一種植物組培過程中染菌試管苗的生根方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種植物組培過程中染菌試管苗的生根方法及其應(yīng)用。該方法將植物組培過程中染菌試管苗直接浸泡在濃度為0.1～0.3mg/mL的生根誘導(dǎo)劑水溶液中進(jìn)行浸泡處理，然后將經(jīng)過生根誘導(dǎo)劑浸泡處理的染菌試管苗直接移栽到裝有含水量大約為55%～70%（體積）左右的蛭石煉苗缽中，并用一次性透明塑料杯反過來扣在煉苗缽中的苗上；在蛭石煉苗缽中生根2～4周后再移栽到土壤中。本發(fā)明方法可以使原來只能丟棄的染菌的組培試管苗長出根，從而實現(xiàn)了拯救染菌的試管苗的目的，這對解決現(xiàn)有的植物組培研究中，因為解決因染菌造成的試管苗大量損失提供了一種新的手段。
【專利說明】一種植物組培過程中染菌試管苗的生根方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組培【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種拯救植物組培過程中染菌試管苗的方法，具體說來，涉及一種植物組培過程中染菌試管苗的生根方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]甘藍(lán)型油菜轉(zhuǎn)基因過程中通常采用下胚軸或子葉柄為外植體，將外植體與根癌農(nóng)桿菌共培后，通過組培和抗性篩選來獲得試管苗，然后將試管苗轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。只有在抗性苗分化出根后，移栽到土壤里才能成活。
[0003]在組培過程中，因為操作和環(huán)境中微生物含量的原因，時常發(fā)生霉菌污染，特別是在我國南方地區(qū)的雨季，試管苗污染經(jīng)常發(fā)生。試管苗一旦被細(xì)菌或真菌污染，再轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上就難以再生根，現(xiàn)有的處理方法是將被污染的苗滅菌后丟棄。尤其是被細(xì)菌或霉菌污染嚴(yán)重的時候，一批組培苗要全部丟棄。
[0004]為了提高獲得轉(zhuǎn)基因植株的概率，如果能夠找到一種方法能讓已經(jīng)被霉菌污染了的試管苗也能及時長出不定根，這樣就可以大大降低試管苗的損失，極大地提高試管苗的成活率和獲得轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)型油菜植株的概率。
[0005]但是，現(xiàn)有技術(shù)中還沒有拯救植物組培過程中染菌試管苗的技術(shù)。因此，目前存在的問題是需要研究開發(fā)一種使植物組培過程中染菌試管苗生根的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種利用高濃度生根誘導(dǎo)劑水溶液直接處理染菌的試管苗，并將經(jīng)生根誘導(dǎo)劑處理的試管苗直接轉(zhuǎn)移到蛭石中進(jìn)行生根，從而實現(xiàn)拯救染菌的`試管苗的目的，這對解決現(xiàn)有的植物組培研究中，因為解決因染菌造成的試管苗大量損失提供了一種新的手段。
[0007]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種植物組培過程中染菌試管苗的生根方法，包括:
[0008]步驟A，將植物組培過程中染菌試管苗的基部浸入生根誘導(dǎo)劑水溶液進(jìn)行浸泡處理；
[0009]步驟B，將經(jīng)過生根誘導(dǎo)劑浸泡處理的試管苗移栽至煉苗裝置中；
[0010]步驟C，用罩體罩住經(jīng)過生根誘導(dǎo)劑處理的試管苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。
[0011]本發(fā)明中所述用語“染菌”是指試管苗的基部被細(xì)菌或霉菌污染，出現(xiàn)變質(zhì)的現(xiàn)象。
[0012]本發(fā)明所述用于“染菌試管苗”是指基部被被細(xì)菌或霉菌污染，甚至因此發(fā)生變質(zhì)的無根試管苗。
[0013]本發(fā)明中所述用語“組培”是指植物組織培養(yǎng)，具體說來，是指在含有營養(yǎng)物質(zhì)及植物生長物質(zhì)的培養(yǎng)基的無菌器皿中，培養(yǎng)離體植物組織(器官或細(xì)胞)并誘導(dǎo)使其長成完整植株的技術(shù)。[0014]本發(fā)明中所述用語“試管苗”是指在試管等容器內(nèi)經(jīng)無菌培養(yǎng)獲得的完整植株小苗。
[0015]所述用語“抗性試管苗”是指能在含有抗生素或除草劑的培養(yǎng)基上正常生長的試管苗。
[0016]本發(fā)明中所述用語“煉苗”是指在適當(dāng)控制溫度、濕度、氣體交換等條件下，使試管苗從完全人工控制的條件下逐步適應(yīng)大氣環(huán)境的過程。
[0017]本發(fā)明中所述用語“不定根”是指不是直接或間接由胚根所形成，而是從莖、葉、愈傷組織或其它部位生長出來，沒有固定的生長部位的根。
[0018]本發(fā)明所述用語“罩體”是指所有能實現(xiàn)透光、透氣和保濕的具有覆蓋和保護(hù)作用的罩體，例如，其可以是塑料杯、帶孔玻璃杯等。
[0019]根據(jù)本發(fā)明，在步驟A中，所述浸泡處理的時間為3~10秒。
[0020]根據(jù)本發(fā)明，在步驟A中，所述生根誘導(dǎo)劑水溶液的濃度為0.1~0.3mg/mL ;優(yōu)選為 0.1 ~0.2mg/mL。
[0021]本發(fā)明中，所述生根誘導(dǎo)劑包括吲哚乙酸和/或吲哚丁酸。
[0022]根據(jù)本發(fā)明，在步驟B中，煉苗裝置中含有蛭石和水。
[0023]根據(jù)本發(fā)明，所述煉苗裝置中含水量為55~70% (體積)；優(yōu)選為65% (體積)。
[0024]根據(jù)本發(fā)明，在步驟C中，生根培養(yǎng)時間為2~4周；優(yōu)選為2周。
[0025]在本發(fā)明的一個實施方式中，所述方法還包括在步驟A之前切除染菌試管苗的基部的變成褐黑色的部分。
[0026]在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述方法還包括在步驟C之后，將生根培養(yǎng)后的試管苗移栽到土壤中的步驟。
[0027]本發(fā)明還提供了一種根據(jù)本發(fā)明上述生根方法在油菜組培過程中的染菌試管苗生根中的應(yīng)用。
[0028]在本發(fā)明的一個具體實施例中，用蒸餾水洗去在甘藍(lán)型油菜轉(zhuǎn)基因組培過程中被霉菌污染的試管苗基部的霉菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織；然后將試管苗基部直接浸在高濃度吲哚丁酸(0.1~0.3mg/mL)溶液中3~10秒，不需經(jīng)過在生根培養(yǎng)基上生根的階段，直接將經(jīng)過吲哚丁酸浸泡處理的試管苗移栽到裝有含水量大約為55%~70% (體積)的蛭石煉苗缽中，用一次性透明塑料杯反過來扣在煉苗缽中的苗上；然后在蛭石煉苗缽中生根2~4個星期后再移栽到土壤中。
[0029]現(xiàn)有技術(shù)中上沒有拯救組培過程中染菌試管苗的技術(shù)，而且，在現(xiàn)有技術(shù)組培過程中，將組培過程中染菌試管苗的基部浸入生根誘導(dǎo)劑水溶液進(jìn)行浸泡處理后，經(jīng)過吲哚丁酸浸泡處理的試管苗需要經(jīng)過在生根培養(yǎng)基上生根的階段，才能移栽到煉苗缽中煉苗。本發(fā)明采用高濃度生根誘導(dǎo)劑水溶液直接處理染菌的試管苗，并將經(jīng)生根誘導(dǎo)劑處理的試管苗直接轉(zhuǎn)移到蛭石中進(jìn)行生根，從而實現(xiàn)拯救染菌的試管苗的目的，這對解決現(xiàn)有的植物組培研究中，因為解決因染菌造成的試管苗大量損失提供了一種新的拯救手段。
【具體實施方式】
[0030]為使本發(fā)明更加容易理解，下面將結(jié)合實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明，這些實施例僅起說明性作用，并不局限于本發(fā)明的應(yīng)用范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規(guī)實驗方法進(jìn)行。
[0031]實施例
[0032]實施例1:0.lmg/mL吲哚丁酸處理真菌污染試管苗的生根試驗
[0033]1.真菌污染試管苗的處理。將來自甘藍(lán)型油菜湘油15號下胚軸的32顆真菌污染的無根試管苗取出，用蒸餾水洗去試管苗基部的真菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織。
[0034]2.浸泡與煉苗，將清理好的試管苗的基部在0.lmg/mL的吲哚丁酸水溶液中浸泡3秒后，迅速將浸泡過的試管苗轉(zhuǎn)移到裝有蛭石的直徑為8厘米小缽中，蛭石的含水量為65%左右，每缽移一顆無根試管苗。再用一個底部開有2個3毫米左右小孔的一次性透明塑料反扣在試管苗上，讓其煉苗的同時生長出不定根。
[0035]3.移栽，煉苗15天后，32顆無根試管苗有31顆試管苗生長出了不定根，平均根長^ 2.5厘米，每個試管苗不定根數(shù)平均為3.5根，將31株帶根的苗移栽到帶有營養(yǎng)土的直徑為30厘米的缽中。
[0036]由此可見，來自甘藍(lán)型油菜湘油15號下胚軸的試管苗，受真菌污染后，經(jīng)0.1mg/HiL吲哚丁酸處理后成活。
[0037]實施例2:0.2mg/mL吲哚丁酸處理細(xì)菌污染試管苗的生根試驗
[0038]1.細(xì)菌污染試管苗的處理。將來自甘藍(lán)型油菜GX27下胚軸的21顆細(xì)菌污染的無根試管苗取出，用蒸餾水洗去試管苗基部的霉菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織。`
[0039]2.浸泡與煉苗，將清理好的試管苗的基部在0.2mg/mL的吲哚丁酸水溶液中浸泡10秒后，迅速將浸泡過的試管苗轉(zhuǎn)移到裝有蛭石的直徑為8厘米小缽中，蛭石的含水量為65%左右，每缽移一顆無根試管苗。再用一個底部開有2個3毫米左右小孔的一次性透明塑料反扣在試管苗上，讓其煉苗的同時生長出不定根。
[0040]3.移栽，煉苗15天后，21顆無根試管苗有21顆試管苗生長出了不定根，平均根長^ 2.7厘米，每個試管苗不定根數(shù)平均為3.8根，將21株帶根的苗移栽到帶有營養(yǎng)土的直徑為30厘米的缽中。
[0041]由此可見，來自甘藍(lán)型油菜GX27下胚軸的試管苗，受細(xì)菌污染后，經(jīng)0.2mg/mL吲哚丁酸處理后成活。
[0042]實施例3:0.lmg/mL吲哚乙酸處理真菌污染試管苗的生根試驗
[0043]1.真菌污染試管苗的處理。將來自甘藍(lán)型油菜湘油15號下胚軸的37顆真菌污染的無根試管苗取出，用蒸餾水洗去試管苗基部的真菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織。
[0044]2.浸泡與煉苗，將清理好的試管苗的基部在0.lmg/mL的吲哚乙酸水溶液中浸泡5秒后，迅速將浸泡過的試管苗轉(zhuǎn)移到裝有蛭石的直徑為8厘米小缽中，蛭石的含水量為65%左右，每缽移一顆無根試管苗。再用一個底部開有2個3毫米左右小孔的一次性透明塑料反扣在試管苗上，讓其煉苗的同時生長出不定根。
[0045]3.移栽，煉苗15天后，37顆無根試管苗有35顆試管苗生長出了不定根，平均根長^ 2.9厘米，每個試管苗不定根數(shù)平均為3.3根，將35株帶根的苗移栽到帶有營養(yǎng)土的直徑為30厘米的缽中。[0046]由此可見，來自甘藍(lán)型油菜湘油15號下胚軸的試管苗，受真菌污染后，經(jīng)0.1mg/mL吲哚乙酸處理后成活。
[0047]實施例4:0.lmg/mL吲哚乙酸處理真菌污染試管苗的生根試驗
[0048]1.真菌污染試管苗的處理。將來自白菜BI下胚軸的30顆真菌污染的無根試管苗取出，用蒸餾水洗去試管苗基部的真菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織。
[0049]2.浸泡與煉苗，將清理好的試管苗的基部在0.lmg/mL的吲哚乙酸水溶液中浸泡5秒后，迅速將浸泡過的試管苗轉(zhuǎn)移到裝有蛭石的直徑為8厘米小缽中，蛭石的含水量為65%左右，每缽移一顆無根試管苗。再用一個底部開有2個3毫米左右小孔的一次性透明塑料反扣在試管苗上，讓其煉苗的同時生長出不定根。
[0050]3.移栽，煉苗15天后，30顆無根試管苗有30顆試管苗生長出了不定根，平均根長^ 2.6厘米，每個試管苗不定根數(shù)平均為3.2根，將30株帶根的苗移栽到帶有營養(yǎng)土的直徑為30厘米的缽中。
[0051]由此可見，來自白菜BI下胚軸的試管苗，受真菌污染后，經(jīng)0.lmg/mL吲哚丁酸處理后成活。
[0052]實施例5:0.2mg/mL吲哚丁酸處理細(xì)菌污染試管苗的生根試驗
[0053]1.真菌污染試管苗的處理。將來自甘藍(lán)G3下胚軸的41顆細(xì)菌污染的無根試管苗取出，用蒸餾水洗去試管苗基部的細(xì)菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織。
[0054]2.浸泡與煉苗，將清理好的試管苗的基部在0.2mg/mL的吲哚丁酸水溶液中浸泡5秒后，迅速將浸泡過的試管苗轉(zhuǎn)移到裝有蛭石的直徑為8厘米小缽中，蛭石的含水量為65%左右，每缽移一顆無根試管苗。再用一個底部開有2個3毫米左右小孔的一次性透明塑料反扣在試管苗上，讓其煉苗的同時生長出不定根。
[0055]3.移栽，煉苗15天后，41顆無根試管苗有38顆試管苗生長出了不定根，平均根長^ 2.1厘米，每個試管苗不定根數(shù)平均為3.8根，將38株帶根的苗移栽到帶有營養(yǎng)土的直徑為30厘米的缽中。
[0056]來自甘藍(lán)G3下胚軸的試管苗，受細(xì)菌污染后，經(jīng)0.2mg/mL吲哚丁酸處理后成活。
[0057]實施例6:0.3mg/mL吲哚丁酸處理細(xì)菌污染試管苗的生根試驗
[0058]1.真菌污染試管苗的處理。將來自甘藍(lán)G3下胚軸的33顆細(xì)菌污染的無根試管苗取出，用蒸餾水洗去試管苗基部的細(xì)菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織。
[0059]2.浸泡與煉苗，將清理好的試管苗的基部在0.3mg/mL的吲哚丁酸水溶液中浸泡5秒后，迅速將浸泡過的試管苗轉(zhuǎn)移到裝有蛭石的直徑為8厘米小缽中，蛭石的含水量為55%左右，每缽移一顆無根試管苗。再用一個底部開有2個3毫米左右小孔的一次性透明塑料反扣在試管苗上，讓其煉苗的同時生長出不定根。
[0060]3.移栽，煉苗21天后，33顆無根試管苗有30顆試管苗生長出了不定根，平均根長^ 3.1厘米，每個試管苗不定根數(shù)平均為3.2根，將30株帶根的苗移栽到帶有營養(yǎng)土的直徑為30厘米的缽中。
[0061]來自甘藍(lán)G3下胚軸的試管苗，受細(xì)菌污染后，經(jīng)0.3mg/mL吲哚丁酸處理后成活。[0062]實施例1:0.3mg/mL吲哚乙酸處理真菌污染試管苗的生根試驗
[0063]1.真菌污染試管苗的處理。將來自白菜BI下胚軸的26顆細(xì)菌污染的無根試管苗取出，用蒸餾水洗去試管苗基部的細(xì)菌污染物，切除試管苗基部變褐黑色的部分，但是要避免傷到綠色組織。
[0064]2.浸泡與煉苗，將清理好的試管苗的基部在0.3mg/mL的吲哚乙酸水溶液中浸泡5秒后，迅速將浸泡過的試管苗轉(zhuǎn)移到裝有蛭石的直徑為8厘米小缽中，蛭石的含水量為70%左右，每缽移一顆無根試管苗。再用一個底部開有2個3毫米左右小孔的一次性透明塑料反扣在試管苗上，讓其煉苗的同時生長出不定根。 [0065]3.移栽，煉苗28天后，26顆無根試管苗有24顆試管苗生長出了不定根，平均根長^ 3.7厘米，每個試管苗不定根數(shù)平均為2.9根，將24株帶根的苗移栽到帶有營養(yǎng)土的直徑為30厘米的缽中。
[0066]來自白菜BI下胚軸的試管苗，受真菌污染后，經(jīng)0.3mg/mL吲哚乙酸處理后成活。
[0067]通過上述實施例可以看出，本發(fā)明方法可以使原來只能丟棄的染菌的組培試管苗長出根，從而實現(xiàn)了拯救染菌的試管苗的目的，這對解決現(xiàn)有的植物組培研究中，因為解決因染菌造成的試管苗大量損失提供了一種新的手段。
[0068]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。例如，本發(fā)明同樣適用于染菌的抗性試管苗。
【權(quán)利要求】
1.一種植物組培過程中染菌試管苗的生根方法，包括: 步驟A，將植物組培過程中染菌試管苗的基部浸入生根誘導(dǎo)劑水溶液進(jìn)行浸泡處理； 步驟B，將經(jīng)過生根誘導(dǎo)劑浸泡處理的試管苗移栽至煉苗裝置中； 步驟C，用罩體罩住經(jīng)過生根誘導(dǎo)劑處理的試管苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生根方法，其特征在于，在步驟A中，所述浸泡處理的時間為3~10秒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生根方法，其特征在于，在步驟A中，所述生根誘導(dǎo)劑水溶液的濃度為0.1~0.3mg/mL ;優(yōu)選為0.1~0.2mg/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任意一項所述的生根方法，其特征在于，所述生根誘導(dǎo)劑包括口引哚乙酸和/或吲哚丁酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4中任意一項所述的生根方法，其特征在于，在步驟B中，煉苗裝置中含有蛭石和水。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生根方法，其特征在于，所述煉苗裝置中含水量為55~70%(體積)；優(yōu)選為65% (體積)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~6中任意一項所述的生根方法，其特征在于，在步驟C中，生根培養(yǎng)時間為2~4周；優(yōu)選為2周。
8.根據(jù)權(quán)利要求1~7中任意一項所述的生根方法，其特征在于，所述方法還包括在步驟A之前切除染菌試管苗的基部的變成褐黑色的部分。
9.根據(jù)權(quán)利要求1~8中任意一項所述的生根方法，其特征在于，所述方法還包括在步驟C之后，將生根培養(yǎng)后的試管苗移栽到土壤中的步驟。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1~9中任意一項所述的生根方法在油菜組培過程中的染菌試管苗生根中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01H4/00GK103477990SQ201310481612
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年10月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月15日
【發(fā)明者】阮穎, 劉春林 申請人:阮穎, 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)