一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法，通過(guò)1)、外植體獲取及脫毒；2)、外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)；3)、叢生芽培養(yǎng)；4)、生根培養(yǎng)；5)、煉苗；6)、大田培育，將實(shí)驗(yàn)室克隆技術(shù)與大棚訓(xùn)練方法技術(shù)結(jié)合繁殖吉賽拉砧木，解決了以往繁殖速度慢，且砧木品種差的問(wèn)題，繁育速度相比扦插繁育提高30倍以上，技術(shù)先進(jìn)，節(jié)省時(shí)間，一年可繁育10——100萬(wàn)株生產(chǎn)苗木，有很高的推廣價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及櫻桃栽培領(lǐng)域，特別涉及大櫻桃吉塞拉快速繁育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]大櫻桃原產(chǎn)于歐洲，為優(yōu)良的喬木水果果樹(shù)品種，因大櫻桃具有果實(shí)成熟期早、果粒大、色澤絢麗、口感好、經(jīng)濟(jì)效益高等諸多特點(diǎn)，而且營(yíng)養(yǎng)物種豐富，保健功能強(qiáng)，深受消費(fèi)者喜愛(ài)。中國(guó)屬引種栽培國(guó)家，發(fā)展速度很快。同時(shí)大櫻桃又是嫁接栽培的果樹(shù)品種，生產(chǎn)栽培過(guò)程中，砧木品種選用十分重要。因?yàn)檎枘緵Q定樹(shù)勢(shì)、樹(shù)齡、抗性、適應(yīng)性，也影響豐產(chǎn)性能、果實(shí)品質(zhì)和花果時(shí)間等。針對(duì)不能用種子繁殖的多倍體植物，目前采用常規(guī)扦插繁殖的缺點(diǎn)主要表現(xiàn)為:
[0003]1、技術(shù)不穩(wěn)定。
[0004]2、扦插的材料來(lái)源少，材料不能達(dá)到理想的繁育目的。
[0005]3、繁殖技術(shù)為常規(guī)方法，不能與現(xiàn)代先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)接軌。
[0006]繁殖速度慢，不能滿(mǎn)足產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的需要。
[0007]“吉塞拉”是由德國(guó)育成的三倍體優(yōu)良矮化砧木品種。具有使樹(shù)體矮化開(kāi)張、早花早果、早熟和豐產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、抗旱、抗寒、固地性好，對(duì)土壤適應(yīng)范圍廣等諸多優(yōu)點(diǎn)。在目前，中國(guó)大櫻桃產(chǎn)業(yè)化大發(fā)展的背景下，良種砧木遠(yuǎn)跟不上生產(chǎn)需要，市場(chǎng)苗木極為混亂，不良砧木品種會(huì)給產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展帶來(lái)許多負(fù)面效應(yīng)，到目前許多地區(qū)已經(jīng)出現(xiàn)了樹(shù)體不健康(病害嚴(yán)重)、死樹(shù)、不結(jié)果或果實(shí)品質(zhì)差等現(xiàn)象，而且良種繁育技術(shù)不夠先進(jìn)，
[0008]綜上，之前生產(chǎn)中砧木繁殖多以種子繁殖求得效益和速度，對(duì)砧木質(zhì)量的重要問(wèn)題重視不夠，所以砧木品種不優(yōu)、混亂。吉塞拉是大櫻桃的優(yōu)良砧木品種，但為3倍體生物，沒(méi)有種子，所以大量快速繁殖有難度。有扦插繁殖技術(shù)應(yīng)用，但繁殖速度較慢，遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足生產(chǎn)需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提出一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室克隆技術(shù)與大棚訓(xùn)練方法技術(shù)結(jié)合，繁育速度相比扦插繁育提高30倍以上，技術(shù)先進(jìn)，節(jié)省時(shí)間，一年可繁育10——100萬(wàn)株生產(chǎn)苗木，有很高的推廣價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。
[0010]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0011]一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法，包括如下步驟:
[0012]I)、外植體獲取及脫毒
[0013]外植體要通過(guò)材料脫毒、殺菌消毒后獲取無(wú)菌莖尖；
[0014]2)、外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0015]外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+6-BA0.5mg / L+ZT0.4mg / L+IBA0.1mg / L，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)30d，獲得新生芽體。
[0016]3)、叢生芽增殖培養(yǎng)[0017]選擇用MS為基本培養(yǎng)基，用4種激素6-BA (6_芐氨基嘌呤)、ZT (玉米素)、ΚΤ (激動(dòng)素)、IBA (吲哚丁酸)組合，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)25d ;可明顯提高叢生芽增殖系數(shù)(達(dá)到11)。
[0018]4)、生根培養(yǎng)
[0019]采用:1 / 4MS+6-BA0.3mg / L+IBA0.5mg / L培養(yǎng)基，黑暗處理15d進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根效果達(dá)到5根/株左右。
[0020]5)、煉苗技術(shù)
[0021]煉苗基質(zhì)及配方選用:草糞:園土 =1:1配比，在大棚對(duì)煉苗環(huán)境(溫度、濕度)全程控制7d.煉苗溫度保持在18°C~26°C之間，煉苗濕度保持在80%。成活率達(dá)90%以上；
[0022]6)、大田培育
[0023]通過(guò)煉苗成活的幼苗在移入大田，在自然環(huán)境中培育2——3月。
[0024]進(jìn)一步，所述步驟I)外植體獲取及脫毒的具體操作為:①脫毒:將盆栽苗放入熱處理箱內(nèi)，進(jìn)行變溫 處理，開(kāi)始處理時(shí)溫度為30-32 V，然后每隔Id提高TC，直至37~38°C,穩(wěn)定處理6周。②殺菌消毒:取1.5-2.0cm長(zhǎng)新梢,用自來(lái)水沖洗10~12h,然后在超凈工作臺(tái)上用70%酒精浸泡材料30s，用0.1%升汞浸泡8~12min，并不時(shí)輕輕攪動(dòng)；加入適量吐溫-傾去升汞-用無(wú)菌水沖洗8~10次后，用無(wú)菌紗布吸干水分；③外植體獲取:在無(wú)菌室解剖鏡下，切取0.3mm左右莖尖接種至培養(yǎng)基培養(yǎng)。
[0025]進(jìn)一步，所述步驟2)中培養(yǎng)環(huán)境條件為:清潔環(huán)境，培養(yǎng)溫度22_28°C，光照時(shí)間8-14h / d，光照強(qiáng)度 1000-3000Lx。
[0026]進(jìn)一步，所述步驟3)中培養(yǎng)基配方及具體濃度為:Ms+6_BA0.5mg / L+ZT0.2mg /L+KT0.2mg / L+IBA0.lmg/L。
[0027]進(jìn)一步，所述步驟5)中煉苗基質(zhì)也可為草炭土:蛭石:珍珠巖=6:3:1混合配比或草糞:園土 =1:1配比。
[0028]進(jìn)一步，所述步驟5)中溫度煉苗溫度在18°C~26°C之間；
[0029]進(jìn)一步，所述步驟5)中濕度控制方法為:試管苗移栽后的前三天濕度控制在90%以上，每天白天用噴霧噴頭隔I小時(shí)噴一次水，噴灑過(guò)程中只噴葉面，不噴根部和營(yíng)養(yǎng)土，連續(xù)三天，幼苗健康，葉子變綠，此后每天噴水兩次，如此連續(xù)一周，一周后每隔兩天噴灑一次稀薄營(yíng)養(yǎng)液，隔五天噴灑一次1000倍的多菌靈液，經(jīng)過(guò)一個(gè)多月的精心管理后幼苗便可健康生長(zhǎng)。
[0030]相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為:通過(guò)實(shí)驗(yàn)室克隆技術(shù)與大棚訓(xùn)練方法技術(shù)結(jié)合繁殖吉賽拉砧木，解決了以往繁殖速度慢，且砧木品種差的問(wèn)題，繁育速度相比扦插繁育提高30倍以上，技術(shù)先進(jìn)，節(jié)省時(shí)間，一年可繁育10—50萬(wàn)株甚至更多的生產(chǎn)苗木，有很高的推廣價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。
[0031]如，2010年4月，我們成功獲取12瓶“吉賽拉5號(hào)”外植體，并誘導(dǎo)叢生芽56個(gè)，同年研究篩選優(yōu)化條件(培養(yǎng)基)和各環(huán)節(jié)技術(shù)，到年底(2010.12)，實(shí)驗(yàn)室培育芽苗約I萬(wàn)株。
[0032]2011年在快繁技術(shù)體系研究成熟的情況下，基于約I萬(wàn)株芽苗，從2012.2——9月份，開(kāi)始叢生芽增殖培養(yǎng)，繼代增殖擴(kuò)繁9代，獲得有效新生芽約53萬(wàn)個(gè)，因受實(shí)驗(yàn)室條件限制，無(wú)法進(jìn)行再擴(kuò)大，從8月份進(jìn)入生根培養(yǎng)、大棚煉苗和擴(kuò)繁的大循環(huán)過(guò)程。到2013.4月份，共從大棚連續(xù)移入大田的試管苗達(dá)到21.2萬(wàn)株。如果實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)面積寬敞，各環(huán)節(jié)操作不相礙，出苗量會(huì)成倍性大大增加。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1為本發(fā)明流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0034]下面結(jié)合附圖及【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)描述:
[0035]一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法，包括如下步驟:
[0036]I)、外植體獲取及脫毒
[0037]外植體要通過(guò)材料脫毒、殺菌消毒后獲取無(wú)菌莖尖；
[0038]2)、外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0039]外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基:用4種激素6-BA(6_芐氨基嘌呤)、ZT (玉米素)、KT (激動(dòng)素)、IBA(吲哚丁酸)組合，MS+6-BA0.5mg / L+ZT0.4mg / L+IBA0.1mg / L，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)30d，獲得新生芽體。
[0040]3)、叢生芽增殖培養(yǎng)
[0041]選擇用MS為基本培養(yǎng)基，用4種激素6-BA(6_芐氨基嘌呤)、ZT(玉米素)、ΚΤ(激動(dòng)素)、IBA(吲哚丁酸)組合，最佳優(yōu)化培養(yǎng)基:Ms+6-BA0.5mg / L+ZT0.2mg /L+KT0.2mg / L+IBA0.1mg / L，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)25d，可明顯提高叢生芽增殖系數(shù)(達(dá)到11)。
[0042]4)、生根培養(yǎng)
[0043]采用優(yōu)化組合培養(yǎng)基:1 / 4MS+6-BA0.3mg / L+IBA0.5mg / L培養(yǎng)基，黑暗處理15d進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根效果達(dá)到5根/株左右。
[0044]5)、煉苗技術(shù)
[0045]煉苗基質(zhì)及配方選用:草糞:園土 =1:1配比，在大棚對(duì)煉苗環(huán)境(溫度、濕度)全程控制7d.煉苗溫度保持在18°C~26°C之間，煉苗濕度保持在80%。成活率達(dá)90%以上；
[0046]6)、大田培育
[0047]通過(guò)煉苗成活的幼苗在移入大田，在自然環(huán)境中培育2——3月。
[0048]進(jìn)一步，所述步驟I)外植體獲取及脫毒的具體操作為:①脫毒:將盆栽苗放入熱處理箱內(nèi)，進(jìn)行變溫處理，開(kāi)始處理時(shí)溫度為30-32 V，然后每隔Id提高TC，直至37~38°C,穩(wěn)定處理6周。②殺菌消毒:取1.5-2.0cm長(zhǎng)新梢,用自來(lái)水沖洗10~12h,然后在超凈工作臺(tái)上用70%酒精浸泡材料30s，用0.1%升汞浸泡8~12min，并不時(shí)輕輕攪動(dòng)；加入適量吐溫-傾去升汞-用無(wú)菌水沖洗8~10次后，用無(wú)菌紗布吸干水分；③外植體獲取:在解剖鏡下，切取0.3mm左右莖尖接種至培養(yǎng)基培養(yǎng)。
[0049]進(jìn)一步，所述步驟2)中培養(yǎng)環(huán)境條件為:清潔環(huán)境，培養(yǎng)溫度22_28°C，光照時(shí)間8-14h / d，光照強(qiáng)度 1000-3000Lx。
[0050]進(jìn)一步，所述步驟3)中培養(yǎng)基配方及具體濃度為:Ms+6-BA0.5mg / L+ZT0.2mg /L+KT0.2mg / L+IBA0.lmg/L。
[0051]進(jìn)一步，所述步驟4)中培養(yǎng)基配方及具體濃度為:1 / 4MS+6-BA0.3mg /L+IBA0.5mg / L培養(yǎng)基，黑暗處理IOd進(jìn)行生根培養(yǎng)。
[0052]進(jìn)一步，所述步驟5)中煉苗基質(zhì)也可為草炭土:蛭石:珍珠巖=6:3:1混合配比或草糞:園土 =1:1配比。
[0053]進(jìn)一步，所述步驟5)中溫度煉苗溫度在18°C~26°C之間；
[0054]進(jìn)一步，所述步驟5)中濕度控制方法為:試管苗移栽后的前三天濕度控制在90%以上，每天白天用噴霧噴頭隔I小時(shí)噴一次水，噴灑過(guò)程中只噴葉面，不噴根部和營(yíng)養(yǎng)土，連續(xù)三天，幼苗健康，葉子變綠，此后每天噴水兩次，如此連續(xù)一周，一周后每隔兩天噴灑一次稀薄營(yíng)養(yǎng)液，隔五天噴灑一次1000倍的多菌靈液，經(jīng)過(guò)一個(gè)多月的精心管理后幼苗便可健康生長(zhǎng)。
[0055]如圖1所示，一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法，其步驟為:
[0056]1、外植體獲取及脫毒
[0057]外植體要通過(guò)材料脫毒、殺菌消毒等過(guò)程后獲取莖尖等無(wú)菌材料。①脫毒:將盆栽苗放入熱處理箱內(nèi)，進(jìn)行變溫處理，開(kāi)始處理時(shí)溫度為30-32°C，然后每隔Id提高I °C，直至37~38°C，穩(wěn)定處理6周。②殺菌消毒:取1.5-2.0cm長(zhǎng)新梢 ，用自來(lái)水沖洗10~12h，然后在超凈工作臺(tái)上用70%酒精浸泡材料30s，用0.1 %升汞浸泡8~12min，并不時(shí)輕輕攪動(dòng)。加入適量吐溫-傾去升汞-用無(wú)菌水沖洗8~10次后，用無(wú)菌紗布吸干水分。③外植體獲取:在解剖鏡下，切取0.3mm左右莖尖接種至培養(yǎng)基培養(yǎng)。
[0058]2、外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0059]外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基:外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基:用4種激素6-BA(6_節(jié)氨基嘌呤)、ZT (玉米素)、KT (激動(dòng)素)、IBA (吲哚丁酸)組合，即:MS+6-BA0.5mg / L+ZT0.4mg /L+IBA0.1mg / L，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)30d，獲得新生芽體。
[0060]培養(yǎng)環(huán)境條件:培養(yǎng)溫度22_28°C，光照時(shí)間8_14h / d，光照強(qiáng)度1000_3000Lx。培養(yǎng)室保持清潔衛(wèi)生，發(fā)現(xiàn)污染及時(shí)清除，以防蔓延和相互傳染。
[0061]3、叢生芽培養(yǎng)技術(shù)
[0062]擇用MS為基本培養(yǎng)基，用4種激素6-BA (6_芐氨基嘌呤)、ZT (玉米素)、ΚΤ (激動(dòng)素)、ΙΒΑ(吲哚丁酸)組合，最佳優(yōu)化培養(yǎng)基:Ms+6-BA0.5mg / L+ZT0.2mg / L+KT0.2mg /L+IBA0.1mg / L，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)25d，可明顯提高叢生芽增殖系數(shù)(達(dá)到11)。
[0063]4、生根培養(yǎng)技術(shù)
[0064]采用優(yōu)化組合培養(yǎng)基:1 / 4MS+6-BA0.3mg / L+IBA0.5mg / L培養(yǎng)基，黑暗處理15d進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根效果達(dá)到5根/株左右。
[0065]5、煉苗技術(shù)
[0066]“吉賽拉”煉苗基質(zhì)，最佳配方是I / 2草糞+1 / 2園土。煉苗效果成活率達(dá)到90.2%，而且生長(zhǎng)速度快，植株粗壯，葉片濃綠。另外，用草炭土:蛭石:珍珠巖=6:3:1混合配方，煉苗成活率可達(dá)88%，而生長(zhǎng)速度較快，植株粗壯，葉片濃綠。
[0067]另外試管苗移栽后的前三天必須控制好溫濕度，濕度應(yīng)控制在90%以上，每天白天用噴霧噴頭隔I小時(shí)噴一次水，噴灑過(guò)程中只噴葉面，不噴根部和營(yíng)養(yǎng)土，這樣連續(xù)三天，幼苗健康，葉子變綠，此后每天噴水兩次，如此連續(xù)一周。一周后每隔兩天噴灑一次稀薄營(yíng)養(yǎng)液，隔五天噴灑一次1000倍的多菌靈液，經(jīng)過(guò)一個(gè)多月的精心管理后幼苗便可健康生長(zhǎng)。煉苗溫度一般應(yīng)保持在15°c~28°C之間，最佳溫度煉苗溫度在15°C~25°C之間。[0068]6、大田培育
[0069]通過(guò)煉苗成活的幼苗在2——3月移入大田進(jìn)行培育，培育條件為自然環(huán)境。
[0070]以上所述，僅為本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何不經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性勞動(dòng)想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書(shū)所限`定的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種大櫻桃吉塞拉快速繁育方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)、外植體獲取及脫毒: 外植體要通過(guò)材料脫毒、殺菌消毒后獲取無(wú)菌莖尖； 2)、外植體誘導(dǎo)培養(yǎng): 外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基:用MS+6-BA0.5mg / L+ZT0.4mg / L+IBA0.1mg / L，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)30d，獲得新生芽體； 3)、叢生芽增殖培養(yǎng): 選擇用MS為基本培養(yǎng)基，用4種激素6-BA (6-芐氨基嘌呤)、ZT (玉米素)、KT (激動(dòng)素)、IBA(吲哚丁酸)組合，對(duì)“吉塞拉”外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)25d ； 4)、生根培養(yǎng): 采用:1 / 4MS+6-BA0.3mg / L+IBA0.5mg / L培養(yǎng)基，黑暗處理15d進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根效果達(dá)到5根/株左右； 5)、煉苗技術(shù) 煉苗基質(zhì)及配方選用:草糞:園土 =1:1配比，在大棚對(duì)煉苗環(huán)境(溫度、濕度)全程控制7d ;煉苗溫度保持在18°C~26°C之間，煉苗濕度保持在80%。成活率達(dá)90%以上； 6)、大田培育 通過(guò)煉苗成活的幼苗在移入大田，`在自然環(huán)境中培育2——3月。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟I)外植體獲取及脫毒的具體操作為:①脫毒:將盆栽苗放入熱處理箱內(nèi)，進(jìn)行變溫處理，開(kāi)始處理時(shí)溫度為30-32°C，然后每隔Id提高I °C，直至37~38°C，穩(wěn)定處理6周。②殺菌消毒:取1.5-2.0cm長(zhǎng)新梢，用自來(lái)水沖洗10~12h，然后在超凈工作臺(tái)上用70%酒精浸泡材料30s，用0.1 %升汞浸泡8~12min，并不時(shí)輕輕攪動(dòng)；加入適量吐溫-傾去升汞-用無(wú)菌水沖洗8~10次后，用無(wú)菌紗布吸干水分；③外植體獲取:在解剖鏡下，切取0.3mm左右莖尖接種至培養(yǎng)基培養(yǎng)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟2)中培養(yǎng)環(huán)境條件為:清潔環(huán)境，培養(yǎng)溫度22-28°C，光照時(shí)間8-14h / d，光照強(qiáng)度1000_3000Lx。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟3)中培養(yǎng)基的具體濃度為:MS+6-BA0.5-1.0mg / L ；ZT0.1-0.2mg / L ；IBA0.3mg / L。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟5)中煉苗基質(zhì)也可為草炭土:蛭石:珍珠巖=6:3:1混合配比。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟5)中溫度煉苗溫度在15°C~25°C之間。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟5)中濕度控制方法為:試管苗移栽后的前三天濕度控制在90%以上，每天白天用噴霧噴頭隔I小時(shí)噴一次水,噴灑過(guò)程中只噴葉面，不噴根部和營(yíng)養(yǎng)土，連續(xù)三天，幼苗健康，葉子變綠，此后每天噴水兩次，如此連續(xù)一周，一周后每隔兩天噴灑一次稀薄營(yíng)養(yǎng)液，隔五天噴灑一次1000倍的多菌靈液，經(jīng)過(guò)一個(gè)多月的精心管理后幼苗便可健康生長(zhǎng)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103688852SQ201310478199
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年10月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月15日
【發(fā)明者】白文釗, 代貴華 申請(qǐng)人:陜西理工學(xué)院