一種鐵皮石斛莖段組培育苗法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛莖段組培育苗法，其步驟為：(1)消毒；(2)誘導(dǎo)出芽；(3)側(cè)芽培養(yǎng)；(4)培養(yǎng)擴繁；(5)出苗。其優(yōu)點在于：第一，在莖段培養(yǎng)過程中改變接種方式，結(jié)合培養(yǎng)基的調(diào)整，使莖段培養(yǎng)增殖率達(dá)到4以上，解決了莖段培養(yǎng)中增殖率不高的問題；第二，不再需要五次移苗、配置不同的培養(yǎng)基，提高了培養(yǎng)的效率，減少了工作人員的勞動量。
【專利說明】一種鐵皮石斛莖段組培育苗法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及種苗生產(chǎn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種以鐵皮石斛莖條為材料的組培育苗方法。【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛為蘭科附生植物，主要分布于江西、廣西、廣東、貴州、云南、安徽、浙江、湖南、陜西、河南、福建等地，其生境獨特，對小氣候要求十分嚴(yán)格，常生長于海拔500~1500米之間，附生在懸崖峭壁上或闊葉樹的樹干上以及石灰?guī)r上，喜溫暖、濕潤、半陽的環(huán)境。在野生狀態(tài)下，鐵皮石斛繁殖速率低、生長緩慢，加之掠奪性采挖，使其野生資源日益減少，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足國內(nèi)外市場經(jīng)濟(jì)發(fā)展和臨床醫(yī)學(xué)的需要，因此鐵皮石斛人工種植的規(guī)模迅速擴大。鐵皮石斛種子極其細(xì)小、自然成活率低，因此培育大量石斛種苗是人工栽培時必須解決的第一個問題，現(xiàn)在鐵皮石斛種苗生產(chǎn)方式主要通過組織培養(yǎng)方法解決。
[0003]鐵皮石斛組培育苗現(xiàn)在一般采用鐵皮石斛蒴果經(jīng)消毒后將種子播種于MS培養(yǎng)基中催芽-圓球莖分化增殖-誘導(dǎo)出芽-誘導(dǎo)出根-煉苗-馴化的過程，該方法效率高，為大多數(shù)生產(chǎn)鐵皮石斛種苗的企業(yè)所采用；但是由于利用種子作為繁殖材料，屬于有性繁殖方式，不可避免的會出現(xiàn)基因不純，種苗混雜的現(xiàn)象。另外也有報道選取鐵皮石斛莖段為外植體通過誘導(dǎo)出芽進(jìn)行增殖的報道，但由于增殖率不高，效率太低，致使該培養(yǎng)方式基本局限于研究單位研究之用，得不到生產(chǎn)上的應(yīng)用。
[0004]例如，申請?zhí)枮?00810058316.0的發(fā)明，公開了一種鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，其方法為:(I)取鐵皮石斛未展開葉新芽，經(jīng)滅菌將莖尖接種到固體培養(yǎng)基，建立無菌體系；(2)切取無菌體系幼苗的莖段或基部小組織塊，在適宜的激素組合和培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出原球莖；(3)原球莖在液體和固體繼代增殖培養(yǎng)基上交替培養(yǎng)，快速增殖形成原球莖團(tuán)；(4)將原球莖團(tuán)切開，轉(zhuǎn)接到固體成苗培養(yǎng)基上分化植株，形成小苗；(5)將小苗轉(zhuǎn)接到固體壯苗培養(yǎng)基上壯苗、生根，培育出完整的植株；(6)將無菌壯苗定植至適宜的煉苗基質(zhì)中，獲得優(yōu)質(zhì)種苗。本發(fā)明可用于大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，具有外植體去污率高、增殖率高、變異率低、種苗粗壯、品質(zhì)好、移栽后成活率高、生長勢強等優(yōu)勢。但是，該發(fā)明公開的技術(shù)方案，繼代增殖、幼苗培養(yǎng)、成苗培養(yǎng)、壯苗生根培養(yǎng)階段，五次移苗，需要不同的培養(yǎng)基，培養(yǎng)的效率低、工作人員的勞動量大。而且原球莖的繼代增殖需要經(jīng)過液體和固體增殖培養(yǎng)基上交替培養(yǎng)，工序麻煩。
[0005]申請?zhí)枮?00910154225.1的發(fā)明，公開了一種鐵皮石斛種苗的組織培養(yǎng)的光調(diào)控方法，其特征在于鐵皮石斛種苗的組織培養(yǎng)過程中，以LED植物生長照明系統(tǒng)作為光源實施光照處理，種子萌發(fā)階段光質(zhì)為白光、光強為10-15 μ mol光照時間12小時/天；種苗生長的第一階段為從胚形成胚芽后的第I天至第30天，光照處理選用光質(zhì)為紅光，光強為45-50μπιΟ1.m_2.s—1 ;第二階段為胚形成胚芽后的第31天后，光質(zhì)選用紅、藍(lán)混合光，紅光:藍(lán)光為4: 1，光強為45-50μm
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種鐵皮石斛莖段組織培養(yǎng)的方法，該方法在于莖段培養(yǎng)過程中改變接種方式，結(jié)合培養(yǎng)基的調(diào)整，使莖段培養(yǎng)增殖率達(dá)到4以上，解決了莖段培養(yǎng)中增殖率不高的問題。
[0007]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛莖段組培育苗法，所述鐵皮石斛莖段組培育苗法的步驟為:
[0008](I)消毒:將當(dāng)年生新鮮鐵皮石斛莖條用干凈的剪刀剪切下來，然后用消毒水沖洗干凈、并吸干莖條上的水珠，再用75%酒精浸泡消毒I分鐘，撈起晾干待用；再將所述鐵皮石斛莖條在超凈工作臺上用0.1 %升汞消毒10分鐘，然后再用無菌水清洗三次；
[0009](2)誘導(dǎo)出芽:將消毒好的所述鐵皮石斛莖條切成兩個莖段節(jié)間的莖段，并接種于l/2Ms+6-BAl.0mg/L+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)出芽，培養(yǎng)溫度為25°C，光照強度為2000LX，光照時間為12小時，培養(yǎng)40天后，所述莖段節(jié)間開始萌發(fā)出側(cè)芽，培養(yǎng)60天后，所述側(cè)芽能長高到I~2cm ;
[0010](3)側(cè)芽培養(yǎng):將所述側(cè)芽挖切下來接種于1/2MS+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60天后，所述側(cè)芽就可以繼續(xù)長高到4~5cm、并且?guī)в?~5個莖間；
[0011](4)培養(yǎng)擴繁:將上一步培養(yǎng)出來所述4~5cm高的側(cè)芽切掉頂芽和/或根，成為新莖段，再以平鋪的方式接種于1/2MS+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)中，培養(yǎng)30天后，所述新莖段的每個節(jié)間都能萌發(fā)出I~2個新芽，培養(yǎng)90天后，所述新芽長成為4~5cm高的莖段；
[0012](5)出苗:選擇3cm`以上的所述新芽單獨切開，以頂芽向直插接種l/2Ms+NAA0.3mg/L+10%香蕉+活性炭2g/L+30%蔗糖的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天開始長根，培養(yǎng)60天后，轉(zhuǎn)移到光照強度較強的煉苗大棚中培養(yǎng)，90天后就成長為可以移栽的健壯小苗，經(jīng)過清洗后移栽到的合適的基質(zhì)中。
[0013]所述消毒水為洗衣粉水。
[0014]所述鐵皮石斛莖段組培育苗法中的培養(yǎng)繁育階段，待所述新芽長成為4~5cm高的莖段后，重復(fù)本步驟繼續(xù)培養(yǎng)擴繁。
[0015]本發(fā)明一種鐵皮石斛莖段組培育苗法和現(xiàn)有技術(shù)相比，其優(yōu)點在于:第一，在莖段培養(yǎng)過程中改變接種方式，結(jié)合培養(yǎng)基的調(diào)整，使莖段培養(yǎng)增殖率達(dá)到4以上，解決了莖段培養(yǎng)中增殖率不高的問題；第二，在繼代增殖、幼苗培養(yǎng)、成苗培養(yǎng)、壯苗生根培養(yǎng)階段，不再需要五次移苗、配置不同的培養(yǎng)基，而是只需要三次移苗，提高了培養(yǎng)的效率，減少了工作人員的勞動量。
【具體實施方式】
[0016]為使本發(fā)明要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將進(jìn)一步說明本發(fā)明的具體實施例。
[0017]本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛莖段組培育苗法，所述鐵皮石斛莖段組培育苗法的步驟為:
[0018](I)消毒:將當(dāng)年生新鮮鐵皮石斛莖條用干凈的剪刀剪切下來，然后用洗衣粉水等消毒水沖洗干凈、并吸干莖條上的水珠，再用75%酒精浸泡消毒I分鐘，撈起晾干待用；再將所述鐵皮石斛莖條在超凈工作臺上用0.1 %升汞消毒10分鐘，然后再用無菌水清洗三次；
[0019](2)誘導(dǎo)出芽:將消毒好的所述鐵皮石斛莖條切成兩個莖段節(jié)間的莖段，并接種于l/2Ms+6-BAl.0mg/L+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)出芽，培養(yǎng)溫度為25°C，光照強度為2000LX，光照時間為12小時，培養(yǎng)40天后，所述莖段節(jié)間開始萌發(fā)出側(cè)芽，培養(yǎng)60天后，所述側(cè)芽能長高到I~2cm ;
[0020](3)側(cè)芽培養(yǎng):將所述側(cè)芽挖切下來接種于l/2Ms+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60天后，所述側(cè)芽就可以繼續(xù)長高到4~5cm、并且?guī)в?~5個莖間；
[0021](4)培養(yǎng)擴繁:將上一步培養(yǎng)出來所述4~5cm高的側(cè)芽切掉頂芽和/或根，成為新莖段，再以平鋪的方式接種于1/2MS+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)中，培養(yǎng)30天后，所述新莖段的每個節(jié)間都能萌發(fā)出I~2個新芽，培養(yǎng)90天后，所述新芽長成為4~5cm高的莖段；待所述新芽長成為4~5cm高的莖段后，重復(fù)本步驟繼續(xù)培養(yǎng)擴繁。
[0022](5)出苗:選擇3cm以上的所述新芽單獨切開，以頂芽向直插接種l/2Ms+NAA0.3mg/L+10%香蕉+活性炭2g/L+30%蔗糖的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天開始長根，培養(yǎng)60天后，轉(zhuǎn)移到光照強度較強的煉苗大棚中培養(yǎng)，90天后就成長為可以移栽的健壯小苗，經(jīng)過清洗后移栽到的合適的基質(zhì)中。
[0023]以上所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明所述原 理和精神的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種鐵皮石斛莖段組培育苗法，其特征在于，所述鐵皮石斛莖段組培育苗法的步驟為: (1)消毒:將當(dāng)年生新鮮鐵皮石斛莖條用干凈的剪刀剪切下來，然后用消毒水沖洗干凈、并吸干莖條上的水珠，再用75%酒精浸泡消毒I分鐘，撈起晾干待用；再將所述鐵皮石斛莖條在超凈工作臺上用0.1 %升汞消毒10分鐘,然后再用無菌水清洗三次； (2)誘導(dǎo)出芽:將消毒好的所述鐵皮石斛莖條切成兩個莖段節(jié)間的莖段，并接種于l/2Ms+6-BAl.0mg/L+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)出芽，培養(yǎng)溫度為25°C，光照強度為2000LX，光照時間為12小時，培養(yǎng)40天后，所述莖段節(jié)間開始萌發(fā)出側(cè)芽，培養(yǎng)60天后，所述側(cè)芽能長高到I~2cm ; (3)側(cè)芽培養(yǎng):將所述側(cè)芽挖切下來接種于l/2Ms+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60天后，所述側(cè)芽就可以繼續(xù)長高到4~5cm、并且?guī)в?~5個莖間； (4)培養(yǎng)擴繁:將上一步培養(yǎng)出來所述4~5cm高的側(cè)芽切掉頂芽和/或根，成為新莖段，再以平鋪的方式接種于1/2MS+NAA0.3mg/L+10%馬鈴薯+30%蔗糖的培養(yǎng)中，培養(yǎng)30天后，所述新莖段的每個節(jié)間都能萌發(fā)出I~2個新芽，培養(yǎng)90天后，所述新芽長成為4~5cm高的莖段； (5)出苗:選擇3cm以上的所述新芽單獨切開，以頂芽向直插接種1/2MS+NAA0.3mg/L+10%香蕉+活性炭2g/L+30%蔗糖的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天開始長根，培養(yǎng)60天后，轉(zhuǎn)移到光照強度較強的煉苗大棚中培養(yǎng)，90天后就成長為可以移栽的健壯小苗，經(jīng)過清洗后移栽到的合適的基質(zhì)中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛莖段組培育苗法，其特征在于，所述消毒水為洗衣粉水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種鐵皮石斛莖段組培育苗法，其特征在于，所述鐵皮石斛莖段組培育苗法中的培養(yǎng)繁育階段，待所述新芽長成為4~5cm高的莖段后，重復(fù)本步驟繼續(xù)培養(yǎng)擴繁。
【文檔編號】A01H4/00GK103477976SQ201310291949
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年7月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月12日
【發(fā)明者】蔡時可 申請人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所