一種抗幽門螺桿菌免疫巴氏牛奶的生產(chǎn)方法
【專利摘要】抗幽門螺桿菌免疫巴氏牛奶的生產(chǎn)方法:取胃粘膜用微需氧培養(yǎng)法:85%N2、10%CO2、5%H2,37℃培養(yǎng),革蘭氏染色及形態(tài)學(xué)鑒定及尿素酶、觸酶試驗(yàn)鑒定Hp;取NCTC11637和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株SS1;用自分離Hp菌株和標(biāo)準(zhǔn)Hp菌株培養(yǎng)收集菌體制成懸液;佛氏佐劑用羊毛脂、液體石蠟及結(jié)核菌素,研磨滅菌;Hp混合菌液加佛氏佐劑,研磨呈乳狀,超聲,制成混合疫苗;奶牛免疫程序:Hp混合疫苗作抗原,注射健康奶牛:皮下5-6個(gè)點(diǎn),每點(diǎn)1.0ml;前后腿內(nèi)側(cè)腋窩部和腹股溝4個(gè)點(diǎn),每點(diǎn)1.5ml;注射相隔時(shí)間12-15天;經(jīng)多次免疫抽牛血分離血清,牛奶用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗HpIgG效價(jià),即可收獲牛奶。
【專利說(shuō)明】一種抗幽門螺桿菌免疫巴氏牛奶的生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制品的【技術(shù)領(lǐng)域】,尤其涉及一種抗幽門螺桿菌免疫巴氏牛奶的生
產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]關(guān)于抗幽門螺桿菌免疫免疫牛奶,生物科技研究工作者對(duì)該項(xiàng)課題,作了種種探索研究與試驗(yàn),獲得成功的確不多,在總結(jié)前人的基楚之上,建立我們的抗幽門螺桿菌免疫菌株的培養(yǎng)及抗原受體體系。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的是提供一種抗幽門螺桿菌免疫牛奶的生產(chǎn)方法。而獲得具有人體抗幽門螺桿菌免疫的牛奶。具體方法步驟如下:
一、幽門螺桿菌的英文縮寫(Hp)菌株建立,以下簡(jiǎn)稱Hp
(一)取胃粘膜組織處理后采用微需氧培養(yǎng)法(85%N2、10%C02、5%H2),37°C培養(yǎng)2-3天,革蘭氏染色及形態(tài)學(xué)鑒定及尿素酶、觸酶試驗(yàn)等生物學(xué)性狀鑒定的Hp ;
(二)從北京生物所獲取的NCTCl1637和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株SSl。
[0004]二、免疫原的制備
(一)用自分離Hp菌株和標(biāo)準(zhǔn)Hp菌株經(jīng)培養(yǎng)后收集菌體,用生理鹽水制成懸液;
(二)佛氏佐劑制備:羊毛脂1.5g、液體石臘8.5ml、結(jié)核菌素26mg,充分研磨均勻,高壓滅菌后備用;
(三)Hp混合菌液3ml(9X109cfu/ml),加3ml佛氏完全佐劑,再充分研磨均勻呈乳狀,超聲粉碎菌體,制成多價(jià)混合疫苗。
[0005]三、免疫奶牛
(一)免疫程序:Hp混合疫苗作為抗原,免疫注射健康奶牛:
1、皮下5-6個(gè)點(diǎn)注射,每點(diǎn)1.0ml ;
2、前后腿內(nèi)側(cè)腋窩部和腹股溝4個(gè)點(diǎn)注射,每點(diǎn)1.5ml;
3、免疫注射相隔時(shí)間為12-15天。
[0006](二)免疫試血試奶:
經(jīng)過(guò)若干次免疫后抽取牛血分離血清及牛奶用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗Hp IgG效價(jià),牛血中抗體效價(jià)> 512,牛奶中抗體效價(jià)> 256即可收獲牛奶,否則,應(yīng)加強(qiáng)注射一次后再收獲牛奶。
[0007]四、收獲乳汁后的處理技術(shù) (一)溫度控制:
1、采用巴氏滅菌法溫度控制或高溫瞬間滅菌溫度與時(shí)間的控制;
2、采用真空冷凍干燥技術(shù)對(duì)高活性抗幽門螺桿菌免疫乳進(jìn)行冷凍干燥物理性狀的質(zhì)量控制。[0008](二)物理化學(xué)指標(biāo)控制
(三) 衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)控制
五、編制抗-Hp IgG免疫乳的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),以規(guī)范該產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制。
【具體實(shí)施方式】
[0009]本發(fā)明所述的一種抗幽門螺桿菌免疫巴氏牛奶的生產(chǎn)方法。實(shí)施方式重述如下:
1、幽門螺桿菌的英文縮寫(Hp)菌株建立,以下簡(jiǎn)稱Hp
(1)取胃粘膜組織處理后采用微需氧培養(yǎng)法(85°福2、10%0)2、5%!12),371:培養(yǎng)2-3天,革蘭氏染色及形態(tài)學(xué)鑒定及尿素酶、觸酶試驗(yàn)等生物學(xué)性狀鑒定的Hp ;
(2)從北京生物所獲取的NCTC11637和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株SSl。
[0010]2、免疫原的制備
(1)用自分離Hp菌株和標(biāo)準(zhǔn)Hp菌株經(jīng)培養(yǎng)后收集菌體,用生理鹽水制成懸液;
(2)佛氏佐劑制備:羊毛脂1.5g、液體石臘8.5ml、結(jié)核菌素26mg,充分研磨均勻,高壓滅菌后備用;
(3)Hp混合菌液3ml(9X109cfu/ml),加3ml佛氏完全佐劑,再充分研磨均勻呈乳狀,超聲粉碎菌體,制成多價(jià)混合疫苗。
[0011]3、免疫奶牛
(O免疫程序:Hp混合疫苗作為抗原,免疫注射健康奶牛:
皮下5-6個(gè)點(diǎn)注射,每點(diǎn)1.0ml ;
前后腿內(nèi)側(cè)腋窩部和腹股溝4個(gè)點(diǎn)注射,每點(diǎn)1.5ml;
免疫注射相隔時(shí)間為12-15天。
[0012](2)免疫試血試奶:
經(jīng)過(guò)若干次免疫后抽取牛血分離血清及牛奶用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗Hp IgG效價(jià),牛血中抗體效價(jià)> 512,牛奶中抗體效價(jià)> 256即可收獲牛奶,否則,應(yīng)加強(qiáng)注射一次后再收獲牛奶。
[0013]4、收獲乳汁后的處理技術(shù)
(I)溫度控制:
采用巴氏滅菌法溫度控制或高溫瞬間滅菌溫度與時(shí)間的控制;
采用真空冷凍干燥技術(shù)對(duì)高活性抗幽門螺桿菌免疫乳進(jìn)行冷凍干燥物理性狀的質(zhì)量控制。
[0014](2)物理化學(xué)指標(biāo)控制
(3)衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)控制
5、編制抗-Hp IgG免疫乳的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),以規(guī)范該產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制。
【權(quán)利要求】
1.一種抗幽門螺桿菌免疫巴氏牛奶的生產(chǎn)方法,其特征在于:它的生產(chǎn)方法步驟如下: .1、幽門螺桿菌的英文縮寫Hp菌株建立,以下簡(jiǎn)稱Hp; (1)取胃粘膜組織處理后采用微需氧培養(yǎng)法:85%N2、10%C02、5%H2,37°C培養(yǎng)2-3天,革蘭氏染色及形態(tài)學(xué)鑒定及尿素酶、觸酶試驗(yàn)生物學(xué)性狀鑒定的Hp ; (2)從北京生物所獲取的NCTC11637和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株SSl; .2、免疫原的制備; (1)用自分離Hp菌株和標(biāo)準(zhǔn)Hp菌株經(jīng)培養(yǎng)后收集菌體,用生理鹽水制成懸液; (2)佛氏佐劑制備:羊毛脂1.5g、液體石臘8.5ml、結(jié)核菌素26mg,充分研磨均勻,高壓滅菌后備用; (3)Hp混合菌液3ml(9X109cfu/ml),加3ml佛氏完全佐劑,再充分研磨均勻呈乳狀,超聲粉碎菌體,制成多價(jià)混合疫苗; .3、免疫奶牛; (O免疫程序:Hp混合疫苗作為抗原,免疫注射健康奶牛: 皮下5-6個(gè)點(diǎn)注射,每點(diǎn)1.0ml ; 前后腿內(nèi)側(cè)腋窩部和腹股溝4個(gè)點(diǎn)注射,每點(diǎn)1.5ml ; 免疫注射相隔時(shí)間為12-15天; (2)免疫試血試奶: 經(jīng)過(guò)若干次免疫后抽取牛血分離血清及牛奶用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗Hp IgG效價(jià),牛血中抗體效價(jià)> 512,牛奶中抗體效價(jià)> 256即可收獲牛奶,否則,應(yīng)加強(qiáng)注射一次后再收獲牛奶; .4、收獲乳汁后的處理技術(shù); (1)溫度控制: 采用巴氏滅菌法溫度控制或高溫瞬間滅菌溫度與時(shí)間的控制; 采用真空冷凍干燥技術(shù)對(duì)高活性抗幽門螺桿菌免疫乳進(jìn)行冷凍干燥物理性狀的質(zhì)量控制; (2)物理化學(xué)指標(biāo)控制; (3)衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)控制; .5、編制抗-HpIgG免疫乳的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),以規(guī)范該產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制。
【文檔編號(hào)】A01K67/02GK103550766SQ201310550191
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月8日
【發(fā)明者】鄢維倫, 張德剛, 余家奇 申請(qǐng)人:貴州省遵義市眾智生物研究所