢的培養(yǎng)基分別浸在清水中制成孢子懸浮液，從而得到哈茨木霉孢子懸浮液，然后將得到的哈茨木霉孢子懸浮液濃縮干燥制備成哈茨木霉孢子粉； II1.刺孢吸水鏈霉菌菌粉的制備:將刺孢吸水鏈霉菌原始菌種在無菌條件下分別依次進(jìn)行斜面培養(yǎng)、搖床培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)后，經(jīng)過濃縮干燥制備成刺孢吸水鏈霉菌菌粉； IV.將上述制得的芽孢桿菌混合孢子粉、哈茨木霉孢子粉、刺孢吸水鏈霉菌菌粉按比例混合，即得復(fù)合菌劑； (2)載體的制備 將菜籽餅、豆柏餅、芝麻餅和發(fā)酵專用復(fù)合菌劑按8:8:8:1的重量比混勻，調(diào)節(jié)水分至50%-60%，堆高 1.0-1.5 米，堆慪 40-60 天； 發(fā)酵初始時(shí)覆蓋薄膜，待發(fā)酵堆中心溫度在50°C以上時(shí)撤去薄膜，當(dāng)發(fā)酵堆中心溫度超過65 °C時(shí)用翻堆機(jī)翻堆，發(fā)酵前25天適當(dāng)補(bǔ)水，使得發(fā)酵堆水分維持在50%-60% ;如此反復(fù)操作，待發(fā)酵堆顏色變咖啡色或黑色，同時(shí)發(fā)酵堆溫度降至40°C，水含量在30%以下結(jié)束發(fā)酵，將發(fā)酵好的餅肥干燥、粉碎、過篩，即得載體；其中，發(fā)酵專用復(fù)合菌劑中含有枯草芽孢桿菌4億cfu/g、釀酒酵母1億cfu/g、哈茨木霉0.5cfu億/g和地衣芽孢桿菌4億cfu/g ; (3)煙草專用微生物肥的制備:按比例稱取復(fù)合菌劑和載體，混勻后即得煙草專用微生物肥。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中1、I1、III具體為: .1.芽孢桿菌混合孢子粉的制備: a.斜面培養(yǎng):將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，原始菌種在無菌條件下分別接種于斜面培養(yǎng)基上，在28 ±2 °C條件下培養(yǎng)36-48小時(shí)； b.搖床培養(yǎng):將步驟a培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于種子培養(yǎng)基中，在pH6.5-7.0、30°C條件下，140-160r/min 搖床培養(yǎng) 12-18 小時(shí)； c.發(fā)酵罐培養(yǎng):將步驟b培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在ρΗ7.5-8.0、罐壓0.5kg、30°C、通風(fēng)量1:0.8-1.1條件下，培養(yǎng)48-56小時(shí)后，活菌數(shù)大于.1.0X 109cfu/mL，80%菌體成為芽孢時(shí)下罐，得到發(fā)酵液； d.將步驟c中得到的發(fā)酵液按等重量 比混合，經(jīng)過濃縮干燥制備成芽孢桿菌混合孢子粉； 其中，步驟a中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:葡萄糖15g、魚蛋白胨5g、酵母膏5g、瓊脂15g和水1000mL ;步驟b中使用的種子培養(yǎng)基配方如下:葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆餅粉5g、KH2PO40.5g、MgSO40.2g和水1000mL ;步驟c中使用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:玉米粉26kg、豆餅粉16kg、硫酸銨4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨.1.7kg和消泡劑50mL，加水至600L ； I1.哈茨木霉孢子粉的制備: e.將哈茨木霉原始菌種在無菌條件下分別接種于斜面培養(yǎng)基上，在28±2°C條件下培養(yǎng)48小時(shí)； f.搖床培養(yǎng):將步驟e培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于種子培養(yǎng)基中，在pH6.5-6.8、.30 °C條件下，160-200r/min搖床培養(yǎng)24小時(shí)； g.發(fā)酵罐培養(yǎng):將步驟f培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基，在ρΗ6.5-6.8、罐壓0.5kg、27-28°C、通風(fēng)量為1:0.6-0.8，在培養(yǎng)48小時(shí)后，菌絲體占總體積的20%時(shí)終止發(fā)酵，進(jìn)行固體發(fā)酵產(chǎn)孢； h..固體發(fā)酵產(chǎn)孢:將步驟g經(jīng)過發(fā)酵罐培養(yǎng)后的菌絲體接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，培養(yǎng)144-168小時(shí)，待哈茨木霉90%產(chǎn)孢時(shí)停止發(fā)酵； .1.將步驟h中完全產(chǎn)孢的發(fā)酵物料浸在清水中制成孢子懸浮液，從而得到哈茨木霉孢子懸浮液； j.將上述步驟i中得到的哈茨木霉孢子懸浮液濃縮干燥制成孢子粉； 其中，步驟e中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:葡萄糖20g、土豆汁200g、瓊脂20g和水.1000mL, pH自然；步驟f中使用的種子培養(yǎng)基配方如下:白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂0.2g、氯化鈉0.2g和水1000mL ;步驟g中使用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:淀粉12kg、豆餅粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸鎂0.12kg、氯化鈉0.12kg、消泡劑50mL，加水至600L ;步驟h中的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下:棉籽殼、玉米粉和麩皮按5:2:13重量比混合組成的固體料中加入水，即得固體發(fā)酵培養(yǎng)基，固體料與水的重量比為1:0.6 ; II1.刺孢吸水鏈霉菌菌粉的制備: k.在無菌條件下，將刺孢吸水鏈霉菌菌種接種于斜面培養(yǎng)基上，于28°C下培養(yǎng)5-6天;.搖床培養(yǎng):將步驟k培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于種子培養(yǎng)基中，在28°C條件下，，220r/min搖床培養(yǎng)24小時(shí)； m.發(fā)酵罐培養(yǎng):在無菌條件下，將步驟I培養(yǎng)的菌種接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在初始PH7.5、罐壓0.5kg、28°C、通風(fēng)量1:0.5_1，培養(yǎng)48小時(shí)后，放罐收集發(fā)酵液，經(jīng)濃縮干燥后制得孢子粉； 其中，步驟k中使用的斜面培養(yǎng)基的配方如下:可溶性淀粉20g、KNO31g> NaCl0.5g、K2HPO40.5g、MgS040.5g、FeS040.lg、瓊脂粉 18g 和蒸餾水 1000mL, pH7.2-7.4 ;步驟 l、m 中使用的培養(yǎng)基配方如下:玉米淀粉 20g、豆粉 10g、NaC10.5g,K2HP040.5g、(NH4) 2S045g、CaC033g、消泡劑0.5g和蒸餾水1000mL, ρΗ7.5。
9.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述微生物肥在煙草種植中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所 述的應(yīng)用，其特征在于，作為基肥施用，每畝用量10-100kg。
【文檔編號(hào)】C05F11/08GK103819237SQ201410044770
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年2月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月7日
【發(fā)明者】豐來, 羅志威, 郭帥, 呂黎, 王蕾, 粟靜, 周艷 申請(qǐng)人:湖南泰谷生物科技股份有限公司